辛伐他汀纳米粒对脓毒症致急性肺损伤小鼠肺组织iNOS/eNOS平衡的调节及对预后的影响

目的分析辛伐他汀纳米粒对脓毒症致急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(i NOS)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)平衡及预后的影响。方法取45只健康雄性C57/BL6小鼠,随机分为假手术组(开腹,但不结扎穿孔)、模型组(经盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型)和干预组(脓毒症小鼠模型+尾静脉注射辛伐他汀纳米粒制剂),每组各15只。造模后24 h,通过苏木精-伊红染色观察三组小鼠病理形态学改变,采用免疫组织化学法测定三组小鼠肺组织中i NOS和e NOS表达水平,记录小鼠造模1周时的生存状况。结果经苏木精-伊红染色结果发现,假手术组小鼠肺组织无明显病理改变;模型组小鼠肺组织细胞排卵紊乱、局部肺组织完整性受破坏、肺泡间中隔增厚、肺泡腔缩小、肺间质弥漫性水肿、弥漫性中性粒细胞浸润;相比模型组,干预组小鼠肺组织中性粒细胞渗出明显减少、肺组织损伤程度较轻、肺泡完整性较好。模型组肺组织中i NOS表达水平明显高于假手术组,干预组i NOS表达水平明显低于模型组(P<0.01);模型组肺组织中e NOS表达水平明显低于假手术组,干预组e NOS表达水平明显高于模型组(P<0.01)。模型组造模1周时的生存率(6.67%)低于假手术组(93.33%),干预组生存率(66.67%)高于模型组,差异均有显著性(P<0.05)。结论辛伐他汀纳米粒可保护脓毒症致ALI小鼠肺组织损伤,调节i NOS/e NOS平衡,可能是脓毒症致ALI具有保护效应的潜在处理位点。     

脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶的变化及意义

目的:观察脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化特点及其意义.方法:24只雄性SD大鼠随机分为脓毒症组和对照组,脓毒症组按5 mg/kg体重腹腔注射脂多糖(LPS),对照组给予等量生理盐水,于注射后2h、6h经腹主动脉采血、处死,比较动脉血气分析、ELISA法检测的肺组织iNOS、白介素-6(IL-6)含量、右下肺肺组织病理切片计算的病理学肺损伤积分.结果:与对照组比较,脓毒症组大鼠氧合指数显著下降、肺组织iNOS、IL-6含量、病理学肺损伤积分均显著增加,P＜0.01.结论:脓毒症大鼠肺iNOS的过度表达增加了炎症因子的释放、增加肺血管通透性,加重肺损伤.     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的 研究血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量的影响及意义.方法 将110只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组和血必净组.皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型.分别于术后1、6、12、24、48 h活杀10只动物,留取肺组织,检测iNOS活性、NO含量、髓过氧化物酶(MPO)活性,并观察肺组织病理变化.结果 模型组肺组织iNOS活性(U/mg)在染菌后1、6、12、24 h(分别为12.57±3.20、22.17±7.29、19.73±6.23、14.37±3.78)均明显高于正常对照组(6.69±1.87,均P<0.01);血必净组6、12、24 h iNOS活性(分别为14.97±3.48、15.15±5.46、10.28±4.13)明显低于同时间点模型组(P<0.05或P<0.01).模型组肺组织NO含量(μmol/g)在染菌后1、6、12、24、48 h(分别为14.53±3.82、31.52±7.01、41.32±7.28、32.82±5.42、24.82±6.01)均显著高于正常对照组(4.94±1.48,均P<0.01);血必净组肺组织NO含量在12 h、24 h(分别为30.93±5.19、25.25±4.67)与同时间点模型组比较均明显下调(均P<0.01).模型组肺组织MPO活性(U/g)在染菌后1、6、12、24 h(分别为1.21±0.32、2.11±0.28、2.05±0.24、1.07±0.36)也明显高于正常对照组(0.55±0.18,均P<0.01);血必净组MPO活性在6 h、12 h(分别为1.69±0.47、1.37±0.42)与同时间点模型组比较明显下调(均P<0.01).染菌后24 h,模型组大鼠肺组织损伤明显,血必净组大鼠肺损伤较模型组有所减轻.结论 iNOS和NO参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的病理生理学过程;血必净注射液干预治疗能显著下调肺组织iNOS活性及NO生成,减轻创伤弧菌感染所致的肺损伤.     

辛伐他汀纳米粒对脓毒症致ALI小鼠肺组织中TLR9信号通路表达水平及预后的影响

目的 探讨辛伐他汀纳米粒对脓毒症致急性肺损伤(ALI)小鼠体内Toll样受体9(TLR9)表达水平及预后的影响.方法 将所选取的小鼠分为对照组(CO组)、脓毒症组(SE组)、静脉注射组(LI组)、纳米粒组(NA组),每组13只.采用免疫印迹法检测肺组织中TLR9蛋白表达水平,记录各组小鼠7 d内生存率,计算各组小鼠湿干...     

阿司匹林对内皮祖细胞数量与功能及其诱导型一氧化氮合酶的影响

目的观察阿司匹林对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度阿司匹林(1、2、5、10 mmol/L)分别培养3、6、12、24 h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管形成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法(Western blot)半定量测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量。结果阿司匹林减少外周血EPCs数量,并且EPCs数量随阿司匹林浓度和作用时间增加而减少。其增殖能力、迁移能力、黏附能力、体外血管形成能力和iNOS含量亦随阿司匹林浓度和作用时间增加而降低。结论阿司匹林通过EPCs中iNOS含量,降低EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,从而抑制内皮细胞的生成。     

早期高压氧治疗对急性脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶的影响及疗效评价

目的探讨早期高压氧（HBO）治疗对急性脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性表达变化的影响及疗效评价。 方法选取70只健康SD大鼠按随机数字表法分为对照组、假手术组、SCI组、HBO 2 h组、HBO 4 h组、HBO 6 h组和HBO 8 h组,每组10例。将SCI组、HBO 2 h组、HBO 4 h组、HBO 6 h组和HBO 8 h组大鼠均采用改良的Allen法制成T8～T9急性脊髓损伤模型（打击后大鼠尾部痉挛摆动、双侧下肢瘫痪,诱发电位测定值明显异于对照组,表明制模成功）;假手术组只进行硬膜囊暴露手术但不打击损伤脊髓;对照组不做任何处理。对照组、假手术组和SCI组仅饲养不做高压氧处理;HBO 2 h组、HBO 4 h组、HBO 6 h组和HBO 8 h组分别在制模成功后2、4、6和8 h始置于动物实验纯氧舱内行高压氧治疗,每日1次,连续7 d。分别于制模成功时和高压氧治疗完成时2个时间点,采用Gale等建立的联合行为评分(CBS)法对各个损伤组大鼠后肢功能进行神经学评定,使用神经肌电图机检测运动诱发电位（MEP）评价大鼠肢体功能。在HBO治疗结束后24 h内处死所有大鼠取材,取材后用重氮比色法测定iNOS表达量,用硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量。将所得数据进行统计学分析比较。 结果SCI组、HBO 2 h组和HBO 4 h组在实验期间各死亡1只,余67只大鼠纳入结果分析。①治疗结束后,脊髓损伤的大鼠脊髓组织中iNOS检测显示, SCI组iNOS测定值为（0.64±0.13）U/L,表达量最高;iNOS表达量逐渐明显降低,以HBO 8 h组最为明显（P<0.05）,HBO 8 h组iNOS值为（0.36±0.10）U/L,表达量最低,且与其它各组间差异有统计学意义（P<0.05）;但脊髓损伤各组大鼠的iNOS值仍高于假手术组的（0.33±0.07）U/L和对照组的0 U/L,且组间差异均有统计学意义（P<0.05）。②HBO治疗结束后,对照组、假手术组和SCI组大鼠血清中NO的测定量分别为（6.52±4.17）、（48.36±8.49）和（105.68±13.12）mmol/L;经HBO治疗后大鼠NO生成量明显降低,以HBO 8 h组最为明显,HBO 2 h组、HBO 4 h组、HBO 6 h组和HBO 8 h组大鼠血清NO的测定量分别为（89.25±12.82）、（66.53±17.91）、（41.33±15.59）和（33.14±11.21）mmol/L,均低于SCI组（P<0.05）;且与假手术组比较,组间差异亦均有统计学意义（P<0.05）。③与对照组及其它HBO治疗组比较,HBO治疗各组大鼠的CBS评分百分比均有提高（P<0.05）,运动功能逐渐恢复良好,以HBO 8 h组最为明显,且组间差异均有统计学意义（P<0.05）。④除对照组和假手术组外,其余各组脊髓损伤大鼠治疗前、后MEP检测的潜伏期和波幅组间比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论大鼠急性脊髓损伤后8 h开始高压氧治疗与损伤后2、4和6 h开始高压氧治疗相比,在减少iNOS的合成和促进运动功能恢复方面有更明显的作用。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与急性冠脉综合征患者尿酸的关系

目的 探讨中国汉族急性冠脉综合征(ACS)患者尿酸与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性的关系.方法 采用聚合酶链反应/限制性片段长度多态性方法分析58例ACS患者(ACS组)和43例对照组患者的eNOS基因Glu298→Asp变异体.结果 与对照组比较,ACS组eNOS基因Glu/Glu、Glu/Asp、Asp/Asp基因型频率差异无统计学意义(43.1%、36.2%、20.7%比48.8%、34.9%、16.3%,x2=0.446,P=0.800).与eNOS基因Glu298等位基因携带者比较,ACS的危险性在Asp/Asp携带者中并不增高[相对比值比(OR)1.34,95%可信区间(CI)0.479～3.755,P=0.575].eNOS基因Glu298→Asp变异体与Duke积分无显著性关系[Glu/Glu(48.33±19.61)分,Glu/Asp(38.19±15.12)分,Asp/Asp(46.73±19.90)分,P=0.248];但Glu298→Asp基因型与ACS组患者血清尿酸存在显著的关联[Glu/Glu(298.92±87.27)μmol/L,Glu/Asp(370.80±95.80)μmol/L,Asp/Asp(346.16±93.71)μmol/L,P=0.01 7].结论 在中国汉族人群中,eNOS基因Glu298→Asp多态性与ACS患者不相关,而与ACS组患者血清尿酸存在显著的关联.     

蛋白激酶C对原代培养神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。方法：采用SD大鼠大脑皮层神经元原代培养为模型，观察PKC刺激剂PMA对培养神经元的毒性率、凋亡及神经元内iNOS表达的影响。结果：PMA可以明显地促进神经元内iNOS的表达，增加神经元的毒性率，诱导神经元凋亡。结论：PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内iNOS的表达而实现的。     

阿司匹林对内皮祖细胞数量与功能及其诱导型-氧化氮合酶的影响

目的观察阿司匹林对外周血内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞，将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上，培养7d后收集贴壁细胞，加入不同浓度阿司匹林（1、2、5、10mmol／L）分别培养3、6、12、24h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC—UEA—I和Dil—acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs，将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTF比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管形成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力，免疫印迹杂交法（Westernblot）半定量测定诱导型一氧化氮合酶（iNOS）含量。结果阿司匹林减少外周血EPCs数量，并且EPCs数量随阿司匹林浓度和作用时间增加而减少。其增殖能力、迁移能力、黏附能力、体外血管形成能力和iNOS含量亦随阿司匹林浓度和作用时间增加而降低。结论阿司匹林通过EPCs中iNOS含量，降低EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力，从而抑制内皮细胞的生成。     

生脉饮对内毒素诱导急性肺损伤大鼠一氧化氮及其合酶的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)和诱生型一氧化氮合酶(iNO S)在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(AL I)中的作用及生脉饮对其的影响。方法:雄性W istar大鼠按随机数字表法分为对照组、AL I组、生脉饮组、地塞米松组。舌下静脉注射LPS复制AL I模型。观察大体标本、组织病理以及肺湿/干重比、支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞比、蛋白含量、肺毛细血管通透性和肺泡通透性指数等生物学指标。测定血浆NO和肺组织匀浆iNO S活性。结果:与对照组比较,AL I组肺组织病理显示肺间质及肺泡有明显的损伤和细胞浸润,各生物学指标及NO和iNO S显著升高(P<0.05或P<0.01);与AL I组比较,地塞米松组和生脉饮组肺组织病理明显减轻,各生物学指标及NO、iNO S也相应下降(P<0.05或P<0.01)。结论:地塞米松和生脉饮两种药物对LPS诱导的AL I具有保护作用,其机制可能是通过抑制NO水平和iNO S活性实现。     

诱导型一氧化氮合酶在动物颞下颌关节软骨组织中的定位表达

目的 探讨颞下颌关节骨关节病（TMJOA）病变发展的不同阶段,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在软骨组织中的表达强度及在组织中的定位。方法 8只山羊分为4组。首先采用1%胶原酶注射山羊关节腔,建立TMJOA动物模型。注射胶原酶后第2、4、12、24周,分别处死2只动物。免疫组化法检测iNOS在TMJOA关节软骨组织中的表达情况。结果 对照组无iNOS表达,各实验组在软骨组织中均有iNOS表达。病变中期iNOS表达强烈,提示NO与软骨的破坏有关。在病变后期,iNOS的表达逐渐变弱。结论 iNOS在TMJOA发生发展的过程中起着重要的作用。     

诱导型一氧化氮合酶和血红素氧合酶-1在百草枯中毒大鼠肾脏中的表达

目的 观察百草枯中毒大鼠肾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,探讨其可能的病理生理机制.方法 SD大鼠84只随机分为空白对照组(A组)42只和染毒组(B组)42只.B组百草枯(25 mg/kg)、A组等量盐水腹腔注射.观察2组肾组织病理学变化及iNOS、HO-1表达,并检测HO-1 mRNA.结果 ①A组组织结构清晰.未见充血、水肿及空泡变性等病理变化;B组组织结构清晰度下降,染毒3 h即可见充血、水肿及空泡变性等病理变化,1 d达顶峰,其后缓解趋势不明显.②iNOS:A组多不表达;B组染毒后3 h在皮质部肾小管上皮细胞及肾小球内皮细胞的胞质中出现表达,随时间延长明显增强,1 d达高峰,其后维持较强表达.③HO-1与HO-1 mRNA:A组多不表达;B组染毒3 h在皮质部肾d、管上皮细胞的胞膜及胞质HO-1呈阳性表达,免疫组织化学评分(IHS)升高,HO-1 mRNA的表达增强,与A组相比差异有统计学意义(P<0.05),1 d达顶峰,之后减弱,5 d仍有阳性表达,但与A组相比,IHS差异无统计学意义(P>0.05).结论 iNOS和HO-1参与百草枯中毒肾损伤的发病过程,但其作用方式、调节途径等尚需进一步研究.     

辛伐他汀、氨氯地平对实验性兔动脉粥样硬化进程中NOS/NO系统的影响

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)系统在动脉粥样硬化进程中的变化、相互关系及辛伐他汀、氨氯地平对动脉粥样硬化进程中iNOS-NO的影响。方法 24只家兔予以高胆固醇饮食8周,8周后随机分为三组(n=8),三组均停用高胆固醇饮食,改普通饮食8周;模型组不用干预,另外两组分别喂饲辛伐他汀及氨氯地平进行药物干预。另取8只家兔予以普通饮食16周作为对照组。结果与对照组比较,模型组血脂水平明显升高,血清NO含量明显降低,iNOS表达明显升高(P均<0.01)。与模型组比较辛伐他汀组血浆TC、TG、LDL-C、ox-LDL-C下降明显(P<0.01),HDL-C升高(P<0.01);血清NO含量明显升高(P<0.01),iNOS表达明显减少(P<0.05)。而氨氯地平组血脂水平与模型组比较无统计学差异(P>0.05);血清NO含量亦无统计学差异(P>0.05),但iNOS表达明显减少(P<0.05)。结论动脉粥样硬化进程中,辛伐他汀、氨氯地平均可以通过下调血红素加氧酶/NO系统而延缓动脉粥样硬化进程。     

脂多糖诱导巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶的实验研究

目的观察脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对小鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(in-ducible nitric oxide synthase,iNOS)的诱导作用。方法常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞随机分成两组:空白对照组(培养基中不含LPS)及LPS组(分别含LPS0.01,0.1,1.0,10mg/L的培养基培养24h)。采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western Blotting方法测定诱导型一氧化氮合酶的基因及蛋白表达水平。结果RT-PCR和Western Blotting结果表明,经0.1mg/LLPS刺激后细胞iNOS mRNA及蛋白表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05),并且在一定范围内呈剂量-效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞产生诱导型一氧化氮合酶。     

Expression of nitric oxide synthase in ulcerative colitis

Abstract. Nitric oxide (NO) is generated from L-arginine by a family of enzymes called the NO synthases. Previous investigators have proposed that the expression of this inducible enzyme (iNOS) may account for the characteristic vasodilatation, oedema and impairment of gut motility seen in active ulcerative colitis. Using a specific antibody to iNOS, we have investigated the distribution of this enzyme in colonic tissue from patients with histologically proven ulcerative colitis. Eight patients with ulcerative colitis expressed calcium-independent citrulline activity (9.96±2.34 pmol citrulline mg^-1 protein min^-1) and showed immunoreactivity to the iNOS antibody within the inflammatory infiltrate of the lamina propria, and also within the cytoplasm of the epithelial cells lining the colon. Five age-matched controls showed no calcium-independent citrulline activity (0.2 ±0.08 pmol citrulline mg^-1 protein min^-1) and no immunoreaction to the antibody. We conclude that this enzyme is present in colonic tissue including the epithelium from patients with active colitis. Inhibition of this enzyme may provide a novel therapeutic option for patients with active ulcerative colitis.     

早期自然流产患者蜕膜组织中iNOS的表达及意义

目的通过测定早期自然流产患者蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶的表达,探讨其与自然流产发病的关系。方法应用免疫组织化学法,对41例妇女蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶的表达进行检测,其中20例为早期自然流产患者（流产组）,21例为要求终止妊娠的正常早孕妇女（对照组）。结果在早期妊娠的蜕膜组织细胞浆内,间质细胞浆内和腺上皮及腔上皮细胞浆内均有iNOS的表达;早期自然流产组蜕膜组织中iNOS的表达（2例呈阴性,2例呈弱阳性,10例呈阳性,6例呈强阳性）明显强于对照组（2例阴性,10例弱阳性,7例阳性,2例强阳性）,两者比较,差异有统计学意义（P=0．026）。结论早期自然流产患者蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶呈高表达,iNOS可能与自然流产有密切的相关性。     

诱导型一氧化氮合酶基因启动子区微卫星多态与急性冠状动脉综合征

目的:研究中国汉族人群诱导型一氧化氮合酶(NOS2A)基因启动子区-2.5kb微卫星CCTTT串联重复序列多态与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性。方法:应用微卫星分析技术,检测CCTTT微卫星多态在117例ACS患者和125名健康对照者中的频率分布。结果:根据CCTTT微卫星多态对NOS2A基因转录水平的影响,将CCTTT串联重复序列分为S(重复次数≤13)和L(重复次数>13)2类,基因型分布在ACS组(S/S=48,S/L=64,L/L=5)和对照组(S/S=56,S/L=49,L/L=20)间存在显著差异(χ2=11.354,P=0.003)。对照组的L/L基因型频率显著高于ACS组,r为0.234(95%CI=0.085～0.647,P=0.003),可能具有保护性作用。分层研究发现,女性ACS与对照组相比,基因型分布存在显著差异(χ2=8.134,P=0.017)。结论:NOS2A基因启动子区CCTTT微卫星多态可能与中国汉族ACS,尤其与女性患者的遗传易感性有关。     

脑缺血后脑组织诱生型一氧化氮合酶组织病理学及轻度低温对其影响

目的观察脑缺血与诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达和组织病理的关系及轻度低温的影响。方法沙鼠３０只分假手术组、缺血组及轻度低温组（颞肌温度 ３３℃,１２ｈ）,夹闭双侧颈总动脉３０ ｍｉｎ,再灌注２４、４８ ｈ检测脑组织ｉＮＯＳ基因表达及组织病理变化。结果原位杂交显示缺血组胶质细胞等呈现ｉＮＯＳ基因表达,海马区ＣＡ１神经细胞部分皱缩及缺失,轻度低温组与缺血组相比ｉＮＯＳ阳性细胞明显减小,灰阶值也有明显下降（Ｐ＜０．０１）,神经元结构基本正常。结论轻度低温抑制脑缺血后脑组织ｉＮＯＳ 基因表达及减轻海马区组织损害程度可能是其脑保护机制之一。