蓬子菜有效成分对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的:研究蓬子菜中总黄酮和木犀草苷对脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症损伤的保护作用。方法:以HUVEC为研究对象,用CCK-8检测总黄酮及木犀草苷对HUVEC增殖的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度LPS对HUVEC细胞周期的影响;酶联免疫分析法检测总黄酮及木犀草苷对LPS诱导的HUVEC炎症因子生成的影响;实时定量PCR法检测HUVEC中P-选择素E-选择素mRNA水平。Western blot法测NF-κB,P-IκB蛋白表达。结果:药物浓度在6.25、12.5、25μg/m L时细胞增殖率最大;总黄酮及木犀草苷能明显下调LPS诱导的炎症因子和黏附分子的分泌,同时也降低了P-选择素E-选择素的表达,NF-κB,P-IκB蛋白表达量。结论:LPS对HUVEC有抑制作用呈剂量、时间依赖性,给予总黄酮和木犀草苷后,损伤有明显改善。     

黄芪甲苷通过TLR4/NF-κB通路改善脂多糖诱导的急性血管内皮损伤

目的:研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的急性血管内皮损伤的保护作用并探讨其可能分子机制。方法:在动物实验中,黄芪苷治疗组经连续灌胃给药14天后,除正常组外,其余各组均通过腹腔注射脂多糖(10mg/kg)以建立急性血管内皮损伤模型,DMT系统记录张力以评估血管舒张功能,ELISA法检测大鼠血清TNF-α和IL-6的含量,免疫组化法检测大鼠血管NF-κB p65蛋白的表达和分布,Western-blot法检测主动脉TLR4蛋白的表达;细胞水平采用CCK-8试剂盒检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖能力;ELISA法检测HUVEC上清液TNF-α和IL-6的含量;硝酸还原酶法检测HUVEC上清液一氧化氮(NO)的含量;Western-blot法检测HUVEC TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达。结果:在动物水平,与模型组相比,40mg/kg和80mg/kg黄芪甲苷均能显著改善血管的舒张功能;40mg/kg以上组黄芪苷降低血清TNF-α和IL-6的含量、下调TLR4和NF-κB p65的表达水平。在细胞水平,与模型组相比,50μM和100μM黄芪甲苷能显著促进HUVEC的增殖能力,降低HUVEC上清液中TNF-α和IL-6的含量,增加上清液中NO的释放量,下调TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达,而且,黄芪甲苷对LPS诱导的HUVEC损伤作用与NF-κB p65抑制剂相似。结论:黄芪甲苷对LPS诱导的急性血管内皮损伤具有保护作用,其可能通过TLR4/NF-κB p65信号通路发挥作用。     

芒果苷对高糖诱导的β细胞凋亡的影响及机制研究

目的:研究芒果苷对胰岛β细胞的保护作用及并探讨其可能的作用机制。方法:建立高糖诱导INS-1细胞凋亡模型,用不同浓度的芒果苷预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,荧光探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平。结果:33 mmol/L葡萄糖能显著诱导INS-1细胞凋亡,芒果苷能以浓度依赖性保护INS-1细胞,降低细胞凋亡率,同时能恢复高糖引起的Bcl-2蛋白表达降低,降低Bax蛋白表达;33 mmol/L葡萄糖能诱导INS-1细胞产生ROS及MDA,芒果苷处理细胞能显著降低ROS及MDA水平。结论:芒果苷可能通过降低细胞内氧化压力抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡。     

芒果苷对高糖诱导β细胞凋亡的影响及机制研究

目的:研究芒果苷对胰岛β细胞的保护作用及并探讨其可能的作用机制。方法:建立高糖诱导INS-1细胞凋亡模型,用不同浓度的芒果苷预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,荧光探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平。结果:33 mmol/L葡萄糖能显著诱导INS-1细胞凋亡,芒果苷能以浓度依赖性保护INS-1细胞,降低细胞凋亡率,同时能恢复高糖引起的Bcl-2蛋白表达降低,降低Bax蛋白表达;33 mmol/L葡萄糖能诱导INS-1细胞产生ROS及MDA,芒果苷处理细胞能显著降低ROS及MDA水平。结论:芒果苷可能通过降低细胞内氧化压力抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡。     

UPLC-PDA-QTOF/MS分析肌注胆木注射液后大鼠血浆中的分布

目的分析并鉴定大鼠肌肉注射胆木注射液后的主要入血的成分,初步探究其药效物质。方法采用UPLCPDA-QTOF/MS分析空白血浆、含胆木注射液血浆、胆木注射液和对照品,对比图谱中色谱峰保留时间以及离子碎片信息,解析成分的归属。结果以胆木注射液11个化学成分为参照,从大鼠血浆中鉴定了8个原形入血成分,分别是naucleamide A-10-O-β-D-glucopyranoside、短小蛇根草苷、3-表短小蛇根草苷、3α,5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam、naucleoxoside A、naucleoxoside B、异长春花苷内酰胺、喜果苷。结论 8个入血成分均为生物碱类成分,提示生物碱是胆木注射液可能的活性物质。     

天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的 考察天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激的影响.方法 建立高糖诱导的HUVEC氧化损伤模型,用不同质量浓度的天麻素干预.MTT法检测HUVEC存活率;相关试剂盒测定一氧化碳(NO)的量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)的活性、丙二醛(MDA)的量,DCFH-DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中NF-κB基因的表达.结果 与对照组相比,模型组HUVEC氧化应激作用明显增强,而天麻素能提高HUVEC中NO的量及SOD和CAT活性,提高细胞的总抗氧化能力,降低MDA的量与ROS水平,显著降低细胞中NF-κB3基因的表达.结论 天麻素通过提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化产物和ROS水平,抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激作用,其作用机制可能与NF-κB通路密切相关.     

活性氧对血府逐瘀汤诱导人脐静脉内皮细胞迁移作用的影响

目的观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)在血府逐瘀汤影响人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)迁移中的作用。方法运用血清药理学方法,采用Boyden小室法检测血府逐瘀汤含药血清对HUVEC迁移的影响;运用ROS清除剂预处理细胞,分析ROS在血府逐瘀汤调节内皮细胞迁移能力中的作用;并分析药物对内皮细胞H2O2产生的影响。结果血府逐瘀汤含药血清能增强HUVEC细胞的迁移能力,促进其H2O2的生成;ROS的清除可抑制血府逐瘀汤含药血清对细胞迁移的促进作用。结论血府逐瘀汤可通过激活ROS,增强HUVEC细胞的迁移能力,从而发挥促血管新生作用。     

玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响

目的:研究玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响。方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型,利用NO试剂盒检测NO分泌量。结果:玉叶金花苷酸甲酯能够显著减少LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生和释放,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:玉叶金花苷酸甲酯可能通过减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

黄芩苷对TNF-α诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的：研究黄芩苷对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：取对数生长期的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,比较有无TNF-α（50ng/ml）诱导时黄芩苷（120、60、30μg/ml）对HUVEC增殖的影响;采用流式细胞仪,分别检测不同浓度的脂多糖（LPS）、佛波酯（PMA）对HUVEC表达CD106的影响,黄芩苷对HUVEC表面CD54、CD106表达的影响、不同浓度的TNF-α对HUVEC凋亡的诱导作用,以及黄芩苷对TNF-α诱导的HUVEC凋亡率的影响。结果：120μg/ml黄芩苷对正常细胞的增殖无显著性影响,但可改善TNF-α对HUVEC细胞增殖的抑制作用;不同浓度LPS、PMA刺激24h、TNF-α诱导以及黄芩苷对HUVEC表面黏附因子CD106的表达均无显著性影响,但120μg/ml、60μg/ml黄芩苷可有效降低TNF-α诱导的CD54的表达,抑制率分别为41%、15%;100 ng/ml TNF-α作用24h诱导的早期凋亡率最高,120μg/ml黄芩苷可抑制TNF-α诱导的凋亡率的增加,抑制率为38%。结论：黄芩苷对TNF-诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制与其能抑制黏附因子表达与细胞凋亡有关。     

柚皮素对LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨柚皮素对LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法 MTT法检测5、20、80、160μmol/L柚皮素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活力的影响，以筛选适宜实验剂量。细胞分为对照组、LPS组和5、20μmol/L柚皮素组，MTT法检测细胞活力，ELISA法检测细胞上清液中炎症因子IL-6、TNF-α水平，DCFH-DA染色观察细胞内活性氧(ROS)水平，免疫荧光法观察细胞骨架蛋白及细胞连接蛋白形态变化，Western blot、RT-qPCR法检测细胞ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋白和mRNA表达。结果 0～20μmol/L柚皮素对HUVEC细胞无明显的毒副作用。与对照组比较，LPS组细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率、ROS荧光强度、IL-6和TNF-α水平、ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.01),细胞骨架蛋白出现聚集，细胞萎缩；与LPS组比较，柚皮素组细胞活力增加(P<0.05),细胞凋亡率、ROS荧光强度、IL-6和TNF-α水平、ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋...     

胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗MRS活性的研究

目的 对比分析胆木叶和茎中的挥发性成分和抗菌活性.方法 采用水蒸气蒸馏法提取胆木叶和茎中的挥发性成分,用GC-MS技术进行成分对比分析,用滤纸片琼脂扩散法检测挥发性成分的抗菌活性.结果 鉴定了胆木叶中的14个化学成分和茎中的10个化学成分;挥发性成分具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS)、大肠杆菌、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌的活性.结论 胆木叶和茎中的挥发性成分主要分别为烷酸46.30%和烯酸48.94%;在抗菌活性中,抗MRS的活性最强.     

大孔树脂法分离纯化胆木中短小蛇根草苷

目的:考察不同型号大孔树脂分离纯化胆木提取液中短小蛇根草苷(Pum iloside,PML)的工艺条件及参数。方法:采用水煎法提取,HPLC法测定含量;以静态饱和吸附量、洗脱量、洗脱率为指标比较5种大孔树脂,并对AB-8树脂的吸附容量、洗脱溶剂、洗脱体积进行筛选;采用甲醇重结晶法纯化PML,并用波谱方法鉴定其化学结构。结果:5种树脂中,AB-8型树脂具有较好的吸附及洗脱参数,对PML的吸附容量为2.44 mg/g干树脂。适宜的工艺条件为:6倍柱体积蒸馏水洗脱后,再用4倍柱体积的30%乙醇以2 BV/h的流速洗脱,减压回收溶剂后过滤,沉淀甲醇重结晶。PML得率为75.1%,纯度>99.5%。结论:AB-8树脂附性能良好,适合胆木中PML的分离纯化。     

胆木叶提取部位群的抗炎镇痛作用

目的:观察胆木叶提取部位群(ELN)的镇痛和抗炎作用。方法:取ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物[三七伤药(0.39 g.kg-1)/阿司匹林(0.26 g.kg-1)]组、胆木浸膏片1.56 g.kg-1组、ELN(0.390,0.195,0.098 g.kg-1)组。每天1次,连续ig给药3 d。末次给药后1 h选用热板法、扭体法、二甲苯致耳肿胀、醋酸致腹腔炎症方法观察镇痛及抗炎作用;取SD大鼠随机分为正常组、模型组、胆木浸膏片(0.78 g.kg-1)组、ELN(0.195,0.098,0.049 g.kg-1)组。每天1次,连续ig给药3 d。末次给药后1 h选用角叉菜胶诱导足肿胀方法观察抗炎作用。结果:ELN(主要指标性成分异长春花苷内酰胺含量16%左右)能显著延长小鼠的疼痛反应时间,明显减少小鼠的扭体次数;抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高,减轻小鼠耳肿胀和大鼠足跖肿胀反应;能明显减少大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中前列腺素E2(PGE2)含量。结论:ELN具有显著的镇痛和抗炎作用,其机制可能与抑制PGE2产生与释放有关。     

The effect of artichoke (Cynara scolymus L.) extract on ROS generation in HUVEC cells

The effect of an artichoke extract on induced reactive oxygen species (ROS) generation in cultured human umbilical endothelial cells (HUVECs) and its reductive properties were evaluated. Preincubation of HUVEC cells with the artichoke extract at concentrations of 25-100 microg/mL for 24 h abolished ROS generation induced by LPS and oxyLDL as evaluated by the fluorescence intensity of 2',7'-dichlorofluorescein (DCF). Potent, concentration-dependent reductive properties of the artichoke extract were demonstrated by the reduction kinetics of cytochrome c in reference to ascorbate were also revealed. The results of the present study the warrant application of artichoke extracts as endothelium protecting agents.     

Effects of leaf and root extracts of Nauclea latifolia on purinergic neurotransmission in the rat bladder

The leaf and root parts or their combination of Nauclea latifolia were separately extracted and their pharmacological effects on purinergic transmission in the bladder investigated. The leaf extract was very potent in potentiating purinergic neurotransmission by potentiating ATP induced contractions. These actions were more pronounced than the depression of potassium chloride evoked contraction of the bladder. The root extract depressed purinergic contraction of the bladder by a direct depressant action on the bladder smooth muscle since it did not modify ATP induced contractions. The leaf and root extracts antagonized each other when combined together. It is concluded that the leaf and root extracts of N. latifolia possess interesting pharmacological actions on the bladder.     

乌檀注射剂中间体指纹图谱研究

目的:建立乌檀注射剂中间体指纹图谱。方法:AgilentExtendC₁₈柱,流动相为纯水～5%乙腈(0～10min),5%乙腈～50%乙腈(10～60min),50%乙腈～纯水(60～70min)梯度洗脱,流速0.7mL·min^-1,检测波长245nm。结果:精密度、稳定性、重复性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均<3%,10批样品间具有很高的相似度。结论:本方法可以作为乌檀注射剂中间体的质量控制方法。     

In vitro and ex vivo antiangiogenic activity of Salvia officinalis

Angiogenesis is a key process in the promotion of cancer and its metastasis. Herein, the antiangiogenic activity of Salvia officinalis extract and its fractions was investigated. S. officinalis aerial parts were extracted with ethanol and its successive hexane, ethyl acetate, n-butanol and aqueous fractions were evaluated for their antiangiogenic activities using human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) capillary tube formation and rat aorta models in a three-dimensional collagen matrix. Furthermore, antimigrative effects of the fractions were assessed using a wound healing model. The ethanol extract of S. officinalis (ESO) potently inhibited capillary tube formation in HUVEC and rat aorta models of angiogenesis, and its hexane fraction (HSO) exerted the highest inhibitory effect. In addition, the ethanol extract of S. officinalis and its hexane fraction showed a dose-dependent inhibitory activity on the migration of the endothelial cells in the wound healing model. Furthermore, ESO inhibited endothelial cell proliferation at 50-200 μg/mL in a dose-dependent manner. These findings indicated some new pharmacological activities of S. officinalis such as antiangiogenic in vitro and ex vivo, and antimigrative activity in vitro. Therefore, S. officinalis could be a candidate as a useful herb with therapeutic or preventive activity against angiogenesis related disorders.     

黄芪多糖组分-A3对对氧磷所致血管内皮功能损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖组分-A3(APS-A3)对对氧磷(PARA)所致血管内皮功能损伤的保护作用。方法以大鼠离体胸主动脉血管环(EVAPVR)和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验对象,以PARA为损伤药物,以APS-A3为保护药,检测血管内皮依赖性舒张反应(EDRR)、内皮细胞单层通透性(ECMP)及细胞培养液生化指标。结果 APS-A3剂量依赖性(0.1,1,10 mg/ml)地显著减轻了PARA(3.63μmol/L)对血管EDRR的抑制作用,降低了ECMP的增加,保护了超氧化物歧化酶(SOD)活性、阻滞了丙二醛(MDA)浓度的升高以及一氧化氮(NO)浓度的降低(均P<0.05)。结论 APS-A3对PARA所致的血管内皮功能损伤有明显的保护作用,其机制可能与APS-A3的抗氧化作用有关。     

异长春花苷内酰胺大孔树脂纯化研究

目的:研究大孔树脂吸附分离纯化异长春花苷内酰胺的工艺,为异长春花苷内酰胺的工业化生产提供参考.方法:采用静态吸附-解吸方法,从10种大孔吸附树脂筛选出最佳树脂,另外采用单因素影响试验,对吸附量、水洗脱体积、乙醇洗脱浓度及体积进行了考察.结果:HPD400大孔树脂对异长春花苷内酰胺的吸附及解吸附效果最好,树脂的最佳吸附量为20.23mg·g-1,水及30%乙醇洗脱体积为6 BV,70%乙醇洗脱体积为4 BV.结论:该法简单可行,分离效果好,对大生产有一定指导作用.     

山莨菪碱对血管内皮细胞组织因子和纤溶酶原激活物抑制剂1表达的影响及其机制研究

目的 通过研究山莨菪碱对内毒素脂多糖(LPS)致血管内皮细胞组织因子(TF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI—1)表达的影响,探讨山莨菪碱治疗感染性休克的机制。方法 用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC);ELISA方法检测HUVEC条件培养液PAI—1蛋白量：用一步凝固法检测HUVEC TF活性;Northern blot检测HUVEC TF和PAI—1的mRNA表达;为了评估上述作用是否通过NF—κB途径而转导,用电泳迁移变动检测法(EMSA)检测HUVEC核提取物NF—κB DNA结合活性。结果 LPS能使HUVEC PAI—1蛋白和TF活性及其mRNA表达显著增强,加入山莨菪碱后,LPS的这种作用明显减弱,并与山莨菪碱呈量效关系。山莨菪碱能完全阻止LPS致内皮细胞核提取物NF—κB DNA结合活性。结论 山莨菪碱治疗感染性休克的机制之一可能是通过拮抗LPS致HUVEC TF和PAI—1的表达。而且这种拮抗作用可能通过NF—κB途径来转导。