左归丸对不育症SD大鼠Ki67蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察左归丸对雷公藤多苷(tripterygium wilfordii,GTW)构建的少弱精子症模型大鼠睾丸组织中组织细胞增殖核抗原(Ki67)蛋白及mRNA表达的影响,初步探讨左归丸改善大鼠模型生殖功能的作用机制。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、左归丸组,每组12只,共干预8周。正常组全程给予去离子水灌胃;模型组前4周给予40 mg·(kg·d)~(-1)的GTW进行造模,实验5～8周给予去离子水灌胃干预。左归丸组前4周用40 mg·(kg·d)~(-1)的GTW造模,实验5～8周,给予6 g·(kg·d)~(-1)的左归丸混悬液灌胃。8周后将所有大鼠处死,无菌取睾丸组织,固定、包埋并切片。免疫组化法检测各组大鼠睾丸Ki67蛋白的表达,比较各组平均光密度值。采用RT-PCR方法检测各组大鼠睾丸组织Ki67mRNA的表达情况。结果:模型组大鼠睾丸组织各级生精细胞核中Ki67较正常组表达明显减弱(P0.05);左归丸组睾丸组织中各级生精细胞核中Ki67蛋白表达较模型组明显增多(P0.05)。模型组ki67 mRNA表达水平较正常组明显降低(P0.05);正常组与左归丸组ki67 mRNA表达水平相当;左归丸组ki67 mRNA表达水平明显高于模型组(P0.05)。结论:左归丸能够上调Ki67蛋白及mRNA的表达,促进生精细胞增殖,提高各级生精细胞的数量并改善其功能,最终提高精子质量。     

左归丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织干细胞因子及其mRNA表达的影响研究

目的　观察左归丸对雷公藤多苷（GTW）诱导的少弱精子症模型大鼠睾丸干细胞因子（SCF）及其mRNA表达的影响,初步探讨其改善模型大鼠生殖功能的机制。方法　2014年3—4月选取36只SPF级SD大鼠,随机分为正常组、雷公藤多苷模型组、左归丸治疗组,每组12只。正常组全程给予去离子水灌胃干预;实验前4周,雷公藤多苷模型组、左归丸治疗组均给予雷公藤多苷40 mg?kg-1?d-1造模;实验第5~8周,雷公藤多苷模型组给予去离子水灌胃干预,左归丸治疗组给予左归丸6 g?kg-1?d-1。8周后处死所有大鼠,无菌留取睾丸组织,并进行固定、包埋、切片。采用免疫组化法检测各组大鼠睾丸组织SCF表达水平,采用Real-time PCR法检测各组大鼠睾丸组织SCF mRNA表达水平。结果　左归丸治疗组大鼠睾丸组织SCF及其mRNA表达水平高于雷公藤多苷模型组（P<0.05）。结论　左归丸可通过上调SCF及其mRNA表达水平,促进精原干细胞的分裂和增殖,抑制生精细胞凋亡。     

左归丸对生精障碍大鼠模型生殖激素水平及精子质量的影响

目的观察左归丸对雷公藤多苷诱导的生精障碍大鼠模型血清生殖激素水平和精子质量的影响。方法 36只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组12只造模组24只。空白对照组采用去离子水造模组采用雷公藤多苷干预4周,每组随机抽取4只大鼠进行模型验证。造模成功后,空白对照组大鼠中随机选取6只做为空白对照组;造模组中随机选取12只,按随机数字表法分为生精障碍模型组和左归丸组,每组6只。空白对照组和生精障碍模型组采用去离子水灌胃左归丸组采用左归丸进行灌胃干预4周。称重大鼠睾丸、附睾质量,计算脏器指数,检测血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、雌二醇(E2)的含量和精子参数。结果左归丸组大鼠FSH、LH、T、E2水平、精子浓度、精子总活率(PR+NP)、前向运动精子百分率(PR)显著高于生精障碍模型组差异有统计学意义(P0.01或P0.05);除PRL水平外,空白对照组FSH、LH、PRL、T、E2水平低于左归丸组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论左归丸可以在一定程度上恢复下丘脑-垂体-睾丸轴的作用,进而调控生殖内分泌激素分泌,使其恢复至正常水平这可能是其改善生精功能的重要途径之一。     

巴戟天萃取物对环磷酰胺诱导生精障碍大鼠支持细胞的影响

目的 探讨巴戟天萃取物对环磷酰胺(CTX)诱导生精障碍大鼠睾丸支持细胞的影响.方法 48只成年雄性SD大鼠,随机分为6组,空白对照组、CTX+NS组、CTX+ MO 10 g/kg组、CTX+ MO 20 g/kg组、CTX+MO 30 g/kg组、CTX+ MO 40 g/kg组.以CTX构建大鼠生精障碍动物模型;巴戟天水提物用乙酸乙酯萃取后取水层成分,分别以10、20、30、40 g/(kg·d)的浓度给予4个剂量实验组灌胃,空白对照组及CTX+ NS组予生理盐水灌胃,持续2周.取各组大鼠睾丸组织,荧光定量PCR检测卵泡刺激素受体(FSHR) mRNA和雄激素结合蛋白(ABP) mRNA表达的差异.结果 4个剂量实验组FSHR mRNA和ABP mRNA表达明显高于CTX+ NS组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 巴戟天萃取物对CTX诱导生精障碍大鼠的睾丸支持细胞具有保护作用,进而修复睾丸的生精功能.     

五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达及生精功能的影响

目的观察五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达和生精功能的影响。方法正常SD雄性大鼠25只,随机分为5组,每组5只。分别为正常组,模型组,五子衍宗丸低、中、高剂量组。正常组早晚均予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;模型组上午给予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午给予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;低、中、高五子衍宗丸组大鼠上午予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午分别予0.5,1.0,2.0 g/kg五子衍宗丸灌胃。30 d后,取睾丸及附睾组织。检测大鼠精子总数、前向运动精子百分率,免疫组化法检测睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白的表达,TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果和正常组相比,模型组精子总数、前向运动精子百分率下降,睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白表达下降,生精细胞凋亡增加;与模型组相比,五子衍宗丸中、高剂量组精子总数、前向运动精子百分率均提高;五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸支持细胞波形蛋白、α-微管蛋白的表达均增加,生精细胞的凋亡率下降。结论五子衍宗丸可通过调控睾丸支持细胞骨架蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡,改善生精功能。     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生精细胞PCNA表达的影响

目的:研究丝胶对2型糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA表达的影响.方法:40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组10只.糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型.待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理;丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天.采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮水平、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:糖尿病模型大鼠血清睾酮水平、睾丸生精细胞PCNA的表达均明显低于正常对照大鼠(P<0.01).丝胶可明显提高糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA的表达(丝胶治疗组与模型组比较:P<0.01);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差别(P>0.05).结论:丝胶可显著提高2型糖尿病大鼠睾酮的合成及睾丸生精细胞PCNA的表达,明显改善2型糖尿病大鼠的生精功能,且作用与二甲双胍相当.     

益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡、caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量、生精细胞、caspase-3蛋白表达、睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)的影响。方法:取清洁级雄性SD大鼠40只随机均分为5组:假手术组、精索静脉曲张模型组、益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组。模型建立4周后,假手术组及模型组均按15 m L·(kg·d)~(-1)给予去离子水,益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组分别给予益肾通络方颗粒剂混悬液1.5g·(kg·d)~(-1)、3.0 g·(kg·d)~(-1)、6.0 g·(kg·d)~(-1),灌胃,1次·d-1,持续60 d。60 d后5组大鼠均脱臼处死并分别取双侧睾丸,电子天平称取睾丸质量,并检测caspase-3在睾丸组织中的表达,生精细胞的凋亡并计算AI。结果:(1)睾丸质量的变化:5组大鼠左右两侧睾丸质量:假手术组为[(1.88±0.19)、(1.95±0.20)g]、精索静脉曲张模型组为[(0.72±0.23)、(1.31±0.34)g]、益肾通络方低剂量组[(0.73±0.28)、(1.39±0.31)g]、益肾通络方中剂量组为[(0.78±0.25)、(1.42±0.22)g]、益肾通络方高剂量组为[(1.08±0.28)、(1.64±0.33)g],假手术组、精索静脉曲张模型组与益肾通络方高剂量组大鼠两侧睾丸质量比较,差异具有统计学意义(P0.05);益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组与精索静脉曲张模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)益肾通络方各剂量组大鼠的生精细胞caspase-3蛋白表达低于精索静脉曲张模型组,高于假手术组;益肾通络方低剂量组大鼠生精细胞caspase-3蛋白表达高于中剂量组,益肾通络方中剂量组生精细胞caspase-3蛋白表达高于高剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)假手术组AI评分最低,益肾通络方干预组AI评分低于精索静脉曲张模型组;益肾通络方干预组组内比较,高剂量组低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量减轻、生精细胞caspase-3蛋白表达升高、AI增加,这可能是影响生育力的机制之一。单侧精索静脉曲张引起睾丸损害是双侧的,但右侧比左侧损害轻。益肾通络方能够降低生精细胞caspase-3蛋白表达,减少精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,对睾丸生精功能具有保护作用,进而可提高睾丸的生殖能力。     

生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响

目的:观察生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响.方法:90只大鼠随机分为3组,假手术组只开腹不做肾静脉结扎,模型组和生精中药组均建立精索静脉曲张模型.造模完成后15 d,生精中药组给予灌喂生精中药4 g/(kg·d),其他2组给予正常饮食.30 d后测定各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T),观察大鼠睾丸及附睾组织结构.结果:生精中药组血清T水平明显高于模型组,FSH与LH水平明显低于模型组(P均<0.05);光镜下大鼠睾丸及附睾组织结构优于模型组.结论:生精中药可以保护及修复功能受损的睾丸及附睾组织.     

雄蚕益肾方对肾阳虚大鼠睾丸抗氧化作用及睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达的影响

目的研究雄蚕益肾方对肾阳虚大鼠抗氧化作用及睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达的影响。方法取雄性SD大鼠40只,随机分成正常组10只、造模组30只。造模组予200 mg/kg腺嘌呤混悬液造肾阳虚模型成功后,随机分为模型组、左卡尼汀组、雄蚕益肾组,正常组与模型组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予相应药物连续灌胃,4 m L/d。4周后检测睾丸组织SOD、MDA、GSH-Px及血清性激素相关指标,免疫组化法测定睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达情况,取两侧睾丸做常规病理切片分析。结果与模型组相比,雄蚕益肾方组睾丸GSH-PX、SOD、血清T、E2浓度显著升高(P0.01),睾丸MDA浓度明显降低(P0.05),雄蚕益肾方组睾丸Bcl-2蛋白阳性表达率明显升高(P0.01),Cyt-c蛋白阳性表达率明显降低(P0.01);与模型组相比,雄蚕益肾方组睾丸生精上皮尚比较完整,组织内生精小管内可见精母细胞,生精小管内仍有大量精子生成,管腔可见大量精子。结论雄蚕益肾方能提高肾阳虚大鼠睾丸组织抗氧化作用,调节生精细胞凋亡,这可能是其调节生精功能的机制之一。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达影响

目的 通过检测大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达水平,探讨五子衍宗丸治疗少弱精子症的作用机制。方法 将体质量200～220 g的雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,生精胶囊组,五子衍宗丸低剂量、中剂量、高剂量组。采用连续灌服雷公藤多苷8周的方法复制少弱精子症模型,模型复制成功后连续给药4周。采用Western blot法测定Catsper1蛋白含量,采用荧光定量PCR法测定Catsper1 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测睾丸组织中cAMP含量。结果 生精胶囊和高剂量五子衍宗丸能明显提高模型大鼠睾丸组织中降低的cAMP含量以及升高睾丸组织中降低的Catsper1蛋白及其mRNA表达水平（P<0.05）。结论 促进Catsper1蛋白表达并参与cAMP-Ca2+正反馈可能是五子衍宗丸提高精子质量的机制之一。