多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

 目的　探讨急性髓系白血病（AML）染色体畸变所形成的融合基因与MICM分型及临床诊断、治疗、预后的关系。方法　采用多重巢式RT-PCR方法对60例AML患者的融合基因联合染色体核型、免疫表型、临床资料进行研究。结果　60例AML中有37例（61.67 %）具有5种融合基因：MLL-AF9、TLS-ERG、CBFβ-MYH1、AML1-ETO、PML-RARα。13例患者有HOX11原癌基因活化,10例为单纯表达HOX11原癌基因活化,3例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的31例患者中接受化疗的23例全部达完全缓解（CR）,且无复发。结论　基因分型是AML最精确的分型方法,可为临床化疗提供指导。采用多重巢式RT-PCR方法可快速同时检测急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型,指导临床个体化治疗。     

儿童急性淋巴细胞白血病遗传学特征

目的：分析儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）遗传学变化的特点.方法：以94例初发ALL患儿为研究对象,采用染色体核型分析及多重PCR技术检测患者骨髓白血病细胞的细胞遗传学和分子生物学变化.结果：63例患儿做了核型分析,有分裂象者55例,其中异常者12例（19.0%）;无分裂象者8例（12.7%）.对93例患儿进行了多重PCR检测,其中包括53例染色体有分裂象患儿和8例无分裂象的患儿,41例正常染色体核型患儿中异常者为17例（占41.5%）,12例染色体核型异常者中融合基因异常者4例（33.3%）,无分裂象患者异常2例,无分裂象检出率与有分裂象者核型分析异常检出率差异无统计学意义;93例患儿中融合基因检出率为34.4%（32/93）,其中TEL/AML1融合基因阳性20例（21.51%）,MLL重排3例（3.23%）,BCR/ABL（p190）融合基因阳性3例（3.23%）,E2A/PBX阳性5例（5.38%）,HOX11阳性1例.94例患儿通过两种检测方法共检出细胞遗传学异常46例（48.94%）.结论：儿童ALL可出现细胞遗传学改变.对于有足够分裂象的患者,常规染色体核型分析仍是可靠的方法.对分裂象质量低或无分裂象的儿童ALL患者,多重PCR检测异常克隆能提高细胞遗传学异常检出率.将染色体核型分析及多重PCR结合起来可提高细胞遗传学异常检出率.     

儿童急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因检测

 目的　检测儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中TEL-AML1融合基因的阳性率,探讨TEL-AML1融合基因的检测方法及其临床应用价值。方法　在形态学、免疫分型、细胞遗传学基础上,采用巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和荧光原位杂交技术（FISH）检测31例ALL患儿骨髓单核细胞中TEL-AML1融合基因。结果　巢式RT-PCR技术和FISH技术均可以显著提高TEL-AML1融合基因的检出率,应用上述两种方法,31例患儿中检测出7例TEL-AML1阳性,占儿童初发ALL的22.6 %（7／31）,在B系ALL中的阳性率为25.9 %（7／27）。结论　t(12;21)形成TEL-AML1融合基因是儿童ALL最常见的染色体易位,常规染色体核型分析极难发现,需用巢式RT-PCR或FISH等分子检测方法加以证实。     

遗传学和免疫表型分析在急性粒单核细胞白血病临床诊断中的意义

 目的　探讨染色体G显带、荧光原位杂交和流式细胞术在急性粒单核细胞白血病临床诊断、鉴别诊断和预后中的意义。方法　运用染色体G显带和流式细胞术 ,对 15例骨髓细胞形态学拟诊为急性髓系白血病M4型 (AML M4 )的患者进行核型分析和免疫分型 ,并用间期荧光原位杂交技术 (inter phasalfluorescenceinsituhybridization ,I FISH)对其中 6例患者进行检测。结果　染色体G显带核型分析显示正常核型 6例 ,伴有inv(16 ) (p13;q2 2 )异常 2例 ,伴有del(16 ) (q2 2 )、 X ,5 q ,t(8;2 1) (q2 2 ;q2 2 )、t(9 ;2 2 ) (q34;q11)、t(11;17)和t(11;?)异常各 1例 ,另有 2例无分裂相可供分析。I FISH对 3例患者进行CBFβ基因重排检测 ,2例阳性 ,1例阴性 ;对这例阴性患者进一步检测AML1/ETO融合基因 ,结果阳性 ;3例患者检测了MLL基因重排 ,2例阳性 ,1例阴性但伴有t(9;2 2 )异常 ,BCR/ABL融合基因阳性。免疫分型提示 14例患者有髓系和单核系分化抗...     

11例t(16;21)(p11;q22)急性髓系白血病病例报告并文献复习

目的:探讨11例伴t(16;21)(p11;q22)染色体易位的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML)患者的临床和实验室特点。方法:回顾性分析2007年07月至2022年03月我院收治的11例t((16;21)(p11;q22)染色体易位的AML患者临床及实验室特征并复习相关文献。结果:11例t(16;21)(p11;q22)染色体易位的白血病均为AML,FAB分型:M2型4例,M4型1例,M5型3例,AML(非M3)型3例;其中男5例,女6例。染色体R显带分析11例均可见到t(16;21)(p11;q22)染色体易位,其中9例伴有附加染色体异常。融合基因TLS/FUS-ERG检测了9例均为阳性。免疫表型除表达髓系CD34、CD117、CD33、CD13、CD38外,均表达CD56。化疗1个周期后完全缓解7例。结论:t(16;21)(p11;q22)染色体易位是一种少见的重现性染色体异常,该易位产生TLS/FUS-ERG融合基因,免疫学检测多伴CD56阳性,以AML中M2/M5型多见,化疗1个周期大部分可完全缓解,但短期内易复发,预后不良。     

132例初发儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型及细胞遗传学特征分析

目的：探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的免疫表型及细胞遗传学特征,为其诊断及治疗提供依据。方法：采用多参数流式细胞术（FCM）对132例初发儿童 ALL 患者进行免疫表型分析,并应用荧光原位杂交（FISH）技术检测其细胞遗传学特点。结果：132例 ALL 患者中,12.9%（17/132）为 T 淋巴细胞急性淋巴细胞白血病（T - ALL）,87.1%（115/132）为 B 淋巴细胞急性淋巴细胞白血病（B - ALL）。46.2%（56/132）的ALL 患者表达髓系抗原,CD13是 ALL 中最常见的髓系抗原,其阳性率为28.0%。T - ALL 髓系相关抗原表达阳性率为47.1%,与 B - ALL 的46.1%比较,差异无统计学意义（χ2=0.006,P =0.940）。可供核型分析的96例 ALL 中,核型异常者50例（52.1%）,其中染色体数目异常26例,染色体结构异常24例。96例 ALL 患者中,TEL/ AML1融合基因阳性21例（21.8%）,BCR/ ABL 融合基因阳性14例（14.6%）,TCF3/ PBX1融合基因阳性5例（5.2%）,MLL 重排3例（3.1%）。对不同免疫分型患者细胞遗传学异常检出率进行比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。结论：儿童 ALL 免疫表型和细胞遗传学具有一定的特点,两者联合检测对 ALL 的诊断及分型具有重要的价值。     

t（8;21）（q22;q22）急性髓系白血病转化为急性淋巴细胞白血病一例并文献复习

目的 探讨t（8; 21） （q22; q22）急性髓系白血病（AML）转化为急性淋巴细胞白血病（ALL）的克隆转化机制.方法 报道1例初诊为t（8; 21）AML,后转化为ALL患者的临床资料.期间对其进行持续细胞形态学、遗传学和分子生物学监测.结果 患者人院时诊断为t（8;21）AML,AML1-ETO融合基因阳性,治疗后达到完全缓解.半年后转化为ALL,诱导化疗后再次缓解.结论 t（8;21）（q22;q22）AML转化的ALL可能起源于具有髓/淋分化潜能的多能造血干细胞,早期化疗抑制了占优势地位的髓系白血病克隆,从而使具有不同表型的淋系亚克隆增殖.     

急性淋巴细胞白血病染色体核型分析

 【摘要】　目的　研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的染色体异常核型及其与临床特征和近期疗效的关系。方法　采用骨髓细胞短期培养法、吉姆萨显带对110例ALL患者进行染色体核型分析。结果　110例ALL患者中,正常核型71例（64.5 %）,异常核型39例（35.5 %）,染色体核型结构异常者24例（21.8 %）,数目异常者11例（10.0 %）,结构及数目异常者3例（2.7 %）,异常复杂核型1例。伴有t(9;22) (q34;q11)的ALL患者疗效差于其他患者（确切概率法,P＝0.045）,伴有t(9;22)(q34;q11)的成年人ALL与儿童ALL疗效差异无统计学意义（确切概率法,P＝0.506）。结论　ALL患者的染色体核型异常具有随机性,较常见的有t(9;22)(q34;q11)、 t(4;11)(q21;q23),其疗效较差。     

伴有t(8;21)变异易位的急性髓系白血病患儿二例遗传学研究

 【摘要】　目的　报道2例分别伴有t(8;20)(q22;q13)和t(1;8;21) (q32;q22;q22)的t(8;21)变异易位的M2型急性髓系白血病（AML-M2）。方法　骨髓细胞短期培养法制备染色体标本,应用反带和吉姆萨显带技术进行核型分析;双色双融合AML1-ETO探针进行间期及中期双色荧光原位杂交（D-FISH）检测AML1-ETO融合信号;多重巢式反转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测AML1-ETO融合基因转录本。结果　例1 核型为45,X,-Y, t (8;20)(q22;q13) [12]／46,XY[3],例2 核型为46,XX,t(1;8;21)(q32;q22;q22)[18]／46,XX[2];间期和中期FISH证实了AML1-ETO融合基因和变异易位的存在;多重巢式RT-PCR检测到AML1-ETO融合基因转录本。结论　t(8;20)(q22;q13)和t(1;8;21)(q32;q22;q22)实质上都是t(8;21)的变异型易位;核型分析联合D-FISH、多重巢式RT-PCR对确定伴有变异型t(8;21)易位的AML患者的性质和预后是重要的。     

急性淋巴细胞白血病常见融合基因检测的研究

 【摘要】　目的　探讨联合应用多重巢式反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术和染色体核型分析对急性淋巴细胞白血病（ALL）常见融合基因的表达和克隆性染色体异常的检出情况。方法　采用多重巢式RT-PCR技术对189例ALL患者进行检测,同时进行染色体R或G显带。结果　189例ALL患者中69例（36.5 %）检出10种融合基因（E2A-PBX1、TEL-AML1、bcr-abl、MLL-AF4、MLL-AF6、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ELL、SIL-TAL1、TLS-ERG）,染色体R或G显带可供分析的152例中,86例（56.6 %）检出染色体结构和数目异常;二者联合可使ALL克隆性染色体异常检出率增至69.3%（131例）。90例成年ALL患者中33例（36.7 %）检测阳性,其中bcr-abl 22例,未见TEL-AML1,99例儿童ALL患者中阳性36例（36.4 %）,其中TEL-AML1 24例,bcr-abl 2例。成年人组与儿童组bcr-abl 、TEL-AML1的表达率差异有统计学意义（均P＜0.01）。MLL相关融合基因、E2A-PBX1、SIL-TAL1、TLS-ERG等表达率差异无统计学意义（均P＞0.05）。66例正常核型的ALL患者检测出有bcr-abl 、TEL-AML1融合基因的存在。结论 成年人和儿童ALL融合基因表达各有侧重,多重巢式RT-PCR可用于初诊时染色体畸变的筛选,可在核型正常的ALL患者中检出隐匿的染色体易位,提供与预后相关的重要信息。     

黏蛋白1基因在白血病中的表达及其临床意义

 目的　探讨各种类型白血病中黏蛋白1（MUC1）基因的表达及其在临床诊断、预后及治疗上的意义。方法　运用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对白血病患者42例和非血液恶性疾病患者或正常人24例的骨髓中MUC1基因的表达进行检测。结果　急性白血病MUC1基因的表达率（43.3 %）显著高于对照组（8.3 %）（P＜0.01）,慢性白血病MUC1基因的表达率（54.5 %）亦高于对照组（8.3 %）（P＜0.05）。急性白血病MUC1基因表达阳性者完全缓解率（16.7 %）低于阴性表达者的完全缓解率（75.0 %）,差异有统计学意义（P＜0.05）。血液学完全缓解（CR）患者10例中检测出MUC1基因表达5例。结论　MUC1基因作为一种肿瘤标志物,在各种类型、亚型白血病患者中高表达,可辅助白血病的诊断,MUC1基因表达的RT-PCR分析法监测白血病微小残留病,较常规血细胞形态学具有更高的敏感性,可为白血病预后的观测指标。     

抑癌基因Rox在白血病细胞中的表达和突变

 目的　分析Rox基因突变在白血病发病中的作用。方法　利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、单链构象多态性（SSCP）分析及DNA序列分析技术,检测26例初治急性白血病（AL）患者、30名正常健康志愿者和7种白血病细胞系Rox基因表达及突变情况。结果　RT-PCR显示所有标本中均可检测到Rox基因的表达,在3例初治AL患者发现3处错义突变,突变率为11.5 %。结论　首次在AL中发现Rox基因突变,提示Rox基因的突变可能与AL的发病有关。     

白血病bcl-2,p170,CD34表达的临床意义及其相关性

目的：探讨和分析白血病ｂｃｌ－２,ｐ１７９０,ＣＤ３４表达的临床意义及相相关性。方法：Ｅ和ＡＢＣ免疫细胞化学法检测急性白血病和２３例慢性粒细胞白血病ｂｃｌ－２,Ｐ１７０,ＣＤ３４４的表达。结果：复发、难治急性白血病ｂｃｌ－２、ｐ１７０、ＣＤ３４的表达率明显高于初治急性白血病;ｂｃｌ－２,Ｐ１７０,ＣＤ３４高表达的急性白血病完全缓解率显著低于低于不表达或低表达者;加速／急变期的慢性粒细胞白血病（ＣＤ     

IKZF1基因在BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病中的表达及机制探讨

目的:探讨IKZF1基因在急性淋巴细胞白血病中的表达特点及可能机制,进一步明确急性淋巴细胞白血病的发病机理.方法:收取80例急性淋巴细胞白血病患者的外周血标本,其中21例BCR/ABL融合基因阳性,均为B细胞急性淋巴细胞白血病.RT-PCR技术检测IKZF1基因、RAG1基因及RAG2基因的表达;提取细胞DNA,PCR...     

全反式维甲酸联合高三尖杉酯碱治疗急性早幼粒细胞白血病的临床研究

 目的 研究全反式维甲酸（ATRA）联合高三尖杉酯碱（HHT）治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的可行性、疗效及不良反应。方法 选择初诊的APL患者26例随机分为研究组和对照组,分别给予ATRA或柔红霉素（DRN）／米托蒽琨（Mit）联合HHT诱导治疗,HA或DA／MA方案巩固治疗。在诱导及巩固治疗各疗程结束时分别对比两组病例的CR率、融合基因情况、不良反应及无病生存期（DFS）,并进行统计学分析。结果 研究组在诱导结束时全部病例获血液学缓解,缓解率为100 ％,融合基因转阴率为63.6 %。巩固第一疗程结束时融合基因转阴率为100 ％（至随访截止时间）。累计生存率为85.7 ％。诱导治疗期间中位累计血浆输注量为670 ml,中位累计血小板输注量32 U。对照组1例患者早期死亡,诱导结束时其余病例获血液学缓解。融合基因转阴率为38.5 %,巩固第一疗程结束时融合基因转阴率为91.7 %,累计生存率为75.6 ％。诱导治疗期间中位累计血浆输注量为760 ml,中位累计血小板输注量32 U。两组比较,在疗效、融合基因转阴率、累计生存率（85.7 %／75.6 %）及不良反应等方面均相似,在诱导治疗融合基因转阴率方面研究组似有优势,差异无统计学意义。结论 ATRA联合HHT治疗APL在疗效、融合基因转阴率、血浆及血小板输注量及不良反应方面差异无统计学意义,作为新诊断APL治疗的新选择,也可取得分子生物学缓解。     

Detection of recurrent,rare, and novel gene fusions in patients with acute leukemia using next-generation sequencing approaches

Identification of gene fusion is an essential part in the management of patients with acute leukemia, not only for diagnosis but also in predicting the treatment outcome and selecting appropriate treatment. Adopting next-generation sequencing (NGS) technology for identification of gene fusion in patients with acute leukemia can be a good alternative to conventional tests. In the present study, the NGS RNA fusion gene panel test was applied to diagnostic samples of patients with acute leukemia to identify fusion genes more efficiently. Among 134 patients with acute leukemia, 53 gene fusions were detected in 52 patients. In addition to the recurrent gene fusions specified in the WHO diagnostic criteria, 11 rare or novel gene fusions were identified. Of those, two were gene fusions associated with Philadelphia-like acute lymphoblastic leukemia (Ph-like ALL), two were novel gene fusions, three were gene fusions with novel partner genes, and six were rare gene fusions from previous reports. We confirmed the clinical utility of the NGS test in identifying clinically significant gene fusions such as gene fusions involving KMT2A that has a large number of partners. Notably, Ph-like ALL-associated gene fusions could be easily identified despite the wide variety of genes involved. The results from the present study may contribute toward a better understanding of the genomic landscape of acute leukemia as well as patient management.     

有助于t(8;21)急性髓细胞白血病的诊断和预后判断的免疫表型特征

 t(8;21)核型急性髓细胞白血病（AML）是临床常见类型白血病,更多见于FAB分型M2型。由于21号染色体上的AML1基因和8号染色体上的ETO基因发生融合,而产生AML1-ETO融合蛋白。t(8;21) AML具有独特的免疫表型,这些独特的免疫表型特征不仅有助于t(8;21) AML的诊断,而且决定了t(8;21) AML的预后     

影响成年人急性非淋巴细胞白血病首次化疗结果的多因素分析

 目的 探索影响急性非淋巴细胞白血病（ANLL）首次化疗结果的因素。方法 采用回顾性队列法对1995年1月1日至2005年12月30日在辽宁省本溪市中心医院血液科就诊的初治ANLL患者61例（M3未在研究范围内）进行研究，治疗2周后复查骨髓穿刺及血常规，并随时进行查体。依据患者完全缓解（CR）将患者分为2组，选择年龄、性别、肝脾淋巴结大、出现化疗不良反应、外周血白细胞（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（Plt）、白血病分型、化疗过程输血、发热、染色体核型作为研究因素，应用Logistic回归对成年人ANLL患者首次化疗结果影响因素进行多因素分析。结果 在计量资料中，Hb的Wald = 4.944，其对应的P = 0.026；在计数资料中，输血的Wald = 4.162，其对应的P = 0.041，都有统计学意义。结论 Hb水平和是否输血是影响ANLL患者首次化疗结果的重要因素。合理的、持续的提高ANLL患者Hb水平有利于患者首次化疗后达到CR。     

Spontaneous Cell Fusion of Acute Leukemia Cells and Macrophages Observed in Cells with Leukemic Potential

Cell fusion plays a well-recognized physiological role during development, while its function during progression is still unclear. Here, we show that acute myeloid leukemia (AML) cells spontaneously fused with murine host cells in vivo. AML cells fused in most cases with mouse macrophages. Other targets of AML cell fusion were dendritic and endothelial cells. Cytogenetic and molecular analysis revealed that successive recipients conserved detectable amounts of parental DNA. Moreover, in a mouse AML1-ETO model where female AML1-ETO-leukemic cells, expressing CD45.2, were injected in congenic CD45.1 male mice AML cells, we found hybrid cells expressing both allelic types of CD45 and XXY set of sexual chromosomes. More importantly, the fusion protein AML1-ETO was transferred in the hybrid cells. When sorted hybrid cells were reinjected in a secondary recipient, they gave rise to leukemia with 100% penetrance and similar time of onset of leukemic cells. Our data indicate that in vivo fusion of cancer cells with host cells may be a mechanism of gene transfer for cancer dissemination and suggest that fused cells may be used to identify still unrecognized leukemogenic genes that are conserved in hybrid cells and able to perpetuate leukemia in vivo.