自体骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的 了解自体骨骼肌卫星细胞(satellite cell,SC)移植至心肌对心肌梗死(myocardial infarction,MI)大鼠心功能的影响及其可能机制.方法 45只Wistar大鼠采用随机抽签法分为假手术组、对照组及移植组,对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型.将体外培养2周的大鼠自体SC以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围,4周后测定各组大鼠血流动力学、心功能、血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度及缺血心肌毛细血管密度的变化,同时观察移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系.结果 SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维;与假手术组比较,尽管对照组及移植组大鼠之收缩压、舒张压、平均动脉压、左室收缩压及左室压力最大上升/下降速率均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),左室舒张末压均明显增高(P＜0.01),但移植组左室压力最大上升速率、左室压力最大下降速率及左室舒张末压较之对照组则有明显改善(P＜0.05,P＜0.01);SC移植4周后,对照组大鼠毛细血管密度较之假手术组明显增高(P＜0.05);移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度及血清VEGF浓度较之假手术组、对照组亦明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 SC在心肌梗死区中能增殖分化为横纹肌样细胞,并可分泌VEGF促使缺血心肌毛细血管增生,从而共同参与改善心功能.     

平滑肌细胞移植提高大鼠心肌缺血模型心功能的可行性实验研究

目的　初步探讨移植平滑肌细胞对大鼠冠脉结扎心肌缺血模型心功能的提高作用。方法　用酶消化法从 胎鼠胃中分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增。结扎大鼠左冠状动脉前降支,制作心肌缺血模型。细胞移植组 (n=10)将体外培养、BrdU标记的平滑肌细胞,注射移植到冠脉结扎后2周形成的心肌梗死区中;对照组(n=10)用同样的 方法注射等量不含血清的DMEM培养液;两组动物术后均每日皮下注射环胞霉素A抑制免疫排斥反应。超声检查评估移 植前、后大鼠的心功能状况。取大鼠心脏标本做抗BrdU、抗α SMA免疫组化染色,检测心肌梗死区中植入的平滑肌细胞的 存活情况。结果　移植后4周,平滑肌细胞存活于心肌梗死区,并形成肌样组织。与对照组比较,移植组左室前游离壁厚 度明显增加[(2.51±0.22)mmvs(1.32±0.16)mm,P<0.01],左室舒张末容积(LVEDV)明显减小[(1.23±0.12)mlvs(1.92 ±0.18)ml,P<0.01],左室射血分数(LVEF)显著提高[(56.7±6.8)%vs(32.3±2.9)%,P<0.01]。结论　平滑肌细胞移 植后能存活于心肌梗死区,并改善缺血心肌的心功能。     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与平滑肌细胞增值

研究大鼠颈外静脉移植入颈总动脉后内膜增生（ＩＨ）的发病机制。应用组织切片的特殊染色，单克隆抗ＰＣＮＡ抗体及抗Ｄｍ的免疫组化方法观察Ｈ的发生过程。结果：①术后１ｄ移植静脉的内膜消失，术后２ｄ出现ＩＨ并逐渐增生，ＩＨ中可见大量平滑肌细胞（ＳＭＣ），术后１２周ＩＨ的面积与术后１８周无显著差异；②ＩＨ中ＳＭＣ的Ｄｍ呈阳性；③ＩＨ中ＳＭＣ的ＰＣＮＡ指数于术后２ｄ骤然升高，术后２周达高峰。结论：ＩＨ发生在移植     

自体骨骼肌卫星细胞移植改善心功能的实验研究

目的：探讨移植骨髂肌卫星细胞(satellite cell，SC)治疗心肌梗死，改善心功能的机制。方法：雄性苏中幼猪10头，随机分成实验组与对照组。实验组采用改良Dorfman法培养SC。开胸结扎冠状动脉对角支制作急性心肌梗死模型。实验组心肌内注射种植体外扩增的自体SC，对照组注射等量细胞培养液。单电子发射断层扫描(SPECT)行心血池显像险查评估治疗前后的6功能变化。结果：①SC贴壁生长，延迟分瓶或降低培养液中胎牛血清(FBS)浓度，SC相互融合形成肌管。②实验组梗死区室壁厚度大于对照组，内见新生的带横纹的肌纤维，细胞间无闰盘。②实验组术后4周左室射血分数(EF)、1／3射血分数(1／3EF)、1／3充盈分数(1／3FF)优于对照组。结论：SC易于获取和体外扩增培养，移植于自体心脏可存活，通过提供具有收缩功能的细胞、阻断心室重构过程，改善心脏顺应性提高心功能。     

自体骨骼肌卫星细胞移植治疗心肌梗死后心衰的实验研究

目的 :研究骨骼肌卫星细胞植入梗死区心肌组织后对心功能的影响 .方法 :幼猪 10只 ,对照组和治疗组各 5只 .治疗组从幼猪三角肌群处切取骨骼肌标本 ,获取卫星细胞 ,体外培养扩增 ,结扎冠状动脉建立幼猪的急性心肌梗死模型 ,通过局部注射的方法将卫星细胞植入梗死周边区及梗死区心肌 .对照组以同样的方法建立心肌梗死模型 ,予以等量的、不含卫星细胞的培养液接种 ,观察移植 4wk后卫星细胞移植对心功能的影响 .结果 :卫星细胞接种培养后 4 8h开始贴壁 ,细胞呈梭形 ,将细胞培养液中胎牛血清浓度降至 2 0mL·L-1以下时 ,细胞生长停滞 ,相互融合形成肌管 ;HE染色治疗组梗死区可见岛状、带横纹的肌肉组织 ,肌细胞核位于周边 ,光镜及电镜移植细胞及移植细胞与宿主细胞之间均未见闰盘连接 ;对照组梗死区为均匀一致的纤维疤痕组织 ;对照组 1wk左室射血分数 (LVEF)为 (2 3± 2 ) % ,4wk为 (33± 2 ) % ,治疗组 1wk为 (2 6± 3) % ,4wk为 (4 0± 2 ) % ,治疗组与对照组 1wk比较 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;而 1wk与 4wk比较 ,有统计学差异 (P <0 .0 0 1) ,治疗组与对照组 4wk比较 ,LVEF有统计学差异 (P <0 .0 1) .治疗组 1wk与 4wk比较 ,1/3充盈分数 (1/3FF)有统计学差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :骨骼肌卫星细胞植入     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与平滑肌细胞增值

研究大鼠颈外静脉移植入颈总动脉后内膜增生（IH）的发病机制。应用组织切片的特殊染色，单克隆抗PCNA抗体及抗Dm抗体的免疫组化方法观察IH的发生过程。结果：①术后1d移植静脉的内膜消失，术后2d出现IH并逐渐增生，IH中可见大量平滑肌细胞（SMC），术后12周IH的面积与术后18周元显著差异；②IH中SMC的Dm呈阳性；③IH中SMC的PCNA指数于术后2d骤然升高，术后2周达高峰。结论：IH发生在移植术后2d，逐渐增厚至术后12周方停止，术后早期发生的IH是由中膜的SMC移行至内膜并增殖所致。SMC增殖的高峰在术后第2周。     

自体成肌细胞移植改善兔心肌梗死后心功能的实验研究

目的:将体外培养并纯化的自体骨骼肌成肌细胞植入心肌梗死区,观察其心脏功能有无改善及改善程度,以探讨成肌细胞移植治疗的机制.方法:采用反复差速贴壁法体外培养、纯化及鉴定新西兰兔自体成肌细胞.结扎冠状动脉致局部心肌梗死后2周,分别将成肌细胞和对照的细胞培养液注入心肌梗死区,4周后观察心功能改善情况,鉴定心肌梗死边缘区毛细血...     

自体骨髓间充质干细胞移植对猪急性心肌梗死再灌注后心功能的影响

目的 初步观察自体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在心梗区存活并分化为心肌细胞的情况,探讨MSCs经冠脉移植对急性心肌梗死后心功能的影响及其可能机制.方法 13头巴马香猪随机分为MSCs移植组(n=7)和DMEM培养液对照组(n=6).经髂后上棘抽取骨髓,密度梯度结合贴壁培养法分离、纯化、扩增MSCs.通过心导管介入球囊封堵冠状动脉左前降支(LAD)第2对角支以远建立急性心肌梗死模型.模型建立后即刻,细胞移植组和对照组分别经梗死相关冠脉注入4,6-二咪基-4-联苯基吲哚(DAPI)标记过的MSCs和DMEM培养液.于心梗前、细胞移植后4周对猪进行超声心动图检查.移植后4周处死动物,观察心脏大体结构,苏木精-伊红染色及Masson三色染色法观察显微结构改变.通过免疫组化检测移植细胞的肌钙蛋白T (Cardiac Troponin T,c-TnT)、缝隙连接蛋白43 (Connexin43,Cx-43)的表达.结果 移植后4周,MSCs移植组和对照组比较射血分数(LVEF)显著提高(P＜0.05),左室收缩末期内径(LVESD)和左室舒张末期内径(LVEDD)显著减小(P＜0.05).苏木精-伊红染色发现对照组病变区心肌变性、坏死,大量炎性细胞浸润,梗死区与非梗死区界限清楚,移植组梗死区与非梗死区界限不清,且在梗死区中可见部分排列相对整齐的肌纤维结构.Masson染色显示移植组梗死区和交界区内胶原纤维融合较少,排列较为有序,而对照组梗死区和交界区内胶原纤维斑块状融合明显,排列紊乱.MSCs移植组DAPI阳性细胞c-TnT、Cx-43表达阳性.结论 在急性心肌梗死造模后即刻进行经冠状动脉MSCs自体移植,MSCs可以在梗死局部存活并向心肌细胞分化,从而抑制左室重构,显著改善心功能.     

自体单个核骨髓干细胞移植对急性心肌梗死后心功能的影响

目的 探讨自体单个核骨髓干细胞(BMSCs)移植对前壁急性心肌梗死(AMI)后心功能的影响.方法 选择2006年1月至2008年12月本院住院的前壁AMI患者32例,按患者意愿分为移植组和对照组,各16例,对照组按常规行心脏介入治疗,移植组术前采集1×108～3×108个自体单个核BMSCs,介入治疗后直接经导管向冠...     

大鼠急性心肌梗死后心功能变化及病理演变的试验研究

目的 探讨大鼠急性心肌梗死(AMI)后心功能变化和病理演变规律及其对心肌梗死干细胞移植治疗的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只随机分为假手术0周组(SH 0周组,n=1 0)、MI 2周组(MI 2周组,n=10)、MI 4周组(MI 4周组,n=1 0)、MI 8周组(MI 8周组,n=10).结扎冠状动脉左前降支制作大鼠急性MI模型,分别于术后观察期满,用超声评价心脏结构和左心导管检测血流动力学改变,并取心脏组织行HE染色,观察心肌病理改变.假手术组仅开胸并在左前降支下过线.结果 MI2周后与假手术0周组相比,大鼠左心室舒张末压明显增高(LVEDP 1 9.75±7.1 8 mmHg v s 2.1 0±1.26 mmHg,P＜0.01),左心室内压力最大上升速率明显减慢( dp/dtmax 4.11±0.74 mmHg/ms vs 6.20±0.70 mmHg/ms,P＜0.01),最大下降速率亦显著减慢(-dp/dtmax 3.54±0.55 mmHg/ms v s 5.82±0.54 mmHg/ms,P＜0.01).MI 4周时上述改变更明显,但MI 8周时心功能未进一步恶化.超声见心脏结构变化与血流动力学改变相一致.HE染色观察梗死后12 h梗死区弥漫的中性多形核细胞浸润,在2周时达到高峰,4周后基本消退.结论本研究显示大鼠梗死后其炎症反应高峰2周时出现,4周后基本完成梗死后修复过程,其演变规律可能对AMI干细胞治疗效果有影响.     

自体外周血干细胞移植对兔心肌梗死心功能的影响

目的　探讨经粒细胞集落刺激因子(G CSF)动员后自体外周血干细胞移植(PBSCT)对兔心肌梗死心功能的影响。方法　4 0只日本大耳白兔随机分成两组,每组2 0只,均结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,两组均给予G CSF连续7天,于模型建立后1周,将分离纯化的外周血单个核细胞悬液经心外膜注射到心梗区及周边,而对照组只给予等量的生理盐水,在术后4周测定两组梗死面积的大小、毛细血管密度以及纤维化的情况,并观察植入细胞的存活及分化情况。于术前、术后2 4h及术后4周做心脏超声检测心功能。结果　移植组毛细血管密度大大增加(P <0 .0 1) ,梗死面积较对照组明显减小;Masson染色显示对照组心肌纤维排列紊乱不规则,而移植组排列有序,且蓝色的胶原纤维明显少于对照组。心功能各项指标在术后4周时均较对照组有明显的改善,射血分数增加了15 %。结论　经G CSF动员后自体外周血干细胞移植可显著改善心肌梗死兔的心功能。     

自体骨髓单个核细胞植入对心肌梗死后心脏功能的影响

 目的 探讨骨髓单个核细胞植入对心肌梗死后心脏功能的影响。 方法 以冷冻损伤的方法建立新西兰种家兔心肌梗死模型,分为骨髓单个核细胞组（mononuclear bone marrow cells,MN-BMCs组）和对照组,各8只。4周后, MN-BMCs组中将提取分离的MN-BMCs,植入心肌梗死及其边缘区,对照组于心肌梗死及其边缘区注射相应体积的IMDM完全培养液。以超声心动图分析细胞植入前后心脏功能改善情况。 结果 MN-BMCs植入心肌梗死及其边缘区可以改善局部及整体心脏功能：细胞移植4周后两组之间比较,MN-BMCs组局部心脏功能明显优于对照组,表现为MN-BMCs组比对照组心肌梗死区室壁厚度增加,（4.81±0.55）mm vs 3.94±0.54）mm,P＜0.05;收缩期和舒张期心肌梗死区室壁运动速度明显增加,分别为（8.20±0.77）cm/s vs 7.00±0.56）cm/s,P＜0.05,（8.51±0.93） cm/s vs （6.75 ±0.57）cm/s,P＜0.05。细胞移植4周后,MN-BMCs组整体心脏功能亦优于对照组,表现为MN-BMCs组比对照组心腔减小,LVDD分别为 （14.89±1.36）mm vs （16.24±1.31）mm,P＜0.05,LVSD分别为（10.48±1.32）mm vs （12.29±1.48）mm,P＜0.05;MN-BMCs组左心室收缩功能明显改善,左室射血分数及缩短分数提高,LVEF分别为（65.25±5.73）% vs （57.00±5.81）%,P＜0.05,LVFS分别为 （30.25±3.73）% vs （24.88±3.95）%,P＜0.05。 结论 骨髓单个核细胞植入心肌梗死及其边缘区可以改善心肌梗死后心脏功能。     

Improvement of cardiac function after transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cells in patients with acute myocardial infarction

Background The infarct size determines the long-term prognosis of patients with acute myocardial infarction (AMI). There is a growing interest in repairing scar area by transplanting bone marrow stem cells. However, effectiveness of intracoronary injection of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in patients with AMI still remains unclear.Methods Sixty-nine patients with AMI after percutaneous coronary intervention (PCI) were randomly divided into intracoronary injection of BMSCs (n=34) and saline (control group, n=35) groups. Serial single positron emission computer tomography (SPECT), cardiac echo and cardiac electromechanical mapping were done at the designed time intervals until six months after transplantation of BMSCs or injection of saline. Results The proportion with functional defect decreased significantly in the BMSCs patients after three months ［(13±5)%］ compared with that pre-transplantation ［(32±11)%］ and the control group ［(28±10)%］ at three month follow-up (P&lt;0.05, respectively). Wall movement velocity over the infracted region increased significantly in the BMSCs group ［(4.2±2.5) cm/s vs (2.2±1.3) cm/s, P&lt;0.05］, but not in the control group ［(2.2±1.5) cm/s vs (2.7±1.7) cm/s, P&gt;0.05］. Left ventricular ejection fraction (LVEF) three months after transplantation in BMSCs group increased significantly compared with that pre-implantation and with that of the control group at three months post-injection ［(67±11)% vs (49±9)% and (53±8)%, P&lt;0.05 respectively］. SPECT scan results showed that perfusion defect was improved significantly in BMSCs group at three-month follow-up compared with that in the control group ［(134±66)cm2 vs (185±87)cm2, P&lt;0.01］. At the same time, left ventricular end-diastolic volume ［(136±31) ml vs (162±27) ml, P&lt;0.05］ and end-systolic volume ［(63±20) ml vs (88±19) ml, P&lt;0.05］ decreased synchronously. The ratio of end-systolic pressure to end-systolic volume ［Psyst/ESV, (2.84±1.30) mmHg/ml vs (1.72±1.23) mmHg/ml, P&lt;0.05］ increased significantly. Cardiac electromechnical mapping demonstrated significant improvement at three months after implantation of BMSCs compared with that pre-injection in both cardiac mechanical capability as left line local shorting ［LLS, (11.29±1.64)% vs (7.32±1.86)%, P&lt;0.05］ and electrical property as left ventricular endocardial unipolar voltage ［UV, (10.38±1.12) mV vs (7.61±1.09) mV, P&lt;0.01］; perfusion defect decreased from (36.2±6.2) % to (20.3±5.31)% (P&lt;0.01). Twenty-four-hour electrocardiographic monitoring demonstrated no arrhythmias occurred at three-months follow-up.Conclusions The transplantation of BMSCs might improve the cardiac function and it is safe and feasible with no deaths or malignant arrhythmias.     

大鼠骨髓单个核细胞移植治疗心肌梗死

目的:探讨大鼠骨髓单个核细胞(mononuclear bone marrow cells,MBMCs)移植方法对梗死心肌的治疗效果.方法:无菌条件下取成年雄性近交系Wistar大鼠股骨和胫骨,常规抽取骨髓,分离制备MBMCs悬液.将成年雄性近交系Wistar大鼠46只随机分为空白对照组(组Ⅰ,n=10)、梗死对照组(组Ⅱ,n=18)、细胞移植组(组Ⅲ,n=18).用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,在建模后2周分别将10μl MBMCs(6×106)悬液和等量磷酸盐缓冲液(PBS)植入组Ⅱ和组Ⅲ的梗死周边区.用心脏超声观察细胞移植后4周的心脏功能改变,用免疫荧光和免疫组化及电镜观察移植细胞在心肌梗死区及梗死周边区的存活、增殖和分化情况.结果:MBMCs移植4周后,移植组超声检查左室功能重建指标如左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室前壁厚度(LVAWT)均较梗死对照组改善明显(P＜0.05);移植组血流动力学检查指标如左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室舒张压力时间变化最大速率(±dp/dtmax)也优于梗死对照组(P＜0.05).MBMCs移植6周后,大鼠心肌梗死区有移植细胞存活、增殖,并分化为有心肌细胞特征的细胞.结论:实验证实用MBMCs移植治疗心肌梗死,可以明显改善梗死后心脏功能.这一效果可能与MBMCs移植相关的心肌再生和新生血管形成有关.     

Transplantation of autologous adipose-derived stem cells ameliorates cardiac function in rabbits with myocardial infarction

Background Adipose-derived stem cells （ADSCs） are capable of differentiating into cardiomyogenic and endothelial cells in vitro. We tested the hypothesis that transplantation of ADSCs into myocardial scar may regenerate infracted myocardium and restore cardiac function. Methods ADSCs were isolated from the fatty tissue of New Zealand white rabbits and cultured in Iscove＇s modified dulbecco＇s medium. Three weeks after ligation of left anterior descending coronary artery of rabbits, either a graft of untreated ADSCs （UASCs, n=14）, 5-azacytidine-pretreated ADSCs （AASCs, n=13）, or phosphate buffer saline （n=13） were injected into the infarct region. Transmural scar size, cardiac function, and immunohistochemistry were performed 5 weeks after cell transplantation. Results ADSCs in culture demonstrated a fibroblast-like appearance and expressed CD29, CD44 and CD105. Five weeks after cell transplantation, transmural scar size in AASC-implanted hearts was smaller than that of the other hearts. Many ADSCs were differentiated into cardiomyocytes. The AASCs in the prescar appeared more myotube-like. AASCs in the middle of the scar and UASCs, in contrast, were poorly differentiated. Some ADSCs were differentiated into endothelial cells and participate in vessel-like structures formation. All the ADSC-implanted hearts had a greater capillary density in the infarct region than did the control hearts. Statistical analyses revealed significant improvement in left ventricular ejection fraction, myocardial performance index, end-diastolic pressure, and peak ＋dP/dt, in two groups of ADSC-implanted hearts relative to the control hearts. AASC-implanted hearts had higher peak -dP/dt values than did control, higher ejection fraction and peak ＋dP/dt values than did UASC-implanted hearts. Conclusions ADSCs transplanted into the myocardial scar tissue formed cardiac islands and vessel-like structures, induced angiogenesis and improved cardiac function. 5-Azacytidine pretreatment before implantation is desirable for augmenting myogenesis. Transplantation of 5-azacytidine-treated ADSCs into the myocardial scar was more efficient than that of untreated ADSCs in preservation of cardiac function.     

壳多糖对兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响

目的：研究壳多糖对体外培养的兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响。方法：将不同质量浓度（０．２,２,２０,２００,２０００μｇ／ｍｌ）的壳多糖溶液分别加入兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞培养液中,培养１２,２４,４８ｈ后用ＭＴＴ经色法测定细胞数。结果：平滑肌细胞数随着壳多糖质量浓度和作用时间的增加而减少;内皮细胞数随着其质量浓度和作用时间的增加,在一定范围内相应增加。结论：壳多糖能抑制兔主动脉平滑肌     

穹窿主体蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响?方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15% 胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测VSMCs的MVP表达水平,同时检测特异性分化标记物α-SMA和SM22α表达水平?然后用PDGF-BB刺激人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs),检测MVP的表达差异?再分别分离培养野生型小鼠和MVP敲除型小鼠的VSMCs,通过CCK8细胞增殖实验检测两者的增殖能力;同时用siRNA干扰的方法,使HAoSMCs中MVP低表达,检测其增殖能力的变化?结果:用PDGF-BB或15% FBS刺激VSMCs后,MVP表达水平呈浓度和时间依赖性下降,α-SMA和SM22α表达水平也相应降低?MVP缺失或低表达情况下,VSMCs的增殖能力均下降?结论:MVP在VSMCs增殖中起了重要作用?