mRNA差异显示法克隆前列腺癌相关基因

目的 克隆前列腺癌相关基因。方法 应用改进的mRNA差异显示技术，从前列腺癌患者和正常成人前列腺组织中获得两者的差异片段，即表达序列标签，克隆测序分析，采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法证实。结果 正常成人和前列腺癌患者的前列腺组织存在明显的基因表达差异。在GenBank分析的7个差异显著的片段中，5个为新基因片段，1个与基因聚集素(clusterin)100％同源，在前列腺癌组织中高表达；另一个与超氧化物歧化酶1(SODl)97％同源，在正常前列腺组织中高表达。RT-PCR结果证明前列腺癌组织及前列腺癌细胞株中，clusterin与内参基因β-actin的相对表达量明显高于正常前列腺组织。结论 5个新基因片段、clusterin和SODl基因表达在前列腺癌的发生、发展中可能发挥重要作用。     

前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达的意义

目的探讨前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达及临床意义.方法采集44例中晚期前列腺癌（PCa）患者、20例良性前列腺增生（BPH）患者及18例健康男子外周血,分离单个核细胞,提取总RNA.RT-PCR琼脂糖电泳法检测DD3 mRNA,以β-actin为内参照,以出现311-bp和184 bP片段为DD3 mRNA阳性,仅出现184 bp片段为DD3 mRNA阴性. 结果 20例BPH患者和18例健康青年男子外周血标本中均无DD3 mRNA表达,44例PCa血标本中DD3mRNA表达13例（29.5%）.B期、C期及D期患者DD3 mRNA阳性率分别为0%（0/3）、18%（2/11）及37%（11/30）,各期之间差异无统计学意义（P＞0.05）.PCa伴骨转移患者外周血中DD3 mRNA阳性率为44%（10/22）,而无骨转移者其阳性率为14%（3/22）,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.PCa未治疗组、去势治疗组的DD3 mRNA阳性率分别为64%（7/11）、18%（6/33）,组间差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 PCa患者外周血中可检测到DD3 mRNA表达,DD3 mRNA可望作为诊断PCa血行转移和治疗监测的良好标志物.     

前列腺癌患者外周血中前列腺特异性膜抗原mRNA的表达

采用巢式ＲＴ ＰＣＲ方法检测 33例前列腺癌 (ＰＣａ)患者外周血中前列腺特异性膜抗原 (ＰＳＭ)ｍＲＮＡ的表达 ,报告如下。材料与方法　 4 3例患者分 2组 :(1)ＰＣａ组 :33例 ,其中Ｂ期 9例 ,Ｃ期 2 0例 ,Ｄ期 4例 ,均经前列腺穿刺病理证实。2 1例接受过黄体生成素释放激素类似物 (ＬＨＲＨ)治疗。 (2 )良性前列腺增生(ＢＰＨ)组 :10例 ,经ＴＵＲＰ术后病理证实。取患者静脉血 5ｍｌ,Ｆｉｃｏｌｌ分离白细胞 ,提取ＲＮＡ ,逆转录ｃＤＮＡ ,巢式ＰＣＲ扩增 ,扩增产物用凝胶电泳观察 ,测序鉴定ＰＣＲ结果。统计学方法采用 χ2 检验 ,χ2 =35 …     

前列腺癌患者PCA3 mRNA的表达及其临床意义

目的：评价PCA3在前列腺癌诊断、临床分期及Gleason评分中的临床应用价值。方法：选取2005年11月～2006年9月在我院住院的前列腺癌患者56例,其中T2期12例,T3期21例,T4（N0～3,M0～1）期23例;Gleason评分5～7分27例,8～10分29例;BPH患者23例,健康男性9例。分别获取其外周血及前列腺按摩液,采用RT—PCR方法检测两种体液标本中PCA3的表达阳性情况,使用SPSS12．0统计软件包对其结果进行分析。结果：BPH和对照组两种体液标本未见PCA3阳性表达,而PCa患者外周血标本PCA3阳性率为88．9％（48／54）,前列腺按摩液标本PCA3阳性率为81．3%（39／48）,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：两种体液标本PCA3的阳性表达有明显的前列腺癌特异性,并且随着前列腺癌的临床分期增高,其阳性率越高,有望成为诊断前列腺癌的新肿瘤标志物和判断预后的指标。     

前列腺癌患者DD3 mRNA表达及其意义的研究进展

前列腺癌对中老年男性生命健康构成严重威胁,有关前列腺癌诊断方法成为目前研究的热点,DD3仅高度表达于前列腺癌细胞中,是新近发现的前列腺癌敏感性高、特异性最好的基因,在前列腺癌早期诊断和判断预后方面具有很好的临床应用前景.本文对其最新研究作如下综述.     

mRNA差异显示技术及其在前列腺癌中的应用现状

mRNA差异显示技术是一种克隆差异表达基因的方法。由于其简便、快速，并不断改进， 近年来得到了广泛的应用。前列腺表型多样、发生机理复杂。运用该方法已经在前列腺肿瘤中克隆出许多新基因和发现已知基因的新功能，表明mRNA差异显示是研究前列腺癌生物学的有力技术，有着广阔的应用前景。     

mRNA差异显示技术及其在前列腺癌中的应用现状

mRNA差异显示技术是一种克隆差异表达基因的方法。由于其简便、快速 ,并不断改进 ,近年来得到了广泛的应用。前列腺表型多样、发生机理复杂。运用该方法已经在前列腺肿瘤中克隆出许多新基因和发现已知基因的新功能 ,表明mRNA差异显示是研究前列腺癌生物学的有力技术 ,有着广阔的应用前景。     

检测前列腺癌病人外周血中PSA mRNA表达的临床意义

目的 探讨前列腺癌患者外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ表达的临床意义。方法 运用敏感的巢式ＲＴ－ＰＣＲ方法检测３３例前列腺癌（ＰＣａ）患者和１０例前列腺增生（ＢＰＨ）患者外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ的表达。结果 ＢＰＨ组外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ均不表达。ＰＣａ组有１４例（４２％）ＰＳＡ ｍＲＮＡ表达阳性。１２例未行内分泌治疗者中有８例（６７％）阳性,２１例行分泌治疗者中有６例（２９％）阳性,二者差异有显著性（     

前列腺癌患者尿液DD3mRNA表达及其意义的研究进展

随着前列腺癌在老年男性中的发病率的升高,早期诊断对其治疗及预后评价有着重要意义.DD3是近年来发现的在前列腺癌细胞特异性表达的一种新的肿瘤标志物,与传统的肿瘤标记物(如PSA等)相比具有更高的敏感性和特异性.对前列腺癌患者进行尿液DD3检测为一种既方便又理想的方法,本文对该方面的研究进展进行了综述.     

前列腺癌患者尿液DD3mRNA表达及其意义的研究进展

随着前列腺癌在老年男性中的发病率的升高,早期诊断对其治疗及预后评价有着重要意义.DD3是近年来发现的在前列腺癌细胞特异性表达的一种新的肿瘤标志物,与传统的肿瘤标记物(如PSA等)相比具有更高的敏感性和特异性.对前列腺癌患者进行尿液DD3检测为一种既方便又理想的方法,本文对该方面的研究进展进行了综述.     

mRNA差异显示方法研究进展

哺乳动物细胞约有100000个不同的基因,在一定时间、空间中仅有10%～15%的基因表达,这种表达受到严格调控[1]。运用ｍＲＮＡ差异显示(ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ,ＤＤ)方法[2],可将不同细胞类型或同一细胞在不同环境下表达的基因进行比较,从分子生物学水平上提供信息,这对理解细胞的生命过程极有帮助。该技术一经问世,立即得到广泛应用,但同时也遇到许多问题,所以Ｄｅｂｏｕｃｋ[3]曾对该方法提出质疑。现将ＤＤ的研究进展简要综述如下。一、ＤＤ方法基本原理ＤＤ的基本原理是将具有可比性的细胞在某一条件下可表达的ｍＲＮＡ群…     

肾癌患者外周血中survivin mRNA的表达

目的探讨肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA的表达及其临床意义。方法用RT-PCR方法检测30例肾透明细胞癌患者、10例正常健康人外周血中survivin mRNA的表达。结果30例肾透明细胞癌患者中有23例外周血中survivin mRNA表达阳性，阳性率为76．7％，与正常健康人（0％）相比差异有统计学意义（P〈0．001）；survivin mRNA的表达与临床分期密切相关（P〈0．01）；随肿瘤组织分化程度的降低，survivin阳性率有增加的趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA可作为肾透明细胞癌微转移的一个监测指标。     

肝癌患者外周血AFP mRNA表达的临床意义

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)患者外周血AFP mRNA表达在血行播散中的意义.方法:抽取30例HCC患者外周静脉血5ml,应用RT-PCR对血中AFP mRNA进行扩增检测,并与各对照组比较.结果:30例HCC患者中,AFP mRNA的阳性率为46.7%(14/30);AFP mRNA的表达阳性率与肝癌TNM分期、肿瘤大小、有无门脉癌栓及有无肝外转移有显著的相关性(P＜0.05),而与血清AFP水平无关(P＞0.05).结论:AFP mRNA是反映原发性肝癌患者血中是否存在肝癌细胞的灵敏指标.     

外周血PSA mRNA早期诊断前列腺癌转移

用反转录聚合酶链式反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测前列腺癌 (ＰＣａ)患者外周血ＰＳＡｍＲＮＡ ,以早期诊断前列腺癌转移 ,报告如下。资料和方法　ＰＣａ患者 14例。年龄 5 0～ 80岁 ,平均 6 7岁。ＪＷＰ分期 :Ａ期 2例 ,Ｂ期 5例 ,Ｃ期 3例 ,Ｄ期 4例。对照组包括 :ＢＰＨ患者 15例 ,年龄 5 5～83岁 ,平均 6 5岁 ;非癌患者 10例 ,男 5例 ,女 5例 ,年龄 2 8～ 5 5岁 ,平均 37岁。ＰＣａ患者通过血清ＰＳＡ测定、直肠指诊、ＣＴ、同位素骨扫描进行诊断 ,并在术前 1周、指诊后 2周采血。所有病例均经病理检查。采集静脉血 5ｍｌ,肝素抗凝 ,密度梯度…     

前列腺癌10个显著差异表达基因筛查研究

目的:筛查验证前列腺癌特异性表达基因。方法:运用基因芯片筛查出前列腺癌组织和癌旁组织中差异表达的基因,再通过PCR验证。结果:从芯片结果中发现,总共有1 444个基因(差异倍数≥1.5;P≤0.05)为差异表达基因。其中,前列腺癌与对比配对的良性组织有769个上调(53%)和675个下调(47%)。差异基因中有40%的差异倍数为1.5~2倍,包括396个上调和182个下调基因。另外308个上调基因和334个下调基因的差异倍数为2~5倍;46个上调基因和78个下调基因的差异倍数为5~10倍;19个上调基因和81个下调基因的差异倍数为10倍以上。取其中上调和下调最明显的各15个基因做进一步荧光定量PCR(qRT-PCR)鉴定,结果显示了大多数基因都有芯片结果相似的基因片段,芯片结果和qRT-PCR结果用皮尔森相关性分析结果为0.83,并获得10个差异显著的基因。结论:芯片分析出来的前列腺癌和良性组织间差异基因是可靠的,qRT-PCR验证获得的这10个差异基因可能成为新的肿瘤标记物和特征性肿瘤鉴定分子。     

原发性肝癌患者外周血GPC-3 mRNA的表达与微转移的关系

目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者外周血的Glypican-3(GPC-3)mRNA检测用于诊断HCC早期微转移的可行性。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测39例原发性肝细胞癌(HCC)、19例肝炎和肝硬化、10例转移性肝癌、10例肝血管瘤患者、19例健康献血员外周血GPC-3 mRNA水平。结果HCC患者外周血中,GPC-3 mRNA的检出率为62%(24/39),GPC-3mRNA的检出率与肿瘤直径77%(17/22)、癌结节数目67%(19/24)、临床TNM分期76%(19/25)、门静脉癌栓90%(9/10)、远处转移100%(6/6)等临床参数密切相关。GPC-3 mRNA在转移性肝癌、肝炎和肝硬化、肝血管瘤患者及健康献血员外周血中均未检出。结论巢式RT-PCR检测HCC患者外周血单核细胞GPC-3 mRNA是一种早期发现原发性肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

原发性肝癌患者外周血GPC-3mRNA的表达与微转移的关系

目的探讨原发性肝细胞癌（HCC）患者外周血的Glypican-3（GPC-3）mRNA检测用于诊断HCC早期微转移的可行性。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测39例原发性肝细胞癌（HCC）、19例肝炎和肝硬化、10例转移性肝癌、10例肝血管瘤患者、19例健康献血员外周血GPC-3mRNA水平。结果HCC患者外周血中，GPC-3mRNA的检出率为62％（24／39），GPC-3mRNA的检出率与肿瘤直径77％（17／22）、癌结节数目67％（19／24）、临床TNM分期76％（19／25）、门静脉癌栓90％（9／10）、远处转移100％（6／6）等临床参数密切相关。GPC-3mRNA在转移性肝癌、肝炎和肝硬化、肝血管瘤患者及健康献血员外周血中均未检出。结论巢式RT—PCR检测HCC患者外周血单核细胞GPC-3mRNA是一种早期发现原发性肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

应用mRNA差异显示技术克隆新的肝癌相关基因的研究

目的 研究和克隆新的肝癌相关基因,探讨肝癌发生的分子学基础。方法 采用ｍＲＮＡ差异显示技术（ＤＤＰＣＲ）和逆转录聚合酶链式反应,测序等方法,分析２对肝细胞癌和癌旁组织基因表达差异情况,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法,分析所获得的基因片段在１２对肝细胞癌和癌旁组织中的表达。结果 使用５条上游引物,４条下游引物,从２对肝癌和癌旁组织中获得６个新的肝癌组织高表达基因片段ＳＴＷ－１、ＳＴＷ－２,ＳＴＷ     

DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析

目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析。结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达。DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104拷贝/mg组织。PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P<0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P>0.05)。DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性。DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879～0.995)。当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11。结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性。DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性。DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值。