抗hnRNP B1单克隆抗体的制备与鉴定

目的　建立分泌抗不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hn RNP) B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行免疫学鉴定。方法　用人工合成的19肽hn RNP B1作为免疫原,采用皮下多点注射及腹腔注射方法免疫BAL B/ c小鼠,取其脾细胞与SP2 / 0小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接EL ISA法筛选。结果　获得稳定分泌抗hn RNP B1单克隆抗体的杂交瘤细胞2株。EL ISA法检测腹水效价为1∶1.8×10 5,免疫组织化学染色法显示该单克隆抗体特异性强。结论　成功构建hn RNP B1单克隆抗体抗体杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体对肺癌的诊断具有较好的特异性。     

人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。　方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体。　结果 :获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株。该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合 ,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合。　结论 :利用重组人CTLA4Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体。     

抗AIB1-C单克隆抗体的制备及初步应用

目的:建立分泌抗AIB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:以纯化GST-AIB1-C蛋白为免疫原,免疫BAL b/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA筛选。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗AIB1-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经Western-blot和免疫细胞化学法鉴定,这些McAb特异性高,亲和力强。结论:成功研制出抗AIB1-C单克隆抗体,为双抗体夹心法ELISA试剂盒的研制奠定基础。     

细胞ELISA筛选树突状细胞单抗中细胞固定剂的选择

用改良ELISA方法,在筛选大鼠树突状细胞单克隆抗体中探讨了细胞固定剂的选择,证实甲醇冷冻固定法较好,本法的建立为非粘附细胞的细胞ELISA方法提供了新途径。     

双向单克隆抗体在示踪裸鼠体内人乳腺癌MCF-7细胞的作用

目的：应用双向单克隆抗体为桥梁对接种于雌性裸鼠体内的人乳腺癌细胞ＭＣＦ７进行示踪，为示踪体内肿瘤细胞寻找更好的途径。方法：将ＭＣＦ７细胞经体外培养后接种于雌性裸鼠，待形成肿瘤结节再用自制的双向单克隆抗体（用两株分别分泌抗ＭＣＦ７细胞表面抗原及抗碘化的ＢｏｌｔｏｎＨｕｎｔｅｒ，ＩＢＨ试剂的单克隆抗体的杂交瘤再杂交，得到的双重杂交瘤分泌的双向单克隆抗体可同时结合ＭＣＦ７细胞及ＩＢＨ试剂）及１２５ＩＢＨ注射于裸鼠体内，用放射自显影法显示１２５Ｉ在ＭＣＦ７细胞表面的分布。结果：双向单克隆抗体确能将１２５ＩＢＨ带到裸鼠体内的ＭＣＦ７细胞表面。结论：应用双向单克隆抗体为桥梁进行肿瘤细胞示踪或局部放射治疗应是较单纯化学修饰单克隆抗体效果更加确切的方式。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体对人肝癌细胞株HepG2增殖活性的影响

目的:检测人肝癌细胞株HepG2细胞有无人肝再生增强因子(hALR)的表达,利用hALR特异性的单克隆抗体(anti-hALR McAb)结合hALR,观察其阻断hALR的作用后,对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖活性的影响.方法:用免疫细胞化学以及RT-PCR的方法检测HepG2细胞hALR蛋白及mRNA的表达;用3H-TdR掺入法检测hALR特异性单克隆抗体中和hALR后HepG2细胞的增殖情况.结果:①HepG2细胞有hALR的表达.②抗hALR单克隆抗体特异性地阻断hALR的作用后可部分抑制肿瘤细胞自主性生长.结论:抗hALR单克隆抗体能部分抑制肿瘤细胞自主性生长;hALR通过自分泌方式参与了肝癌细胞的自主性生长.     

分泌抗H_(615)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用抗正常615纯系小鼠肝细胞抗体处理的H615瘤细胞免疫Balb/c小鼠、取其脾细胞与小鼠骨髓细胞融合、以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测、建立两株分泌抗H615单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、心肌、横纹肌、胸腺的组织细胞和小鼠肿瘤细胞及人肝癌细胞无交叉反应,证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。对两种单克隆抗体进行亚类检定均属IgG_1。     

人胚胎嗅鞘细胞移植供、受者HLA配型方法介绍

目的探讨人胚胎嗅鞘细胞移植供、受者HLA配型方法。方法建立嗅鞘细胞库，使用单克隆抗体法和基因分型法分别对供受体进行HLA配型。结果用脐带血行单克隆抗体法分型时，出现假阳性，导致结果无法判读。取胎脑组织与分离纯化培养后得到嗅鞘细胞进行裂解提取的DNA再行基因分型法（PCR—SSP）的结果完全一致，即胚脑组织中提取的HLA分型完全可替代嗅鞘细胞的HLA分型。结论基因分型法（PCR—SSP）能为人胚胎嗅鞘细胞移植供受者提供可靠的HLA分型方法。     

抗前胃泌素释放肽单克隆抗体在小细胞肺癌诊断应用

目的研究抗前胃泌素释放肽（抗-PGRP）单克隆抗体在小细胞肺癌和其它肺部肿瘤中的表达。方法应用免疫组化SP法检测48例小细胞肺癌和52例非小细胞肺癌及22例肺良性肿瘤组织中抗-PGRP单克隆抗体的表达。结果抗-PGRP单克隆抗体在小细胞肺癌、非小细胞肺癌及良性肺肿块中的阳性表达率分别为87.50％,32.69％和13.64％,差异有统计学意义P〈0.01;抗-PGRP单克隆抗体在淋巴结或远处转移阳性的小细胞肺癌组织中的表达率为94.87％,在淋巴结或远处转移阴性的小细胞肺癌组织中的表达率为55.56％,差异有统计学意义P〈0.01;抗-PGRP单克隆抗体在I期小细胞肺癌组织中的阳性表达率为80％,在Ⅱ期小细胞肺癌组织中的阳性表达率为88.24％,在Ⅲ期小细胞肺癌组织中的阳性表达率为100％,差异无统计学意义P〉0.05。结论抗-PGRP单克隆抗体表达在小细胞肺癌和其它肺部肿瘤中的存在显著差异,其在小细胞肺癌组织中的表达与有无淋巴结或远处转移相关与临床分期之间无关联。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的 应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法 用蛋白 G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果 抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5 μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0 μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论 双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

Preparation of monoclonal antibody against HPT and its application to detecting marker protein in genetically modified rice

INTRODUCTION The enzyme hygromycin B phosphotransferase(HPT) is a selectable marker used widely in variousanimal and plant transformation systems. It hasproven that hpt is a highly effective marker gene forrice transformation in comparison with the traditionalkanamycin antibiotic gene (nptII)[1]. On the otherhand, cowpea trypsin inhibitor from cowpea seeds[2],a member of the serine protease inhibitor family, isresistant to a wide range of insects. Constitutiveexpression of the cpti gene…     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

重组创伤弧菌溶细胞素单克隆抗体的制备

目的：制备重组创伤弧菌溶细胞素（recombinant Vibrio vulnificus cytolysin,rVVC）鼠源性单克隆抗体,并对其特异性及免疫球蛋白类型进行鉴定,为创伤弧菌溶细胞素（Vibrio vulnificus cytolysin,VVC）致病机制的后续研究及创伤弧菌引起的食品污染中溶细胞毒素快速检测试剂盒的研发奠定基础。方法：IPTG诱导含pET28a（＋）-vvhA的大肠杆菌表达rVVC,将rVVC纯化、复性后经甲醛脱毒作为抗原免疫BALB/c小鼠。SDS-PAGE检测蛋白纯化后效果。采用杂交瘤技术和ELISA法制备并筛选分泌rVVC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养。采用免疫双扩法鉴定单克隆抗体类型,ELISA法、免疫双扩法鉴定单克隆抗体的特异性。结果：将纯化复性后的rVVC作为抗原免疫小鼠后,经ELISA检测,血清有效稀释度达1：12800。共获得2株可持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为B2C7和E3F4株,其抗体类型均为IgG1,且具有较高特异性,与多种其他细菌蛋白不发生免疫反应。结论：本研究成功免疫BALB/c小鼠,获得B2C7和E3F4两株可持续稳定分泌rVVC鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG1型。     

全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗体的制备及鉴定

目的:利用重组狂犬病病毒糖蛋白(RVG)免疫人源IgM转基因小鼠,制备全人源抗重组RVG蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行初步鉴定?方法:以重组RVG蛋白作为抗原免疫人源IgM转基因小鼠,采用杂交瘤技术制备筛选全人源抗重组RVG蛋白杂交瘤细胞株,双抗体夹心ELISA实验鉴定单抗的人源性及抗体类型,并对其特异性及与灭活狂犬病病毒CVS-11株的结合能力进行鉴定?结果:建立了5株稳定分泌抗重组RVG的全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5D1?6H11?9A3?15D6?19E6,均为人源IgM免疫球蛋白,5株单抗均能特异性识别重组RVG蛋白,其中3株能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合?结论:筛选制备了特异性全人源抗重组RVG蛋白的单克隆抗体,能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合,为进一步研制用于狂犬病防治的抗体药物奠定了基础?     

应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究

目的 建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。方法 采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较。结果 该法的测量范围为(0.02~150)ng/ml,灵敏度为0.02ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3~6.2)%和(5.3~9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoVN蛋白情况比较的结果一致。结论 本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值。     

抗炭疽PA15单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

目的:制备抗炭疽保护性抗原15(protective antigen,PA15)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测炭疽感染者血清中的保护性抗原?方法:以纯化的PA63蛋白为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,间接ELISA?Western blot?免疫沉淀(IP)和蛋白质谱分析单抗特异性,并建立双抗体夹心ELISA检测方法?结果:制备了2株抗PA15单克隆抗体,命名为3D7和8E9?SDS-PAGE电泳可见抗体的重链和轻链,间接ELISA?Western blot发现单抗3D7和8E9可与PA15?PA63特异性结合,IP和蛋白质谱分析发现单抗3D7可与PA83特异性结合,双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中保护性抗原的最低检出浓度为16 ng/ml?结论:成功制备了抗PA15单克隆抗体,并建立了双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中的保护性抗原?