应用Vero细胞分离新型布尼亚病毒

目的从不明原因发热伴血小板减少综合征患者血液中分离新型布尼亚病毒。方法应用Vero细胞培养法分离病毒,并用间接免疫荧光检测法(IFA)、实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)技术进行鉴定。结果从24份不明原因发热患者血液标本中分离出6株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。结论应用Vero细胞培养法可以直接从不明原因发热患者血液中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。     

非冻存低温下维持悬浮培养细胞

目的 建立非冻存低温条件下维持悬浮培养细胞的细胞保存技术.方法 常规培养悬浮生长的人白血病细胞Jurkat,分别正常培养、室温和4℃冰箱条件下保存,间隔10天进行细胞形态观察和细胞存活率分析,然后室温和4℃冰箱保存的细胞再加入新鲜培养剂转入正常培养.结果 两种非冻存低温条件下细胞存活率降低,与正常培养组有显著性统计学差...     

L20B细胞用于脊髓灰质炎病毒分离鉴定的实验观察

应用RD、Hep-2、L20B细胞对64株已知病毒和73份粪便标本悬液进行脊髓灰质炎病毒（PV）分离鉴定及效价滴定．实验结果证明,L20B细胞具有很好的特异性,用该细胞检测已知病毒标本,PV检出率达100％;检测粪便标本悬液PV检出率可达13.70％,均高于RD、Hep-2细胞的检出率,而对其它肠道病毒均不增殖．用RD、L20B进行病毒分离优于RD、Hep-2,用前者PV检出率可提高4.11％．从29株病毒效价滴定结果分析,三种细胞对病毒的敏感度依次为RD＞L20B＞Hep-2．     

应用对脊髓灰质炎病毒特异的L＿α细胞进行脊灰病毒分离鉴定

在全球消灭脊髓灰质炎进程中，实验室要对大量的标本进行检测。由于病毒株对细胞敏感性的差异，在进行病毒分离鉴定时，ＷＨＯ推荐使用ＲＤ和Ｈｅｐ─２两种细胞株，而这两种细胞不仅对脊髓灰质炎病毒敏感，而且对其它肠道病毒，尤其是一些能致麻痹的肠道病毒也敏感。随着消灭脊髓灰质炎工作的深入开展，由脊髓灰质炎病毒引起的肝病例越来越少，而由其它肠道病毒引起的麻痹病例所占比例越来越大。Ｓ．ｋｏｉｋｅ教授建立了一种Ｌ＿α细胞，该细胞株仅对脊髓灰质炎病毒敏感，而其它肠道病毒不能在其中生长。我们用Ｌ＿α细胞对脊髓灰质炎和其它肠道病毒的分离鉴定做了一些试验研究，显示Ｌ＿α细胞对脊髓灰质炎病毒具有较强的特异性和敏感性。     

Vero/slam细胞在麻疹病毒分离中的应用

实施免疫规划是控制乃至消灭疫苗针对的传染病的主要策略。继人类消灭天花后,消灭脊髓灰质炎即将成为现实,世界卫生组织将麻疹列为下一个拟被消除的传染病。麻疹是一种严重危害儿童健康的急性呼吸道传染病,传染性极强,易引起爆发流行。麻疹病毒只有一个血清型,抗原性稳定,人感染后产生持久免疫力,人是唯一宿主,且有安全有效的疫苗加以预防。     

L20B细胞在脊髓灰质炎病毒分离鉴定中的应用

在脊髓灰质炎（脊灰）病毒分离鉴定中，细胞的选择非常重要，以往世界卫生组织（ＷＨＯ）推荐使用Ｈｅｐ－２和ＲＤ两种细胞同时进行脊灰病毒的分离鉴定。由于这两种细胞不仅对脊灰病毒敏感，对非脊灰肠道病毒（ＮＰＥＶ）同样敏感，分离到许多ＮＰＥＶ。最近ＷＨＯ推荐了一种新型的对脊灰病毒特异的Ｌ２０Ｂ细胞，我们使用这种细胞进行的实验显示，Ｌ２０Ｂ细胞对脊灰病毒具有较强的敏感性和特异性     

用Vero细胞从病人痰液中分离呼吸道合胞病毒的实验研究

目的：证实本次暴发流行的病原和Vero细胞分离RSV的效果，获得可用于疫苗研制的RSV毒株。方法：用Vero细胞从患儿痰标本中分离RSV并对分离到的毒株进行生物学特性研究。结果：从13例患儿痰标本中分离到3株可稳定传代的病毒株，经RSV单克隆抗体、RT-PCR扩增产物的核酸序列测定及CPE特征等证实为RSV。结论：本次婴幼儿呼吸道疾病暴发是由RSVA型所引起，Vero细胞分离RSV阳性率为23．1％。     

-70℃超低温冻存细胞的实验研究

[目的]探索-70℃超低温条件冻存细胞的可行方法。[方法]用-70℃超低温冰箱冻存对数生长期的C6／36、BHK-21、Vero和MDCK细胞，冻存30、60和90d后，37℃水浴复苏，用MTT法测定细胞活性，计算冷冻存活率；同时观察复苏细胞形态，并与液氮冻存方法同步比较。[结果]-70℃冻存后复苏细胞均可获得90％以上的存活率，与液氮冻存细胞的复苏效果类似。光镜下显示，冻存细胞均可在拟定的冻存期内成功复苏。复苏即时镜下90％以上的细胞呈现良好的活细胞形态悬浮在培养基中。[结论]-70℃超低温冰箱冻存细胞的方法可行，尤其适用于基层或液氮来源困难地区开展细胞培养研究。     

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型细胞受体的研究进展

近几年手足口病在亚太地区的流行大幅上升并伴随严重的中枢神经系统并发症,而针对其主要致病原肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型现在还缺乏有效的预防疫苗和抗病毒制剂.确定它们的特异性细胞受体对于进一步阐明病毒与宿主细胞早期互相作用的分子机制及其致病机制至关重要.过去一年中,P-选择素糖蛋白配体-1、B类清道夫受体Ⅱ和唾液酸化...     

以支持细胞为饲养层培养冻存后大鼠精原干细胞研究

目的：研究冻存的精原干细胞体外分离培养的生物学特性,为今后冻存精原干细胞的批量培养和长期利用提供依据。方法：取7～8d的sD雄性大鼠,分离睾丸组织,用两步酶消化法和差速时间贴壁法,分离精原干细胞和支持细胞。以二甲基亚砜（DMSO）作冷冻保护液,将分离到的精原干细胞放置于液氮中冻存;利用体外培养体系,进行支持细胞的培养和饲养层的制备;然后将复苏的精原干细胞接种到支持细胞饲养层上培养,并利用碱性磷酸酶鉴定精原干细胞。结果：用两步酶消化法和差速贴壁法能分离到纯度较高的精原干细胞和支持细胞,冻存的SSCs解冻后能在支持细胞饲养层上贴壁、生长、增殖,碱性磷酸酶活性鉴定呈阳性。结论：冻存后精原干细胞在体外支持细胞饲养层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可为体外研究药物或毒物干扰精原干细胞提供细胞模型。     

3种细胞共培养分离单纯疱疹病毒及培养物快速鉴定方法的建立

目的 建立狗肾细胞(MDCK)、人喉癌表皮细胞(Hep-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)共培养(下简称MHV细胞)分离单纯疱疹病毒(HSV)并用荧光PCR的CT值梯度参考曲线鉴定培养物的方法。方法 选取1株某实验室保存的单纯疱疹病毒分离株,用培养液以5倍梯度倍比稀释成多个模拟样品。用此样品同时接种MHV细胞和Vero细胞,每个样品各接种5瓶,并设空白对照和无细胞对照。经37℃、8％CO2培养后, 每隔12 h记录上述各组的细胞病变效应(CPE),培养在84 h后终止,所有培养物同批提取核酸,并用荧光PCR检测RNA。所有核酸同机检测,并记录CT值,无细胞对照组的CT值用软件制成梯度参考曲线,其余各组与梯度参考曲线对比。结果 MHV细胞和Vero细胞培养模拟样品后,均出现典型细胞病变,Vero细胞出现更晚,MHV组CT值低于Vero组和无细胞对照组（P＜0.05）,MHV组的CT值曲线位于梯度参考曲线的下方。结论 HSV病毒可以在MHV细胞内有效增殖,同一样品的CT值梯度参考曲线可用来客观评价该样品中病毒在细胞内的增殖。     

妇产科常见感染性疾病的病原学研究现状

妇产科感染性疾病是病原体侵入妇女泌尿生殖道或其他部位引起的生殖道炎症或全身感染性疾病,如不及时诊断和正确治疗,可导致不孕症、异位妊娠、流产、早产、死产、先天性感染及新生儿感染,以至影响两代人的健康,严重的还可致癌或易与艾滋病并发。世界卫生组织长期以来致力于妇产科感染性疾病实验室检查和标准技术等研究,以预防和控制该类疾病的传播和蔓延。     

北京地区不同人群柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型感染状况调查

目的 了解北京地区不同人群柯萨奇病毒A16型（coxsachievirus A16,CoxA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）感染状况。方法 2012年对北京9区进行整群随机抽样,采集血样,开展血清流行病学调查。用酶联免疫吸附实验检测血清中抗CoxA16和抗EV71 免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）和免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）抗体。结果 2 140名被研究人群中,抗EV71 IgG和IgM阳性率分别为27.0%和1.6%,抗CoxA16 IgG和IgM的阳性率分别为48.5%和4.2%,抗EV71 IgM与抗CoxA16 IgM同时阳性阳性率为0.7%,抗EV71 IgG与抗CoxA16 IgG同时阳性阳性率为17.2%。各年龄组抗EV71 IgM、IgG阳性率、抗CoxA16 IgM、IgG阳性率、抗EV71 IgM 和抗CoxA16 IgM同时阳性的阳性率、抗EV71 IgG和抗CoxA16 IgG同时阳性阳性率差异均有统计学意义（均有P<0.05）。1～岁组抗EV71 IgM阳性率最高,5～岁组抗CoxA16 IgM阳性率最高,10～岁组抗EV71IgG 和20～岁组抗CoxA16 IgG阳性率最高。女性抗CoxA16 IgG阳性率高于男性。结论 低龄组儿童是手足口病防控的重点人群,手足口病防控措施制定应考虑地域分布因素。     

Systematic evaluation of suspension MDCK cells,adherent MDCK cells,and LLC-MK2 cells for preparing influenza vaccine seed virus

Suspension Madin–Darby canine kidney (MDCK) cells (MDCK-N), adherent MDCK cells (MDCK-C), and adherent rhesus monkey kidney LLC-MK2 cells (LLC-MK2D) were systematically evaluated for the preparation of influenza vaccine seed viruses for humans on the basis of primary virus isolation efficiency, growth ability, genetic stability of the hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) genes, and antigenic properties in hemagglutination inhibition (HI) test of each virus isolate upon further passages. All the subtypes/lineages of influenza viruses (A(H1N1), A(H1N1)pdm09, A(H3N2), B-Victoria, and B-Yamagata) were successfully isolated from clinical specimens by using MDCK-N and MDCK-C, whereas LLC-MK2D did not support virus replication well. Serial passages of A(H1N1) viruses in MDCK-N and MDCK-C induced genetic mutations of HA that resulted in moderate antigenic changes in the HI test. All A(H1N1)pdm09 isolates from MDCK-C acquired amino acid substitutions at the site from K153 to N156 of the HA protein, which resulted in striking antigenic alteration. In contrast, only 30% of MDCK-N isolates showed amino acid changes at this site. The frequency of MDCK-N isolates with less than two-fold reduction in the HI titer was as high as 70%. A(H3N2) and B-Yamagata isolates showed high antigenic stability and no specific amino acid substitution during passages in MDCK-N and MDCK-C. B-Victoria isolates from MDCK-N and MDCK-C acquired genetic changes at HA glycosylation sites that greatly affected their antigenicity. When these cell isolates were applied to passages in hen eggs, A(H1N1), B-Victoria, and B-Yamagata viruses grew well in eggs, while none of the cell isolates of A(H3N2) viruses did. Thus, we demonstrate that MDCK-N might be useful for the preparation of influenza vaccine seed viruses.     

流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析

摘要:目的　优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高流感病毒的分离效果。方法　将5种流感病毒液（甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata）分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量（30 μl/cm2、60 μl/cm2、90 μl/cm2、120 μl/cm2、150 μl/cm2）、不同的病毒孵育时间（0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h）、不同的TPCK-胰酶添加浓度（1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、4.0 μg/ml、5/0 μg/ml）以及不同的MDCK细胞增毒代次（连续盲传5代）对5种流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果;对分离后的病毒以红细胞凝集（HA）方法检测病毒滴度,结果　通过对比病毒HA滴度结果,5种流感病毒（甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata）的最佳病毒接种量分别为:90 μl/cm2、90 μl/cm2、60 μl/cm2、120 μl/cm2、120 μl/cm2;最佳病毒孵育时间:甲型流感病毒为1.0～1.5 h,乙型流感病毒为2.0～2.5 h;胰酶最佳使用浓度分别是:2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、3.0 μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论　甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2;Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。     

我国三种人群常见多发传染病知识与预防技能调查

目的了解城市居民、农村居民、流动人口三种人群常见多发传染病知识与技能,并进行干预前后调查,比较干预效果,了解三种人群传染病健康教育现状,评估和改进干预策略,为国家制定相关政策法规提供依据。方法 采用多阶段分层随机抽样方法,在宁夏、山西、山东选择城乡居民和流动人口进行问卷调查。结果传染病知识方面,除"乙肝传播途径"外,其余传染病知识知晓率干预后均较干预前有显著提高(P<0.05)。传染病行为方式选择方面,除"不与别人共用牙刷、剃须刀"外,其余行为正确率干预后均较干预前有显著提高。阅读理解方面,干预后5道题回答正确率均显著提高,差异具有统计学意义。结论 干预前后三种人群在传染病知识、行为、阅读理解能力和现场行为操作方面有明显差异。以大众传播为主,结合组织传播和群体传播的综合干预措施是提高城乡居民和流动人口的传染病知识与技能有效策略。     

感染性疾病与人类基因组研究进展

病原体感染后,机体对其清除能力以及疾病的转归,在很大程度上取决于个体间基因组的差异.研究发现,人类白细胞抗原(HLA)、细胞因子(CK)、甘露糖结合蛋白(MBL)、维生素D受体(VDR)、红细胞抗原等基因与感染性疾病的易感性有关.此文就近年来该研究领域的进展作了综述.     

荆门市常见传染病季节性分布特征动态分析

目的 分析荆门市常见传染病发病的季节性分布特征与流行规律,为制定和调整传染病的防制策略和措施提供科学依据.方法 采用集中度和圆形分布法进行季节性分析,按照控制图法预警模型原理,对2000-2009年的分月发病情况进行评价.结果 荆门市常见传染病中乙型脑炎有严格的季节性,麻疹、疟疾有明显的季节性,痢疾、伤寒有一定的季节性...