肝癌患者手术前后外周血AFP mRNA定量检测的临床意义

目的：研究肝细胞肝癌患者手术前后外周血AFP mRNA表达量的变化，分析其作为微转移标记物的可行性及与复发转移的关系．方法：使用实时荧光定量RT—PCR检测64例肝细胞癌患者手术前后外周血AFP mRNA表达量，并进行平均6mo以上的随访；同时以8例肝硬化患者、4例肝增生患者、8例肝血管瘤患者和10例健康志愿者作为对照组，对比检测其外周血单核细胞AFP mRNA的表达量．结果：复发34例．HCC组的术前AFP mRNA表达量明显高于对照组．术前外周血AFP mRNA相对HCC的灵敏度为85．9％，特异性为90．3％，准确率为87．4％．HCC患者术后外周血AFP mRNA表达量明显高于术前．HCC组外周血术前、术后AFP mRNA水平表达量与术后复发转移有明显相关性，与TNM分期、血管癌栓或侵犯有相关性，但与术时肿瘤数目、癌细胞分化程度、包膜完整性均与血清AFP浓度无相关．术后HCC组外周血AFP mRNA表达量与肿瘤大小有相关性．结论：实时荧光定量RT—PCR法检测HCC患者外周血AFP mRNA表达量有很高的敏感性和特异性，可以反映HCC患者血中是否存在肝癌细胞．手术可促进部分HCC细胞脱落人血．监测外周血AFP mRNA水平对术后早期复发转移有预测价值．     

应用组织芯片技术检测GPC3蛋白在肝细胞癌及其他肿瘤中的表达

目的 研究GPC3蛋白在肝细胞癌(hepatocellular careinoma,HCC)及其他人类常见肿瘤组织中的表达.方法 应用组织芯片及免疫组化技术检测36例HCC组织、33例HCC癌旁组织以及其他人类常见肿瘤组织及其癌旁组织中CPC3蛋白的表达.结果 (1)GPc3蛋白在Hcc、肺鳞癌、癌旁慢性浅表性胃炎组织中表达.而在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌组织中无表达;(2)36例HCC组织及33例HCC癌旁组织中GPC3蛋白的表达率分别为66.7%(24/36),3.0%(1/33),两者之间差异有显著性(P<0.001);(3)HCC组织中GPC3蛋白表达与患者年龄、性别、病理分级无相关性(P>0.05).结论 GPC3蛋白在HCC、肺鳞癌组织中表达,而在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌中表达沉默,GPC3是一个值得期待的多种肿瘤特异性标志物.     

血清GPC3联合AFP检测在HCC中的临床意义

目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)在肝细胞癌(HCC)患者中的临床意义。方法采用ELISA法检测血清GPC3和血清AFP,分析72例HCC患者、58例肝良性病变组和40例健康组血清GPC3和AFP水平。结果 HCC患者血清GPC3和AFP水平显著高于肝良性病变组和健康组(P<0.05);肝良性病变组和健康组中表达无统计学意义(P>0.05)。两者表达与肿瘤大小、是否侵袭和病理分级有关(P<0.05);年龄、性别、有无HbsAg感染和包膜与两者表达无关(P>0.05)。单项检测灵敏度、准确度较低;联合检测灵敏度达84.7%,准确度达90.1%;两者在HCC中表达未存在直接关联(P>0.05)。结论联合检测血清GPC3和AFP水平有助于HCC的早期临床诊断。     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的诊断意义

目的：探讨血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式RT-PCR检测40例复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA。结果：21例伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA均表达阳性（100％）,19例复发性肝癌患者中有7例血液AFP mRNA表达阳性（36.8％),两组比较差异有显著性意义(P<0.01）。结论：血液AFP mRNA有希望成为判断肝癌复发或预测肝癌远处器官转移的客观性指标之一。     

应用组织芯片技术检测GPC3蛋白在肝细胞癌及其它肿瘤中的表达

目的 研究GPC3蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及其他人类常见肿瘤组织中的表达。方法 应用组织芯片及免疫组化技术检测36例HCC组织、33例HCC癌旁组织以及其他人类常见肿瘤组织及其癌旁组织中GPC3蛋白的表达。结果 ①GPC3蛋白在HCC、肺鳞癌、癌旁慢性浅表性胃炎组织中表达,而在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌组织中无表达;②36例HCC组织及33例HCC癌旁组织中GPC3蛋白的表达率分别为66.7% (24/36),3.0%（1/33）,二者之间差异有显著性（P＜0.001）;③HCC组织中GPC3蛋白表达与患者年龄、性别、病理分级无相关性（P＞0.05）。结论 GPC3蛋白在HCC、肺鳞癌组织中表达,而在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌中表达沉默,GPC3是一个值得期待的多种肿瘤特异性标志物。     

GPC3与AFP在肝硬化异型增生结节及肝细胞癌中的表达及意义

目的观察GPC3、AFP在肝硬化高度异型增生结节及肝细胞癌中的表达,探讨其在肝细胞癌诊断及鉴别诊断中的作用及意义.方法应用免疫组织化学Envision法检测GPC3、AFP在肝硬化高度异型增生结节、肝细胞癌及正常肝组织中的表达.结果 GPC3在进展期HCC中的表达阳性率为86.36%（38/44）,在高分化HCC中的表达阳性率为68.18%（15/22）,在肝硬化伴高度异型增生结节中的表达阳性率为45%（9/20）,在正常肝组织中无阳性表达（0/20）.AFP在进展期HCC中的表达阳性率为47.72%（21/44）,在高分化HCC中的表达阳性率为27.27%（6/22）,在肝硬化伴高度异型增生结节中的表达阳性率为15%（3/20）,在正常肝组织中无阳性表达（0/20）.结论 GPC3是一个较敏感及特异的标记物,可以和AFP联合应用协助诊断肝细胞癌.     

肝细胞癌患者血液AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝细胞癌患者血液甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍｒＲＮＡ检测的临床意义。方法：取９３例肝癌患者,１５例肝炎后肝硬化患者,１２例慢性肝炎患者及１０例健康人静脉血各５ｍｌ,应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测其周围静脉血中ＡＦＰｍＦＮＡ。结果：在５０个肝癌血标本中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中未检测到１例。ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显     

GPC3和CD44v6在肝细胞癌组织中的表达及其意义

[摘要]　目的　检测GPC3和CD44v6在肝细胞癌组织中的表达,并探讨其在肝细胞癌鉴别诊断中的临床应用价值。　方法　采用免疫组化方法,检测38例肝细胞癌（高分化组、中分化组、低分化组）及癌旁肝硬化组织石蜡标本中GPC3蛋白和CD44v6蛋白的表达;分析两种蛋白表达的相关性。　结果　GPC3和CD44v6蛋白在肝细胞癌中的表达阳性率（84.2%和84.2%）显著高于癌旁肝硬化组织（0%和0%）（P<0.01）。肝细胞癌高分化组、中分化组、低分化组同癌旁肝硬化组比较差异均有显著性意义,P<0.05。GPC3与CD44v6在肝细胞癌组织中的表达呈正相关（r=0.502,P<0.001）。　结论　GPC3联合CD44v6可能有助于肝细胞癌的鉴别诊断。     

甲胎蛋白异质体AFP—L3测定的临床意义

目的 探讨甲胎蛋白异质本ＡＦＰ－Ｌ３检测的临床意义。方法 采用扁豆凝集素亲和交叉免疫电泳自显影法，将血清甲胎蛋白（ＡＦＰ）分为ＡＦＰ－Ｌ１，ＡＦＰ－１２，ＡＦＰ－Ｌ３３条电泳带，结果 肝细胞癌（ＨＣＣ）患者的ＡＦＰ－Ｌ３阳性率为５９．６％，显著高于肝硬化（５．４％）等良性肝病组。其中ＡＦＰ－Ｌ３阳性的２例肝硬化患者均在以后观察阶段被诊断为ＨＣＣ，且ＡＦＰ－Ｌ３显示阳性，提示肝癌的存在和发生，先于Ｂ     

β-catenin、GS及GPC3在肝细胞癌中的表达及意义

目的观察β-catenin、GS及GPC3在肝细胞癌中的表达,探讨它们在肝细胞癌(HCC)诊断中的价值。方法 应用免疫组化EnVision法检测87例HCC、40例肝内胆管细胞癌(ICC)和70例癌旁良性肝组织中β-catenin、GS及GPC的表达。结果 ①β-catenin、GS及GPC在HCC中的阳性率分别为72.41%、87.36%和73.56%;在ICC中的阳性率分别为70.0%、40.0%和2.5%;在癌旁良性肝组织中的阳性率分别为15.71%、5.71%和2.86%;β-catenin、GS及GPC3在HCC组织中的表达显著高于癌旁良性肝组织(P＜0.05);GS及GPC3在HCC组织中的表达显著高于ICC肝组织(P＜0.05)。②仅GPC3在HCC不同病理分化程度有统计学意义(P<0.05)。③在HCC中β-catenin及与GPC3表达呈正相关(rs=0.229,P<0.05),β-catenin及与GS的表达不具有呈不相关性(rs=0.164,P＞0.05),GS及与GPC3蛋白表达不具有相关性呈不相关(rs=0.153,P＞0.05)。结论 β-catenin、GS及GPC异常表达在HCC的发生、发展中具有重要作用;GS联合GPC3有助于鉴别HCC、ICC及癌旁良性肝组织。     

血清GPC3联合AFP检测对原发性肝癌介入化疗疗效的评价

目的 评价原发性肝癌患者经导管动脉化疗栓塞术(TACE)前后血清磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3,GPC3)、甲胎蛋白(AFP)的变化及其对疗效判断的临床价值.方法 32例接受TACE治疗的原发性肝癌患者纳入研究.分别在术前、术后1个、2个月及半年采用酶联放射免疫法检测血清GPC3、AFP水平.32例健康体检者作为正常对照组同法检测血清GPC3、AFP水平.检测结果采用t检验及方差分析统计处理.结果 原发性肝癌患者TACE治疗前的血清GPC3及AFP水平均显著高于正常对照组(P<0.05);经1～3次TACE治疗后,有效组患者血清GPC3及AFP水平较治疗前显著降低(P<0.05),而无效组变化不明显;GPC3+AFP更能反映疗效.结论 GPC3与AFP均是较好的判断原发性肝癌患者TACE疗效的生化指标.GPC3+AFP联合使用,对判断疗效和预后更有价值.     

GPC3、VEGF、nm23对肝细胞癌转移的诊断评价

目的评价磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）、血管内皮生长因子（VEC,F）、转移抑制因子（nm23）在肝细胞癌转移中的诊断价值。方法采用免疫组织化学技术检测3标记物在54例HCC组织（27例HCC转移、27例HCC未转移）中的表达,比较单项和多项蛋白联合检测的准确性。结果3标记物在HCC转移组和未转移组中阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．05）。单项检测GPC3、VEGF、nm23的ROC曲线下面积（AUC）为0．646（P〈O．05）、0．838（P〈0．05）、O678（P〈0．05）。任意2指标联合检测有助于提高HCC转移组的检出率,其中以GPC3和nm23组合最能提高诊断敏感性和特异性,3指标联合应用时,检出率迭100％。结论合理选择多指标联合检测对HCC复发转移的判断有重要意义。     

RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

目的观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制。方法设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响;通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达。结果设计合成的GPC3siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72h的表达高于未转染组,96h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关。进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

GPC3特异性HLA-A11限制的T淋巴细胞表位肽免疫活性检测

目的设计合成人类白细胞抗原（HLA）-A11限制性T细胞识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）多肽,并检测其免疫原性和反应性。方法利用BIMAS和SYFPEITHI评分系统评价GPC3多肽与HLA-A11分子的结合能力,预测出相应的抗原谱,合成HLA-A1101限制性GPC3多肽库;流式细胞仪检测HCC患者HLA-A11分子的表达;多肽刺激外周血淋巴细胞,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测T细胞对GPC3多肽的反应性。结果流式细胞仪检测32例HCC患者,7例HLA-A11分子表达阳性（21.9%）;ELISPOT检测发现17例（53.1%）HCC患者的T细胞应答阳性,7例（21.9%）HLA-A11表型检测阳性的HCC患者,T细胞应答结果成强阳性。HLA-A11限制性GPC3多肽应答率符合人群中相应基因位点的自然表达率。结论 GPC3多肽设计合理,具有良好的免疫原性和反应性。     

GPC3启动子报告基因载体构建与转录活性分析

目的 构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)启动子荧光素酶报告基因载体,并验证其转录活性.方法 以人类基因组DNA为模板,PCR扩增GPC3启动子基因片段,克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上,通过转染HepG2细胞检测荧光素酶活性来验证GPC3启动子的转录活性.结果 GPC3基本启动子和全长启动子分别成功构建到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中,GPC3基本启动子具有很强的转录活性,而全长启动子的转录活性比基本启动子高4倍以上.结论 成功构建了GPC3启动子荧光素酶报告基因载体,为研究GPC3转录调控提供了重要手段.     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)在原发性肝癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化法检测45例手术切除的原发性肝癌及癌旁组织中GPC3的表达水平,比较原发性肝癌不同临床病理特征中GPC3的表达差异,分析GPC3表达与临床和病理因素的相关性.结果 肝癌组织GPC3表达评分[(10.3±2.5)分]显著高于癌旁组织[(3.2±0.8)分],差异有统计学意义(P＜0.05);不同性别、年龄组间GPC3蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而不同临床分期、肿瘤直径及有无转移患者比较,差异有统计学意义,GPC3在临床分期晚、肿瘤直径大、分化程度低及远处有转移的患者肝癌组织中表达强度增高(P＜0.05).logistic回归分析显示,PHC患者肝癌组织中GPC3表达与临床分期、肿瘤直径、分化程度及远处有转移等因素紧切相关(OR=0.623～0.960,P＜0.05).结论 GPC3蛋白在肝癌组织中呈高表达状态,对于其病情的诊断及预后评估具有重要价值.     

外周血GPC3与PEG10 mRNA检测对肝细胞癌转移的诊断价值

目的 研究外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)与遗传印迹基因(PEG10)mRNA检测对肝细胞癌(HCC)转移的诊断价值.方法 30例HCC患者分为HCC转移组(n=18)和HCC未转移组(n=12),另选取11例肝硬化患者作为对照.以SYBRGreen I作为荧光信号,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ RT-PCR)检测三组患者外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达,应用ROC曲线和诊断性能专用指标评价两者预测诊断及排除诊断的价值.结果 HCC转移组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达显著高于HCC未转移组和肝硬化组(P<0.05);HCC未转移组与肝硬化组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的表达比较差异无统计学意义.单项检测GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的诊断灵敏度分别为66.7%和72.2%,特异度均为91.7%,ROC曲线下面积(AUC)为0.748和0.812;两基因检测平行试验的灵敏度为90.7%,特异度为84.0%,阴性似然比为0.11,诊断准确率为83.3%;系列试验的灵敏度为60.5%,特异度为98.7%,阳性似然比为45.5,诊断准确率为73.3%.结论 检测外周血GPC-3mRNA和PEG10 mRNA对估计肝癌有无血行播散和肝外转移有一定的价值,且PEG10 mRNA优于GPC-3 mRNA.两者联合系列试验有助于HCC外周血转移的预测诊断.     

外周血GPC3与PEG10mRNA检测对肝细胞癌转移的诊断价值

目的研究外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）与遗传印迹基因（PEG10）mRNA检测对肝细胞癌（HCC）转移的诊断价值。方法30例HCC患者分为HCC转移组（n=18）和HCC未转移组（n=12）,另选取11例肝硬化患者作为对照。以SYBR Green I作为荧光信号,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQRT—PCR）检测三组患者外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达,应用ROC曲线和诊断性能专用指标评价两者预测诊断及排除诊断的价值。结果HCC转移组GPC-3mRNA和PEG10 mRNA表达显著高于HCC未转移组和肝硬化组（P〈0．05）;HCC未转移组与肝硬化组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的表达比较差异无统计学意义。单项检测GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的诊断灵敏度分别为66．7％和72．2％,特异度均为91．7％,ROC曲线下面积（AUC）为0．748和0．812;两基因检测平行试验的灵敏度为90．7％,特异度为84．0％,阴性似然比为0．11,诊断准确率为83．3％;系列试验的灵敏度为60．5％,特异度为98．7％,阳性似然比为45．5,诊断准确率为73．3％。结论检测外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA对估计肝癌有无血行播散和肝外转移有一定的价值,且PEG10 mRNA优于GPC-3 mRNA。两者联合系列试验有助于HCC外周血转移的预测诊断。