微小RNA-17-5p及RNA-21在卵巢癌患者血清中的表达及与术后复发的关系

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-17-5p及miR-21在卵巢癌患者血清中的表达及与术后复发的关系。方法选取2014年1月至2016年6月河北省沧州市中西医结合医院102例卵巢癌患者为研究对象,检测患者血清miR-17-5p及miR-21表达情况,分析不同临床特征患者血清miR-17-5p及miR-21水平差异;根据患者术后是否复发,将患者分为复发组(45例)和未复发组(57例),探讨血清miR-17-5p及miR-21表达情况与卵巢癌术后复发的关系;根据血清miR-17-5p和miR-21的表达情况,将患者分为高表达组(60例)和低表达组(42例),探讨不同miR-17-5p及miR-21表达患者复发情况。结果不同临床分期、病理类型、分化程度和是否存在淋巴结转移的卵巢癌患者血清miR-17-5p及miR-21表达,差异有显著性(P<0.05)。术后复发组患者血清miR-17-5p及miR-21表达水平显著高于未复发组(P<0.05)。血清miR-17-5p及miR-21检测预测卵巢癌患者术后复发的曲线下面积分别为0.819、0.807,预测灵敏度为66.7%、64.4%,特异度为84.2%、80.7%。血清miR-17-5p和miR-21低表达组患者术后3年内复发率明显低于高表达组(P<0.05)。结论血清miR-17-5p和miR-21表达与卵巢癌临床分期和分化程度有关,检测血清miR-17-5p和miR-21水平可以辅助评估术后复发。     

微小RNA-143在脓毒症患者中表达及意义

目的 探讨脓毒症患者外周血白细胞中微小RNA-143(microRNA-143,miR-143)的表达变化及其与脓毒症严重程度的关系.方法 采用实时定量PCR法检测40例脓毒症患者、20例非感染全身性炎症反应综合征患者和20例正常对照者外周血白细胞中miR-143表达量.并测定血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白介素-10(interleukin-10,IL-10)水平,分析miR-143与白细胞总数、TNF-α,IL-10和序贯器官衰竭估计评分间相关性.结果 脓毒症组miR-143表达量较正常对照组明显降低(P＜0.01),白细胞、IL-10水平和IL-10/TNF-α比值明显升高(P＜0.01),与非感染全身性炎症反应综合征组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);脓毒症组中死亡组miR-143表达量较存活组明显降低(P＜0.05),而IL-10水平和IL-10/TNF-α比值升高(P＜0.01);脓毒症患者miR-143表达量与序贯器官衰竭估计评分、血清TNF-α和IL-10呈明显负相关;与白细胞无相关性.结论 脓毒症患者外周血miR-143水平可反映机体免疫反应状态,在判断疾病严重程度及预后中有一定价值.     

基于微小RNA-142-3p与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4的相互作用探讨细胞因子在原因不明反复性流产的作用

目的 探讨原因不明反复性流产(URSA)过程中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的相互作用对细胞因子影响的可能机制。方法 选取2016年9月至2017年12月中国科学院大学深圳医院(光明)收治的45例URSA患者纳入流产组,选取同期于中国科学院大学深圳医院(光明)进行检查的40例健康早孕者作为对照组进行回顾性研究。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的表达水平。结果 流产组研究对象CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比低于对照组(P <0.05);流产组研究对象外周血中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)的表达水平低于对照组(P <0.05),而白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平均高于对照组(P<0.05);流产组研究对象的IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4比值...     

脓毒症致急性肾损伤患者miR-142-3p与PCT的关系及预测病死率的价值

目的:研究脓毒症致急性肾损伤(AKI)患者miR-142-3p与降钙素原(PCT)的关系及预测病死率的价值。方法:回顾性分析2016-09—2019-03期间我院收治的脓毒症患者并分为AKI组、非AKI组,另取同期体检的健康志愿者作为对照组。检测血清miR-142-3p表达量及PCT、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)含量,随访28 d死亡情况。结果:AKI组的血清miR-142-3p表达量及PCT、BUN、Scr含量均明显高于非AKI组、对照组(P0.05)且miR-142-3p与PCT、BUN、Scr呈正相关;AKI组中死亡患者的年龄、SOFA评分、APACHE II评分、miR-142-3p表达量及PCT含量均明显高于存活患者(P0.05),BUN、Scr与存活患者比较无差异(P0.05);经Logistics回归分析,年龄、SOFA评分、APACHE II评分、miR-142-3p是AKI患者28 d内死亡的独立危险因素;经ROC曲线分析,miR-142-3p预测AKI患者28 d内死亡的最佳截点为1.085,敏感度为72.73%、特异度为70.59%。结论:脓毒症致急性肾损伤患者miR-142-3p的增多与炎症反应激活、肾功能损害程度相关且对28 d死亡具有良好的预测价值。     

miR-494-3p在胃癌患者血清外泌体中的表达及价值

摘要:目的探究微小 RNA-494-3p(miR-494-3p)在胃癌患者血清外泌体中的表达水平及临床意义。方法采用 TaqMan探针 法RT-qPCR检测44例胃癌患者和44例健康人对照组血清外泌体中miR-494-3p的表达水平,采用ROC曲线分析并评估其对 胃癌的鉴别诊断价值。同时,在14例胃癌组织和16例胃良性疾病对照患者胃组织中进行进一步验证。结果与健康人对照 组( 1.00+0.36)相比,胃癌组血清外泌体中miR-494-3p的相对表达水平(0.21+0.03)显著降低,差异有统计学意义(Z=3.64,P< 0.01);胃癌组织中miR-494-3p的相对表达水平(0.22+0.07)亦显著低于胃良性疾病对照组( 1.00+0.39),差异有统计学意义 (Z= 2.66, P<0.01)。血清外泌体miR-494-3p筛查胃癌和健康人的ROC曲线下面积( AUCROC )为0.725( 95% CI :0.622 ~0.829 , P<0.01),当ecut-off 值为0.370时,其敏感性为50.0%，特异性为86.4%,阳性预测值为63.3%,阴性预测值为78.6%,准确性为 68.2%。结论miR-494-3p 在胃癌患者血清外泌体中呈低表达，有望成为胃癌筛查和辅助鉴别诊断的潜在生物学标志物。     

脓毒症并发急性肾损伤患儿血清miR-452-3p的水平表达及其临床意义

目的　探讨miR-452-3p在脓毒症并发急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）患儿中的表达及其临床意义。方法　选取2018年1月～2020年12月海口市妇幼保健院收治的脓毒症并发AKI患儿106例,根据生存情况分为生存组（n=71）和死亡组（n=35）,检测两组血清miR-452-3p,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）及肾损伤分子-1（KIM-1）水平。应用多因素Logistic回归分析AKI患儿发生死亡的危险因素。绘制ROC曲线分析miR-452-3p,NGAL及KIM-1预测AKI患儿死亡的价值。结果　死亡组血清miR-452-3p（3.92±1.61 vs 2.17±0.95）,NGAL（562.38±53.62mg/L vs 287.46±31.70 mg/ L）及KIM-1（29.15±6.28μg/ L vs 15.96±3.20μg/ L）水平明显高于生存组,差异均有统计学意义（t=18.245,15.117,11.613,均P＜0.001）。多因素Logistic回归分析显示,miR-452-3p（OR=2.583, 95%CI : 1.690~5.374）,NGAL（OR=2.792, 95%CI:1.835~6.153）及KIM-1（OR=1.950, 95%CI:1.274~3.902）水平升高是AKI患儿发生死亡的独立危险因素（P＜0.001）。ROC曲线分析显示,miR-452-3p,NGAL及KIM-1三项联合预测AKI患儿死亡的曲线下面积（0.947,95%CI:0.886~0.991）最大,其敏感度和特异度分别为96.2%和89.5%。结论　miR-452-3p在脓毒症并发AKI患儿中明显升高,联合NGAL及KIM-1预测AKI患儿死亡具有更高的价值。     

鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值

目的　探讨鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值。方法　选取2016年1月～2020年7月涿州市医院收治的106例鼻咽癌患者和50例健康对照组作为研究对象,采用实时定量PCR法检测miR-144-3p及miR-151-3p表达水平。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-144-3p及miR-151-3p诊断鼻咽癌的价值。Pearson相关分析鼻咽癌患者血清miR-144-3p与miR-151-3p表达水平的相关性。结果　鼻咽癌组血清miR-144-3p（2.36±1.05 vs 0.82±0.27）及miR-151-3p（3.58±1.73 vs 0.97±0.36）表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义（均P <0.001）。鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移有关（t=5.824~19.307,均P <0.01）。ROC曲线显示, miR-144-3p为1.61及miR-151-3p为2.25是诊断鼻咽癌的最佳截断值,二者联合诊断鼻咽癌的曲线下面积（0.937,95%CI:0.875~0.99）最大,其敏感度和特异度为95.3%和87.0%。鼻咽癌患者血清miR-144-3p表达水平与miR-151-3p呈正相关（r=0.872,P<0.001）。结论　鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3表达水平明显升高,二者联合诊断鼻咽癌的价值较高。     

miR-142-3p在感染后肠易激综合征中的表达及意义

目的 探讨微RNA（miR）-142-3p在感染后肠易激综合征（PI-IBS）中的表达及意义,进一步阐明miR-142-3p调控PI-IBS发生发展的分子机制。方法 使用脂多糖（LPS）刺激后,在大鼠肠上皮细胞上考察miR-142-3p对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）-Toll样受体4（TLR4）靶基因的作用;通过TargetScan预测软件分析发现HMGB1是miR-142-3p的靶基因,之后采用旋毛虫感染建立PI-IBS模型,原代肠上皮细胞进行小干扰RNA（siRNA）转染实验,提取肠上皮细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测,检测细胞中 miR-142-3p、HMGB1和TLR4的mRNA表达水平,考察miR-142-3p对HMGB1-TLR4靶基因的作用,并进一步验证HMGB1在miR-142-3p抗炎中的介导作用。结果 炎症基因NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α均为HMGB1-TLR4的靶基因。使用LPS刺激后,施加miR-142-3p大大抑制了HMGB1-TLR4靶基因（NLRP3、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α）的表达（P均< 0.01）。使用siRNA对肠上皮细胞中的HMGB1靶向敲低后,细胞中的HMGB1表达降低超过80%,HMGB1-TLR4靶基因（NLRP3、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α）的表达均无明显变化（P均> 0.05）。结论 miR-142-3p在肠上皮细胞中具有抗炎作用,其抗炎作用依赖于HMGB1。     

微小RNA-1246在结直肠癌患者血清中的表达水平及其临床意义

目的 探讨微小RNA(miRNA)-1246在结直肠癌(CRC)患者血清中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系,并分析miR-1246联合癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199检测对CRC的诊断价值。方法 选取2017年1月至2020年12月在新密市中医院接受手术治疗的60例CRC患者作为CRC组,另选取同期在新密市中医院住院治疗的60例结直肠腺瘤(CRA)患者作为CRA组,选取同期在新密市中医院体检的60例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测血清miR-1246表达水平,采用电化学发光免疫分析法检测血清CEA和CA199水平,采用Spearman相关分析CRC患者血清miR-1246表达水平与血清CEA、CA199水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-1246联合CEA、CA-199检测对CRC的诊断价值。结果 CRC组血清miR-1246表达水平显著高于CRA组与健康对照组(P<0.05),而CRA组和健康对照组血清miR-1246表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移和有远处转移的...     

胃癌患者血清 microRNA-192和 microRNA-215的表达及临床意义

目的探讨血清miR-192、miR-215作为胃癌诊断标记物的可能性。方法收集2011年9月至2012年1月四川省人民医院29例术前胃癌患者和10名健康对照者血清并提取总RNA,反转录后采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-192、miR-215相对表达量,收集胃癌患者的详细临床病理资料,比较miR-192、miR-215在胃癌患者与健康人之间的差异,并与临床病理特征之间的关系进行分析,构建受试者工作特征曲线（ROC曲线）,通过曲线下面积（AUC）计算miR-192、miR-215检测及其联合应用诊断胃癌的敏感性和特异性。结果胃癌患者血清中miR-192、miR-215表达水平分别较正常对照组升高8.87倍（P＝0.002）和4.14倍（P＝0.037）。在不同肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤大小的胃癌患者之间比较,血清中miR-192、miR-215表达无统计学差异。 ROC曲线分析显示,miR-192、miR-215检测及其二者联合应用于胃癌诊断的AUC值分别为0.833（95％CI：0.793～0.993,P＜0.001）、0.724（95％ CI：0.555～0.894,P＝0.002）、0.893（95％CI：0.699～0.966,P＝0.037）,敏感性分别为75.9％、62.1％、75.9％,特异性分别为90.0％、88.3％、92.1％。结论胃癌患者血清中miR-192和miR-215表达可能与胃癌的形成或发展有关。 miR-192、miR-215检测及其联合应用,对胃癌的诊断有较高的敏感性和特异性,提示这两种血清miRNA有望作为胃癌的诊断标记物。     

miR-142-3p靶向调控mll-af4融合基因的实验研究

本研究探讨mll-af4融合基因的表观遗传学调控机制,以筛选靶向调控mll-af4融合基因的microRNA。利用Targetscan在线分析软件预测特异性靶向mllaf4基因3′端非翻译区域（3′-untranslated region,3′UTR）的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增mll-af4基因3′UTR序列,插入经EcoRI和PstI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-142-3p mimics以脂质体Hiperfect转染至RS4;11细胞,选用实时定量PCR及Western blot检测mll-af4 mRNA及蛋白的表达。结果表明,成功构建了含有1935bp、2104bp和1371bp的mll-af4基因3′UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-AF4-3′UTR,并通过酶切及基因测序方法鉴定得到证实。荧光素酶报告实验提示,miR-142组荧光素酶活性明显低于对照组。RS4;11细胞中过表达miR-142-3p可以明显下调MLL-AF4融合蛋白及mRNA表达。结论：miR-142-3p通过靶向结合mll-af4基因3′UTR的结合位点特异调控mll-af4基因表达。     

MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用

目的检测microRNA-199a-3p（miR-199a-3p）在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用。方法利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用。结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%（14/18）的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞。结论我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能。     

microRNA-21在胃癌患者血清中的表达及临床意义

目的 分析microRNA-21在胃癌患者血清的表达及临床意义.方法 前瞻性选取首都医科大学附属北京友谊医院消化分中心60例胃癌患者及健康体检中心年龄性别匹配的健康对照人群60例的临床资料.提取胃癌患者和健康对照人群的血清RNA,用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法分析microRNA-21的表达.血清mic...     

微小RNA-155在脓毒症小鼠肝脏内的表达变化及作用研究

目的 探讨肝组织中微小RNA-155(miR-155)表达在脓毒症小鼠肝损伤中的作用.方法 按随机数字表法将120只BALB/c小鼠分为脓毒症组和正常对照组,每组60只.腹腔注射脂多糖(LPS)20 mg/kg复制脓毒症模型,术后0、2、6、12、24、48 h每组各取10只小鼠的血及肝组织标本.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,并观察肝组织病理改变;用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中miR-155的表达.结果 脓毒症组血清和肝组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-10水平均随制模时间延长呈升高趋势,TNF-α、IL-6达高峰后逐渐降低,但仍高于对照组水平;TNF-α(ng/L)于2h达高峰(血清:1538.46±102.12比64.52±18.44,肝:255.26±41.23比60.21±13.55),IL-6(μg/L)于6h达高峰(血清:875.33±102.37比153.72±20.67,肝:9.22±0.82比3.35±0.36),IL-10(ng/L)于48 h达高峰(血清:520.13±88.52比23.43±3.01,肝:260.12±50.38比16.37±3.71),与正常对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).脓毒症组血清ALT活性(U/L)随制模时间延长逐渐增加,至48 h达高峰(603.26±70.21比45.84±5.64),与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).注射LPS后12h,肝组织结构紊乱,大量炎性细胞浸润,肝细胞水肿、坏死;肝组织中miR-155相对表达量在注射LPS后2h开始升高,12h达高峰,为正常对照组的(72.96±9.34)倍(P＜0.05).结论 MiR-155表达增加在脓毒症肝损伤机制中起重要作用.     

乳腺癌14-3-3 sigma基因表达及其临床意义

目的 探讨乳腺癌14—3—3sigma基因表达及其临床意义。方法 采用RT—PCR和western—blot方法,分别对40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变的乳腺组织,半定量检测14—3—3sigma基因的表达情况。结果 40例乳腺癌患者中,有35例（35／40,87．5％）没有检测出14—3—3sigma mRNA;western—blot也证明,40例中有32例14—3—3sigma蛋白表达缺失（32／40,80．0％）,两种试验同时阴性的有31例（77．5％）,另各有2例低表达。而在18例乳腺良性病变的患者,RT—PCR和western—blot均检测出14—3—3sigma基因表达。结论 14—3—3sigma基因表达缺失或低表达是乳腺癌的经常性事件,研究乳腺癌14—3—3sigma基因表达情况,可为乳腺癌的诊断提供实验室依据。     

miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中中的表达及诊断价值研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中(AIS)中的表达及临床诊断价值。方法分别收集该院50例非脑卒中患者和50例AIS患者的血清标本作为对照组和病例组。采用实时荧光定量PCR法检测血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的表达水平,同时将血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的水平与研究对象的临床诊断价值进行对比分析。结果病例组血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。AIS患者血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p与美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分呈显著正相关(r=0.605、0.667、0.710,均P<0.05)。miRNA-17-5p、miRNA-103-3p、miRNA-144-3p及三者联合区分AIS患者与非AIS的受试者工作特征曲线下面积分别为0.846(95%CI:0.757~0.935,P<0.001)、0.866(95%CI:0.788~0.945,P<0.001)、0.935(95%CI:0.888~0.982,P<0.001)和0.976(95%CI:0.953~0.999,P=0.000);灵敏度和特异度分别为84%和92%、84%和88%、92%和86%、92%和94%。结论miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p是AIS诊断的潜在标志物。     

丙型肝炎患者血清hsa miR-17-5p和has-miR-223-3p表达及意义

摘要：目的：探讨丙型肝炎(丙肝)患者血清hsa-miR-17-5p和hsa-miR-223-3p的表达情况及意义。 方法：采用实时荧光定量PCR检测30例丙肝患者和32例体检健康者血清hsa-miR-17-5p和hsa-miR-223-3p的表达水平。 结果：丙肝组血清hsa-miR-17-5p相对表达量［1.96（1.27,2.82）］比体检健康组［1.29（1.01,1.52）］显著升高（Z=2.94,P<0.05）,而丙肝组血清hsa-miR-223-3p相对表达量［0.29（0.22,0.39）］比体检健康组［0.56（0.45,0.64）］显著降低（Z=4.21,P<0.05）。体检健康组hsa-miR-17-5p表达水平与丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性均无相关性（r分别为0.316和0.073,P>0.05）;hsa-miR-223-3p表达水平与ALT和AST活性亦无相关性（r分别为0.063和0.121,P>0.05）。而丙肝组hsa-miR-17-5p表达水平与ALT和AST活性存在正相关（r分别为0.985和0.972,P<0.05）;hsa-miR-223-3p表达水平与ALT和AST活性存在负相关（r分别为-0.446和-0.450,P<0.05）。 结论：丙肝患者血清hsa-miR-17-5p和hsa-miR-223-3p表达失调,hsa-miR-17-5p有望成为判断丙肝患者肝损伤的潜在分子标志物。