青霉素产生的遗传学

改变培养条件虽然可以提高抗菌素和其他一些微生物代谢产物的产量,但当有关的微生物发生遗传性变异之后,这些产物的产量却会得到显著的提高。通过突变或遗传重组能够产生许多新的遗传类型。由于突变机理研究的不断发展,已经找到了许多有效的物理和化学诱变剂,应用这些诱变剂可使工     

扩展的简单串联重复位点诱发突变在遗传毒理学的应用进展

扩展的简单串联重复(ESTRs)序列是基因组DNA上高不稳定的一类重复序列。由于其自发突变和诱发突变率高,因而在生殖细胞诱发突变中的研究中得到广泛的应用。随着研究的深入,目前发现有3类重复序列——小卫星、微卫星和ESTRs,主要通过系谱法和单分子PCR法来研究这些重复序列的变化。但迄今为止,这些重复序列的突变机制还不明确。本文主要综述了目前国内外对这3种重复序列的异同、ESTRs突变研究方法的优缺点以及突变机制。     

化学诱变技术在微生物育种研究中的应用

化学诱变是一种传统而经典的微生物育种技术,不仅在高产工业菌株选育中得到广泛应用,而且近来还用于改造野生菌株代谢功能,以发现新产活性产物。本文简要综述常用化学诱变剂及其作用机制,以及化学诱变技术在微生物育种领域中的新近应用研究进展。     

L5178Y细胞tk基因突变试验评价芥子气致突性

目的应用L5178Y细胞检测芥子气(Mustard gas,MG)诱发tk位点突变。方法采用96孔微孔板接种法检测平板接种效率和突变频率。结果芥子气诱发了L5178Y3.7.2-tk+/-细胞tk位点的突变,诱发突变是自发突变的2~15倍。在tk位点诱发了大克隆和小克隆两种不同表型的突变集落,但以小克隆为主。结论L5198Y细胞检测MG诱发非位点突变可应用于化学战剂诱变性的检测,为tk基因突变试验评价化学战剂诱变性提供了实验方法。     

绞股蓝总皂甙对环磷酰胺诱变性的影响

采用已知的化学诱变剂环磷酰胺诱发小鼠微核，染色体畸变及精子畸变为指标，观察了绞股蓝总皂甙的抗诱变作用。结果表明，绞股蓝总皂甙对环磷酰胺所致微核、染色体畸变及精子畸变均有抑制作用，并有一定程度的剂量依赖性关系。     

一个参与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的遗传不稳定的cDNA片段的分离筛选

为研究甲基硝基亚硝基胍 ( MNNG)诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的机理 ,采用 m RNA差异显示分离到的 MNNG处理后表达发生改变的表达序列标识 ( EST)相关基因进行功能筛选 .利用反义核酸阻断技术阻断其相应基因的表达 ,以筛选分离参与非定标性突变形成的 c DNA片段 .现筛选到 1 0号片段 ,其相关基因的表达被阻断后 ,MNNG诱发的 vero细胞非定标突变率下降至自发突变水平 ,提示 1 0号片段相关的基因是非定标突变发生的正相关基因 .     

一个参与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的遗传不稳定的cDNA片段的分离筛选

为研究甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的机理，采用mRNA差异显示分离到的MNNG处理后表达发生改变的表达序列标识（EST）相关基因进行功能筛选. 利用反义核酸阻断技术阻断其相应基因的表达，以筛选分离参与非定标性突变形成的cDNA片段. 现筛选到10号片段，其相关基因的表达被阻断后，MNNG诱发的vero细胞非定标突变率下降至自发突变水平，提示10号片段相关的基因是非定标突变发生的正相关基因.     

碘对比剂诱发甲状腺功能减退的病因及临床特点研究进展

应用碘对比剂（ICM）可诱发甲状腺功能减退（IIHypo）。新近研究发现ICM可独立于游离碘而特异性抑制甲状腺对碘化物摄取,其作用机制与传统的Wolff-Chaikoff效应并不一致。目前关于IIHypo发病率、相关危险因素及监测ICM诱发事件的适应证等问题尚未完全确定。认识发生IIHypo的潜在风险因素、及时评估在碘暴露时间窗内发生的碘诱导事件,对优化ICM诱发甲状腺功能障碍诊断和管理程序具有重要临床意义。     

肿瘤与表观遗传学研究

表观遗传学是指以DNA序列不改变为前提发生的可遗传、影响基因表达的一种调控方式,越来越多的研究表明其与肿瘤的发生发展联系紧密。本文就表观遗传学与肿瘤的发生、抗肿瘤药物及临床应用作一简要分析。     

药源性神经系统疾病(二)

1.1.6药物引起的继发性脑病很多药物可造成严重的肝脏损害而诱发肝性脑病。肝硬化患者在应用某些药物后也可诱发肝性脑病,这些药物有奥美拉唑、丙硫氧嘧啶、丙戊酸、碘造影剂、磺胺类、利多卡因、普萘洛尔(心得安)等。有些药物可使血糖降低,其临床表现为交感神经过度兴奋和脑功能障碍,严重者可发生低血糖性脑病。常见诱发低血糖性脑病的药物为降糖药物、β受体阻滞剂、丙吡胺、磺胺类、卡托普利、口服避孕药、锂剂、水杨酸盐等。严重的低钠血症可出现昏迷、抽搐,甚至死亡。常见诱发低钠性脑病的药物有利尿剂、脱水剂、多巴胺拮抗剂、复方磺…     

白念珠菌ERG11基因突变与氟康唑耐药性的关系

探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)突变与耐药性的关系。分离抽提分别对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌基因组 DNA,根据 ERG11编码序列设计一对上下游引物 ,对靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的基因表达序列进行 PCR扩增 ,经 DNA测序比较敏感和耐药菌株的碱基差异。结果 :6株氟康唑耐药白念珠菌此段序列有 5个位点发生突变 ,其中 5株第 1344 bp位点 G→A的突变致所编码的第 44 8个氨基酸由甘氨酸 (G)变为谷氨酸 (E)。结论 :ERG11基因突变致所编码的氨基酸改变与氟康唑耐药有关。     

长波紫外线和8-甲氧基补骨脂素对红霉素链霉菌诱变效果的初步考查

在菌种选育中,最常用的物理诱变剂是远紫外线(FUV),但长期使用,诱变效应会出现饱和现象。亚硝基胍(NTG)是一种较强的化学诱变剂,诱发营养缺陷型的效果很好,但毒性很大。文献报道,长波紫外线(NUV,波长为365.5nm)和光敏化物质8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralen,简称8-MOP)共同的诱变作用强,诱发营养缺陷型的效果可与亚硝基胍相比,特别是对工业放线菌。因此,我们以红霉素链霉菌(Streptomyces erythreus)14-74为出发菌株,初步考查了长波紫外线和8-MOP的诱变效果,并与远紫外线、NTG的诱变效果进行了初步比较。     

应用λ/lacZ转基因小鼠研究微囊藻毒素体内遗传毒性

目的应用λ/lacZ转基因小鼠研究环境化合物微囊藻毒素MCLR是否可诱发动物体内遗传毒性。方法实验分为MCLR(1mg/kg)染毒及生理盐水对照组,每组各有5只MutaTM小鼠(平均体重25g),每周给药一次,连续4周。染毒48h后检测外周血微核细胞率。末次染毒7d后处死动物,提取组织DNA,通过体外包装反应获得并测定肝脏、肺脏cII基因突变频率,以突变噬菌斑的DNA为模板进行cII基因序列分析。结果实验组诱发微核率与对照组相比差异无统计学意义,MCLR及对照组肝脏cII基因突变(MF)分别为21.1×10-6,20.5×10-6,肺脏MF分别为36.9×10-6,25.7×10-6,实验组与对照组相比差异无统计学意义。MCLR诱发突变与对照较为相似,主要类型是碱基置换,自发突变40个突变体有37个(89%),其中转换突变有26个(62%),颠换突变有11个(27%),在CpG位点G:CtoA:T转换达到自发突变的40%。MCLR诱发突变34个突变体碱基置换有28个,占82%,转换、颠换比例分别为62%、21%,其中在CpG位点发生的G:CtoA:T转换比例略高于对照达到52%。结论MCLR在小鼠体内即不能诱发点突变也不能造成染色体损伤。     

人黑色素瘤细胞系MTS1／p16 CDK4基因的突变

为了探讨p16基因在人肿瘤细胞系中的突变，采用PCR-SSCP分析和基因序列测定技术，对人黑色素瘤细胞系(Bowes)中p16基因的突变进行检测。结果显示,Bowes细胞的p16基因第二外显子扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶中电泳异常，表明其基因序列存在点突变。核酸序列测定证实第341号核苷酸发生T→C的颠挠。应用DNA重组技术构建的突变型p16基因重组质粒可作为基因探针用于检测p16基园的缺失。     

主动外排系统与念珠菌的多重耐药

近年真菌感染大幅度增加，随着三唑类抗真菌药大剂量、长疗程使用，多重耐药株感染导致的治疗失败也呈增加趋势，对耐药念珠菌的研究发现，多重耐药与真菌细菌膜上主动外排泵的活化密切相关；与多重耐药相关的主动外排系统有ATP结合盒超家族（cdr 1和cdr 2)和主要易化因子超家族（CaMDR和flul),临床分离的敏感株和耐药株应用Southern blot及限制性核酸内切酶片段长度多态性分析表明，两者在基因型上无明显的差异，而Northern blot发现，两者在主动外排泵基因的mRNA上差异明显，表明耐药的发生是源于基因表达的异常而不是基因扩增所致，而启动子区上游500bp的碱基序列分析，未发现能增加基因表达的突变，进一步的研究发现，基因表达的增加源于反式调节因子对启动子的激活。     

TK6和WTK1细胞tk位点突变敏感性的比较研究

目的比较研究2种起源于人类的tk^ /-杂合子细胞TK6和WTK1细胞对化合物——甲基磺酸甲酯(MMS)诱发tk位点突变的敏感性，为tk位点突变敏感细胞株的筛选提供实验依据。方法用标准诱变剂MMS处理TK6和WTK1细胞，对培养物进一步作tk位点突变测试，以及细胞p53基因蛋白表达水平的检测。结果MMS可诱导TK6和WTK1细胞tk位点的突变，其诱发突变分别是自发突变的2—7倍和3～10倍。WTK1细胞对MMS的细胞毒作用具有较大的抗性。MMS的作用下，WTK1细胞的突变频率分别是TK6细胞的15．7、19．0和20．4倍。在tk位点诱发了2种不同表型的突变集落，但以慢生长突变体为主。无论是自发突变还是MMS的诱发突变，WTK1细胞的突变频率均显著地高于TK6细胞。经MMS处理后，TK6细胞p53蛋白的表达水平增高更为明显。结论WTK1细胞是更为敏感的tk基因突变试验检测细胞株。MMS诱发的突变有染色体畸变和基因突变，但以染色体畸变为主。     

中国田鼠卵巢细胞 gpt 基因自发和亚砷酸钠诱发突变的分子分析

中国田鼠卵巢细胞ｇｐｔ基因自发和亚砷酸钠诱发突变的分子分析孟紫强（山西大学生命科学系环境生物毒理学研究室，太原０３０００６）本文报告了亚砷酸钠对ＣＨＯ－ＡＳ５２细胞ｇｐｔ基因的致突作用的研究．实验结果表明，亚砷酸钠能诱发该基因发生突变，且其突变频率随...     

P~(53)基因突变与宫颈癌发生的相关性

为探讨Ｐ５３基因点突变与子宫颈癌发生发展的关系。采用聚合酶链反应及其单链构象多态性技术，对６１例子宫颈癌基因组ＤＮＡ的Ｐ５３基因点突变进行检测，分析基因表达与临床病理的关系。结果：聚合酶链反应单链构象多形态性分析位点位于Ｐ５３基因外显子５～８区段，在整个基因组ＤＮＡ中有５例发生Ｐ５３点突变，突变率为８．２％，其中４例Ｐ５３点突变位于外显子７，且均为ＨＰＶ阴性病例；另一例点突变位于外显子５并有ＨＰＶ１８感染。结果提示：ＨＰＶ感染在大多数宫颈癌中发生，Ｐ５３基因外显子５～８的突变，主要在ＨＰＶ阴性的宫颈癌中发生，也偶可发生于ＨＰＶ阳性宫颈癌，宫颈癌发生与人乳头瘤病毒感染及Ｐ５３基因功能失活有关。     

长期应用恩替卡韦治疗的慢性乙型肝炎患者耐药发生情况及原因分析:8年随访研究

目的:了解慢性乙型肝炎患者长期应用恩替卡韦(ETV)治疗的耐药发生情况并探讨耐药原因。方法:对2003-2007年3月参加ETV剂量和疗效的随机双盲Ⅱ期临床试验、ETV与拉米夫定(LAM)治疗慢性乙型肝炎的随机双盲对照Ⅲ期临床试验、ETV治疗LAM失效的慢性乙型肝炎Ⅲ期临床试验及其后续ETV开放治疗临床试验的63例慢性乙型肝炎患者继续给予治疗和随访,计算截至2011年3月的累积耐药发生率,对临床耐药患者进行乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶区(RT)序列突变检测,并分析耐药原因。结果:63例患者中3例治疗2年后失访;1例治疗2.5年时转其他中心治疗;其他59例中16例用药4～6年,43例用药7～8年,随访4～8年,中位随访时间7年。13例患者发生临床耐药,累积耐药发生率为20.5%。9例耐药患者进行了HBV RT序列突变检测,其中5例检测出LAM耐药位点L180M和M204V突变和1～2个ETV耐药位点突变,符合ETV耐药特点;3例仅检出LAM耐药位点突变;1例检出2个ETV耐药位点突变和ADF耐药位点A181T突变。LAM经治、治疗前高病毒载量、治疗6个月病毒学应答不佳、治疗依从性差可能与耐药的发生有关。结论:长期应用恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎耐药率较低。对治疗初期应答不佳患者,加强监测和提高治疗依从性可减少耐药的发生。     

前导序列工程

在传统的蛋白质工程中,为了改变酶的特性,常采用诱变等方法在蛋白酶结构域中引入突变.在前导序列调节蛋白折叠机制的基础上,文章介绍了一种新的蛋白质工程技术--"前导序列丁程".前导序列工程是指当前导序列发生突变时,同一种多肽链可以折叠成具有不同高级结构、稳定性或特异性改变的构型.前导序列工程不仅是研究蛋白质折叠机理的重要丁具.更是创造新型蛋白酶的一种十分有前途的新技术.文章以枯草杆菌蛋白酶为例,介绍了前导序列工程的意义与应用.例如.枯草杆菌蛋白酶在突变前导序列作用下可以得到底物特异性改变的酶,并且可以提高自动处理效率.-个枯草杆菌蛋白酶同族的前导序列可以作为变性枯草杆菌蛋白酶折叠的分子内伴侣帮助其折叠.