急性髓系白血病中TRIM58基因表达与其启动子甲基化水平的关系

目的：分析急性髓系白血病（AML）中三基序蛋白58(tripartite-motif protein 58,TRIM58)基因启动子甲基化水平与其mRNA表达的关系,探讨TRIM58基因在AML中的表达调控。方法：分别用亚硫酸氢盐修饰后PCR、实时荧光定量PCR技术检测原代CD34+和CD34-AML细胞以及白血病细胞株KG1a、K562中TRIM58基因启动子甲基化状态和TRIM58mRNA表达情况。结果：AML患者CD34+细胞TRIM58基因mRNA表达下调10例,CD34-细胞TRIM58基因mRNA表达下调12例,TRIM58基因启动子甲基化水平与正常对照比较存在统计学差异（P<0.05）;KG1a及K562细胞株中TRIM58mRNA表达下调,经地西他滨处理后TRIM58mRNA表达上调。结论：AML细胞中TRIM58mRNA表达下调,可能与其启动子甲基化状态具有相关性。     

急性髓系白血病TFPI-2基因表达及启动子甲基化的研究

本研究检测了组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其甲基化状态,探讨其与AML发生、发展及危险度分层的关系.分离33例初治、19例完全缓解、12例复发/难治AML患者及15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）骨髓单个核细胞,采用实时定量PCR （RT-PCR）检测TFPI-2 mRNA在其中的表达水平,采用甲基化特异性PCR （MSP）检测启动子CpG岛甲基化状态.结果表明,初治组、完全缓解组及复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平均低于对照组（P＜0.05）,复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平明显低于初治组（P =0.006）,与完全缓解组相比,初治组TFPI-2 mRNA表达水平也显著降低（P=0.030）;64例AML患者TFPI-2基因启动子甲基化频率为64.63％ （42/64）,其中初治组、完全缓解组和复发/难治组患者中TFPI-2基因启动子甲基化频率分别为66.67％（22/33）、52.63％ （10/19）和83.33％ （10/12） （P＞ 0.05）;甲基化AML患者与非甲基化AML患者骨髓单个核细胞中TFPI-2 mRNA的相对表达量分别为0.165（0.005-2.099）和0.597（0.011-2.787） （P ＜0.05）,在对照组骨髓单个核细胞中未检测到TFPI-2基因启动子的甲基化;初治组经2个疗程化疗后,完全缓解组（CR）骨髓单个核细胞TFPI-2 mRNA表达量显著高于未完全缓解组（PR＋ NR） （P=0.031）.结论：在AML中TFPI-2基因表达下调或沉默与启动子甲基化有关,TFPI-2基因表达水平及启动子甲基化状态可以作为AML分层及病情进展的指标.     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因表达及启动子区甲基化状态研究简

本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61 ±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％ （42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％ （8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937 DAPK启动子区非甲基化,HL-60 DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.     

pig7基因在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的检测pig7基因在急性白血病（AL）细胞中的表达水平及其临床意义，在基因甲基化调控方面探讨pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录PCR（RT—PCR）方法对138例AL患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了pig7转录本的检测，并在全反式维甲酸（ATRA）作用下观察NB4细胞分化效应及pig7基因表达情况。进行限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的pig7转录剪接体。通过甲基化特异性PCR（MSP）检测白血病细胞pIg7基因启动子区域是否存在过度甲基化。结果AL进展期（包括初治、复发／难治）患者骨髓细胞pig7 mRNA相对表达水平与正常骨髓细胞相比明显降低（RQ中位数分别为0．62和18．30，P〈0．01），其中急性髓系白血病（AML）与急性淋巴细胞白血病（ALL）差异无统计学意义，而初治组与复发／难治组比较pig7 mRNA水平差异有统计学意义，前者明显高于后者（RQ中位数分别为1．43和0．16，P〈0．05）。pig7低表达患者完全缓解率也较低（P〈0．05）。NB4细胞经ATRA诱导分化后pig7表达水平由1．61±0．72增至44．75±3．93（P〈0．01）。酶切结果提示白血病细胞中仅存在SIMPLE剪接体。在K562、HL-60及Nalm-6细胞pig7启动子区域存在过度甲基化，而U937、NB4和kasumi-1细胞中该区域非甲基化状态占优势。结论pig7基因在AL的表达下调为白血病发病机制的探讨和疗效预测提供了新的思路。     

急性髓系白血病BCL2L10基因启动子区异常甲基化定量研究

目的:定量研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中BCL2L10基因启动子区异常甲基化状态,探讨其与AML的临床关系.方法:应用焦磷酸测序法,对62例原发AML患者的骨髓进行BCL2L10基因启动区甲基化水平的定量检测,并以10例缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血的骨髓标本及10例健康人外周血标本作为对照.结果:62例AML中32例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为51.6％,而20例对照组中1例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为5.0％;BCL2L10基因在AML患者中的高甲基化阳性率显著高于对照组(P＜ 0.01);BCL2L10基因的甲基化状态与AML患者的年龄、性别及临床分型间均未出现显著相关性(P＞0.05).结论:BCL2L10基因启动子区异常甲基化在AML中普遍存在,其可能是引起AML的分子机制之一.     

急性髓系白血病SFRP4基因启动子区异常甲基化研究

目的研究急性髓系白血病中SFRP4基因启动子区的异常甲基化状态,探讨其与急性髓系白血病发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR法对99例急性髓系白血病患者的骨髓或外周血进行SFRP4基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通患者的外周血作为对照。结果 99例急性髓系白血病患者中有17例SFRP4基因的启动子区发生了甲基化,甲基化率为17.2%;而正常对照组中未检出SFRP4基因启动子区的甲基化。SFRP4基因在急性髓系白血病患者中的甲基化率极显著的高于正常对照(P<0.001)。SFRP4基因的甲基化状态与急性髓系白血病患者的年龄、性别及临床分型间均未出现显著相关性(P>0.05)。结论 SFRP4基因启动子区的异常甲基化与急性髓系白血病的发生有相关性,SFRP4基因的甲基化可能是引起急性髓系白血病的分子机制之一。     

急性髓系白血病患者SFRP2基因甲基化的检测及临床意义

目的检测分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因在急性髓系白血病(AML)患者中的甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子区甲基化状态与AML发生的关系。方法收集了99例AML患者的骨髓或外周血样本,匹配以70例门诊普通患者的外周血作为对照。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对所有研究样本进行SFRP2基因启动子区甲基化状况检测。结果 99例AML患者中有27例检测到SFRP2基因的甲基化,甲基化率为27.3%;而正常对照组中未检出SFRP2基因的甲基化;两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。SFRP2基因的甲基化状态与AML的年龄、性别、临床分型及样本来源(骨髓/外周血)间均未见显著关系(P>0.05)。结论 SFRP2基因启动子区的甲基化与AML的发生有相关性,可能是引起AML的分子机制之一。外周血中的SFRP2基因的甲基化可望作为一项新的分子标记物应用于AML的临床早期检测。     

部分恶性血液病患者红细胞A、H抗原表达与基因启动子CpG岛甲基化研究

目的 研究急性髓系细胞性白血病(AML)与骨髓增生异常综合征(MDS)患者红细胞A、H抗原表达与基因启动子CpG岛甲基化的相关性.方法 应用流式细胞技术检测红细胞表面A、H抗原表达,并应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)测定ABO基因启动子CpG岛甲基化.结果 AML与MDS组红细胞表面A抗原阳性表达率和A抗原平均荧...     

垂体瘤转化基因在急性髓系白血病患者中表达的研究

本研究探讨垂体瘤转化基因（pituitarytumor-transforming gene,pttg）在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中的表达及其与AML发生的关系,以及pttg基因在FAB亚型中的表达是否存在差异性。采用实时荧光定量PCR方法检测47例AML患者及28例正常对照者骨髓中pttg基因的表达水平。结果表明：AML患者pttg基因的表达水平[（1.1323±1.3934）×105]明显高于正常对照组[（4.5766±1.1817）×103]（p〈0.05）,急性早幼粒细胞细胞白血病（M3）患者中pttg基因的表达水平高于其他FAB亚型,其中包括急性髓系白血病未分化型（M1）、急性粒细胞白血病部分分化型（M2）、急性粒细胞单核细胞白血病（M4）、急性单核细胞白血病（M5）。结论：pttg基因的过度表达可能与AML的发生发展有关,其中可能与M3发生的关系更加密切,本研究为AML的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。     

DNA甲基化对TIG1基因在急性白血病中表达的影响

本研究探讨急性白血病细胞中抑癌基因T1G1的表达及其甲基化状态。应用实时荧光定量PCR（real—timeQuantitativePCR，RT—QT—PCR）的方法，检测53例急性白血病（acuteleukemia，AL）患者及20例正常对照者（nom—alcontrols，NC）的TIG1表达情况，并通过甲基化特异性PCR（methylation—sepecificPCR，MS—PCR）检测TIGl基因的甲基化状态。应用去甲基化试剂处理KG-1a、U937和I（562细胞株，观察其基因转录水平和甲基化状态之间的关系。结果表明，TIG1mRNA在NC中高表达，而在AL患者中低表达；AL患者中TIG1的异常甲基化率高达75％（40／53例），而在正常标本中不发生甲基化；在初治AL中，发生甲基化的患者TIGj的表达水平明显低于未甲基化的患者；Kg-1a、U937和K562细胞株TIG1基因启动子CpG岛均存在过甲基化，应用去甲基化试剂处理后，TIG1基因启动子CpG岛甲基化程度降低，T1G1的表达都得到了恢复，并且TIG1的表达随着5-Aza—CdR浓度增加而增高。结论：TIG1基因表达的减少与急性白血病的发病有关，而甲基化是导致TIG1基因转录沉默的重要机制之一。     

急性髓系白血病ID4基因甲基化研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者中ID4基因甲基化状态。采用甲基化特异性聚合酶链反应(M S-PCR)对46例不同亚型、不同病期的AML患者骨髓细胞进行ID4基因启动子区甲基化状况检测,并以10例缺铁性贫血患者骨髓作为对照。结果表明,ID4基因在对照组患者骨髓中呈完全性非甲基化状态,在46例AML患者中有39例患者出现ID4基因甲基化(阳性率为84.8%),其中各AML亚型M1、M2、M3、M4、M5、M6患者ID4基因甲基化阳性率分别为4/4、9/12、8/8、7/9、9/11、2/2。初治,完全缓解的AML患者ID4基因甲基化阳性率分别为27/30、7/11,另有5例复发难治患者均检测出ID4基因甲基化,与对照组相比,差异均有统计学意义(p<0.01)。结论 :与对照组患者相比,AML不同亚型、不同病期患者ID4基因发生了不同程度的甲基化改变,这表明ID4基因甲基化可能是AML发生发展过程中的一个早期分子事件。     

急性髓系白血病患者hPer3基因启动子甲基化状态及其去甲基化对白血病细胞增殖的影响

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者hPer3基因启动子甲基化检测的临床意义,并观察地西他滨(DCA)诱导hPer3基冈表达对AML细胞系HL-60和U937增殖的影响.方法 应用甲基化聚合酶链反应(MS-PCR)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测206例AML患者骨髓细胞hPer3基因启动子甲基化状态和mRNA表达,以40例缺铁性贫血患者骨髓细胞作为对照.用不同浓度的DCA处理HL-60和U937细胞48和72 h,检测其hPer3基因启动子甲基化状态及其mRNA表达,用MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI标记法检测细胞凋亡,用流式细胞术检测CD14、CD11b抗原表达.结果 AML患者初发组、部分缓解组、完全缓解组、复发组中,hPer3基因启动子甲基化阳性率分别为93.65%(63例中59例)、54.39%(57例中31例)、24.66%(73例中18例)、61.54%(13例中8例),对照组无一例甲基化;hPer3 mRNA表达分别为0.19±0.08、6.28±2.11、52.76±14.17、8.18±4.36,明显低于对照组(75.03±18.16),除部分缓解组与复发组相比差异无统计学意义(P>0.05)外,其余组别两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).DCA处理HL-60和U937细胞后,hPer3基因启动子甲基化水平降低,mRNA表达升高,细胞出现凋亡,CD14和CD11b表达升高,并呈剂量和时间依赖性.结论 AML患者骨髓细胞hPer3基因启动子甲基化状态和mRNA表达水平可能作为AML患者病情缓解程度的一个评价指标.体外应用DCA有助于诱导hPer3基因表达和促AML细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the clinical significance of promoter methylation status of hPer3 gene in acute myeloid leukemia( AML) patients and the in vitro effect of decitabine( DCA) on AML cell lines HL-60 and U937. Methods The promoter methylation status of hPer3 gene and mRNA expression levels in bone marrow of 206 AML and 40 iron deficiency anemia( IDA) patients ( as control) were detected by methylation specific PCR(MS-PCR) and real-time PCR(RT-PCR). The HL-60 and U937 cell lines were treated with different concertrations of DCA for 48 and 72 h. The inhibition rates of cell proliferation were detected by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) ;the early apoptosis rates by staining with Annexin V and PI; the CD14 and CD11b expressions by flow cytometry( FCM) ; the promoter methylation status of hPer3 gene by MS-PCR;and the hPer3 mRNA expressions levels by RT-PCR. Results The promoter methylation rates of hPer3 in newly diagnosed( ND) group, partial remission ( PR) group, complete remission ( CR ) group, relapse (R)group and control group were 93.65% (59/63) ,54. 39% (31/57) ,24. 66% (18/73) ,61. 54% (8/13) and 0% (0/40), and the hPer3 mRNA expression levels were 0. 19 ±0.08,6.28 ±2. 11,52.76 ± 14.17,8. 18 ±4.36,75.03 ±18. 16, respeatively. There was a significant statistic difference between any two group (P <0.01) excepting for between PR and R group(P>0.05). After DCA treatment,the promoter hypermethylation status of hPer3 was reduced and the mRNA and CD14,CD11b expression levels were up regulated in a dose dependent manner with an induction of cell apoptosis. Conclusions Promoter methylation status and mRNA expression of hPer3 gene may be indicators for evaluating AML. DCA can induce the expression of hPer3 gene and cells apoptosis in AML.     

急性髓系白血病E-cadherin基因表达和CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨急性髓系白血病（AML）患者中上皮钙黏附素（E-cadherin）基因表达及其甲基化状态。方法 分别用RT-PCR和流式细胞术方法检测55例AML患者骨髓细胞和7份正常对照骨髓细胞中E—cadherin基凶和蛋白的表达，并用甲基化特异性PCR方法分析E—cadherin基因5’端CpG岛的甲基化状况。结果 55例AML患者骨髓细胞中E-cadherinmRNA和蛋白表达阳性率分别为23．6％和18．2％，较正常对照组明显下调（P值均〈0．01）；E—cadherin基因5’端甲基化的阳性率为69．1％。E-cadherin mRNA和蛋白表达阴性的31例患者中，29例（93．5％）E—cadherin甲基化阳性，其蛋白水平和mRNA表达水平与启动子甲基化呈明显负相关（P〈0．01）。7份正常对照骨髓细胞E—cadherin mRNA和蛋白表达均为阳性，E—eadherin基因的CpG岛无明显甲基化。结论 AML的粒系分化成熟障碍可能与E—cadherin基因表达下调有关。5’端CpG岛的甲基化可能影响E-cadherin基因表达。     

AML 和ALL 患者骨髓DNMT1，SFRP1 基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的 检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA 甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled related protein 1, SFRP1)基因甲基化及 mRNA 表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法 根据FBA (French-American-British classification systems;法- 美- 英分型系统) 标准选取2019 年11 月～ 2020 年11 月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70 例,其中AML 50 例和ALL 20 例;另选取65 例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP) 检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1 和SFRP1 基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML 和ALL 患者临床参数之间的关系;用实时定量 PCR 检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中 DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 表达;Pearson 相关分析明确DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与预后的关系。结果 AML 和ALL 患者中DNMT1 基因甲基化发生率分别为26.0% 和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ2=47.683,P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化发生率分别为78.0% 和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ2=55.265,P ＜ 0.001),差异均有统计学意义。AML 组DNMT1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=6.524,5.732,均P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、BM 水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ2=8.115, 5.395, 5.060,均P＜ 0.05)。ALL 组DNMT1 基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ2=4.802,P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=4.920, 5.115,均P ＜ 0.05)。与对照组相比,AML 和ALL 患者化疗前DNMT1 和β-catenin mRNA 表达均显著升高(t=4.807 ～ 10.456,均P＜ 0.05),SFRP1 表达显著下降(t=24.791,12.069,均P＜ 0.05)。与化疗前相比,AML 和ALL 患者化疗后DNMT1 和β-catenin mRNA 表达显著下降(t=3.461 ～ 6.374,均P ＜ 0.05),SFRP1 表达显著上升(t=17.076,7.454,P ＜ 0.05)。两组患者DNMT1 与SFRP1 表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P ＜ 0.05);SFRP1 与β-catenin 表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P ＜ 0.05);两组患者DNMT1与β-catenin 表达均无明显相关性。两组患者DNMT1 基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ2=3.862,3.679,均P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ2=2.927,3.155,均P ＜ 0.05)。结论 DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1 和SFRP1 基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

急性髓系白血病患者dapk基因启动子甲基化改变的研究

本研究旨在分析中国人群急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者死亡相关蛋白激酶(deathassociated protein kinase,DAPK)基因启动子的甲基化状况及其临床相关性。应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术对112例AML患者骨髓标本dapk基因甲基化状态进行检测。结果表明:13例对照组均未发生dapk基因启动子甲基化,而112例AML患者中82例(73.2%)发生dapk基因甲基化,dapk基因甲基化改变与患者的性别、年龄、白细胞、血红蛋白、血小板计数、AML分型以及染色体异常等结果均无相关性(p0.05)。结论:dapk基因甲基化是AML中的一个常见分子事件。     

CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病的相关性分析

目的研究CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病(AML)发生的相关性。方法选取180例AML患者骨髓标本及24例健康供者骨髓标本,通过甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)进行CTNNA1基因启动子区异常甲基化阳性率进行检测,提取基因组DNA,设计硫化测序PCR(BS-PCR)引物及甲基化特异性PCR(MS-PCR)引物,进行PCR扩增及测序分析。结果 5例健康者标本及5例AML患者标本DNA经硫化且BS-PCR测序分析,其健康者标本甲基化率分别为1.5%、1.0%、1.0%、1.5%、1.0%,而AML患者CTNNA1甲基化率分别为92.0%、78.5%、86.0%、56.0%、90.0%,远远高于健康供者。MS-PCR分析结果显示,CTNNA1基因在24例健康人中呈完全非甲基化状态,在180例AML患者中其甲基化阳性率为37.2%(P0.05)。结论 CTNNA1基因启动子区异常甲基化可能参与AML的发生,为疾病的早期监测提供分子理论依据。     

DNA修复相关基因甲基化与肺癌A549细胞顺铂化疗耐药的相关性研究

目的探讨5-氮杂-2’脱氧胞苷（5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza—Cde）对顺铂耐药株肺癌A549／DDP细胞DNA修复相关基因hMLH1、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响。方法A549细胞（A549细胞组）、A549／DDP细胞（A549／DDP组）、A549／DDP细胞5、10、20μmol／L5-Aza—Cde组,分别采用甲基化特异性PCR检测细胞hMLHl、MGMT基因甲基化状态,反转录一PCR法检测用药前、后细胞hMLHlmRNA、MGMTmRNA表达情况。结果A549细胞组hMLHl基因呈非甲基化状态且高表达,MGMT呈部分甲基化状态且高表达,A549一DDP细胞组hMLHl、MGMT基因均呈高甲基化状态,mRNA表达下调,10、20μmol／L5-Aza—Cde组hMLHl和MGMT均呈非甲基化状态;A549／DDP细胞组、5μmol／L5-Aza—Cde组hMLHlmRNA与MGMTmRNA表达量均低于A549细胞组（P〈0．05）,20μmol／L5-Aza—Cde组与A549细胞组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;10μmol／L5-Aza—Cde组MGMTmRNA表达量低于A549细胞组（P〈0．05）,hMLH1mRNA表达量与A549细胞组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论hMLHl、MGMT基因甲基化修饰程度与mRNA表达有一定相关性,hMLH1、MGMT基因甲基化可能是肺癌A549细胞对顺铂耐药的因素之一。     

Apaf-1基因启动子甲基化与抑凋亡蛋白Apollon表达在成人急性白血病发生发展中的意义

目的 探讨Apaf-1基因启动子甲基化与抑凋亡蛋白Apollon在成人急性白血病(AL)发生发展中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测53例AL患者骨髓细胞基因启动子区域甲基化情况,RT-PCR方法 检测Apaf-1 mRNA表达水平.免疫细胞化学方法 检测Apollon蛋白表达情况,正常骨髓对照为10名正常人和非恶性血液病患者.结果 18例(33.9%)AL患者Apaf-1基因启动子存在异常甲基化,甲基化检测阳性患者均未检测到Apaf-1 mRNA的表达,对照组仅1份Apaf-1 mRNA表达缺失,MS-PCR检测未发现Apaf-1基因启动子的异常甲基化,AL患者Apaf-1基因甲基化阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),AL患者骨髓细胞Apollon蛋白表达水平高于对照组(P＜0.05),AL患者外周血WBC＞10×109/L的患者Apaf-1基因启动子甲基化阳性率及Apollon蛋白表达水平高于WBC≤10×109/L患者,差异有统计学意义(P＜0.05),AL患者中Apaf-1基因启动子甲基化阳性率与Apollon蛋白表达呈正相关.结论 Apaf-1基因启动子的异常甲基化与抑凋亡蛋白Apollon的高表达在白血病的发生发展中可能起协同作用,共同促进了白血病的发生、发展.