水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及纤溶活性的影响

目的:研究低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及其纤溶活性的影响。方法:水蛭的低温炮制采用液氮快速冷冻和冷冻干燥技术;传统炮制参照2005药典;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异检测采用SDS-PAGE,定量分析采用Scion Image软件;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组分的纤溶活性鉴定采用纤维蛋白平板法,溶栓活性分析采用体外溶栓试验。结果:低温炮制工艺的水蛭水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,不仅SDS-PAGE蛋白条带的数量与浓度显著高于传统工艺,而且纤溶活性也显著高于传统炮制工艺。结论:不同炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成与溶栓活性有显著影响;在防止水蛭中蛋白质类活性成分的降解、变性与失活方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。该工艺适用于以蛋白为主要活性成分的动物药研究。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析

目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。     

水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较

目的:应用抗凝血活性指标筛选水蛭炮制工艺。方法:按生物检定法测定各种炮制品水提取物的抗凝血时间,比较不同炮制方法对水蛭抗凝血活性的影响。结果:净制法和低温冷冻粉碎炮制法均能较好地保持水蛭抗凝血活性,而其它炮制方法炮制的水蛭抗凝血活性不强。结论:净制法炮制水蛭,能较好地保持抗凝血活性,且制作简便,是一种较好的炮制方法。     

脉通胶囊对大鼠纤溶系统的影响

目的:研究脉通胶囊对血液纤溶系统的影响.方法:用体外血凝块溶解实验观察脉通胶囊溶解血凝块的作用及用相应试剂盒测定血栓模型大鼠血浆纤溶酶原(PLG)和纤维蛋白原(Fbg)含量.结果:脉通胶囊能使体外血凝块重量减少及降低纤溶酶原和纤维蛋白原的含量.结论:脉通胶囊具有激活大鼠纤溶系统的作用.     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

螺旋藻蛋白激酶溶栓作用的研究

目的 探索螺旋藻蛋白激酶(SPK)的溶栓作用.方法 体外用试管法,通过测定血栓溶解率来研究SPK的溶栓作用;用琼脂糖-纤维蛋白平板法检测SPK的纤溶作用;体内采用结扎大鼠下腔静脉的方法复制静脉血栓模型,通过称取血栓重量来研究SPK对静脉血栓的溶解作用.结果 SPK使体外试管法的血栓溶解率显著增加;SPK可以溶解琼脂糖-纤维蛋白平板;使体内实验的静脉血栓重量减轻,各结果均具有明显的剂量-效应依赖关系.结论 螺旋藻蛋白激酶具有明显的溶栓作用.     

溶栓通脉胶囊纤溶活性的实验研究

溶栓通脉胶囊是由水蛭等中药组成的中成药,临床证实其具有很强的破血逐瘀功效,对心脑血管病病人有较好的疗效,为了探讨其破血逐瘀的物质基础,应用纤维蛋白平板法、纤维蛋白加热平板法进行了纤溶活性实验研究,现报告如下。１纤维蛋白平板法［１,２］１．１实验材料１．１．１试剂及仪器纤维蛋白原、纤维蛋白溶酶原、凝血酶、尿激酶：中国药品生物制品检定所提供。琼脂粉、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、生理盐水、５％稀盐酸：深圳市中医院检验科提供。溶栓通脉胶囊：深圳市中医院制剂室生产。恒温箱：Ｈ．Ｈ．Ｓ２４－６型上海医疗器械厂…     

湿法超微粉碎和水煎煮提取法对鼠妇蛋白溶栓抗凝活性的影响及机制初探

目的比较湿法超微粉碎及水煎煮提取法对鼠妇溶栓抗凝活性蛋白的影响,并探究其溶栓抗凝活性的机理。方法比较两种不同提取法所得鼠妇提取物得率及蛋白含量的差异,并采用硫酸铵分级盐析初步纯化鼠妇活性蛋白,纤维蛋白平板法检测鼠妇活性蛋白对纤维蛋白的降解作用及溶栓机理,全自动凝血因子分析仪测定鼠妇活性蛋白对凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响,考察温度对鼠妇活性蛋白的影响。结果两种不同提取方法在提取物得率、蛋白含量存在较大差异;其中,鼠妇的水煎煮提取物未检测出溶栓活性,而湿法超微粉碎提取的蛋白具有很强的溶栓活性,其活性蛋白主要集中在60%~80%硫酸铵饱和度范围内,通过激活纤溶酶原的方式降解纤维蛋白,并且能明显延迟TT、APTT,但对于PT无明显作用;而水煎煮提取物对TT、PT、APTT均无延迟作用。结论湿法超微粉碎提取法能很好地保留鼠妇溶栓抗凝活性蛋白,而水煎煮提取的鼠妇蛋白无溶栓抗凝活性。     

不同炮制方法对牡丹皮中丹皮酚、芍药苷、总黄酮及总多糖含量的影响

目的: 探讨不同炮制方法对牡丹皮中主要成分含量的影响,为全面评价牡丹皮的药效与质量提供参考. 方法: 采用RP-HPLC测定丹皮酚和芍药苷含量,流动相分别为甲醇-水(55:45)和乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86),检测波长依次为274,230 nm.采用Al(NO₃)₃显色法测定总黄酮含量,检测波长508 nm;硫酸-苯酚比色法测定总多糖含量,检测波长485 nm. 结果: 丹皮酚、芍药苷、总黄酮及总多糖在不同炮制品中含量排序分别为酒炙品>生品>炒黄品>炒焦品>炒炭品,炒黄品>生品>酒炙品>炒焦品>炒炭品,酒炙品>生品>炒黄品>炒焦品>炒炭品,生品>酒炙品>炒黄品>炒焦品>炒炭品. 结论: 多指标成分测定有利于阐释牡丹皮的炮制机制,并有助于牡丹皮炮制品的检测.     

不同炮制方法对僵蚕体外抗氧化活性及其对酪氨酸酶抑制能力的影响

目的： 探讨不同炮制方式对僵蚕提取物体外抗氧化活性及其对酪氨酸酶抑制能力的影响。 方法： 以生品僵蚕为对照,以二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）、羟自由基（·OH）、三价铁离子还原能力及小鼠肝微粒体脂质过氧化为指标,考察不同僵蚕炮制品甲醇提取部位体外抗氧化能力的差异;以L-多巴为底物,考察不同僵蚕炮制品提取物对酪氨酸酶抑制能力的差异;采用HPLC比对和确定甘蒸僵蚕新增成分的归属。 结果： 当提取液生药质量浓度为2~30 g·L^-1时,生品、微波品、甘蒸品和麸炒品对DPPH·的清除率基本一致,清蒸僵蚕的清除率最低;生药质量浓度为20 g·L^-1时,各炮制品对·OH的清除率均达到最大,清除能力顺序为生品 > 甘蒸品 > 微波品 > 麸炒品 > 清蒸品;生药质量浓度为8~80 g·L^-1时,各炮制品的总还原能力大小为甘蒸品 > 微波品 > 生品 > 清蒸品 > 麸炒品;生药质量浓度为80 g·L^-1时,各炮制品对小鼠肝脏微粒体脂质过氧化的抑制率均达到最大,抑制能力顺序为生品 > 甘蒸品 > 微波品 > 麸炒品 > 清蒸品;生药质量浓度为20 g·L^-1时,各炮制品对酪氨酸酶的抑制率达到最大,抑制能力排序为甘蒸品 > 生品 > 清蒸品 > 麸炒品 > 微波品。HPLC图谱比对结果显示,与生品及其他炮制品相比,甘蒸僵蚕甲醇提取部位增加了芹糖甘草苷、甘草苷和甘草酸铵等抗氧化活性成分。 结论： 僵蚕经加热炮制后,体外抗氧化活性与对酪氨酸酶的抑制能力有所降低。甘蒸僵蚕的整体抗氧化活性不低于生品是因为辅料甘草汁中活性物质起到了相应的贡献作用。     

不同炮制法对广西五月艾总黄酮含量及镇痛作用的影响

目的:探讨不同炮制方法对广西五月艾总黄酮含量及镇痛作用的影响.方法:采用紫外分光光度法测定总黄酮含量;采用热板法、扭体法观察不同五月艾炮制品对小鼠的镇痛作用.结果:不同炮制品中广西五月艾总黄酮含量大小为酒炙品＞醋炙品＞生品.醋炙品中总黄酮含量较生品提高6.60％,酒炙品则提高7.46％;扭体法中,醋炙组镇痛率较生品提高27.11％,酒炙组则提高29.11％;热板法中,广西五月艾醋炙品和酒炙品较生品对热板致痛能大幅提高止痛作用.结论:广西五月艾生品、醋炙品、酒炙品对冰乙酸所致的小鼠扭体反应有明显的抑制作用,均能提高对小鼠不同时段热板致痛的痛阈.     

川芎炮制历史沿革及现代研究

通过查阅文献资料,弄清川芎炮制历史沿革及现代研究方法.以《历代中药炮制资料辑要》一书为线索,查阅南齐至清朝时期本草原著123部,并查阅建国后《中国药典》8部、《全国中药炮制规范》1988年版和地方中药饮片炮制规范17部,对古今文献中所收载的与川芎炮制有关的内容加以归纳、总结和文献循证.川芎炮制历史悠久,历代的炮制方法有洗、去土、去苗芦;切、剉、研;熬、炒、煅、焙、蒸、酒炒、酒洗、酒炙、酒煮、醋煮、醋炒、米泔浸、米泔炒、童便浸、盐水炙等,共29种.其中酒炙法自宋代沿用至今.现代主要应用生品,酒炙亦有.分析了川芎现代炮制研究状况.川芎炮制的规范化、标准化研究有待进一步阐明.     

补骨脂生品及炮制品抗氧化活性

目的:筛选补骨脂生品及5种炮制品(雷公法制补骨脂、炒盐补骨脂、酒炒补骨脂、炒补骨脂和盐蒸补骨脂)各石油醚(PE)部位、乙酸乙酯(EA)部位和正丁醇(BU)部位的体外抗氧化活性,并比较不同炮制方法对补骨脂抗氧化活性的影响.方法:以二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照,利用清除二苯代苦味酰基(DPPH)和[2,2’-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基以及铁离子还原/抗氧化(ferricreducing/antioxidant power assay,FRAP)3种方法对补骨脂生品及炮制品各部位抗氧化活性进行评价.结果:雷公法补骨脂、炒盐补骨脂、酒炒补骨脂和炒补骨脂各PE部位清除DPPH自由基的能力(IC50分别为97.1,97.7,99.9和95.7 mg·L-1)均低于补骨脂生品PE部位(IC50 =77.3 mg·L-1);补骨脂生品PE部位清除ABTS自由基的能力(IC50=1.8 mg·L-1)强于阳性对照BHT(IC50=2.3 mg·L-1),酒炒补骨脂和盐蒸补骨脂BU部位清除ABTS自由基的能力(IC50为5.8 mg·L-1和5.1 mg·L-1)均高于补骨脂生品正丁醇部位(IC50=6.8 mg·L-1);5种补骨脂炮制品各部位还原Fe3+的能力均比补骨脂生品各部位低.结论:补骨脂生品及炮制品各部位显示出不同的抗氧化活性,且不同炮制方法抗氧化活性差距较大.     

酒黄芩炮制研究进展

研究酒黄芩历史炮制情况和现代炮制工艺研究情况.通过查阅、整理有关酒黄芩的历史文献资料,对其炮制研究情况进行归纳总结.整理了酒黄芩的炮制历史沿革、酒黄芩炮制规范收载情况、酒黄芩临床功效及复方应用、黄芩酒制的现代研究以及酒黄芩化学及质量、药理学等方面内容.黄芩酒制早在唐代就有记载,在全国大部分省市的中药饮片炮制规范中也有收载,但目前对其化学成分,药理作用的系统研究较少,有必要对黄芩酒制历史沿革加以考证,同时对其进行系统的现代化学和药理学研究,为揭示其炮制原理和科学内涵提供一定的理论依据.     

酒制甘肃丹参的炮制工艺研究

目的以甘肃丹参中脂溶性成分、水溶性成分为指标,通过正交试验探讨酒制甘肃丹参的炮制工艺。方法采用高效液相色谱法,以脂溶性成分、水溶性成分含量为指标,通过正交设计筛选炮制工艺。结果水提取对脂溶性成分转移率仅为2.4%,实际意义不大;而对水溶性成分丹酚酸B含量有显著影响,最佳工艺条件为10%的黄酒,加20%的酒量,在80℃炒炙4min。结论选择最佳炮制工艺对于酒制甘肃丹参的制备较为合理。     

建立中药复方用半仿生提取研究的技术平台

半仿生提取法(SBE法)是针对中药药效物质提取中存在的“唯成分论”和“通则论”,采用“灰思维方式”将整体药物研究法与分子药物研究法相结合,从生物药剂学的角度为经消化道给药的中药制剂创立的一种提取新技术。经对多种中药及其复方的研究,结果皆提示：半仿生提取法有可能替代(WE法水提取法);(SBAE法半仿生提取醇沉淀法)有可能替代(WAE法水提醇沉淀法)。本文以黄连解毒汤和慈航丹为例,对建立中药复方半仿生提取研究的技术平台作了介绍。