百里醌对人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的抑制作用

目的 探讨百里醌对体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的影响及其机制.方法 百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞计数CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测SaOS-2细胞中Caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Smac的表达.结果 不同浓度(20、40、80μmol/L)百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞存活率分别为(75.5±4.2)%、(62.1±6.7)%和(52.5±4.9)%;细胞早期凋亡率分别为(8.1±0.7)%、(13.2±1.1)%和(20.2±1.7)%;百里醌作用后,SaOS-2细胞出现典型凋亡的形态学改变;百里醌可明显上调Caspase-3和Smac在SaOS-2细胞中的表达,而显著抑制XIAP的表达.结论 百里醌具有抑制体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长和促进细胞凋亡的作用,可能是通过上调人骨肉瘤SaOS-2细胞中Caspase-3和Smac的表达和下调XIAP的表达而实现.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effect of thymoquinone on the growth of human osteosarcoma cell line SaOS-2 in vitro.Methods After human osteosarcoma SaOS-2 cells were treated with different concentrations of thymoquinone, the proliferation was measured by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The flowcytometry (FCM) was used to determine apoptosis of SaOS-2 cells. The morphological changes of SaOS-2 cells were observed under the fluorescence microscopy after DAPI staining. Western blotting was used to detect the protein expression of Caspase-3, X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) and Smac.Results Thymoquinone obviously suppressed proliferation of SaOS-2 cells in a dose-dependent manner, and the apoptosis rate was (8.1±0.7)%, (13.2±1.1)% and (20.2±1.7)% respectively when the concentrations of thymoquinone exposed were 20, 40 and 80 μmol/L. After treatment with thymoquinone, the expression of Caspase-3 and Smac was up-regulated in SaOS-2 cells, and thymoquinone treatment significantly decreased the XIAP levels in SaOS-2 cells.Conclusion Thymoquinone has the anti-tumor effect on the human osteosarcoma SaOS-2 cells in vitroprobably by up-regulating the expression of Caspase-3 and Smac and down-regulating the expression of XIAP.     

增强顺铂对骨肉瘤疗效的体内外研究进展

骨肉瘤是骨骼系统常见的恶性肿瘤,目前其治疗以新辅助化疗结合保肢术为主。顺铂是骨肉瘤化疗的常用药物之一。本文综述了增强顺铂疗效的体内外研究新进展,包括自噬相关的化疗耐药、抑制DNA损伤修复、抑制原癌基因表达、增强细胞凋亡、热休克蛋白HSP90相关化疗敏感性、多药联合化疗等。这些新进展将有助于骨肉瘤新药的研发。     

PKC412联合阿霉素对膀胱肿瘤细胞生长及侵袭的影响

目的 探讨蛋白激酶抑制剂N苯甲酰星孢菌素PKC412联合阿霉察对膀胱肿瘤细胞生长抑制及凋亡诱导作用及其机制,为膀胱癌治疗提供新理论基础.方法 软琼脂克隆形成试验测定PKC412联合阿霉素对T24细胞的克隆形成抑制作用,MTT比色试验测定PKC412联合阿霉素对T24细胞的存活和生长的抑制作用,Transwell小室法检...     

DNT细胞对体内外胰腺癌生长的抑制作用

目的 探讨CD4 - CD8 - DNT细胞对体内、外胰腺癌生长的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐法检测DNT细胞对人胰腺癌细胞株Panc-1生长的影响.将18只裸鼠随机分成3组,其中前两组皮下注射Panc-1细胞以建立荷瘤鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,第3组注射DNT与Panc-1细胞按数量5∶1共培养后的细胞混悬液.前两组待成瘤后,再随机分为对照组和治疗组.治疗组予塞来昔布4 mg/d口服,对照组每日给予等量蒸馏水口服.每2周测量裸鼠肿瘤体积一次,描绘肿瘤生长曲线.治疗结束后处死裸鼠,剥除瘤组织,测量肿瘤体积并计算抑瘤率.结果 (1)四甲基偶氮唑盐结果显示,DNT细胞能在体外抑制人胰腺癌细胞株Panc-1的生长,且DNT细胞对胰腺癌细胞的生长抑制呈剂量依赖性;(2) DNT细胞能够干预人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长.结论 DNT细胞能够抑制体内、外胰腺癌细胞的生长.     

靶向Survivin的小分子干扰RNA对骨肉瘤细胞的体内外抑制作用

目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学(SP)法检测转染前后Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,建立裸鼠移植瘤模型,记录瘤体形成时间及肿瘤生长.结果 转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,转染后mRAN表达抑制率为85.08%,增殖指数为空白组的28.20%;细胞周期分析显示:shRNA组G0/G1期细胞明显增多,而G2/M期、S期细胞数目减少;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54%;稳定转染组细胞裸鼠体内致瘤能力降低,转染组成瘤时间为(13.2±2.0)d,空白组为(6.5±1.6)d,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).4周时同空白组相比转染组瘤体体积小62.89%(P＜0.01),重量轻59.07%(P＜0.01).结论 靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞MG-63增殖,促进细胞凋亡;明显抑制人骨肉瘤细胞的致瘤活性及裸鼠移植瘤的生长.     

RGDS-GG-KLAKLAKK多肽对人骨肉瘤细胞生长的影响

.结果 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK明显抑制MG-63细胞的增殖,并有时间和剂量依赖性,在24、48 h的IC50分别为46.8、37.6 μmol/L(P＜0.05).多肽RGDS-GG-KLAKLAKK随着剂量的增加MG-63细胞的凋亡率从5.23%上升至38.90%(P＜0.01).MG-63细胞在多肽RGDS-GG-KLAKLAKK处理后,SurvivinmRNA的表达出现明显下降.结论 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK能够抑制入骨肉瘤MG-63细胞的增殖,并诱导其凋亡.     

百里醌对肝缺血-再灌注损伤的作用研究

目的  探讨百里醌对肝缺血-再灌注损伤(IRI)的作用及其机制。方法  30只C57小鼠随机均分为假手术(Sham)组、IRI组和百里醌(Thy)组(每组各10只)。术前1 h, Thy组给予百里醌(40 ml/kg)腹腔注射, Sham组和IRI组给予无水乙醇(40 ml/kg)腹腔注射。IRI组和Thy组建立小鼠肝IRI模型。再灌注4 h后收集血清和肝脏标本。光学显微镜下观察肝组织病理学改变, 并予病理损伤评分; 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和白细胞介素(IL)-6的信使核糖核酸(mRNA)表达水平; 采用酶链免疫吸附试验(ELISA)检测血清中TNF-α、MCP-1和IL-6的蛋白表达水平; 采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测肝组织丙二醛(MDA)的含量; 采用ELISA法测定肝组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活性; 采用肝组织免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53的蛋白表达水平。结果  与Sham组比较, IRI组肝组织损伤严重, 损伤评分明显增加(P < 0.05), 肝组织和血清中的TNF-α、MCP-1、IL-6和肝组织MDA、Wnt、β-catenin、p53的表达均明显增多(P < 0.05~0.001), 而肝组织CAT、GPx与SOD活性均明显降低(均为P < 0.001)。与IRI组比较, Thy组肝组织损伤较轻, 损伤评分明显减少(P < 0.05), 肝组织和血清中的TNF-α、MCP-1、IL-6和肝组织MDA、Wnt、β-catenin、p53的表达均明显减少(均为P < 0.05), 而肝组织CAT、GPx与SOD活性均明显增高(均为P < 0.05)。结论  百里醌通过减轻炎症反应和氧化应激而减轻肝IRI, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin/p53信号通路激活有关。     

硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响

目的 研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响，并探讨其可能的机制。方法 应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinV法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测bcl-2及bax基因的表达，观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用。结果 硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖，1．0mg／L浓度的硫化砷作用24h后，MG-63细胞的抑制率可达26．43％。倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变．流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关。在硫化砷的作用下，MG-63细胞的bcl-2表达下调，而bax表达无明显改变．结论 硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡，bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制。     

外磁场协同表阿霉素-羧甲基磁性纳米颗粒对膀胱癌体内外的杀伤作用

目的探讨脉冲外电磁场协同表阿霉素(EPI)-羧甲基葡聚糖氧化铁磁性纳米颗粒(CDMN)对人膀胱癌BIU-87细胞体外增殖活性和裸鼠皮下移植膀胱癌生长及其凋亡的影响。方法用化学共沉淀和氧化还原法制备EPI-CDMN并检测其理化性质,建立膀胱癌BIU-87细胞裸鼠皮下移植瘤动物模型,并设立空白对照组、磁场组、EPI组和EPI-CDMN组作为对照。分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、双标流式细胞术、DNA原位末端标记法观察脉冲外电磁场联合EPI-CDMN对BIU-87细胞生长增殖活性和裸鼠皮下瘤生长状况及凋亡的影响。结果EPI-CDMN的直径、比饱和磁化强度分别为8～10 nm、0．22 emu/g。外磁场协同EPI-CDMN可以显著抑制BIU-87细胞增殖,抑制率达(21．82±3．18)%,并诱导细胞发生明显的凋亡,凋亡率为(16．8±3．4)%,均显著高于其他各组(P＜0．05)；裸鼠皮下瘤体积(1．57±0．42)cm~3和重量(2．00±0．21)g,均显著低于其他各组,抑瘤率51．69%和细胞凋亡指数(60．45±6．93)%均明显高于其他各组。结论外磁场可以显著增强EPI-CDMN对膀胱肿瘤的杀伤作用,为抗膀胱肿瘤的磁靶向治疗提供了实验依据。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合阿霉素治疗骨肉瘤

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与阿霉素（ADM）联用对骨肉瘤细胞株HOS是否具有协同杀伤作用，并对其机制进行初步研究。方法 MTT法检测细胞的抑制率和存活率，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TRAIL受体（receptor，R）的表达水平。结果 单用0．5mg／LTRAIL及1．0、10．0、100．0mg／LADM对HOS8603的抑制率分别为13．18％、5．56％、23．02％和76．72％，联合用药的抑制率分别为42．98％、53．12％、81．91％。0．5mg／LTRAIL和1．0mg／LADM有协同作用．TRAIL和ADM联用时TRAIL R2 mRNA表达较TRAIL单用时明显增强。结论 TRAIL与ADM联用对骨肉瘤细胞有明显的协同作用，其机制可能与ADM上调TRAILR2的表达有关。     

氧自由基对体内生长胆管癌细胞增殖的影响

为探讨胆管癌细胞内氧自由基浓度与体内培养胆管癌细胞增殖的关系,我们利用体外培养的胆管癌细胞QB ,建立裸鼠动物模型,检测不同浓度的氧自由基对动物体内生长胆管癌细胞增殖的影响。一、材料与方法1.主要材料:丙二醛(MDA )试剂盒购自南京生物工程研究所;Dulbecco改良培养基(DMEM )及新生牛血清购自Ser va公司;SOD及H2 O2 均为Sigma公司产品;紫外分光光度仪(瑞典LKB公司) ;流式细胞仪(美国杜邦公司) ;2 4孔细胞培养板(美国Costar公司产品)等。2 .细胞培养:体外培养胆管癌细胞QB由西南医院肝胆医院建株。材料取自低分化肝门部胆管…     

氯喹对肝癌细胞体内外生长的影响及其与自噬的关系

背景与目的:氯喹是一种广泛应用于疟疾、类风湿性疾病治疗的药物,同时还是一种自噬抑制剂,而且多项研究表明,氯喹能抑制包括肝癌在内的多种肿瘤细胞的生长。本研究在体外细胞实验与荷瘤鼠模型上进一步观察氯喹对肝癌的抑制作用及其与自噬的关系。方法:不同浓度的氯喹(0、25、50 μmol/L)体外作用于肝癌Huh7细胞后,用MTT法检测细胞的增殖情况。将75只裸鼠皮下接种Huh7细胞建立肝癌裸鼠移植瘤模型后,随机均分为3组,于接种后7 d(均已成瘤)分别腹腔注射生理盐水(对照组)、25 mg/kg氯喹(低剂量氯喹组)、50 mg/kg氯喹(高剂量氯喹组),1次/d,连续30 d。期间记录各组肿瘤生长情况,实验结束时,收集移植瘤标本,分别用免疫组化与Western blot法检测移植瘤内自噬相关蛋白(LC3、p62)的表达。结果:MTT检测结果显示,与对照组比较(0 μmol/L),两个浓度氯喹均能明显抑制肝癌Huh7细胞的增殖,并呈明显的时间、浓度效应(均P0.05)。荷瘤鼠模型中,两个剂量氯喹组的肿瘤生长均较对照组明显抑制,且高剂量氯喹组较低剂量氯喹组的肿瘤生长抑制更为明显(均P0.05);免疫组化与Western blot结果显示,两个剂量氯喹组肿瘤组织中LC3、p62的表达水平均较对照组明显升高,且高剂量氯喹组的升高水平明显大于低剂量氯喹组(均P0.05)。结论:氯喹体外与体内均能抑制肝癌细胞的生长,其作用机制可能与其调节自噬相关蛋白的表达抑制肝癌细胞自噬有关。     

Angiostatin cDNA对胶质瘤体内生长的影响

Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ是新近发现的血管内皮生长抑制因子 ,能显著抑制一些实验性肿瘤的生长。为探讨Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ治疗脑胶质瘤的可行性 ,我们观察了其对胶质瘤体内生长的影响。1.材料与方法 :(1)材料 :Ｕ87人脑多形性胶质母细胞瘤细胞及转染Ａｎｇｉｏ ｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ的Ｕ87 Ａｇｓｔ细胞 ,由瑞典Ｃａｏ博士惠赠。Ｕ87 Ａｇｓｔ中 ,ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ与Ｕ87细胞的整合、表达已被鉴定[1] 。 6～ 10周龄裸小鼠 (Ｂａｌｂ/ｃｎｕ)购自北京市实验动物中心 ,ＣＤ31单克隆抗体及ＨＩＧＨ ＳＡＢＣ试剂盒由博士德公…     

外源性一氧化氮对骨肉瘤细胞株HOS生长能力的影响

目的：研究外源性一氧化氮对骨肉瘤细胞株（ＨＯＳ）体外生长能力的影响。方法：用不同浓度的ＳＮＰ（Ｓｏｄｉｕｍ Ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ,硝普纳）作用于体外培养的ＨＯＳ细胞株,经细胞作用产生外源性一氧化氮,通过Ｇｒｉｅｓｓ比色法、ＭＴＴ比色法,观察ＨＯＳ细胞株一氧化氮的产生量及对细胞株生产情况的影响。结果：随着ＳＮＰ浓度的增加,ＨＯＳ细胞一氧化氮的产生量逐渐增加而细胞存活数量逐渐减少,以ＳＮＰ２００     

百里醌预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的探讨百里醌(TQ)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及分子机制。方法建立大鼠肝脏IRI模型,肝脏缺血再灌注前,实验大鼠进行百里醌给药预处理。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,检测肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等酶活性;蛋白印迹法(Western blotting)检测肝脏组织凋亡相关蛋白。实验设3组:假手术组(Sham组,n=10)、缺血再灌注组(IRI组,n=10)、百里醌预处理+肝缺血再灌注组(TQ+IRI组,各亚组n=10)。结果与Sham组比较,IRI组大鼠血清ALT、AST水平显著增高,TQ+IRI组ALT、AST较IRI组明显降低(P0.05)。IRI组与Sham组比较,大鼠肝脏组织中GPX、GSH、SOD含量均明显下降(P0.05),而MDA含量显著增高(P0.05);TQ+IRI组与IRI组比较,GPX、GSH、SOD含量均显著上升(P0.05),MDA含量下降(P0.05)。百里醌预处理能下调肝脏IRI的Bax、裂解的胱天蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、Cleaved-caspase-9表达,阻断肝细胞凋亡。结论百里醌可能通过调控肝细胞氧化应激诱导的细胞凋亡进而在肝脏IRI中发挥肝脏保护作用。     

尼古丁对体内外成骨活性的影响

目的 观察尼古丁对体外培养的成骨细胞活性和体内成骨活性因子的影响.方法 用含不同浓度尼古丁(1×10-4 mol/L)的DMEM培养基体外培养成骨细胞,分别用噻唑蓝(MTT)比色法检测成骨细胞的增殖,并检测尼古丁对成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性和钙结节形成能力的影响,用酶联免疫吸附试验( ELISA)测定大鼠血清中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和ALP水平,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)测量尼古丁作用后大鼠股骨中骨桥蛋白(OPN)、ALP、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的mRNA表达变化.结果 与对照组比较,体外尼古丁处理对成骨细胞的增殖起抑制作用,尼古丁可降低成骨细胞的ALP活性,抑制成骨细胞钙结节形成,尼古丁可以导致大鼠血清中BMP-2和ALP水平下降,并抑制股骨中OPN、ALP、COL1 mRNA表达.结论 尼古丁可抑制成骨细胞的活性,并对体内成骨相关因子也有抑制作用.     

聚乳酸阿霉素纳米微粒的制备及体内外释药的研究

目的研究聚乳酸阿霉素纳米微粒(ADM-NP)的制备及其在体内外的释药特点。方法以聚乳酸为包封材料,以阿霉素为模型药物,采用复乳法制备ADM-NP。采用扫描电镜、动态光散射法及高效液相色谱法分别考察纳米微粒的形态、粒径分布、载药量及包封率,通过体内外实验探讨纳米微粒的释药特点。结果ADM-NP在扫描电镜下呈球形,粒径为(163±52)nm,载药量为(28.4±4.5)%,包封率为(73.6±9.2)%。ADM-NP在体外释药缓慢,在大鼠体内的消除半衰期(t1/2)、曲线下面积(AUC)、平均滞留时间(MRT)均明显大于游离阿霉素(F-ADM,P<0.01)。结论ADM-NP在体内外均具有良好的缓释性,其化疗效果理论上可望优于F-ADM。     

肿瘤生长方式影像学表现对骨肉瘤预后影响的临床研究

目的 探讨骨肉瘤生长方式与病人预后的相关性。方法 收集2007年1月至2018年8月于中国人民解放军联勤保障部队第九六〇医院确诊为四肢骨肉瘤的119例病人的病历资料。根据MRI图像所显示的骨肉瘤生长方式将病人分为均匀生长型、渐进生长型和纵向生长型。Fisher精确检验分析骨肉瘤生长方式与病人临床特征之间的相关性;Kaplan-Meier分析病人5年无事件生存率和5年总生存率,通过Log-rank分析其生存差异;Cox比例风险模型进行多因素分析。结果 均匀生长型44例（37.0%）,渐进生长型35例（29.4%）,纵向生长型40例（33.6%）。三型骨肉瘤病人比较,纵向生长型初诊转移率最高（χ²=14.615,P=0.001）;均匀生长型肿瘤体积较小,纵向生长型肿瘤体积较大,渐进生长型肿瘤体积介于两者之间（χ²=29.322,P＜0.001）;均匀生长型化疗效果优于渐进生长型和纵向生长型（χ²=6.640,P=0.035）;均匀生长型局部复发率低,渐进生长型和纵向生长型局部复发率高（χ²=8.005,P=0.023）;纵向生长型远处转移率高,渐进生长型次之,均匀生长型远处转移率低（χ²=6.708,P=0.037）;均匀生长型、渐进生长型和纵向生长型5年总生存率分别为72.7%、65.7%和50.0%（χ²=17.407,P＜0.001）;均匀生长型、渐进生长型和纵向生长型5年无事件生存率分别为63.6%、51.4%和37.5%（χ²=15.477,P＜0.001）。多因素预后分析表明肿瘤生长方式、肿瘤体积、肿瘤体积比率、Enneking分期对病人生存具有明显统计学意义,系独立预后因素（P＜0.05）。结论 骨肉瘤生长方式可以作为判断骨肉瘤预后的重要参考依据之一,均匀生长型预后较好,渐进生长型次之,纵向生长型预后较差。     

Survivin基因对膀胱癌细胞体内生长的影响

目的探讨通过RNA干扰下调Survivin基因对膀胱癌细胞在体内生长的抑制作用。方法构建Survivin基因shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivin,转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞。观察裸鼠皮下移植瘤内注射靶向Survivin的siRNA及稳定转染pR- NAT-U6.1/neo—survivin对膀胱癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,肿瘤组织行免疫组织化学检测Survivin蛋白表达。结果经鉴定成功构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivivn,稳定转染重组质粒的T24细胞Survivin mRNA表达下调达92.86%;瘤内注射50 mg siRNA-Survivin能够明显抑制肿瘤生长,与对照比较差异有统计学意义(P<0.01);未转染组在20 -29 d均发展为体积超过2000 mm3的肿瘤,转染组在43 d时形成3个体积不超过62.5 mm3肿瘤;免疫组织化学显示转染组肿瘤Survivin蛋白表达明显降低。结论裸鼠移植瘤内注射siRNA-sur- vivin明显抑制了肿瘤的生长;靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌T24细胞在体内的生长; Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点。     

体内逆转录病毒介导的sFlt-1抑制小鼠骨肉瘤生长的实验研究

目的 调查逆转录病毒介导的sFlt-1基因针对高血管内皮生长因子(VEGF)表达的人骨肉瘤G-292细胞进行体外转导的效率,并构建重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠的骨肉瘤模型,评估sFlt-1转基因治疗对于骨肉瘤生长的抑制作用.方法 2010年3月至2010年10月应用逆转录病毒介导的sFlt-1基因(sFlt-1转导组,n=10)和LacZ基因(LacZ转导组,n=10)体外转染人骨肉瘤G-292细胞(G-292组,n=10),种植到重度联合免疫缺陷小鼠胫骨近端,建立骨肉瘤动物模型.应用显微CT监测骨肉瘤的生长发育,8周后取出骨肉瘤标本进行组织学以及分子生物学分析.结果 酶联免疫吸附试验测定证实sFlt-1基因转导成功.细胞种植后2周时所有小鼠胫骨近端均出现了骨肉瘤的发生、发育,sFlt-1转导组骨肉瘤体积小于G-292组和LacZ转导组,差异无统计学意义(P＞0.05);在细胞种植后4、6、8周时,sFlt-1转导组骨肉瘤体积明显小于G-292组和LacZ转导组,差异具有统计学意义(P＜0.05).组织学表现显示了典型的骨肉瘤特征,包括重度的细胞多型现象、骨质破坏和新生血管形成.实时定量PCR测定结果显示sFlt-1转导组的sFlt-1基因相对定量表达为(4.6±1.3)倍,高于其他两组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 逆转录病毒介导的sFlt-1基因抑制了小鼠骨肉瘤的生长.

Abstract：

Objective To examine the influence of vascular endothelial growth factors (VEGF) in controlling the growth of an experimental osteosarcoma in mice by performing retrovirus-mediated sFlt-1 gene modification.Methods From March to October 2010 human osteosarcoma G-292 cells were in vitro infected with retroviral vectors encoding soluble Flt-1 or LacZ gene before transplanted into proximal tibiae of immune deficient SCID mice to establish experimental orthotopic osteosarcoma. Daily observation and biweekly microCT were performed to monitor tumor development and progression till sacrifice at 8 weeks after tumor cell inoculation for histological and molecular analyses. Results Successful transgene expression was confirmed in the culture media of sFlt-1 transduced G-292 cells using ELISA, and with positive X-gal staining of the LacZ transduced cells. Noteworthy tumors were grown in all mice on the tibiae receiving G-292 cell inoculation, with clear detection on microCT images starting 2 weeks after inoculation.Over the time period, tumors derived from sFlt-1 transduced G-292 cells were distinctively smaller in size compared to the ones from wide-type G-292 and G-292-LacZ cells.Histology showed typical osteosarcoma characteristics including severe cellular pleomorphism, bone erosions, and neo-vascularization.Real-time polymerase chain reaction indicated significantly higher sFlt-1 expression in sFlt-1 transduced groups than the wild-type G-292or LacZ treated groups.Strong expression of oncogenes c-myc and c-fos were also obvious, along with the expression of VEGF in the primary tumor tissue. Conclusion Retrovirus-mediated sFLT-1 gene modification decelerates the osteosarcoma tumor growth in this murine model.