华蟾素诱导U937细胞凋亡及其作用机制

目的：研究华蟾素诱导白血病U937细胞凋亡，探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色及荧光染色观察细胞凋亡形态学改变，琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变，TdT原位标记计算凋亡率，流式细胞术检测bcl-2表达，半定量RT-PCR检测Fas和Fas-1 mRNA水平。结果：与对照组相比，0．225～1．8μg/mL华蟾素作用1-3d明显抑制U937细胞生长，具有剂量．时间相关性，24h时的IC50为1．36μg/mL。0．9μg/mL华蟾素作用1d，U937细胞出现凋亡典型形态学改变；DNA电泳出现凋亡特有“梯子”条带。0．225、0．45和0．9μg/mL华蟾素作用1d，TdT原位标记检测凋亡率分别为4．8％、13．57％和24．33％。凋亡细胞bcl-2表达及Fas-1 mRNA水平下降，Fas mRNA水平增高。结论：华蟾素可能通过抑制bcl-2、Fas-1基因及活化Fas基因的途径来抑制U937细胞生长并诱导凋亡。     

威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的探讨威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法以NB4细胞为实验对象,1.0 μmol/L的三氧化二砷为阳性对照,0.01% DMSO为阴性对照,用不同浓度的威灵仙皂苷作为实验组,利用MTT法观察细胞的增殖抑制状态,瑞氏染色进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞凋亡率及进行细胞周期测定,Real-time PCR检测威灵仙皂苷干预细胞后PML-RARa mRNA的变化。结果不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞增殖,具有时间和浓度依赖性,但抑制率低于砷剂组。瑞氏染色可见典型凋亡细胞的形态学改变,与砷剂组有同样的改变。流式细胞术检测发现凋亡细胞随时间延长而增多,组间差异有统计学意义,凋亡率低于砷剂组。细胞周期测定提示G2期细胞增多,G1期细胞明显减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）。威灵仙皂苷作用后的NB4细胞PML-RARa mRNA的表达无统计学意义（P>0.05）。结论威灵仙皂苷可能通过诱导NB4细胞凋亡抑制细胞生长,可能的机制是通过细胞周期阻滞,但不影响PML-RARa mRNA的表达。     

蟾蜍灵诱导NB4细胞凋亡及其分子机制的初步探讨

目的：了解蟾蜍灵（bufalin）诱导对急性旱幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4的增殖抑制和诱导凋亡作用及其分子机制。方法：以急性旱幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞为研究对象，应用细胞计数、形态学分析、电镜以及RT—PCR手段．观察蟾蜍灵对NB4细胞的作用。结果：蟾蜍灵以时间、剂量依赖的方式抑制NB4细胞的增殖，并诱导NB4细胞凋亡，同时有效降低NB4细胞中Survivin基因的表达。结论：蟾蜍灵诱导NB4细胞凋亡过程中其可能的分子机制是与Survivin基因表达下调有关。     

冬凌草甲素对NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞,应用MTF法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 8μmol／L以上的冬凌草甲素可显著降低NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。药物(16μmol／L)作用48～60h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论 冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据。     

槲皮素对NB4细胞株的抑制增生和促凋亡作用

目的：研究黄酮类化合物槲皮素对白血病细胞株NB4的抑制作用。方法：应用细胞计数、细胞形态、DNA凝胶电泳等方法,在体外研究槲皮素诱导NB4细胞凋亡的作用。结果：10μmol/L浓度的槲皮素无明显抑制NB4增殖作用,过高的浓度可能发生细胞变性,而当作用浓度为30μmol/L-90μmol/L时,就能显示抑制效应,其抑制作用呈剂量依赖性,细胞表现典型的凋亡特征。结论：槲皮素在一定的浓度范围内能抑制NB4细胞增生,其作用随时间和浓度增加而增强,并诱导凋亡。     

蛋白酶体抑制剂联合亚砷酸对白血病细胞株NB4的凋亡诱导效应

目的 观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BOR)联合急性早幼粒细胞白血病(APL)凋亡诱导剂亚砷酸(ATO)对NB4细胞株的作用.方法 BOR单独及联合ATO作用于NB4细胞,应用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;RT-PCR方法检测survivin mRNA的表达.结果 MTT法显示BOR对NB4细胞具有生长抑制作用,且能增强ATO对细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测可见明显凋亡峰及G2/M期细胞周期阻滞;RT-PCR检测发现两药单独应用均能下调survivin mRNA的表达,联合作用时具相加效应.结论 ATO与BOR联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性,细胞周期G2/M期的阻滞及survivin mRNA表达的下降是蛋白酶体抑制剂及亚砷酸对白血病细胞株联合诱导凋亡的可能机制.     

地西他滨联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡作用的研究

 目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

辛伐他汀对NB4细胞分化与凋亡的影响

 目的　探讨磁性纳米Fe3O4颗粒（Fe3O4-MNP）联合多柔比星（ADM）对Raji细胞的影响。方法　采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-κB的表达水平。结果　ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关（r＝0.412,P＝0.027;r＝0.523,P＝0.014）;12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76 % 比 14.85 %、35.08 %比 44.50 %、44 %比69.4 %,差异有统计学意义（P＝0.012、0.041、0.024）;Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-κB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义（t＝-54.416,P＝0.035;t＝33.963,P＝0.047）。结论　Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF -κB通路的激活有关。     

不同浓度亚砷酸对NB4细胞凋亡的影响

目的研究不同浓度的亚砷酸对NB4细胞凋亡的影响.方法采用流式细胞术、DNA电泳和免疫印迹研究测定亚砷酸对NB4细胞凋亡作用.结果(1)经0.8～8μmol·L     

肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡效应及其机制的研究

Objective: To investigate the apoptosis effect of TNF-a on HepG2 cells and its mechanism in vitro.Methods: HepG2 cells were treated with TNF-α(400 U/mL).HepG2 cells treated with TNF-αfor 24 h and apoptosis was proved by DNA fragments on gel electrophoresis.Fluorescent quantitative real-time PCR was used to detect Fas and FasL expression.HepG2 cells treated by TNF-αwere co-cultivated with normal HepG2 cells.Apoptosis of HepG2 cells was determined by the method of FACS.Results: After 24 h TNF-αtreatment, DNA was collapsed into fragments to form DNA ladder in gel electrophoresis; FasL expression increases and induces HepG2 cells apoptosis.By FACS, 98.4% of the co-cultivated cells were apoptosis, but 16.5% cells in control group were apoptosis.Conclusion: TNF-αcan induce apoptosis of HepG2 cells in vitro.FasL expression on TNF-αpre-treated HepG2 cells increased and these cells can lead normal HepG2 cells to apoptosis.This may attribute to the cure of virus hepatitis and hepatoma.     

Fas/FasL系统介导的免疫细胞凋亡

一些肿瘤细胞可以表达FasL,并能够同T淋巴细胞上的Fas分子结合,通过Fas途径介导T淋巴细胞凋亡.本文拟就此现象及其可能机制作一综述.     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞凋亡的双重阻断研究

目的通过阻断Fas/FasL介导的T细胞凋亡,建立快速制备大量激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的方法。方法选择FasL表达阳性的肝癌标本,分离肝癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),然后在体外将两者混合,并在CD28单抗共刺激下,激活制备特异性CTL。应用可溶性Fas受体阻断肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发激活T细胞凋亡,与对照组比较用流式细胞仪和DNA ladder Test同时检测阻断凋亡作用,通过3H掺入法和51Cr释放法了解T细胞增殖力及杀伤活性。结果流式细胞术仪检测未阻断组较阻断组和未阻断对照组凋亡率明显升高,未阻断组凋亡率达47．82％±0．13％,对照组静息性T淋巴细胞组为3．76%±0．25％,阻断组为8．22％±0．26％(P<0．01),DNA ladder显示未阻断组T淋巴细胞出现明显梯状条带,阻断组为阴性。51Cr释放法表明阻断后T淋巴细胞杀伤活性增加,较未阻断组及未阻断对照组差异有显著性(P<0．01)。3H掺入法检测证实可溶性Fas受体阻断激活T细胞凋亡后,细胞增殖明显升高,较未阻断组差异有显著性(P<0．01)。结论体外实验可获得大量激活T细胞,并可杀伤肿瘤细胞。     

γ-干扰素对白血病细胞Fas/FasL系统的调控及凋亡的影响

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对白血病细胞Fas/FasL表达的调控及凋亡的影响.方法:应用免疫组织化学方法、TUNEL测凋亡法、细胞培养技术,检测人髓系白血病细胞株HL-60及临床髓系白血病患者单个核细胞的Fas的表达及相关功能,并研究γ-干扰素对之的影响.结果:白血病细胞表达Fas蛋白较正常骨髓细胞低,并能致共同培养的Jurkat细胞发生凋亡;而IFN-γ能提高其Fas蛋白的表达(P＜0.01),且调节作用具有时间、剂量依赖性,并有下调白血病细胞致Jurkat细胞凋亡的能力,且能够增强白血病细胞对Fas途径介导的凋亡敏感性及增强对化疗药物阿糖胞苷的敏感性.结论:IFN-γ能通过对白血病细胞Fas/FasL系统的调控以防止其逃避免疫监视,并能增强白血病细胞对以Fas/FasL为靶标的化疗药物的敏感性.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对大肠癌细胞株LOVO体外杀伤作用的研究

目的研究树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对大肠癌细胞株LOVO的杀伤及诱导凋亡作用。方法 从健康供者外周血中提取出单个核细胞, 用不同的细胞因子诱导出DC及CIK细胞, 待DC成熟后将DC与CIK混合培养。细胞计数法测定细胞的增殖、MTT法测定细胞杀伤活性、透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡、Western Blot法检测效应细胞表面FasL表达。结果 DC细胞对CIK细胞具有很强的促增殖作用, 且DC-CIK细胞共培养组在各效靶比的杀伤活性均明显高于单独CIK细胞培养组(P＜0.01)。DC可以促进CIK诱导肿瘤细胞发生凋亡, 且DC-CIK、CIK细胞均大量表达FasL。结论 DC细胞可以显著提高CIK细胞的增殖活性和细胞毒活性, 其共培养的作用机制之一可能是通过Fas/FasL途径而实现。     

Fas／FasL信号通路在千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡中的作用与机制研究

目的：在明确千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡的基础上,从Fas/FasL信号通路的角度探讨其诱导凋亡的分子机制。方法 HL-60细胞培养体系中分别以千金子甾醇终浓度2．5、10、40μg/ml作用24 h后CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光学及荧光显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin Ⅴ/PI 流式细胞术检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应法检测Fas/FasL、caspase-8和caspase-3 mRNA转录水平,比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性。结果千金子甾醇可明显抑制HL-60细胞的增殖,增殖抑制率分别为（34．9±3．7）％、（54．6±5．2）％、（61．3±4．3）％,细胞呈典型凋亡形态学改变,细胞早期凋亡率分别为（23．4±3．1）％、（35．7±4．3）％、（53．2±3．9）％。Fas、FasL、caspase-8和caspase-3 mRNA转录水平明显上调（P＜0．01）,caspase-8和caspase-3活性显著增高（P＜0．01）。结论千金子甾醇可以诱导HL-60细胞发生剂量依赖性细胞凋亡,其机制与上调Fas/FasL凋亡信号通路有关。     

紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

自体免疫性甲状腺疾病中甲状腺组织凋亡与凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2表达研究

目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2在自体免疫性甲状腺疾病(ATDs)中的表达及意义。方法:采用原位细胞凋亡检测(Tunel法)及免疫组化SP法进行检测。桥本甲状腺炎(HT)19例,Graves病(GD)13例,对照组非毒性结节性甲状腺肿(NTNG)(结甲)7例。结果:HT及GD滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为100%和80.01%,结甲组滤泡细胞为57.14%。HT及GD分别与结甲组相比有显著差异(P<0.01)。HT及GD中均有滤泡细胞表达FasL和Bcl-2,而结甲中FasL没有表达。Bcl-2的表达在HT和GD中较强,而在结甲组织中的表达较弱,与HT和GD相比有显著差异(P<0.01)。结论:在HT、GD中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,并经过Fas与FaL的作用导致部分滤泡细胞凋亡。在HT、GD中由于滤泡细胞通过增强Bcl-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱。凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用。     

薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的　探讨薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法　应用形态学方法 ,流式细胞术 (FACS) ,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生 ,应用RT PCR检测凋亡相关基因Fas与FasL的变化。结果　薏苡仁酯对人宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质碎裂 ,DNA凝胶电泳显示清晰的DNA梯形条带 ,FACS检测到凋亡率最高为 13%。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现 ,坏死与凋亡共存。在薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强 ,而FasL转录水平减低。结论　除了坏死 ,凋亡也为薏苡仁酯抑癌的机制之一。薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡可能与Fas基因与FasL基因表达有关。