酶联免疫技术在乙型肝炎表面抗原检测中的应用

目的 分析酶联免疫吸附法（ELISA）在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测中的临床应用价值.方法 选择150例乙肝患者和50例健康体检者,分别采用ELISA法、胶体金试纸条法、电时间分辨免疫荧光法（TRFIA）检查血液样本HBsAg,比较三种检查方法检查结果的一致性.结果 三种方法在检测乙型肝炎血清标志物HBsAg结果方面具有很高的一致性.结论 酶联免疫吸附法（ELISA）是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的有效方法,具有较高的临床应用价值,可以用于检验科的常规检查.     

简要分析标本溶血对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的检测是诊断乙型肝炎的主要指标。ELISA一步法检测HBsAg,因其操作简便、灵敏度高、特异性强、实验条件要求不高,各级医院检验科普遍采用。在临床检测中,常常遇到溶血的标本。溶血对ELISA检测HBsAg的影响,各文献报道很不一致,本文就溶血标本对HBsAg结果的影响进行简要的分析。     

标本久置对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原结果的影响分析

目的：探讨标本久置对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原的影响。方法筛选强阳性、弱阳性及阴性标本若干份,用ELISA法对同一标本进行当天和隔日检测。结果强阳性及阴性标本放置前后,乙型肝炎表面抗原检测结果相同,无明显差异,而弱阳性标本放置后,出现假阴性。结论标本久置会使乙型肝炎表面抗原的免疫活性减弱,从而遗漏乙型肝炎表面抗原弱阳性者。     

麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料,分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平,比较两者的符合率;同时统计ELISA与NT诊断的耗时、费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于200 IU/L样品,其差异有统计学意义(P0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P0.05),但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹Ig M抗体时具有很高的准确性,且耗时和费用均较低,值得临床推广。     

以生物素化酶免疫试验检测乙型肝炎e系统

本文以生物素化酶免疫试验(BA-ELISA)与常规ELISA对比检测乙型肝炎e系统。本法HBeAg检出相对敏感度为常规ELISA法的2倍;其HBeAg检出阳性率亦非常显著高于常规ELISA(P<0.01);两法检测HBV·DNA的一致性以及与Abbott试剂的符合率本法均优于常规ELISA。     

溶血标本对HBsAg检测影响的实验研究

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测,是诊断乙肝的主要指标。随着技术的不断发展,酶联免疫吸附试验(ELISA)被大多数实验室所采用。由于非特异性物质对ELISA试验的影响,致使实验结果出现假阳性或假阴性。因此,保证检测质量是实验室面临的重要任务。我室在监测ELISA法测定表面抗原试剂盒灵敏度的基础上,通过实验证实溶血标本(即血红蛋白,Hb)是引起非特异性反应的因素之一,并分析其机理。     

酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原最佳条件探讨

本试验表明:以McAb为包被抗体,HRP-SPA为酶标结合物可以将非特异性反应降低接近于零,以患者血清为第二抗体可提变试验敏感性,以OPD或TMB为底物,每步作用60分钟或40分钟、每孔加样0.1ml或0.05ml,结果无明显区别。     

酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体抗体的分析性能评价

目的评价ELISA检测梅毒螺旋体（TP）抗体的分析性能,探讨未知诊断的定性实验的性能评价方法。方法参照临床实验室标准化协会（CLSI）发布的EP12-A2文件对ELISA法测定TP的临界值±20%范围的重复性进行分析,并与TP明胶凝集试验（TPPA）结果进行一致性比较。结果 ＋20%浓度临界值检测阳性率为≥95%,CV为14.8%;-20%浓度临界值检测阴性率≥95%,CV为19.6%;两种方法的一致程度百分比为99.6%,一致程度95%可信区间为98.8%~99.6%。结论 TP-ELISA法检测TP抗体的临界值±20%浓度范围之外标本,可得到可靠的检测结果。TP-ELISA法与TPPA法结果一致性好,可代替其作为TP诊断试验。     

酶联免疫吸附试验检测HIV抗体的质量控制方法探讨

目的寻找一种适用于HIV抗体酶联免疫吸附实验室内质量控制（IQC）的方法。方法采用Levey-Jennings质控图法、即刻法和控制变异系数（CV）的方法（改良即刻法）同时统计规范操作前和规范后的两批各30个质控数据，制作质控图。结果规范前检测采用即刻法和Levey-Jennings质控图法考核显示在控．改良即刻法显示失控；规范后检测3种方法考核均为在控。结论采用即刻法考核，前3次结果对后续质控结果影响较大，前3个质控数据的cV值较大时，随后的结果会出现假在控。Levey-Jennings质控图法如果不对CV值进行考核，前3个质控数据的CV值较大时，随后的结果也会出现假在控。采用改良即刻法统计，只要设定好一个实验室或一个地区的允许CV值，就没有假失控和假在控的结果，因此改良即刻法较为适用于HIV抗体ELISA检测的室内质量控制。ELISA检测手工操作步骤较多，操作细节都对实验结果有很大影响，因此需要规范实验操作，并严格按照要求执行。     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验在结核性脑膜炎诊断中的初步应用

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测38例结核性脑膜炎，33例其它脑膜炎在112例非脑膜炎患者脑脊液中的结核杆菌抗原和抗体。结果脑脊液结核抗原阳性率为81．6％，假阳性率为2．8％；结核抗体阳性率为86．6%，假阳性率为3．4％．提示本法可作为结核性脑膜炎有效的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判断提供依据。     

酶联免疫吸附试验在丙型肝炎抗体检测中质量控制探讨

寻找适合酶联免疫吸附试验对丙型肝炎抗体检测的室内质量控制(internal quality controlling,IQC)的方法。采用Levey-Jennings质控图法、即刻法、加强即刻法(CV30%)对相同的20例数据进行处理。再用双质控法处理更换试剂批号和血清质控。和传统的质控方法比较,Levey-Jennings质控图法和即刻法对数据监控上均存在假失控和假在控。而加强即刻法显示良好效果。配合双质控法处理更换试剂批号和血清质控也很优秀。依据提出的质控方法进行室内质控,其当年室间质评结果全部合格。课题组的结论是控制变异系数的加强即刻法配合L-J质控图法更适用于酶联免疫吸附试验的IQC。     

酶联免疫吸附试验检测抗-HBe与抗-HBc假阳性分析

目的 对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒血清抗-HBe与抗-HBc出现假阳性进行分析,并提出一些解决办法.方法 对521例血清标本采用酶联免疫吸附试验进行检测,先用一种试剂初检,再用另外两种试剂复检阳性标本,初检呈阳性反应而两种试剂复检均为阴性者判为假阳性.结果 在521份标本中用第一种试剂检测到抗-HBc阳性434份,抗-HBe阳性451份.用两种试剂复查阳性标本后,其中65份标本抗-HBc均为阴性,假阳性占15.98%,60份抗-HBe标本均为阴性,假阳性占13.30%.结论 酶联免疫吸附试验检测抗-HBc、抗-HBe,有许多影响因素可导致结果假阳性结果,对怀疑假阳性的标本除了消除其影响因素外,还应使用两种试剂进行复检.     

乙肝病毒表面抗原可疑阳性标本确认方法的建立

目的 建立基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）确认方法,避免错误诊断。方法收集ELISA检测HBsAb〉15COI的血清,取HBsAb阳性;HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;HBsAb、HBcAb阳性三种模式的血清各20份混合,与HBsAgELISA结果浓度〉20COI的血清中和以确认HBsAb的中和活性,制成确认试剂。确认试剂与30例HBsAg弱阳性阳性患者血清中和,HBsAgCOI下降率〉50％判定为阳性,其结果与罗氏确认试剂盒进行比对。结果确认试剂可以很好的中和HBsAg,对30例HBsAg弱阳性标本的判定结果为24例阳性,6例阴性,与罗氏确认试剂盒结果完全一致。结论成功建立HBsAg确认方法,适用于对HBsAg弱阳性样本进行确认,并且简单经济。     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验在结核性脑膜炎诊断中的初步应用

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测38例结核性脑膜炎、33例其它脑膜炎和112例非脑膜炎患者脑脊液中的结核杆菌抗原和抗体。结果脑脊液结核抗原阳性率为81.6％,假阳性率为2.8％;结核抗体阳性率为86.6％,假阳性率为3.4％,提示本法可作为结核性脑膜炎有效的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判断提供依据。     

HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验及其抑制剂的研究

目的　建立一种检测人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV - 1 )整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法 ,用于筛选和研究HIV - 1整合酶抑制剂。方法　将质粒F1 85K C2 80SIN1 2 88转化到大肠埃希菌中 ,经IPTG诱导表达 ,柱亲和层析纯化 ,获得HIV 1整合酶融合蛋白。建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性 ,与3 2 P同位素标记方法比较 ,并用ELISA方法筛选HIV 1整合酶的抑制剂。结果　SDS PAGE电泳分析显示 ,相对分子质量 30 0 0 0上方有HIV 1整合酶融合蛋白条带出现。ELISA及3 2 P同位素标记法证实 ,此融合蛋白对于特异底物具有 3′切割和链转移活性。ELISA反应的平均P N值为 2 836± 0 1 61 ,批内及批间变异系数 (CV)分别为 4 63 %和 5 89%。检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性 ,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高。结论　ELISA法检测HIV 1整合酶活性技术简单 ,快速 ,重复性好 ,无同位素污染 ,可用于HIV 1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗 HIV药物作用机理的研究。     

应用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验过程探讨——以乙型肝炎病毒表面抗原检测为例

目的 利用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验操作流程,通过缩短孵育时间,以提高工作效率.方法 收集化学发光法定量检测乙肝表面抗原阳性高值样本30例、阳性中值样本30例、阳性临界值样本30例、阴性样本30例,使用ELISA试剂盒说明书推荐方法和快速孵育法同时进行检测,比较检测结果相关性.结果 使用酶标板孵育器将孵育时间缩短至原来的1/2、1/3时,ELISA试剂盒说明书推荐方法、快速孵育法与化学发光法检测结果符合率100％;当孵育时间缩短至原来时间的1/4时,两种方法与化学发光法阴性、高值和中值样本检测结果符合率100％;临界值样本检测时,ELISA试剂盒说明书推荐方法与化学发光法检测结果符合率100％,快速孵育法与化学发光法结果6例不一致,检测结果符合率80％.结论 通过实验证实,酶联免疫吸附实验时,快速孵育法可满足临床检测,可将孵育时间缩短至原试剂盒推荐时间的1/3或1/2,可提高工作效率.     

酶联免疫吸附法同时检测血清中的HIV和HCV抗体

用酶联免疫吸附试验检测病毒抗体 ,多为对单一抗体的检测 ,我们将人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1 2 )和丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)抗原包被于同一载体 ,同时检测这两种病毒的抗体 ,取得了与单测法基本一致的效果。ＨＩＶ 1 2抗原和ＨＣＶ抗原为加拿大Ｙｅｓ生物技术研究有限公司产品 ;ＨＩＶ酶联免疫检测试剂盒批号 96 0 5 15 ,ＨＣＶ酶联免疫诊断试剂盒批号 96 0 72 3,均为厦门新创科技有限公司产品。ＨＩＶ和ＨＣＶ抗体阴、阳性国家参照品由卫生部药品生物制品检定所制备 ,批号分别为 96 0 1、96 0 4。 112 0份血清样品取自山东医科大学附属医院…     

ELISA方法进行婴幼儿HBsAg弱阳性标本检测的方法学评估

目的 评价ELISA方法在检测婴幼儿HBsAg时的适用性.方法 用弱阳性昆合血清评价ELISA方法测定HBsAg时的精密度;使用经化学发光法定值的混合血清系列稀释,分析ELISA方法测定HBsAg时的检出限;使用添加350μmol/L胆红素或5g/L血红蛋白的系列浓度血清评价该方法的抗干扰能力;收集临床1岁以下患儿化学发光方法检测弱阳性(＜ 5ng/mL)的样品,进行化学发光和ELISA方法的比对,并以化学发光确证试验为参考方法评价ELISA方法的诊断灵敏度、特异性和诊断效能.结果 在弱阳性水平上(1 ng/mL,S/CO=4.97) ELISA方法测定HBsAg的变异系数为18.91％;检出限为0.125ng/mL;350μmol/L胆红素或5g/L血红蛋白对检验结果准确度无显著影响;经比对,ELISA法与化学发光法在小于0.25 ng/mL区间一致率为30.3％,而在大于0.25ng/mL区间一致率达95.6％;以二者一致和化学发光法中和试验为参考方法,ELISA方法的灵敏度为87.14％,阴性预测值为79.07％.结论 ELISA方法尽管分析灵敏度低于化学发光法,然而它在测定婴幼儿弱阳性标本时,分析性能尚可接受,考虑到其方法的易得和低廉的成本,ELISA方法仍不失为一种好的筛查方法.     

可溶性CD40酶联检测试剂盒的研制及其检测的临床意义

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0 (sCD4 0 )酶标检测试剂盒及探讨其检测的临床意义。方法 :采用该室制备的鼠抗人CD4 0单抗 5C11作为包被抗体 ,另一株识别不同抗原位点的单抗 3G3经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sCD4 0酶标检测方法和对各种质控参数进行优化。在此基础上测定了健康供血员、甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿性关节炎患者的血清、肺癌患者血清和胸水及多种多发性骨髓瘤 (MM)、淋巴瘤细胞株培养上清中sCD4 0的含量。结果 :成功地研制了人sCD4 0酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 15 6pg ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 9% ,回收率为 95 %～ 114 % ,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得血清中sCD4 0含量的 95 %正常值范围 (x±s)为 10 5 0 0± 18 88pg ml,甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿患者的血清、肺癌患者血清和胸水中sCD4 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 :成功地研制了检测人sCD4 0酶标检测试剂盒 ,对一些与CD4 0分子表达或信号异常的疾病患者外周血检测结果显示 ,该试剂盒在临床检测中具有潜在的应用价值     

用单克隆抗体酶联免疫法检测临床标本中单纯疱疹病毒抗原

本文报告在太原市6所医院从各类感染性疾病中采取各种临床标本2067份,正常妇女阴道分泌物72份,用ELISA法快速分型检测单纯疱疹病毒抗原(HSV-Ag),总阳性率为24.5％,其中HSV-1占4.4％,HSV-2占20.1％;正常对照总阳性率为7.0％,HSV-1占1.4％,HSV-2占5.6％。HSV-Ag阳性率和型分布因感染部位而不同:肺部感染以HSV-1居多,生殖器疱疹、疱疹性脑炎、宫颈癌和胎儿畸型均以HSV-2为主。