益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞干预大鼠骨性关节炎实验研究

目的:探讨益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对骨性关节炎大鼠的干预作用。方法:取SD大鼠骨髓,筛选、纯化并鉴定BMSCs,分别给予生理盐水与益气汤干预后获取血清。将实验动物分为对照组、生理盐水组、益气汤组。含药血清干预后观察大鼠毛色、食欲及活动情况等,同时测量大鼠体质量,治疗6周后取膝关节病理检查。结果:益气汤血清干预BMSCs电镜下观察细胞形态均一,边界清楚。生理盐水组膝关节炎程度退变明显。骨性关节炎模型大鼠运用益气汤含药血清干预BMSCs治疗后,原发病变缓解,关节组织滑膜病理检查均未见明显异常。结论:益气汤含药血清诱导下BMSCs能有效修复骨性关节炎大鼠软骨的退变和损伤。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

当归、阿魏酸钠对骨关节炎软骨退变与自由基的影响

目的:探讨当归、阿魏酸钠关节腔注射对大鼠骨性关节炎(OA)软骨退变与自由基的影响。方法:4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后48只大鼠分成6组:正常组,模型组,25%、5%当归治疗组,0.5%、0.1%阿魏酸钠治疗组,分组后即开始用不同浓度的当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.1 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、关节液检测SOD、MDA,切取关节,大体及组织学观察。结果:两药在高浓度可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低关节液、血浆的MDA水平(均P<0.01),增加SOD活性(均P<0.05);两药在低浓度时SOD升高不明显(均P>0.05),但阿魏酸钠仍可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低MDA的水平(P<0.01,P<0.05)。结论:当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复,阿魏酸是当归注射液治疗OA的有效的单体成份之一。     

骨髓间充质干细胞治疗早期骨性关节炎的实验研究

目的:用骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗兔早期骨性关节炎(OA),探讨其可行性及疗效评价。方法:将72只新西兰大白兔随机分成对照组、OA组和BMSCs治疗组,每组24只。治疗组在造模后第4周左膝关节腔内注射BMSCs。观察动物的一般情况,TNF-α和IL-1β水平,MRI扫描,取膝关节标本行大体及病理观察并进行Mankin’s评分。结果:与OA组相比,BMSCs治疗组术后步态逐渐好转;血清TNF-α和IL-1β水平降低;MRI示低信号区缩小,关节软骨厚度接近正常,无关节腔积液;大体标本见关节软骨表面趋于平坦完整,有软骨覆盖,但光泽欠佳;病理检查提示有透明样软骨形成,细胞排列整齐,厚薄基本一致,软骨相连。结论:BMSCs关节腔内可成软骨分化,为早期OA患者提供了一种新的有效疗法。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响

目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。     

同源异体间充质干细胞上清液干预大鼠佐剂性关节炎

目的:探讨同源异体骨髓来源的间充质干细胞上清液对大鼠佐剂性关节炎的预防作用.方法:培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞,收集培养间充质干细胞48h的上清液;将健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只制作佐剂性关节炎模型,造模后行间充质干细胞上清液干预;造模前及造模后第7、14、21和28天测量大鼠体重和后足爪体积,同时观察大鼠生存状况;并于干预后第28天摄四肢关节X片并做病理检查.结果:间充质干细胞上清液干预组大鼠的原发性炎症和继发病变均不明显,关节X片检查和病理检查均未见明显异常;干预组与模型组大鼠相比,体重、足爪体积差异有统计学意义(P＜0.05).结论:间充质干细胞上清液可有效干预弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎的进展.     

柴胡疏肝散联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心肌的保护作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合柴胡疏肝散对心肌梗死大鼠心肌组织的保护作用。方法:采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。经结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗死(AMI)模型。SD大鼠随机分为假手术组、AMI组(模型组)、BMSCs组、CHSG-L组(柴胡疏肝散小剂量+BMSCs移植)、CHSG-M组(柴胡疏肝散中剂量+BMSCs移植)、CHSG-H组(柴胡疏肝散大剂量+BMSCs移植)。BMSCs细胞悬液直接注入梗死区边缘心肌组织;中药或生理盐水经灌胃给予。各组干预7 d后,生化法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清低氧诱导因子(HIF-1α)表达;免疫组化法观察心肌血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与模型组和BMSCs组比较,各联合治疗组SOD升高、MDA降低,血清HIF-1α水平和心肌细胞VEGF蛋白表达升高;且柴胡疏肝散剂量越大,作用越显著。结论:BMSCs移植联合柴胡疏肝散可一定程度上保护心肌梗死大鼠心肌组织。