Lactacystin对体外C6胶质瘤细胞超微结构影响的研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Lactacystin 对体外C6胶质瘤细胞超微结构的影响.方法 Lactacystin处理体外培养的G6胶质瘤细胞,HE染色后光镜观察细胞的死亡情况,锇铀铅染色后透射电镜观察细胞超微结构变化.结果 Lactacystin处理体外C6胶质瘤细胞24 h后,光镜下见胞浆浓缩深染,胞核染色质致密浓缩,透射电镜下见细胞表面微绒毛消失,核皱缩,染色质致密浓缩、边集.结论 蛋白酶体抑制剂Lactacystin可以诱导体外G6胶质瘤细胞凋亡.     

高压氧治疗对大鼠脑挫裂伤后认知功能和细胞凋亡的影响

目的：探讨高压氧对脑挫裂伤的治疗作用与对细胞凋亡影响之间的关系.方法：实验于2001-03/2002-05在上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科实验室进行.选择SD雄性大鼠109只,随机分为假手术组、高压氧治疗组和脑损伤组,使用Morris水迷宫实验测试大鼠伤前及伤后的认知功能;分别应用透射电镜、原位末端标记法（TUNEL）和流式细胞技术对各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况进行检测.结果：各组大鼠全部进入结果分析,无脱落.①Morris水迷宫实验结果：脑外伤后大鼠逃生时间显著延长（P＜0.01）,而高压氧治疗使逃生时间明显缩短（P＜0.05）;②各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况：假手术组无细胞凋亡,损伤组和治疗组存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24 h达到高峰,高压氧治疗组在伤后24 h和48 h细胞凋亡发生率显著低于相应的损伤对照组（P＜0.05）.结论：脑挫裂伤后大鼠的认知功能显著减退,高压氧可以显著改善脑外伤后下降的神经功能;高压氧治疗对脑挫裂伤后细胞凋亡的发生有显著影响,抑制细胞凋亡很可能是高压氧对脑挫裂伤治疗作用的重要机制.     

苯乙酸对胶质瘤细胞形态的影响

目的：观察苯乙酸诱导分化胶质瘤细胞C6过程中,对细胞形态的影响。方法：采用醋酸双氧铀电子染色,电子显微镜（电镜）下观察培养C6细胞在应用苯乙酸后的超微结构变化。结果：应用苯乙酸后,C6细胞核形变规整,由畸形核变为类圆形,胞浆中代表细胞分化程度的粗面内质网大量增生。结论：苯乙酸可在亚细胞水平使C6细胞分化程度提高,恶性度降低。     

高压氧治疗对大鼠脑挫裂伤后认知功能和细胞凋亡的影响

目的:探讨高压氧对脑挫裂伤的治疗作用与对细胞凋亡影响之间的关系。方法:实验于2001-03/2002-05在上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科实验室进行。选择SD雄性大鼠109只,随机分为假手术组、高压氧治疗组和脑损伤组,使用Morris水迷宫实验测试大鼠伤前及伤后的认知功能;分别应用透射电镜、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞技术对各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况进行检测。结果:各组大鼠全部进入结果分析,无脱落。①Morris水迷宫实验结果:脑外伤后大鼠逃生时间显著延长(P<0.01),而高压氧治疗使逃生时间明显缩短(P<0.05);②各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况:假手术组无细胞凋亡,损伤组和治疗组存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24h达到高峰,高压氧治疗组在伤后24h和48h细胞凋亡发生率显著低于相应的损伤对照组(P<0.05)。结论:脑挫裂伤后大鼠的认知功能显著减退,高压氧可以显著改善脑外伤后下降的神经功能;高压氧治疗对脑挫裂伤后细胞凋亡的发生有显著影响,抑制细胞凋亡很可能是高压氧对脑挫裂伤治疗作用的重要机制。     

高压氧辅助治疗恶性胶质瘤

恶性胶质瘤包括间变性星形胶质细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤等.恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,难以治愈.目前的治疗方法主要为外科手术切除、放疗和化疗,这些治疗方法均有一定的疗效,但疗效均不理想.因为手术不能完全切除肿瘤,且由于肿瘤细胞对放、化疗的敏感性不一,肿瘤往往容易复发.而高压氧能大大提高肿瘤内乏氧区的氧分压,增加其对放、化疗的敏感性,改善疗效.     

氯化甲基汞对人SHG44胶质瘤细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的探讨氯化甲基汞(MMC)对人SHG44胶质瘤细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为胶质瘤治疗提供理论依据。方法体外培养SHG44胶质瘤细胞,分为空白对照组和MMC实验组(按氯化甲基汞浓度分组)。采用MTT比色法检测不同浓度MMC对体外培养SHG44细胞的增殖抑制和杀伤作用。用流式细胞仪测定MMC对SHG44细胞凋亡/坏死的影响。结果在体外1.25、2.50、5.00和10.00μmol.L-1的MMC均可抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,SHG44胶质瘤细胞存活率明显低于对照组(P0.05),增殖抑制作用随浓度的增加而增强。SHG44胶质瘤细胞接触2.50、5.00和10.00μmol.L-1的MMC后4、8、16和32 h的细胞存活率明显低于对照组(P0.05),细胞杀伤作用随浓度的增加和时间的延长而增强。SHG44胶质瘤细胞接触0.075、0.15、0.3和1.2μmol.L-1氯化甲基汞12 h后细胞凋亡/坏死率呈现剂量依赖性增高趋势(P0.01)。结论MMC具有杀伤SHG44胶质瘤细胞、抑制其增殖、诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于胶质瘤治疗的潜在价值。     

抗原致敏外周血树突状细胞治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 观察树突状细胞(DCs)从凋亡脑胶质瘤细胞获取抗原后,体外诱导抗肿瘤免疫应答及对胶质瘤细胞的特异性免疫杀伤效果.方法 用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)加白介素-4(IL-4)从人外周血分化、诱导DCs、γ-射线在体外诱导培养的人脑胶质瘤细胞凋亡,将DCs、T淋巴细胞和凋亡胶质瘤细胞共培养,同时设计不同类型肿瘤细胞(U937及培养胶质瘤细胞)作对照,分离、富集DCs、T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验.结果 与凋亡胶质瘤细胞共培养之Dcs可以有效提呈胶质瘤细胞抗原,有强烈的免疫应答,刺激的细胞毒T淋巴细胞((CTLs)特异性杀伤胶质瘤细胞.结论 用GM-CSF加IL-4从人外周血分化、诱导的DCs能从凋亡胶质瘤细胞有效提呈肿瘤抗原并诱导出显著的杀伤胶质瘤细胞的免疫反应,可望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径.     

蒿甲醚对人恶性胶质瘤细胞的抑制作用

目的 探讨蒿甲醚对U251人胶质瘤细胞增殖活性、凋亡的影响及其机制.方法 将浓度为0、50、100、200、400、600及800 μmol/L的蒿甲醚孵育U251胶质瘤细胞24、48 h.利用MTT法测定细胞增殖活性.然后将利用浓度为0、200、400及800μmol/L的蒿甲醚培养U251人胶质瘤细胞48 h,利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡.最后利用Western blot法检测胶质瘤细胞的磷酸化AKt的表达水平.结果 400 μmol/L及更高浓度的蒿甲醚培养48 h,U251细胞的增殖活性受到显著抑制,同时随着浓度升高抑制作用增强.与对照组相比,蒿甲醚显著促进U251细胞的凋亡.400 μmol/L和800 μmol/L浓度的蒿甲醚显著抑制了磷酸化Akt的表达水平.结论 蒿甲醚能够以剂量依赖的方式显著抑制U251细胞的增殖活性并促进其凋亡,该抑制作用可能与其抑制Akt信号通路有关.     

CM通路AEA对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的观察在神经酰胺(CM)通路中,大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)抑制人胶质瘤U251细胞增殖及在诱导细胞凋亡中的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法,分别测定不同浓度的CM(5~20μmol/L)和烟曲霉毒素(FB1)(10μmol/L)预处理24h后对AEA(1~10μmol/L)抑制人胶质瘤U251细胞增殖作用的影响;流式细胞仪Annexin-V/PI双染色法定量分析FB1(10μmol/L)预处理24h后对AEA(10μmol/L)促细胞早期凋亡作用的影响。结果不同浓度的AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用不同,且与CM具有协同作用;10μmol/L FB1预处理24h后可显著对抗AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;AEA(10μmol/L)可诱导人胶质瘤U251细胞发生早期凋亡,而FB1(10μmol/L)预处理24h后凋亡发生率明显下降。结论 AEA可通过CM从头合成通路,与CM呈浓度依赖性协同,从而抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其早期凋亡。     

高压氧对持续局灶性脑缺血细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨高压氧(HBO)对持续性局灶性脑缺血细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 选择4～5个月龄SD大鼠65只,随机分为缺血组、HBO组和假手术组。观察脑梗死灶体积、凋亡细胞数量及凋亡调控基因蛋白表达的变化。结果 HBO组与缺血组相比,6 h～10 d各相应时间点梗死灶体积均明显缩小,差异均有极显著性意义(P均<0.01);HBO 组缺血48 h后,TUNEL 阳性凋亡细胞数较缺血组明显减少(P<0.01);HBO 组与缺血组相比,在缺血6 h～10 d各时间点 Bcl-2阳性细胞增加;差异有显著性意义;Bax阳性细胞在缺血6 h～10 d各时间点均减少,差异有显著性意义。结论 脑缺血早期暴露于高压氧可以减少局灶性脑缺血梗死灶体积;高压氧能抑制脑缺血细胞凋亡,其作用与上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白表达有关。     

高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制

目的:探讨高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制。方法:选取3—4周龄SD雄性大鼠,采用全骨髓贴壁法培养至P3代,随机分为正常组A(细胞置于常规培养箱内培养)、缺氧/复氧组B(置于95%N2、5%CO_2密闭培养箱中培养9h,复氧6h)、缺氧/复氧+高压氧组C(90%O_2,2.5ATA、90min)、缺氧/复氧+高压氧+YC-1组D,实验组其余时间处理和正常组相同。A、B、C、D组均于处理结束12h后行CCK-8比色法、流式细胞仪检测细胞存活率及凋亡率。Western blot检测HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平。结果:(1)与A组相比,缺氧/复氧后B、C、D组细胞存活率明显降低,差异具有显著性意义(P0.05),给予高压氧后C组存活率比B组升高,D组存活率较C组降低(P0.05)。(2)实验组B、C相比,C组中HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平升高(P0.05)。(3)实验组C、D组相比,给予YC-1阻断剂后HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达减少(P0.05)。结论:高压氧能够提高缺氧环境下骨髓间充质干细胞存活率,其机制可能与调控HIF-1α介导的Wnt通路有关。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后移植神经干细胞增殖分化的影响

目的：探讨高压氧（HBO）对大鼠脊髓全横断损伤后移植的神经干细胞存活、增殖及分化的影响。方法：成年健康SD大鼠20只,随机分为神经干细胞移植组（NSCs组）和HBO联合神经干细胞移植组（HBO＋NSCs组）各10只。2组均采用脊髓全横断损伤模型,术后均给予NSCs移植治疗,HBO＋NSCs组在移植后辅以HBO治疗。治疗后检测移植在脊髓损伤处的神经干细胞存活、增殖及分化的情况。结果：术后第28d,HBO＋NSCs组移植的神经干细胞存活数量显著多于NSCs组（P〈0．05）。2组大鼠的脊髓损伤处及其相邻的组织均可观察到较多移植的神经干细胞分化为胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性染色细胞。HBO＋NSCs组中移植的神经干细胞分化为神经元特异性烯醇化酶（NSE）阳性染色细胞百分率显著高于NSCs组（P〈0．05）。结论：HBO能够促进大鼠脊髓损伤处移植的神经干细胞存活、增殖,并能促进这些细胞能分化为NSE阳性神经元。     

高压氧治疗对海马区急性脑缺血再灌注损伤的远期疗效

目的探讨高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)治疗对海马区急性脑缺血再灌注损伤的远期疗效。方法沙土鼠脑缺血20min后再灌注,同时应用24.52kPaHBO治疗,连续3d,停止治疗2d后,应用TUNEL标记神经元凋亡,观察HBO治疗停止后神经元凋亡的变化。结果24.52kPaHBO治疗停止2d后,海马神经元凋亡数比24.52kPaHBO治疗结束时显著减少(P<0.01),比单纯缺血再灌注5d组亦显著减少(P<0.01)。结论24.52kPaHBO治疗急性脑缺血损伤具有良好的疗效,未见“反跳”现象。     

高压氧对实验兔脑血管前、后循环超微结构的影响*

目的:观察高压氧(HBO)作用下及停用2d后,实验兔颈内动脉和基底动脉血管壁超微结构的变化。探讨高压氧作用下前循环收缩,后循环扩张的可能机制。方法:30只实验兔随机分为实验组、对照组和HBO+休息2d组,实验组暴露于2.2ATAHBO下60min,连续3d,对照组正常饲养,HBO+休息2d组同实验组经HBO处理3d后正常饲养2d。电镜下分别观察3组实验兔颈内动脉和基底动脉超微结构的变化。结果:实验组颈内动脉与对照组比较,其血管壁内弹力膜疏松,脂质空泡形成,内皮细胞及细胞器呈轻度变性;基底动脉实验组与对照组比较,其超微结构变化不明显。HBO+休息2d组基底动脉和颈内动脉超微结构与对照组比较,基本恢复正常。结论:HBO作用下颈内动脉和基底动脉内膜的形态学改变,提示HBO可能影响了线粒体内氧化磷酸化过程,从而出现脑组织供能不足,进而启动脑血管自动调节机制使前循环血管收缩,而供应脑干的后循环血管扩张,以提供充足的血供维持正常的物质代谢。在2.2ATAHBO作用下,对脑血管壁超微结构造成的轻度损伤是暂时的、可逆的。     

Effect of hyperbaric oxygen on flow-mediated vasodilation: an ultrasound study

OBJECTIVE: The purpose of this study was to investigate the effect of hyperbaric oxygen (HBO) treatment on flow-mediated vasodilation (FMD) by ultrasound examination. METHODS: We studied 14 young patients without cardiovascular problems who underwent HBO treatment. The indications for HBO treatment were osteomyelitis (n = 8), Crohn disease (n = 2), perianal abscesses (n = 2), lingual artery embolization (n = 1), and aseptic necrosis (n = 1). The ultrasound evaluation for FMD was performed before HBO treatment, after 1 session of HBO treatment, and after 10 sessions of HBO treatment. The right brachial artery FMD response was evaluated by the mean of the baseline right brachial artery diameter, absolute change in the diameter before and after cuff inflation/deflation, and percent change in the diameter. RESULTS: Statistical analysis showed a significant change in the preinflation right brachial artery diameter before (mean +/- SD, 3.6 +/- 0.54 mm) and after (3.76 +/- 0.56 mm) 10 sessions of HBO treatment (P < .05). The absolute changes in the right brachial artery diameter before and after cuff inflation/deflation (0.36 +/- 0.2 mm before HBO treatment, 0.37 +/- 0.22 mm after 1 session of HBO treatment, and 0.38 +/- 0.21 mm after 10 sessions) and percent change in FMD (10% +/- 5.8% before HBO treatment, 10.6% +/- 7.5% after 1 session of HBO treatment, and 10.6% +/- 7.7% after 10 sessions) after induction of a hyperemic response by cuff inflation were not statistically significant (P > .05). CONCLUSIONS: Hyperbaric oxygen treatment did not have an immediate effect on FMD (absolute change in the right brachial artery diameter after cuff inflation/deflation); however, the right brachial artery diameter increased after 10 sessions of HBO treatment. This may suggest chronic stress on the vascular endothelium after HBO.     

高压氧治疗脑外伤失语症60例疗效观察

目的观察高压氧(HBO)治疗脑外伤后失语症的治疗效果。方法将120例脑外伤患者随机分为HBO治疗组和常规组,常规组治疗采用临床常规治疗,HBO治疗组在常规治疗的基础上实施30次以上HBO治疗。在治疗前后分别用中国康复中心失语症检查法对语言功能进行评估和比较。结果 HBO治疗组和常规组显效率分别为63.3%、13.3%,HBO治疗组和常规组总有效率分别为93.3%、46.7%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HBO治疗脑外伤后失语疗效明显优于常规治疗组,能显著提高疗效。     

高压氧治疗高血压性脑出血疗效分析

目的评价高压氧治疗高血压性脑出血的疗效。方法100例行高压氧治疗的高血压性脑出血患者为治疗组，同期未行高压氧治疗的高血压性脑出血患者为对照组，对比其显效率。结果治疗组总显效率为61％，对照组显效率为42％（X^2=4．86，P〈0．05）。结论高压氧治疗可提高高血压性脑出血患者的神经功能恢复。     

高压氧治疗缺血性结肠炎的疗效观察

目的：观察探讨高压氧治疗缺血性结肠炎的疗效。方法：入选67例缺血性结肠炎患者,将患者分为高压氧组（36例）和对照组（31例）,2组基础治疗相同。高压氧组在此基础上人院次日行高压氧治疗,比较研究两组患者结肠恢复的治愈率及总体有效率。结果：高压氧组和对照组总有效率分别为91．7％和67．7％,两组总有效率比较差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：高压氧治疗缺血性结肠炎具有显著疗效。     

高压氧治疗溃疡性结肠炎患者的疗效及对Th17/Treg细胞免疫调节的影响

目的 探讨高压氧治疗溃疡性结肠炎（UC）患者的疗效及其对外周血Thl7细胞（CD4＋ IL-17＋T细胞）与Treg细胞（CD4＋ CD25＋T细胞）数量的影响.方法 选择74例UC患者,随机分为柳氮磺胺吡啶组（对照组）38例和高压氧联合柳氮磺胺吡啶组（高压氧组）40例.治疗4周后,比较2组总有效率,同时采用流式细胞仪检测治疗前后CD4＋ IL-17＋T细胞与CD4＋CD25＋T细胞的表达百分比.结果 2组患者在治疗前外周血Thl7细胞所占比例、Treg细胞所占比例、Th17/Treg细胞的比值差异均无统计学意义（t=1.747,0 149,0 091,P＞0.05）.治疗后,2组患者外周血Thl7细胞所占比例均明显下降（t=14.679,17.486,P＜0.01）,Treg细胞所占比例均明显升高（t=9.85,13.042,P＜0.01）,而Th17/Treg细胞的比值则下降（t=12.5,9.09,P＜0.01）.高压氧组Thl7细胞所占比例下降程度、Treg细胞所占比例升高程度以及Th17/Treg细胞的比值下降程度较对照组更为明显（t=9.076,8.638,2.227,P＜0.05）.结论 Th17/Treg失衡可能参与UC的发生发展,而HBO联合柳氮磺胺吡啶正是通过调节Th17/Treg的失衡关系,改善免疫抑制功能,抑制炎症因子的释放来达到抗炎-促炎平衡的治疗作用,这可能是其治疗UC的免疫调节重要机制之一.