维生素E对大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死的作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨维生素E防治大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)的可能性及作用机制。方法取雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组和干预组,每组24只。对照组大鼠不作处理;模型组及干预组采用脂多糖联合激素法制备SANFH模型,干预组在注射激素的同时每天肌肉注射维生素E 40 mg/kg,连续7 d。末次激素注射后2、4、8周取股骨头,HE染色观察骨坏死发生情况,计算空骨陷窝率;TUNEL染色观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数;免疫组织化学染色及Western blot检测观察胱天蛋白酶9(Caspase-9)、Caspase-3、细胞色素-c(cytochrome-c,Cyt-c)蛋白表达情况。结果组织学观察示,干预组空骨陷窝率仅8周时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),4、8周时与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);干预组细胞凋亡指数各时间点均低于模型组(P<0.05),8周时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色及Western blot观察示,干预组各时间点Cyt-c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),8周时与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论维生素E可通过减轻线粒体依赖性骨细胞凋亡来延缓大鼠早期SANFH病程发展。     

Wnt/β-catenin信号通路在大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死中的作用机制研究

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)中的作用。方法 12月龄清洁级雄性SD大鼠72只,体质量200~230 g,随机分为对照组(A组,n=24)、模型组(B组,n=24)和干预组(C组,n=24)。B、C组大鼠采用脂多糖联合甲泼尼龙法制备SANFH模型;C组在第1次注射甲泼尼龙时开始肌肉注射人重组分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)[1μg/(kg·d)],持续30 d。A组于B组各注射时间点同法给予等量生理盐水。观察B、C组动物造模期间以及造模后一般情况。于末次注射甲泼尼龙后2、4、8周,各组取8只动物双侧股骨头标本行HE染色并计算空骨陷窝率,TUNEL染色并计算细胞凋亡率,免疫组织化学染色及Western blot检测活性β-catenin、c-Myc表达情况。结果 B、C组造模期间共6只动物死亡,均对应补充;其余动物均存活至实验完成。组织学观察示,A组为正常骨组织结构;B、C组随时间延长均出现骨质紊乱、骨小梁断裂等骨坏死表现。各时间点C组空骨陷窝率及细胞凋亡率均高于A、B组,B组高于A组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色及Western blot检测示,各时间点C组活性β-catenin及c-Myc表达水平均低于A、B组,B组低于A组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路异常参与了大鼠SANFH早期病变,作用机制可能与其调控c-Myc表达,导致骨细胞凋亡有关。     

激素性和酒精性股骨头坏死组织形态学的对比分析

目的比较分析激素性股骨头坏死和酒精性股骨头坏死的组织形态学特点。方法选取自2012-12—2013-12诊治的股骨头坏死26例,激素性股骨头坏死14例(激素组),酒精性股骨头坏死12例(酒精组),将同期行THA的6例股骨颈骨折(股骨头正常)作为对照组。将26例坏死股骨头及6例正常股骨头制备成病理切片标本进行HE染色、改良Masson染色,通过光学显微镜进行组织形态学定量分析。结果与对照组相比,激素组和酒精组同源软骨细胞数减少、骨小梁面积减小,而空骨陷窝率、骨陷窝面积及长径、软骨成骨指数、脂肪细胞长径、血管形成量及新生骨小梁面积等均高于正常水平,差异有统计学意义(P0.05)。激素组空骨陷窝率、骨小梁面积、新生骨小梁面积及脂肪细胞长径等均低于酒精组,而软骨成骨指数高于酒精组,差异有统计学意义(P0.05);2组在骨陷窝面积及长径、有效血管及无效血管数、同源软骨细胞数方面差异无统计学意义(P0.05)。结论酒精性股骨头坏死在组织形态学表现上更为复杂,坏死程度更加严重,在修复过程中也不同于激素性股骨头坏死。     

股骨头坏死组织中半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3与细胞凋亡的关系

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3在无菌性股骨头坏死（avascular/aseptic necrosis of femoral head,ANFH）进展过程中的表达及意义。方法21例（22髋）ANFH取股骨头病灶周围骨松质,其中早期ANFH组（6髋）,中期ANFH组（8髋）,晚期ANFH组（8髋）;另取19例（19髋）新鲜股骨颈骨折的股骨头对应部位骨松质为对照组。采用原位末端标记（TUNEL）法、空骨陷窝计数法检测细胞凋亡水平,比色法检测股骨头组织Caspase-3活性。结果骨陷窝空虚百分率（F=45.43,P=0.000）、成骨细胞凋亡率（F=120.86,P=0.000）等凋亡指标均随ANFH临床分期进展而显著升高,ANFH早、中期组显著高于对照组（q=18.899,P〈0.05;q=6.398,P〈0.05）,但并不随着ANFH病变进展而增强,而呈现进行性下降;ANFH晚期组Caspase-3活性与对照组Caspase-3活性无统计学差异（q=2.021,P〉0.05）。Caspase-3活性与细胞凋亡率统计学相关性不显著（r=0.126,P=0.425）。结论在ANFH进展过程中,Caspase-3可能不是细胞凋亡的主要执行分子;Caspase-3在ANFH进展中可能发挥非凋亡作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对股骨头缺血坏死的保护作用

目的探究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对早期激素性股骨头坏死(steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH)的保护作用。方法采用改良技术建立早期激素性股骨头坏死兔模型,随机分成实验组(n=12)和对照组(n=12)。实验组给予髋周臀大肌注射GDNF(8.0μg/只),对照组相同部位注射等体积生理盐水,干预1周。分别于第5、10、15、20天进行股骨头多排螺旋CT、显微CT及苏木素-伊红(HE)染色检测。结果影像学观察示,GDNF注射后第15天开始,实验组股骨头骨小梁逐渐丰富、密集,间距变窄,骨皮质厚度及密度增加;对照组股骨头骨小梁分布稀疏,间距增宽,部分断裂,骨质密度减低。第15、20天,实验组与对照组股骨头骨矿物质密度、组织骨矿物质密度及骨体积分数,比较差异具有统计学意义(P0.05)。组织学观察示,实验组股骨头内骨小梁粗大,骨细胞分布广泛,细胞核着色深,脂肪细胞分布较少;对照组骨小梁分布稀疏,形态不完整,部分断裂,骨细胞空陷窝和脂肪细胞增多,骨细胞和造血细胞减少。第15、20天,实验组与对照组股骨头骨细胞空陷窝率分别为:13.3±3.2%、10.6±2.4%和71.0±7.5%、78.6±5.3%,两组比较,实验组骨细胞空陷窝率显著减低(P0.05)。结论 GDNF可通过抑制骨细胞坏死,保持骨小梁的完整性。     

阿魏酸钠对兔激素性股骨头坏死早期促血管生成影响的实验研究

目的探讨药物阿魏酸钠对于激素性股骨头坏死(SANFH)早期干预以及对于血管变化的影响,以达到预防或延缓股骨头坏死的目的。方法利用改良的马血清加甲强龙的方法成功制备兔激素性股骨头坏死早期的动物模型,56只动物随机zhi分为对照,模型和治疗三组。分别选取激素注射后2周、4周、8周、12周共4个时间点,每组随机处死四只动物进行股骨头大体观察、HE染色、VEGF免疫组化染色、透射电镜观察。分析每组各时间点相关指标的变化情况以及各组之间的差异。结果大体观察以及HE染色和透射电镜观察发现早期股骨头坏死动物模型建立成功,且治疗组与模型组相比股骨头坏死表现明显减轻,VEGF表达增强,两组差别有统计学意义(P0.05)。结论阿魏酸钠可以有效地you,治疗e were dividied into 3 groups延缓或降低股骨头坏死的发生。     

淫羊藿苷干预兔早期激素性股骨头坏死的实验研究

目的探讨淫羊藿苷对激素诱导的兔早期激素性股骨头坏死干预效果。方法50只成年新西兰兔(体质量2.5~3.0 kg)随机分为对照组(n=10)、模型组(n=20)及实验组(n=20)。模型组和实验组采用脂多糖联合甲泼尼龙注射制备早期激素性股骨头坏死模型;实验组首次注射甲泼尼龙开始每日灌服淫羊藿苷药液1次,对照组及模型组灌服等量生理盐水,连续6周。于6周后取左侧股骨头行大体观察;Micro-CT扫描观察骨小梁微结构,测量骨小梁相对体积(bone volume to total volume,BV/TV)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Tn)及骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp),并构建三维图像观察;HE染色观察骨小梁结构、骨细胞及骨髓脂肪细胞形态变化,按照病理学诊断标准检测股骨头坏死模型造模是否成功,计算空骨陷窝率。结果实验期间共7只动物死亡,最终对照组9只、模型组16只、实验组18只纳入研究。大体及Micro-CT扫描、三维重建显示,与对照组相比,模型组股骨头塌陷明显,骨小梁断裂、排列紊乱稀疏;实验组股骨头表面皱褶,塌陷不明显,骨小梁结构轻度退变。与对照组相比,模型组和实验组Tb.N、Tb.Tn、BV/TV下降、Tb.Sp升高;与模型组相比,实验组Tb.N、Tb.Tn、BV/TV升高、Tb.Sp降低;组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色示模型组骨小梁中骨细胞减少,空骨陷窝较多,骨小梁间脂肪细胞堆积,部分呈囊状融合;实验组骨小梁形态较模型组完整,骨细胞坏死及脂肪细胞肥大不明显。按照股骨头坏死病理学诊断标准,对照组无骨坏死发生,模型组骨坏死发生率为81.3%(13/16),实验组为66.7%(12/18),差异无统计学意义(P=0.448)。模型组和实验组发生坏死的股骨头标本其空骨陷窝率分别为33.1%±1.4%及18.9%±0.8%,均高于对照组12.7%±1.5%,且模型组明显高于实验组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论淫羊藿苷对激素诱导的兔早期激素性股骨头坏死具有保护作用,可以降低骨细胞凋亡,改善骨微结构,延缓骨坏死发生。     

染料木黄酮通过促进VEGF 表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制

目的观察染料木黄酮(Genistein Gen)通过促进VEGF表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制。方法建立绝经大鼠模型,6月龄雌性大鼠40只,随机分为对照组,假手术组、去势组、Gen干预6周组、Gen干预12周组。光镜下观察各组股骨头结构,分析大鼠股骨头空缺骨陷窝数的变化。ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF),观察VEGFmRNA原位杂交表达强度并分析。结果与对照组相比,去势组骨密度值下降,Tb.Th明显下降(P0.05)。干预10周组骨密度值明显升高,Tb.Th明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。糖尿病大鼠股骨头随病程发展骨小梁变稀薄。Gen对去卵巢大鼠血清中VEGF的表达无影响。VEGF mRNA在骨髓腔血管内皮细胞表达上升(P0.05)。结论 Gen可促进血管内皮细胞增殖,促进血管形成,改善去势大鼠骨质疏松抗骨质疏松倾向。     

坏死状凋亡通路抑制剂在兔早期激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨坏死状凋亡及其抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在兔早期激素性股骨头坏死中的作用机制,为股骨头坏死的研究提供新的理论依据。方法选取84只健康成年新西兰兔,雌雄不限,体重(2.9±0.3)kg,适应性喂养1周。选择60只采用激素联合脂多糖法构建早期激素性股骨头坏死模型,其余24只为空白对照模型。造模6周后MRI对动物模型进行筛选,50只发生早期股骨头坏死,选2只进行病理学观察,其余48只利用简单随机数法随机平均分为模型组和治疗组,治疗组给予每日1.65 mg/kg剂量静脉注射Nec-1,模型组和空白对照组按同剂量每日注射生理盐水,给药后分别于2、4、8周三个时间点处死动物并取双侧股骨头标本,通过大体观察、HE染色及透射电镜观察骨坏死情况;免疫组化及Western Blot检测受体相互作用蛋白1(RIP-1)的蛋白表达情况。利用单因素方差分析比较三组不同时间点空骨陷窝率,利用Quantity One半定量分析各组及同一组不同时间点蛋白表达情况,利用Image Pro Plus对免疫组化各组及同一组不同时间点平均蛋白吸光度行半定量分析,对半定量结果行单因素方差分析。结果兔早期股骨头坏死模型成模率83.3%。Nec-1治疗组在不同时间点的透射电镜下形态学改变及平均空骨陷窝率较模型组均改善(t值分别为2.41,2.43,4.13,P均小于0.05),但均劣于空白组(t值分别为8.42,8.80,11.38,P均小于0.05);免疫组化半定量分析示RIP-1表达治疗组与模型组相比在第2周,第4周,第8周均有统计学差异(t值分别为6.28,4.00,2.35;P均小于0.05)。Western Blot电泳结果提示RIP-1蛋白表达趋势与免疫组化结果相同,半定量分析示治疗组与模型组在第2周,第4周,第8周RIP-1表达有统计学差异(t值分别为6.89,3.69,2.50;P均小于0.05)。结论坏死状凋亡参与激素性股骨头坏死的发生,Nec-1通过对坏死状凋亡抑制从而对激素性股骨头坏死有一定的保护作用。     

人脐带间充质干细胞防治早期激素性股骨头坏死的作用及其机制

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对大鼠早期激素性股骨头坏死(GC-ONFH)防治作用及其机制。方法将48只SD大鼠完全随机法分为4组:对照组、模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组。使用注射用甲泼尼龙琥珀酸钠建立GC-ONFH的模型,并给予不同剂量的hUC-MSCs干预。6周后分离股骨头组织,利用苏木精-伊红(HE)染色、原位缺口末端标记法(TUNEL)染色、微型CT(Micro-CT)、蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)评价股骨头坏死、细胞凋亡、骨密度及凋亡相关蛋白mRNA表达水平。采用t检验和完全随机设计的方差分析。结果对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组股骨头坏死发生率分别为0(0/12)、83%(10/12)、17%(2/12)、50%(6/12),空骨陷窝率和细胞凋亡率分别为(2.301±1.238)%、(26.138±2.742)%、(10.229±2.658)%和(13.518±2.241)%,治疗组中空骨陷窝率和细胞凋亡率显著低于模型组(F=13.45,P<0.05),差异有统计学意义。Micro-CT结果显示对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组骨体积分数分别为(0.618±0.147)%、(0.250±0.130)%、(0.563±0.127)%、(0.358±0.057)%,骨小梁厚度分别为(0.448±0.086)、(0.218±0.082)、(0.418±0.059)、(0.292±0.051)mm,骨小梁间隙分别为(0.042±0.010)、(0.016±0.008)、(0.036±0.004)、(0.023±0.004)mm,骨小梁数量分别为(4.233±1.137)、(1.950±0.650)、(3.633±0.717)、(2.333±0.457)/mm,治疗组上述指标显著高于模型组(F=11.75、13.02、14.22、10.79,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot检测对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bcl-2)蛋白表达分别为(1.000±0.039)、(7.508±0.253)、(1.540±0.182)、(3.778±0.160),bcl-2蛋白表达分别为(1.000±0.053)、(0.202±0.046)、(0.745±0.083)、(0.485±0.065),半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达分别为(1.000±0.045)、(8.917±0.238)、(1.694±0.189)、(4.250±0.164),qPCR检测对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组bax mRNA表达分别为(1.000±0.056)、(4.433±0.192)、(1.933±0.142)、(2.367±0.134),bcl-2 mRNA表达分别为(1.000±0.037)、(0.227±0.029)、(0.793±0.032)、(0.617±0.036),Caspase-3 mRNA表达分别为(1.000±0.062)、(4.467±0.393)、(1.800±0.180)、(2.600±0.131),模型组bcl-2表达显著低于对照组,Caspase-3、bax表达显著高于对照组,经hUC-MSCs干预后情况改善显著(F=67.74、54.68、104.40,P<0.05),差异有统计学意义。结论hUC-MSCs可能通过调节bax、bcl-2、Caspase-3的表达,抑制糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡,有助于防治大鼠早期GC-ONFH。     

丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达的影响

目的:探究丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾功能的保护作用机制。方法:60只SD雄性大鼠,随机分成5组,分别为:A正常组,B假手术组,C模型组,D模型+丹参酮ⅡA低剂量组,E模型+丹参酮ⅡA高剂量组。4周、8周、12周检测各组肌酐、尿素氮水平。12周时Tunel法检测细胞凋亡,Western blot法检测GRP78、CHOP和Caspase-12表达。结果:(1)C组较A组4周、8周、12周时肌酐、尿素氮升高(P0.05);D组、E组分别与C组比较:8周、12周时较模型组肌酐、尿素氮水平下降(P0.05);E组较D组12周时肌酐、尿素氮水平下降(P0.05)。(2)C组凋亡细胞较A组、B组增多(P0.05)。D组、E组凋亡细胞较C组减少(P0.05),E组较D组凋亡细胞减少(P0.05)。(3)C组与A组相比,GRP78、CHOP和Caspase-12表达均明显升高(P0.05);D组、E组与C组相比:GRP78、CHOP和Caspase-12表达均下降(P0.05);E组与D组比较:GRP78、CHOP和Caspase-12表达进一步下降(P0.05)。结论:TanⅡA能够改善CRF大鼠肾功能,抑制细胞凋亡,其机制可能是通过调节内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达水平实现。     

生物力学因素在激素性股骨头坏死中对软骨细胞的作用

目的建立大鼠激素性股骨头坏死正常负重和超负重模型,探究力学因素在激素性股骨头坏死中对于软骨细胞的作用。方法4月龄健康Wistar大鼠随机分成实验组与对照组。臀肌注射地塞米松磷酸钠(20mg/kg),每周1次,共计8w。实验组,置于1km/h跑步机中,强迫动物跑动,形成股骨头坏死超负重模型;对照组,生理状态下正常负重。分别于2、4、6、8w处死大鼠,取右侧股骨头标本,行免疫组织化学法Bcl-2和MMP-1染色,比较不同组之间的累计光密度(IOD)值。取左侧股骨头行组织病理学检查。结果实验组Bcl-2和MMP-1累计光密度(IOD)与对照组比较,第4周起有明显统计学差异(P0.05)。实验组Bcl-2和MMP-1表达随激素注射时间增加有统计学意义(P0.05),q检验显示实验组Bcl-2和MMP-1表达从4w开始两两之间有统计学意义,8w时表达最多(P0.05)。实验组8w时病理学呈股骨头坏死表现。结论力学因素通过影响Bcl-2和MMP-1的生成,调节着软骨细胞的凋亡,促进软骨组织的改建。     

颈椎病大鼠颈脊髓神经细胞凋亡的研究

目的 研究Caspase-3在颈椎病大鼠颈脊髓的表达及神经细胞凋亡的研究.方法 将4月龄SD大鼠96只,破坏颈椎后柱稳定性后分别饲养3、5个月,用斜板试验评价运动功能;HE染色观察颈椎间盘组织的形态学变化;免疫组织化学染色及Western Blot测定颈脊髓Caspase-3的表达;TUNEL法检测颈脊髓神经细胞凋亡情况,与对照组比较,并作经统计学处理.结果 斜板试验评价运动功能,3月对照组与模型组斜板角度为75.4±3.8及46.4±6.5,5月对照组与模型组斜板角度为74.9±4.0及45.1±7.2;颈椎间盘C4-5、C5-6退变程度Miyanmoto分级评分结果,3月对照组与模型组分别为1.32±0.39及2.10±0.58,5月对照组与模型组分别为1.39±0.69及3.98±0.84.经斜板试验及组织学观察,模型组与对照组间均有统计学意义,P＜0.01.颈椎病大鼠颈脊髓Caspase-3的阳性细胞数3月对照组与模型组分别为2.01±1.36及13.23±3.21,5月对照组与模型组分别为3.26±3.02及26.32±4.01;Western Blot法测定颈脊髓不同组间Caspase-3的蛋白表达,用图象处理系统ECL对条带进行扫描,测定其区带的感光密度,并进行处理.3、5月模型组间有统计学意义,P＜0.05.3月对照、3月模型、5月对照、5月模型的凋亡指数分别为:4.20±1.56;16.53±2.01;6.32±2.32;29.56±4.25.对照组间无统计学差异(P＞0.05),模型组间及模型组与对照组间均有统计学意义(P＜0.05).结论 破坏大鼠颈椎后柱稳定可成功建立颈椎病模型.Caspase-3被认为是细胞凋亡过程中的关键酶之一,Caspase-3介导了慢性脊髓损伤后的细胞凋亡,并随颈椎退变程度增强而表达增强.     

人脐带血干细胞外泌体对大鼠股骨头坏死的影响

[目的]探讨人脐带间充质干细胞外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-exosomes, hUCMSC-Exos）防治大鼠激素性股骨头坏死的疗效及其潜在机制。[方法] 36只雄性7周龄Sprague-Dawley大鼠随机分为3组，每组12只。空白对照组给予0.9%的盐水静脉注射；模型组给予静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）和甲泼尼龙（methylprednisolone,MPS）制备股骨头坏死模型；外泌体组在模型组给予的基础上，静脉注射hUCMSC-Exos。在第28 d处死大鼠，取股骨头行组织学Micro CT检测。[结果]透射电子显微镜和Western blot的检测表明，所提取分离物符合Exos基本特征。HE染色组织形态观察，三组的空骨陷窝率：模型组>外泌体组>空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。TUNEL染色成骨细胞凋亡率，模型组>外泌体组>空白对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Micro CT检测方面，与空白对照组相比，模型组大鼠的BV...     

左旋多巴干预激素性股骨头坏死中骨细胞凋亡的实验研究

目的 探讨左旋多巴对激素性股骨头坏死中骨细胞凋亡的影响.方法 健康成年中国大耳白兔44只,随机分为三组.模型组,15只,经耳缘静脉注射10 μg/kg脂多糖,24 h后于右侧臀肌注射20mg/kg甲基泼尼松龙,共3次,每次间隔24 h.治疗组,15只,与模型组相同方法建模,注射完成后当日开始口服左旋多巴,剂量0.4 g·kg~(-1)·d~(-1).对照组,14只,于相同时间点注射等量生理盐水.制模后6、8周,各组分别处死7只,处死前行双髋关节X线摄片及MR检查,处死后取双侧股骨头标本,行HE染色并用TUNEL法测定细胞凋亡,观察组织病理学改变并进行细胞凋亡分析.制模后8周,采血测定3组兔子血清中胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)水平.结果 模型组X线片显示股骨头骨密度不均匀,可见有囊性变或硬化骨;HE染色显示骨小梁变细、稀疏、连续性中断,骨髓组织脂肪变性,空骨陷窝明显增多;TUNEL检测显示骨小梁内存在大量凋亡骨细胞.而治疗组X线片显示股骨头接近正常,骨密度均匀增高;组织病理学显示骨小梁连续性完整,制模后6、8周的空骨陷窝率分别为13.33‰±3.06‰及25.97‰±6.29‰,低于模型组的21.44‰±4.77‰及33.86‰±8.38%(P<0.01);骨细胞凋亡指数分别为74.93‰±14.32‰及120.67‰±13.13‰,低于模型组的102.56‰±18.96‰及202.02‰±18.99‰(P<0.01);制模后8周治疗组动物血清IGF-1含量为(14.78±2.37)ng/ml,高于模型组的(10.12±2.49)ng/ml(P<0.01);统计学分析显示模型组骨细胞凋亡指数与空骨陷窝率呈明显正相关(r=0.74,P<0.01).结论 左旋多巴可以减少激素诱导的骨细胞凋亡,减少股骨头坏死的发生.而左旋多巴通过体内代谢促进IGF-1的合成及释放可能是其预防及治疗激素性股骨头坏死的生物学途径之一.     

肾上腺髓质素对缺氧复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对缺氧复氧(HR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响及其机制.方法 体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、HR组、空质粒+HR组、ADM质粒+HR组.采用Fugene HD转染试剂,将pcDNA3.1-myc-his B空质粒和ADM真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞内,应用免疫细胞化学的方法检测转染效率,转染成功48 h后制作HR模型.锥虫蓝摄取法进行细胞计数并计算细胞存活率,分光光度法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量评价细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测ADM、Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达;Western印迹法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8、9(Caspase-3、8、9)的蛋白表达.结果 HR组ADM的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).ADM质粒+HR组的ADM表达显著高于空质粒+ HR组(P＜0.05).与正常对照组相比,HR组活细胞计数和细胞存活率显著降低,LDH含量及细胞凋亡率显著升高,Bax、Bcl-2、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著上调,Bax上调更明显,故Bax/Bcl-2升高(均P＜0.05).与HR组相比,ADM质粒+HR组活细胞计数和细胞存活率显著升高,LDH含量及细胞凋亡率显著降低,Bax、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著下调,Bcl-2表达进一步上调,Bax/Bcl-2降低(均P＜0.05).空质粒+HR组和HR组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ADM在NRK-52E细胞中的高表达可以减轻HR诱导的细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制线粒体通路和死亡受体通路实现的.     

雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制研究

[目的]研究雷奈酸锶对大鼠激素性股骨头坏死的作用及其机制。[方法]将60只Wistar大鼠采用激素造模法造模(每日腹腔注射强的松20 mg/kg,连续注射4周,同时灌胃阿莫西林溶液预防感染)。造模成功的大鼠随机分为对照组和实验组,对照组(生理盐水组)30只大鼠给予灌胃生理盐水;实验组(雷奈酸锶组)30只大鼠给予灌胃雷奈酸锶干预(900 mg/kg·d)。干预12周后处死大鼠取材,行HE、油红O染色;免疫组织化学染色检测两组股骨头内DKK-1、Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2及PPAR-γ2等表达水平。[结果]通过计算骨小梁空骨陷窝率得出对照组与实验组大鼠股骨头坏死发生率分别为66.67%(20/30)和56.67%(17/30)(P<0.05)。同时与对照组相比,给予雷奈酸锶干预的实验组脂肪细胞数量明显减少且其体积明显减小(P<0.05);免疫组织化学法结果显示实验组大鼠股骨头内DKK-1、PPARγ2的表达明显低于对照组,而实验组大鼠股骨头内Wnt3a、GSK-3β、β-catenin、Rux-2的表达明显高于对照组(P<0.05)。[结论]雷奈酸锶可以通过抑制大鼠激素性股骨头坏死模型的DKK-1过表达,激活经典Wnt信号通路,进而促进成骨分化及成骨活性,抑制其成脂分化,在一定程度上防治早期激素性股骨头坏死的发生和发展。     

中西医结合治疗激素性股骨头坏死的实验研究

目的　探讨中西医结合治疗激素性股骨头坏死的作用机制。方法　将 40只兔子随机分为对照组、模型组、中药组、介入组和综合组。于治疗后 8周 ,分别进行血液流变学、血脂、股骨头空骨陷窝数测定及观察。结果　中药组和介入组动物血浆和全血粘度、红细胞聚集指数、总胆固醇、甘油三脂和股骨头空骨陷窝率均明显低于模型组 (P <0 0 5)。综合组与模型组比较 ,全血高、中切粘度、红细胞聚集指数和甘油三脂明显降低 ,有显著差异 (P <0 0 1 ) ,与中药组和介入组比较亦有差异 (P <0 0 5) ,全血低切粘度、血浆粘度、总胆固醇降低 ,与模型组比较仍有差异 (P <0 0 5) ,空骨陷窝率较模型组显著降低 (P <0 0 1 )。结论　中药组、介入组和综合组治疗股骨头缺血性坏死 ,均可以降低血脂 ,改善血液循环 ,促进坏死骨修复和新生骨再生 ,其中综合组疗效优于单纯内服中药组及单纯介入治疗组     

丹参与骨碎补注射液防治激素诱发股骨头坏死的实验研究

目的探讨丹参和骨碎补对激素性股骨头坏死的防治机理及其交互作用.方法选用家兔50只,随机分成五组:模型组、丹参组、骨碎补组、丹参 骨碎补组、对照组.8周后观察五组家兔血液流变学、脂代谢、股骨头组织学等指标的改变.结果与对照组相比,模型组股骨头疏松,易于凿切,血液粘度和血脂升高,骨小梁变细、稀疏,空骨陷窝率增高,髓腔脂肪细胞增多;而其余各组上述病变有不同程度的减轻,其中以丹参 骨碎补组病理改变最轻.结论①丹参、骨碎补均能预防激素所致的高粘滞血症和高脂血症;②骨碎补能提高血钙血磷,激活成骨细胞,提高股骨头的骨密度,能预防激素性骨质疏松;③两药在预防SANFH方面有协同作用.     

联合应用阿托伐他汀和氯吡格雷对激素性股骨头缺血性坏死的早期干预作用

背景：目前激素性股骨头缺血性坏死（SANFH）病例较多,手术干预方法多样,保守治疗方法较少。目的：研究联合应用阿托伐他汀和氯吡格雷对SANFH兔动物模型的血脂及血浆黏度的影响,探讨联合用药对预防及治疗SANFH的可行性和机制。方法：将24只健康成年新西兰大白兔随机分为3组各8只：A组为模型组,采用Kabata造模法（第1周经耳缘静脉注射马血清10 ml/kg,间隔3周后注射第2次马血清,第5周时连续3 d腹腔内注射地塞米松磷酸钠10 mg/kg·d）制作SANFH模型;B组为治疗组,造模法同模型组,腹腔注射激素后每日给予抗凝药物氯吡格雷4 mg/kg和降脂药阿托伐他汀3 mg/kg灌胃;C组为对照组,马血清注射方法同模型组,而第5周时改为连续3 d腹腔内注射生理盐水4 ml/kg·d。各组分别于实验前、第5周注射激素或生理盐水后、第6周、第8周及第10周检测血清胆固醇、甘油三酯及血浆黏度,并行X线片检查及股骨头与肝脏病理切片观察病变情况。结果：模型组和治疗组的血清胆固醇、甘油三酯含量及血浆黏度均显著高于对照组,模型组的血清胆固醇、甘油三酯含量及血浆黏度显著高于治疗组,两两比较均有统计学差异（P〈0.05）,提示药物早期干预有效。通过X线片检查及病理切片可见治疗组股骨头坏死发生率明显低于模型组,而对照组未出现股骨头坏死。结论：联合应用阿托伐他汀和氯吡格雷可以明显抵消激素对血脂和血浆黏度的影响,可能对预防SANFH具有一定作用。