氟对大鼠甲状腺形态和甲状腺过氧化物酶活性及蛋白表达的影响

目的 观察长期氟过量对大鼠甲状腺形态结构、甲状腺过氧化物酶(TPO)活性及TPO蛋白表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 选用雄性SD大鼠40只,按体质量随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组10只.4组大鼠分别饮用含氟0.40(普通自来水)、15.00、30.00、60.00 mg/L的自来水,均食用普通粮食配制的饲料.喂养180 d后,将大鼠麻醉,取甲状腺组织.在400倍光镜下观察甲状腺组织形态学改变;改良愈创木酚法测定TPO活性;免疫印迹(Western blot)法检测TPO蛋白质表达水平.结果 光镜下,对照组甲状腺滤泡上皮细胞多为单层柱状或立方状,滤泡腔内充满粉红色胶质;低氟组甲状腺滤泡上皮细胞增生活跃;中氟组滤泡增大,滤泡腔内充满深染、黏稠的胶质滤泡;高氟组滤泡上皮细胞明显扁平,滤泡胶质过度浓集,少量滤泡腔甚至有融合,形成巨形滤泡或囊腔.对照组、低氟组、中氟组和高氟组甲状腺细胞TPO活性[(1.572±0.046)、(1.414±0.086)、(1.322±0.049)、(0.960±0.083)U/L]依次降低,组间两两比较差异有统计学意义(P均＜ 0.05);TPO蛋白表达水平(0.335±0.011、0.156±0.027、0.084±0.020、0.045±0.002)依次下降,组间两两比较差异有统计学意义(P均＜ 0.05).结论 长期摄入过量氟可抑制甲状腺TPO活性和TPO蛋白的表达,进而影响甲状腺组织学改变.     

慢性氟中毒大鼠中缝大核超微结构的研究

目的：研究慢性氟中毒大鼠中缝大核的超微结构,方法：以饮用高氟水（100mg/L)的方法制造了雄性大鼠慢性氟中毒模型。透射电子显微镜下[观察了大鼠中缝大核的超微结构,结果：氟中毒大鼠中缝大核内的神经元出现超微结构改变,胞核内异染色质增多且边集,线粒体扩张,嵴断裂或消失,粗面内质网,高尔基复合体平囊亦扩张,胞体,尤其是突起中脂褐素明显增多,并出现较多的自噬体,个别神经元固缩,结论：高氟摄入对中缝大核神经元有直接损害作用。     

维生素C、E对氟中毒大鼠肝、肾、脑组织超微结构的影响

目的 探讨维生素C、E(VC、VE)干预对氟中毒大鼠肝、肾和脑组织超微结构变化的影响.方法 将120只Wistar大鼠分为9组.对照组饮用纯净水;染氟组饮用高氟水(含氟化钠150 mg/L).染氟同时.VC干预组分别用50、100、150 mg·kg-1·d-13种剂量的VC灌胃;VE干预组分别用25、50、75 mg·kg-1·d-1 3种剂量的VE灌胃;VC和VE联合干预组以100 mg·kg-1·d-1VC和50 mg·kg-1·d-1VE同时灌胃.9个月后处死大鼠,用透射电子显微镜观察各组大鼠肝、肾、脑组织超微结构变化.结果 大鼠饮用高氟水后.肝、肾、脑组织发生了不同程度的超微结构病理变化.①肝细胞水肿,线粒体基质变淡,在肝细胞内可见脂滴,核基质淡,核仁边集.肝血窦内皮明显肿胀; ②肾小管细胞核异染色质较多且边集,细胞间隙和质膜内褶增宽,内质网扩张,集合管上皮细胞内的亮细胞胞质极度松散;③脑胶质细胞肿胀,细胞器很少,细胞核异染色质较多、边集.VC、VE各干预组肝、肾、脑组织超微结构变化轻微或无明显变化,其中VC、VE联合干预组各组织超微结构基本与对照组相同.结论 氟中毒可引起大鼠肝、肾、脑组织损害.VC、VE单独及联合干预均对氟中毒引起的组织器官损害有一定的保护作用,联合干预效果强于单独干预.     

氟对大鼠甲状腺过氧化物酶mRNA表达的影响

目的 观察长期氟过量对大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)活性、TPO mRNA表达的影响,并探讨其可能的机制.方法 选用雄性SD大鼠40只,按体质量分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组10只,分别饮用含氟化钠0.40(普通自来水)、15.00、30.00和60.00 mg/L的自来水,均食用普通粮食配制的饲料.喂养180 d后处死.测定血清FT3和FT4;采用改良愈创木酚法测定甲状腺TPO活性;半定量RT-PCR方法检测甲状腺TPO mRNA表达水平.结果 低、中、高氟组血清FL3水平[(3.62±0.47)、(3.57±0.55)和(3.30±0.68)pmol/L]与对照组[(3.64±0.45)pmol/L]相比虽呈下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);高氟组血清FT4水平[(8.64±1.72)pmol/L]低于对照组、低、中氟组[(13.08±1.69)、(12.68±1.32)、(12.05±1.43)pmol/L,P均＜0.05].对照组、低氟组、中氟组、高氟组甲状腺细胞TPO活性[(1.572±0.064)、(1.414±0.086)、(1.322±0.049)、0.960±0.083)U/L]随着氟浓度的升高而明显降低,任意两组组间比较差异均有统计学意义(P均＜ 0.05),TPO活性与氟浓度呈显著负相关(r=-0.955,P＜0.05).半定量RT-PCR结果显示:对照组、低氟组、中氟组、高氟组甲状腺TPO mRNA表达水平(0.936±0.160、0.368±0.095、0.115±0.018、0.016±0.008)随着氟浓度升高而明显降低,任意两组组间比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 长期摄入过量氟抑制甲状腺TPO活性和TPO的表达,影响甲状腺激素合成.     

过量氟和硒对大鼠垂体,甲状腺,甲状旁腺的影响

为观察过量氟对大鼠垂体、甲状腺、甲状旁腺的影响及硒的保护作用，选用Ｗｉｓｔｒａｒ大鼠饮用３０ｍｇ／Ｌ与５０ｍｇ／Ｌ高氟水，同时设高氟水加富硒饲料组。自实验第４个月光镜下见甲状腺呈现弥漫增生性改变，８个月和１４个月出现增生和过度复原并存；垂体４个月光镜下尚无变化，８个月开始出现窦样毛细管增生并扩张充血，嗜酸性细胞变大增多，呈现分化和功能活跃表现。     

氟中毒大鼠肝脏超微结构观察

目的 研究氟对大鼠肝脏超微结构的影响。方法 在饮水中加入不同剂量的氟化钠（0、50、100和150mg／L）喂词大鼠3个月后，透射电镜下观察肝脏超微结构的改变。结果 染氟各组大鼠肝组织超微结构发生改变，表现为肝细胞线粒体肿胀，嵴断裂或消失；内质网呈片层状；染色质边集于核膜下；胞质内多见白色脂滴。结论 氟损伤亚细胞膜性结构和DNA，造成肝脏损伤。     

实验性氟中毒大鼠中缝背核神经元超微结构研究

以喂饲高氟（１００ｍｇ／Ｌ）水的方法制造了雄性大鼠慢性中毒模型，透射电子显微镜下观察了大鼠中缝背核（ＮＲＤ）神经元的超微结构变化。结果表明，氟中毒大鼠ＮＲＤ神经元出现超微结构改变。主要表现为神经元的核浆比值增大，核内异染色质增多且边集，线粒体扩张，嵴断裂或消失，粗面内质网池，高尔基复合体扁平囊亦扩张。神经元胞体，尤其是突起中脂褐素明显增多，并有较多的自噬体出现。个别神经元固缩。神经纤维有髓鞘松散及     

氟中毒大鼠骨组织病理改变动态分析

目的动态观察亚慢性氟中毒大鼠骨组织的超微结构变化，分析亚慢性氟中毒大鼠骨组织病变特征。方法将雄性Wistar大鼠按体质量随机分成2个组，氟化钠组每日饮用含氟150mg／L的氟化钠水溶液，正常对照组饮用自来水，共饲养6个月，每月处死1批大鼠，光镜观察长骨干骺端的病变特点，常规透射电镜观察骨组织中各细胞成分的超微结构病变特点。结果成功地复制出了大鼠氟中毒的模型：随着染氟时间的延长，氟化钠组大鼠的骨小梁密度同对照组相比明显增加。电镜观察中可见氟中毒组大鼠骨细胞变性坏死明显，成骨细胞和破骨细胞都异常活跃，其细胞器结构都有不同程度的损伤：破骨细胞表现为溶酶体数量减少并伴有溶酶体酶的合成减少。结论高剂量氟可以直接对大鼠骨组织中的各种细胞成分造成破坏，并不同程度地促进成骨细胞和破骨细胞的活跃，最终表现为骨转换增强。     

氟对体外培养软骨细胞超微结构的影响

目的观察氟化物对体外培养乳鼠软骨细胞超微结构的影响。方法采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0（对照）、5、10、20、40mg／L组,染氟培养10d后,制备乳鼠软骨细胞超薄切片,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变。结果电镜下5、10mg／L组软骨细胞增殖,双核细胞数量增多,细胞器发达,可见囊池扩张;20、40mg／L组细胞表面微绒毛减少,部分细胞染色质固缩,并凝结成块状,聚集在核膜周边,核基质密度下降,核膜迂回曲折,胞浆内线粒体空泡化,有些细胞胞浆内可见大量的囊泡,泡内含有电子致密物质;在40mg／L组中可见到凋亡细胞。结论高氟可以引起乳鼠软骨细胞超微结构的损伤。     

氟对人胎腺上皮细胞超微结构的影响

目的观察氟病区胎儿肝、肾上腺、甲状腺上皮细胞的超微结构变化,为研究氟对细胞损伤机理提供实验依据。方法收集氟病区胎儿１０例,其母亲均有氟斑牙,尿氟含量为（４．３７±２．９４）ｍｇ／Ｌ。非氟病区胎儿１０例,其母亲无氟斑牙,尿氟含量为（１．６７±０．８２）ｍｇ／Ｌ。用氟电极法测定胎儿骨氟含量。取胎儿肝脏、肾上腺、甲状腺组织作电镜检查。结果病区胎儿骨氟含量（２．７７±０．２５）ｍｇ／ｋｇ,与非病区胎儿骨氟（２．５０±０．１１）ｍｇ／ｋｇ相比,差异有显著性（ Ｐ<０． ０１）。电镜观察结果：细胞膜的主要变化是微绒毛变短、变少,甚至消失。细胞间连接松解,结构紊乱。病变严重者有髓鞘样结构形成。线粒体的主要变化为：线粒体肿胀、体积增大,甚至嵴消失,呈空泡状。内质网的主要病变为粗面内质同扩张呈囊状,网上核蛋白体部分脱失。细胞核的主要病变为核膜的双层结构破坏,呈囊状扩张。有的细胞浆内出现巨大包涵体或异常电子致密度较高的颗粒。结论氟对细胞结构的破坏是多方面的。氟中毒时细胞膜、线粒体、粗面内质网及核膜均可受到损伤。     

高氟与补硒对大鼠甲状腺影响的实验研究

观察了６０只饮用３０ｍｇ／Ｌ或５０ｍｇ／Ｌ高氟水及加硒大鼠的尿氟、甲状腺组织结构及其激素变化。结果显示尿氟随饮高氟水时间延长而升高，补硒在早期可增加尿氟排泄；早期甲状腺滤泡上皮增生活跃、游离甲状腺激素升高；后期甲状腺滤泡上皮出现退行性变，ＦＴ３和Ｔ４水平降低。提示高氟使甲状腺早期兴奋，甲功高度代偿，后期抑制甲状腺使甲功低下；氟与甲状腺组织及功能的改变与摄氟时间密切相关。     

氟对大鼠骨代谢的影响

目的 观察氟对大鼠骨代谢的影响,探讨氟骨症的发病机制.方法 Wistar雄性大鼠80只,体质量80～100 g.将大鼠按体质量随机分为4组:对照组(饮用自来水),低剂量组(NaF,50 mg/L),中剂量组(NaF,100 mg/L),高剂量组(NaF,150 mg/L),每组20只.饲养12周,乙醚麻醉处死大鼠,观察大鼠氟斑牙发生率;股动脉取血,放射免疫法测定血清骨钙素(BGP)、甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT);比色法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP).结果大鼠氟斑牙检出率组间比较差异有统计学意义(x2=82.81,P＜0.01);其中低(80%,16/20)、中(100%,20/20)、高剂量组(100%,20/20)与对照组(0,0/20)比较差异有统计学意义(x2值分别为22.67、40.00、40.00,P均＜0.01).大鼠血清BGP、PTH、CT组间比较差异有统计学意义(F值分别为38.614、20.778、3.023,P＜0.01或＜0.05);但ALP、ACP组问比较差异无统计学意义(F值分别0.609、2.895,P均＞0.05).血清BGP:低、中、高剂量组[(19.60±12.79)、(33.41±10.81)、(39.46±9.51)mg/L]高于对照组[(7.35±3.22)mg/L,P均＜0.01],中、高剂量组高于低剂量组(P均＜0.01);血清PTH:低、中、高剂量组[(72.27±25.38)、(67.80±12.01)、(106.52±36.37)pmol/L]高于对照组[(47.08±9.22)pmol/L,P均＜0.01],高剂量组高于低、中剂量组(P均＜0.01);血清CT:中、高剂量组[(13.39±2.07)、(15.05±4.77)pmol/L]低于对照组[(26.06±28.31)pmol/L,P均＜0.05],也低于低剂量组[(24.49±14.10)pmol/L,P＜0.05].结论氟影响大鼠的骨代谢,BGP、PTH、CT在氟骨症发病中起着重要的作用.     

慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶表达水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导激酶表达变化,进一步揭示慢性氟中毒神经损伤的分子机制.方法 SD大鼠随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组24只,饮用水含氟量分别为＜0.5和5.0、50.0 mg/L,实验期为6个月.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及血氟,用Western blotting和免疫组织化学方法检测脑组织中JNK信号转导激酶的表达和分布,并分析血氟与活化的JNK激酶的相关关系.结果低氟组和高氟组大鼠尿氟[(2.56±0.91)、(5.73±3.14)mg/L]和血氟[(0.36±0.14)、(0.50±0.18)mg/L]均较对照组[(0.92±0.30)、(0.12±0.07)mg/L]升高(P均＜0.05).高氟组(1.74±0.69)脑组织phospho-JNK表达高于对照组(1.00±0.37)和低氟组(1.20±0.28,P均＜0.05);total-JNK蛋白表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=0.046,P＞0.05).phospho-JNK、total-JNK阳性表达神经元主要集中在皮质、海马和背侧丘脑,其中高氟组大鼠phospho-JNK在顶叶皮质(119.3±14.1)、枕叶皮质(112.7±5.4)、海马CA3区(100.6±8.9)、背侧丘脑(117.8±10.4)及橄榄核(112.6±5.9)中阳性表达较对照组(104.1±8.9、106.6±9.6、106.6±9.7、108.9±6.4、100.3±8.4)和低氟组(96.7±17.1、102.5±8.3、106.4±6.5、110.2±9.3、102.4±4.7、102.5±9.8)明显增高(P均＜0.05),而total-JNK在各组大鼠脑组织中阳性表达分布未见明显改变(P均＞0.05).相关分析结果发现,随大鼠血氟升高,脑组织中phospho-JNK表达呈增高趋势,二者存在正相关关系(r=0.677).结论慢性氟中毒导致脑组织中磷酸化JNK表达改变,并与机体中氟蓄积量存在相关关系,这些改变可能与慢性氟中毒导致的神经损伤有关系.     

氟对大鼠胆碱酯酶活性和学习记忆功能的影响

目的 研究氟对慢性氟中毒大鼠学习、记忆功能的影响以及其可能的机制,探讨氟对脑组织胆碱酯酶活性的影响多氟中毒大鼠智力损伤程度的关系.方法 SD大鼠按性别和体质量随机分为3组,对照组:自由饮用自来水,含氟量低于1mg/L;低剂量染氟组:饮水含氟量为5mg/L;高剂量染氟组:饮水含氟量为50mg/L.实验3个月时检测大鼠行为学变化和脑组织胆碱酯酶活性.结果 高剂量染氟组大鼠的逃避潜伏期时间[(17.55±1.51)s]长于对照组[(12.07±0.97)s],两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);高剂量染氟组探索实验目标次数[(2.88±0.35)次]与对照组[(4.00±0.50)次]比较,有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);高剂量染氟组的乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性[(1.41±0.19)、(0.49±0.07)kU/g]均低于对照组[(1.88±0.13)、(1.04±0.16)kU/g)],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 过量氟在体内蓄积可使大鼠智力降低,脑内的胆碱酯酶活性降低可能是其机制之一.     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠大脑皮层颞叶锥体细胞超微结构改变的影响

应用透射电镜技术观察糖尿病大鼠大脑皮导颞叶锥体细胞超微结构的变化,并对比观察胰岛素治疗对超微结构改变的影响。结果显示：病程3个月的链脲菌素致糖尿病大鼠颞叶皮层光镜下无显著改变,而锥体细胞超微结构出现细胞核形态不规则,染色质分布不匀、聚集成块且有边集现象;高尔基氏器,粗面内质网扩张且数量显著减少,核糖核蛋白体脱粒;线粒体减少,部分膜和嵴模糊或消失,胰岛素治疗组则不出现上述改变,提示糖尿病可引起皮层颞叶锥细胞超微结构的改变,为糖尿病引起的认知功能障碍及胰岛素对其防治作用提供了可靠的形态依据。     

慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体融合分裂基因转录水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体融合分裂基因mRNA含量和活性氧(ROS)水平,探讨其在氟中毒线粒体损伤中的作用.方法 选取SD大鼠120只,按体重随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组40只.在饮水中加入不同剂量的氟化钠,含氟量分别为＜0.5、10、50 mg/L,饲养3、6个月.采用线粒体ROS荧光探针法检测大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平,实时荧光定量PCR法检测线粒体融合基因Mfn1及分裂基因Fis1、Drp1转录水平.结果 3个月时,与对照组[10.43±5.98、(3.4±0.6)×103、(8.8±1.4)×10、(1.2±0.2)×102]比较,低氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(11.67±3.49)未见明显改变(P＞ 0.05),线粒体融合分裂基因Mfn1、Drp1、Fis1 mRNA表达水平未见明显改变[(3.1±0.3)×104、(6.7±2.7)×10、(5.0±0.9)×10,P均＞0.05];而高氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(25.48±6.09)显著升高(P＜0.05),线粒体融合分裂基因Mfn1、Drp1、Fis1 mRNA表达水平[(1.0±0.2)×1011、(3.0±1.6)×103、(8.9±3.6)×102]明显升高(P均＜ 0.05).6个月时,与对照组[25.26±6.41、(3.0±0.8)×109、(5.1±0.8)×103、(2.8±0.7)×102]比较,低、高氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(63.02±8.15、65.60±7.40)明显升高,线粒体融合基因Mfn1mRNA表达水平[(3.0±0.4)×106、(4.0±0.9)×104]显著降低,分裂基因Fis1、Drp1 mRNA表达水平[(2.0±0.8)×106、(4.0±0.6)×105,(3.8±1.3)×103、(1.3±0.2)×103]明显升高(P均＜0.05).结论 摄入过量的氟导致大鼠大脑皮质神经细胞ROS水平升高,线粒体融合基因转录降低、分裂基因转录升高,这种改变与染氟时间和剂量呈正相关.线粒体融合分裂基因转录水平改变可能与慢性氟中毒引起的线粒体氧化应激升高有关.