水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及纤溶活性的影响

目的:研究低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及其纤溶活性的影响。方法:水蛭的低温炮制采用液氮快速冷冻和冷冻干燥技术;传统炮制参照2005药典;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异检测采用SDS-PAGE,定量分析采用Scion Image软件;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组分的纤溶活性鉴定采用纤维蛋白平板法,溶栓活性分析采用体外溶栓试验。结果:低温炮制工艺的水蛭水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,不仅SDS-PAGE蛋白条带的数量与浓度显著高于传统工艺,而且纤溶活性也显著高于传统炮制工艺。结论:不同炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成与溶栓活性有显著影响;在防止水蛭中蛋白质类活性成分的降解、变性与失活方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。该工艺适用于以蛋白为主要活性成分的动物药研究。     

水蛭炮制又一法

<正>水蛭,是一味治疗经闭症瘕,蓄血发狂,扑损瘀血的良药,但因其气腥臭,难以入口,甚者服之恶心呕吐,影响疗效。笔者在传统的炮制方法基础上增加除腥工序,效果良好,现将方法介绍如下。 取原药切段,投入沸猪油中,炸至表面焦黄色,鼓起,取出,摊凉。或取滑石粉置热锅中,待其滑利,投入水蛭,炒至表面微鼓起时,取出,筛去滑石粉,摊凉。将在猪油中炸成焦黄鼓起的水蛭取出,滤去油,和在滑石粉中炮制鼓起的水蛭取出,筛去滑石粉,趁热置一干净     

试述不同炮制方法对水蛭功效的影响

经对水蛭不同炮制品浸出物的比较，提出：不同的炮制方法对临床功效有影响；水蛭生品应作为一个法定的药用规格予以肯定；因其有腥燥之气，应研粉后装入胶囊利于吞服     

水蛭炮制研究进展

水蛭功能破血、逐瘀、通经,用于癥瘕、痞块、血瘀经闭、跌扑损伤等.因其有特殊的腥臭味和不易粉碎的特性,历代医家多将其炮制后入药.水蛭的现代制品主要有生水蛭、清炒品、砂炒品、滑石粉拌炒品等.目前对其炮制工艺已进行了一系列改革,如:酒炙法,滑石粉加酒、姜炮制,麦麸加酒炮制,焙制和电热烘烤等.同时发现炮制对水蛭化学成分及药理作用均有一定影响.临床应用水蛭时,当结合实际情况选择适宜的生品或炮制品.     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

水蛭饮片炮制研究

作者从历史文献、近代研究等资料入手,对二千年来水蛭炮制的原始意图和演变动因,现存炮制工艺合理与否,如何改进及其内在成分、药效反应和临床应用的关系等问题进行了系统研究及探讨。     

水蛭新法炮制之商榷

水蛭：别名：马鳖、马蛭、马蝗、肉钻子、蚂蝗干等。本品为水蛭科动物蚂蝗Whitmania pigra Whitman．水蛭Hirude nipponica Whitman,柳叶蚂蝗Whitmania acran ulaata Whitman的干燥体。全国大部分地区的湖泊、池塘以及水田中均有。     

水蛭古今炮制研究初探

对水蛭的炮制方法进行了历史沿革探讨,并对其现代炮制研究进行了概述。水蛭历代炮制方法分净制、切制、加辅料和不加辅料制几大类,约十余种,而今仅沿用了净制、切制和滑石粉烫炒制几种炮制方法。现代仅就其生品和炒制品从化学成分含量与药理作用比较进行了初步的研究探讨,为其炮制工艺改进和临床用药提供了一定的科学依据,但对历代沿用的多种炮制方法未能进行全面的科学探讨。据此提出,对水蛭的炮制研究,应用现代科学技术,结合临床用药理论,找出突破点,多学科深入地进行研究探讨,更好地提高水蛭的炮制品质量,为临床提供更加安全可靠有效的水蛭制品     

宽体金线蛭不同炮制品抗炎作用及使用方法的药理研究

比较了宽体金线蛭3种炮制品,对小鼠急性炎症模型的抗炎作用、免疫吞噬能力。以体内、外抗凝及体内抗栓作用为指标,比较了供试品不同使用方法的活血作用,为全面认识宽体金线蛭的药理作用及合理使用方法,提供了初步实验依据。     

宽体金线蛭5种提取方法的比较

宽体金线蛭５种提取方法的比较中国中医研究院基础理论研究所（北京１００７００）丁家欣，欧兴长，张秋海，张玲，刘振丽ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｍｏｎｇＦｉｖｅＤｉｆｆｅｒｅｎｔＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｆＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｒａＷｈｉｔｍａｎ￥...     

恒温越冬对蚂蟥生长及性腺发育的影响

为了探究恒温越冬对蚂蟥生长、性腺发育及内在品质的影响。将越冬期蚂蟥置于21℃的光照培养箱,以自然越冬蚂蟥为对照,越冬结束后测定蚂蟥的体质量、性腺质量及内在品质,石蜡切片观察蚂蟥精卵巢组织形态。结果表明,与自然越冬组相比,恒温越冬蚂蟥体质量是其2.35倍,雌雄性腺质量分别增加11.54%,48.33%,卵巢囊泡内卵黄期细胞和胶膜形成期细胞以及精巢囊腔内精原细胞和初级精母细胞均显著增加,抗凝血酶活性增加27.85%。综上,恒温能促进越冬蚂蟥生长、精卵细胞发育,提高抗凝血酶活性。     

Cu2+富集与释放对蚂蟥生长、内在品质及相关基因表达影响的研究

该研究旨在探究Cu^2+富集与释放对蚂蟥生长和内在品质影响,以及蚂蟥不同组织对Cu^2+富集与释放规律。在安全浓度范围内,在蚂蟥日常养殖中添加适宜浓度Cu^2+,养殖50 d后停止添加Cu^2+继续养殖50 d,测定不同时期蚂蟥生长指标、不同组织Cu^2+含量、以及内在品质变化。结果表明,0.014 mg·L^-1 Cu^2+能显著促进蚂蟥生长(P<0.05),降低死亡率;在Cu^2+富集初期40 d内蚂蟥特定生长率、消化酶活性、生长与消化酶相关基因表达量显著高于对照组(P<0.05),释放期无明显差异;Cu^2+组蚂蟥免疫酶活性、免疫酶基因表达量与对照组比呈现先升高后降低的趋势(P<0.05);蚂蟥不同组织对Cu^2+富集能力为消化道>肌肉>皮肤,释放能力为肌肉>消化道>皮肤;Cu^2+组蚂蟥内在品质、水蛭素基因表达量与对照组无显著差异。综上,Cu^2+能提高蚂蟥消化酶、抗逆酶活性及相关基因的表达,促进蚂蟥生长、提高免疫能力,但并不影响药材水蛭内在品质,蚂蟥至少需要30 d才能完全释放体内富集的Cu^2+。     

宽体金线蛭室内产茧、孵化及仔蛭饥饿研究

目的：建立宽体金线蛭室内网箱湿土养殖新模式,为中药材生产质量管理规范及规模化繁养殖提供参考依据。方法：以野外采捕的具有生殖环带的宽体金线蛭为试验材料,在室内采用网箱湿土法养殖,进行宽体金线蛭产茧、卵茧孵化及仔蛭饥饿试验研究。结果：亲蛭采用网箱湿土法养殖17d,其平均成活率为90％;产茧前具有生殖环带（土黄色）,产茧后生殖环带消失;亲蛭产卵茧后平均体重下降率达（29．94±0．01）％;产卵茧期间共收获卵茧79枚,平均产茧量为1．8枚／条,卯茧平均重量为（0．50±0．21）g／枚,平均长径和短径分别为（1．75±0．31）cm／枚和（1．10±0．18）cm／枚;卵茧在室温下（14—33℃）孵育34d,共孵出仔蛭865条,每枚卵茧孵出（11．4±2．0）条仔蛭,卵茧孵化率达92．57％。初孵仔蛭平均个体体重为（0．0205±0．0084）g。饥饿试验表明,在140d时,对照组存活11条水蛭,成活率仅22％,其平均个体体重为（0．1084±0．0877）g,仔蛭个体体重有随日龄的增加而增加趋势;饥饿组仔蛭在140d时全部死亡。结论：在适宜的条件下,采用网箱湿土养殖法,宽体金线蛭可在室内产茧,卵茧集中孵育及亲蛭和仔蛭分开饲养。     

黄芪对蚂蟥生长和免疫及相关基因表达的影响

为了研究黄芪对蚂蟥生长和免疫影响及作用机制,在蚂蟥养殖水中添加黄芪,使养殖水中黄芪质量分数分别为0,0.01%,0.03%,0.05%,0.07%,0.09%。养殖60 d后测定生长性能、消化酶和抗逆酶活性、内在品质以及生长激素(growth hormone,GH)、胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor,IGF-1)和消化酶相关基因相对表达量;同时观察和统计热应激对蚂蟥生存状况的影响,测定热激蛋白HSP70和免疫相关基因相对表达量。结果表明:黄芪组最终体质量、增重率和特定生长率、消化酶和抗逆酶活性以及GH,IGF-1和消化酶相关基因相对表达量均高于空白组,且随浓度的增加呈先升后降趋势,其中0.05%组显著高于其他组别(P<0.05);黄芪组与空白组蚂蟥内在品质无显著性差异。蚂蟥存活率与热应激处理时间呈负相关;随着热应激处理时间的延长,蚂蟥HSP70和免疫相关基因相对表达量呈先升高后降低趋势,热应激24 h时最高;黄芪组存活率、HSP70和免疫相关基因相对表达量均高于空白组,其中0.05%组显著高于其他组别(P<0.05)。综上,黄芪能提高蚂蟥消化酶、抗逆酶活性及相关基因的表达,促进蚂蟥生长、提高免疫能力、增加其抗热应激能力。建议在蚂蟥实际生产中添加0.05%黄芪以提高养殖效益。     

蚂蟥蛋白激酶C基因的克隆和表达分析

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛参与细胞增殖和发育的蛋白激酶,但在雌雄同体动物蚂蟥性腺中的发育机制尚不清楚.为探究蛋白激酶C在蚂蟥生殖细胞的发育过程中的作用,该研究克隆蚂蟥PKC基因,进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR技术进行雌雄性腺的表达分析.结果 表明:①克隆得到的Wp-PKC全长2 580 bp,相对分子质量7...     

蚂蟥Guamerin基因的克隆及吸食后时空表达分析

该研究对非吸血蛭蚂蟥体中弹性蛋白酶抑制剂基因(wp Guamerin)进行了克隆和生物信息学分析,同时对该基因在蚂蟥不同组织、不同吸食阶段的时空表达特点进行研究。结果表明,蚂蟥wp Guamerin基因全长295 bp,相对分子质量为9 145.95 Da,包含1个编码83个氨基酸的开放阅读框,与吸血蛭Guamerin氨基酸序列相似性均在29%~65%;wp Guamerin编码的蛋白无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋、延伸链、折叠和无规则卷曲组成。wp Guamerin在肌肉中表达量显著高于唾液腺,在嗉囊和肠中无表达;吸食后wp Guamerin在肌肉和唾液腺的表达量分别在第1,3天达到最高。因此,wp Guamerin是有别于吸血蛭Guamerin的小分子多肽蛋白,在蚂蟥消化道中不表达,主要在肌肉中表达,吸食行为可刺激蚂蟥肌肉和唾液腺wp Guamerin基因的表达而不能诱导蚂蟥消化道wp Guamerin的表达。     

宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研究

目的:研究宽体金线蛭的耗氧率和窒息点。方法:应用呼吸室法进行研究。结果:平均体重为10 g的宽体金线蛭,15~35℃变温下耗氧率为0.049~0.094 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.44~0.67 mg.p^-1.h^-1,窒息点为0.9~1.51 mg.L^-1;20℃条件下耗氧率为0.044~0.058 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.19~0.77 mg.p^-1.h^-1,窒息点为1.4~1.57 mg.L^-1。结论:宽体金线蛭的耗氧率随水温的升高而上升;窒息点与温度和体重呈负相关;体重与耗氧率呈负相关,与耗氧量呈正相关;耗氧率白天和夜晚的差异不大。