实验性脑出血血肿周围组织的细胞凋亡

目的 观察实验性脑出血血肿周围组织的细胞凋亡情况。方法 采用犬脑内注入非肝素化的自体动脉血建立实验性脑出血动物模型。分别在术后6h、24h、48h、72h和7d处死动物，取脑，制成单细胞悬液，流式细胞仪检测凋亡细胞的百分率。结果 注血后实验动物有类似于自发性脑出血的行为变化，大体和光镜下符合脑出血后的病理改变。血肿形成后上述各时间点凋亡细胞所占百分率分别为：9.69％、15．47％、25.67％、29．06％和37．46％。结论 犬脑内注入非肝素化的自体动脉血可建立实验性脑出血的动物模型。血肿形成后6h即可检测到凋亡细胞的存在，血肿周围组织中凋亡细胞所占的比例在7d内随时间延长逐渐增加。     

头部局部亚低温对实验性脑出血大鼠脑组织TNF-α、NF-κB影响的研究

目的 建立大鼠实验性脑出血(1CH)模型,研究头部局部亚低温对大鼠脑组织炎性细胞因子和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,从而探讨头部局部亚低温的脑保护作用.方法 选用Wistar大鼠,采用大鼠脑内缓慢注入非肝素化自体血的方法,建立实验性ICH动物模型.随机分为亚低温组、常温组、假手术组.亚低温组在建立模型后立即应用头部局部亚低温治疗48h.48h后用HE染色法观察实验组与对照组脑组织的病理变化,用免疫组化法研究肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、NF-κB在各组表达的差异.结果 成功地建立了大鼠实验性ICH模型.ICH后48h,亚低温组血肿周围炎细胞较常温组显著减少,脑组织水肿明显轻于常温组,胶质细胞反应较轻,周围小血管出血现象轻于常温组.常温组血肿周围及注血侧皮质、胼胝体、脉络丛内TNF-α、NF-κB表达较假手术组明显增多(P＜0.01),亚低温组的表达较常温组有显著减少(P＜0.05).结论 (1)大鼠脑内缓慢注入非肝素化自体血,可建立可靠、重复性好的实验性ICH动物模型.(2)大鼠ICH急性期脑组织内NF-κB和前炎性细胞因子TNF-α显著增加.(3)头部局部亚低温治疗可以抑制大鼠ICH后脑组织TNF-α和NF-κB的表达.(4)头部局部亚低温治疗在抑制实验性ICH炎症反应方面的脑保护作用与它抑制NF-κB的表达有关.     

大鼠自体动脉血脑出血动物模型的建立

目的:建立大鼠自体动脉血液脑出血模型,研究脑出血后大鼠行为学改变、脑水肿的变化规律。方法:参照Yang、Lee及Hua等方法,应用立体定向技术,用大鼠自体尾动脉不抗凝动脉血液50μl缓慢注入大鼠尾状核,制成中等量脑出血,通过动脉观察其行为学改变和脑水肿的变化规律建立稳定的脑出血动物模型。结果:对32只大鼠脑出血动物模型采用Longa评分法、肢体对称试验评分法、Berderson评分法和平衡木评分法进行评分,结果显示,大鼠脑出血后其行为学改变与对照组有显著性差异。脑出血周围组织含水量明显高于对照组,病变侧高于病变对侧脑组织,以出血后48～72h最明显。结论:大鼠自体动脉血脑出血后有一系列的行为学改变,其行为学改变能够反映脑血肿对神经功能影响的严重程度和病情的轻重,大鼠自体动脉血脑出血动物模型是比较理想的实验性脑出血模型。     

实验性脑出血急性期灶周组织水肿及炎性细胞因子的表达

目的 研究脑出血血肿周围脑组织炎性细胞因子的表达,探索其动态变化规律及与脑水肿的关系.方法 采用Wistar大鼠脑内缓慢注入自体血的方法建立实验性脑出血动物模型;随机分为6组,测定实验性脑出血6h、12h、24h、3d、5d、7d时间点血肿周围脑组织的含水量;应用免疫组化法及免疫印迹法(Western Blot)观察血肿周围脑组织中细胞因子IL-6、TNFα的表达.结果 脑出血后血肿周围脑组织的含水量逐渐增加,于3d达高峰;免疫组化染色显示血肿周围组织中神经细胞、血管内皮细胞均有IL-6及TNFa的阳性表达.免疫印迹半定量分析显示脑出血后6h血肿周围脑组织中即可见IL-6、TNFα较高水平的表达,24h达高峰,此后逐渐下降.结论脑出血急性期(6h)II-6及TNFα参与了血肿周围脑组织的损伤过程.IL-6变化曲线与脑水肿曲线呈现出一致性,推测其参与了血肿周围水肿的形成.     

幼猪脑出血模型的建立与评价

目的探索建立稳定、可靠、重复性好的幼猪脑内血肿模型。方法利用未肝素化自体血制作幼猪脑基底节区血肿。实验分缓慢注射组(n=12)和快速注射组(n=12),通过取脑切片,采用计算机图像分析系统计算各组脑内血肿体积,同时观察血肿周围组织病理变化,从而评价两种注射法的差异。结果缓慢注射法(二次注入法)可形成较稳定、形态规则的血肿,无蛛网膜下腔和脑室积血表现,脑内血肿体积(1.84±0.28)cm3。快速注射组血肿易破入蛛网膜下腔和脑室内,脑内血肿体积(1.13±0.48)cm3,两种注射法所形成的脑内血肿大小比较差异有统计学意义(P<0.05)。而两组血肿周围脑组织病理形态学表现均为血肿周围白质疏松水肿与炎性细胞侵润。结论采用缓慢注射法(二次注入法),将未肝素化自体血缓慢匀速注入幼猪脑基底节区,可形成稳定、可靠、重复性好的脑内血肿模型。     

脑出血24h后不同蛋白酶激活受体表达的初步筛查

目的初步探讨脑出血后血肿周围组织的不同蛋白酶激活受体（PARs）的表达情况。方法Wistar大鼠20只,随机分为脑出血组（采用2次注血/2次退针法建立脑出血大鼠模型,右侧尾状核注入自体血50μL）和对照组（右侧尾状核注人生理盐水50μL）。术后24h将大鼠处死取脑,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色（间接法）检测血肿周围组织PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4阳性细胞的表达情况。结果①脑出血组,出血后24h血肿周围组织PAR-1表达明显增多,与对照组比较P〈0．01。②恼出血组,出血后24hPAR-2主要在血管内皮细胞表达,与对照组比较无明显差异。③脑出血组,出血后24h无PAR-3、PAR-4荧光表达,与对照组比较无明显差异。结论脑出血24h后血肿周围组织PAR-l表达增加。     

亚低温对脑出血后凝血酶受体Ⅰ表达影响的实验研究

目的观察亚低温对大鼠自体血注入法脑出血模型凝血酶受体(PAR-1)表达的影响,探讨亚低温减轻脑出血后脑水肿的可能机制。方法雄性SD大鼠108只,随机分为生理盐水组、脑出血组和脑出血 亚低温组。每组分为脑出血后24h、72h和7d共3个亚组。脑出血 亚低温组于注血后给予6h亚低温治疗。各组于注血后24h、72h和7d断头取脑组织,测定脑水含量(干湿重法),检测脑内血肿周围微血管壁上PAR-1的表达(免疫组化学法)。结果脑出血组血肿周围微血管壁上PAR-1的表达高于生理盐水组(P<0.05)。亚低温组血肿周围微血管壁上PAR-1的表达低于脑出血组(P<0.01)。同时,亚低温组脑水含量在各时间点与脑出血组比较明显下降(P<0.01)。结论脑出血后血肿周围微血管壁上PAR-1的表达增加,其变化与脑水肿的变化一致,说明PAR-1参与了脑出血后脑水肿的形成;亚低温可能通过抑制出血后微血管壁上PAR-1的表达来发挥其脑保护作用。     

大鼠脑出血后脑组织转铁蛋白表达的实验研究

目的　探讨大鼠自发性脑出血 (ICH)后不同时间脑组织中转铁蛋白 (Tf)的表达及其规律。方法　采用立体定向技术注入自体不凝血建立实验性大鼠ICH模型 ,在不同时间断头取脑 ,免疫组化染色检测脑组织中Tf阳性细胞的表达并与对照组比较。结果　ICH后 6h血肿周围及同侧大脑皮质Tf阳性细胞的表达增高 ,72h达高峰 ,然后下降 ,但第 7d时仍高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　ICH后血肿周围和同侧大脑皮质Tf阳性细胞表达增高 ,推测Tf可能参与了ICH后神经元的保护并减轻迟发性脑水肿     

胞磷胆碱钠对实验性大鼠脑内血肿周围区细胞凋亡影响的研究

目的研究脑出血(ICH)后血肿周围区细胞凋亡的时间规律及胞磷胆碱钠治疗对血肿大小、细胞凋亡的影响.方法自体非抗凝动脉血注入大鼠右侧尾壳核制作脑内出血模型;腹腔注射胞磷胆碱钠或生理盐水;按多田公式估算血肿体积;流式细胞仪检测血肿周围区细胞凋亡率.结果大鼠脑内出血后6 h 血肿周围区出现细胞凋亡,72 h达高峰,4周时有少量凋亡细胞存在;对应的相同时间点给药组与对照组大鼠脑内血肿体积比较无显著差异(P>0.05);除6 h外余各时间点均显示给药组细胞凋亡率低于对照组,尤以72 h组为甚(P<0.01).结论脑内出血后血肿周围脑组织发生细胞凋亡且有时间规律性;胞磷胆碱钠早期治疗实验性大鼠脑内出血不引起血肿扩大,且可减少血肿周围区细胞凋亡.     

兔脑出血后血肿周围组织ATP和乳酸含量及磷酸果糖激酶活性变化

目的　观察兔脑出血后血肿周围组织能量代谢产物的变化规律。方法　健康大耳白家兔采用随机数字法分成 3组 :正常组 ,脑出血组 ,假手术组。其中脑出血、假手术组又分成 1、6、12、2 4、4 8、72h组。采用二次注血法制备兔自体血脑出血模型。分离血肿周围组织 ,测定脑水含量、能量代谢产物三磷酸腺苷 (ATP)和乳酸的含量以及磷酸果糖激酶活性变化。结果　脑出血 1h血肿侧即有脑水肿 ,至 72h逐渐加重 ,血肿侧明显重于对侧。 1h后血肿周围组织ATP含量呈中度下降 ,但差异无显著意义。 1～ 12h间ATP含量略有波动 ,12h后再次下降 ,至 2 4h达最低点 [(13 2 9± 2 92 )μg/ g ,降至正常的 5 8% ],差异有显著意义。 2 4h至 72h间无明显变化。乳酸含量于 1h即有增高 ,12h达高峰 [(2 1 0 1± 0 18) μmol/g],直至 72h乳酸水平 [(12 89± 0 2 5 ) μmol/g]仍明显高于正常组及假手术组。磷酸果糖激酶 (PFK)活性 1h即有下降 [(3 98± 0 0 2 )U/mg],72h内持续下降。与正常组及假手术组比较差异有显著意义。结论　脑出血后血肿周围组织在 2 4h后才发生明显的能量代谢衰竭 ,滞后于脑水肿的发生 ,其发生机制可能与相关酶的活性减低有关     

脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系

目的 探讨脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系.方法 48只大鼠采用自体不凝血注入法制备脑出血模型,随机分为8组:假手术组、脑出血6h组、脑出血12h组、脑出血24h组、脑出血48 h组、脑出血72 h组、脑出血1周组和脑出血2周组.分别在相应时间点断头取脑,进行脑组织含水量测定和HE染...     

大鼠实验性脑出血后脑组织中c-fos基因的表达与局部脑血流的改变

目的 探讨大鼠实验性脑出血后脑组织中即刻早期基因c-fos的表达和局部脑血流的变化。方法 采用Nath改良法建立大鼠脑出血模型；免疫组化法及RT－PCR法测定其脑组织中fos蛋白和c-fos mRNA的表达；氢清除法测定其局部脑血流。结果 大鼠血肿周围区（基底节）在脑出血后1小时即出现fos蛋白的表达，至3小时达高峰；c-fos mRNA于出血后1小时达表达高峰,至3小时后仍有较高水平的表达；出血后1小时全脑的的血流量均下降，4小时恢复至对照组水平，并维持至出血后24小时，随着的24小时内再次出现脑血流下降。结论 大鼠脑出血后，血肿周围区和双侧皮质区的脑组织中存在着c-fos基因的快速而长久的诱导表达。局部脑血流的下降相对短暂，且脑血流的下降在时程上与c-fos基因的表达不相一致。     

补体在脑出血后脑组织损伤机制中的作用

目的研究补体C9在大鼠实验性脑出血(ICH)后血肿周围组织中的表达情况,探讨补体C9在ICH后脑水肿中的作用以及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后对血肿周围组织C9表达及脑组织含水量变化的影响。方法采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备ICH模型,将动物分为假手术组、出血组和CVF干预组,分别在不同时间断头取脑,连续切片分别作补体C9免疫组化染色和HE染色,并进行脑组织含水量测定(干湿重法)。结果ICH后2h血肿周围脑组织开始表达C9,24h达高峰。血肿周围脑组织含水量在ICH后2h开始增加(P<0.05),6h明显增加,24～72h达高峰(P<0.01),此后逐渐回落,1周基本恢复正常水平,脑组织含水量与C9的表达呈正相关关系(r=0.938,P<0.01);对侧半球相应部位及假手术对照组脑组织含水量没有明显变化;经CVF干预后,血肿周围组织C9表达明显下降,干预组与出血组之间比较有显著差异(P<0.01)。CVF干预组脑组织含水量明显低于常规ICH组(P<0.01)。结论脑出血后补体级联激活C9表达明显增加,并证明通过CVF干预后,C9表达下降,脑水肿减轻,能达到神经保护作用。     

脑出血后脑水含量变化及铁络合剂的作用

目的探讨脑出血后脑水肿的发生机制及铁络合剂的作用。方法将0．3ml自体血和0．3ml自体血 100mg去铁胺分别注入兔的两侧额叶,测定血肿周围脑组织的水含量。结果自体血注射后4h开始出现水肿,72h达高峰;去铁胺可减轻其水肿程度。结论红细胞在脑出血后脑水肿的形成中起重要作用;铁络合剂可减轻脑出血后脑水肿。     

实验性脑出血血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达及其与脑水肿的关系

目的探讨实验性脑出血(ICH)血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达及其与脑水肿的关系。方法采用自体血注入法建立大鼠ICH模型,制模后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、7d共9个时间点分别用干湿重法测血肿周围脑组织含水量,伊文思蓝(EB)检测血-脑屏障(BBB)通透性,Western Blot方法检测血肿周围组织的TIMP-1的表达;分析三者间的关系,并与假手术组相比较。结果与假手术组比较,ICH后各时间点血肿周围脑组织含水量和EB含量均明显增加(P<0.05～0.01),均于ICH48h达到高峰,且二者呈正相关(r=0.940,P<0.01);TIMP-1在ICH12～36h表达明显减低,ICH1～24h TIMP-1表达量与脑组织含水量以及EB含量呈负相关(r=-0.922,-0.950,均P<0.05)。结论大鼠ICH后血肿周围脑组织TIMP-1表达下调,可能促进了ICH早期的脑水肿形成。     

Acute gastric changes after intracerebral hemorrhage in rats

Severe intracerebral hemorrhage (ICH) produces gastric pathology in about 30% of the patient population, even after the standard treatment of H2 receptor blockers or proton pump inhibitors. This study was undertaken to establish a rat model of ICH-induced gastric ulcer. Adult male Sprague-Dawley rats (300-350 g) were divided into two hemorrhage groups and a sham control group. ICH was produced either by injection of 100 microl of autologous arterial blood or by injection of 4 microl saline containing 0.6 unit of bacterial collagenase VII into the right basal ganglia. Rats were sacrificed at 24, 48, 72 h, and 7 days after ICH to harvest brains and stomachs. Greater degrees of hemorrhage and brain edema were observed in collagenase-induced ICH. Motor behavior decreased significantly after 24 h in both models. The incidence of acute ulceration with destruction of the forestomach epithelium was extremely low at 8.7% in the collagenase injection model and 4.8% in the blood injection rats. Small, pinpoint hemorrhages (petechiae) were noticed in 38% of rats after blood injection and 22% after collagenase injection, in the glandular portion of the gastric mucosa with penetration of red blood cells and inflammatory cells into the gastric mucosa. Enhanced tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) and cyclooxygenase 2 (COX-2) expressions were observed in gastric tissues after ICH with more intense staining occurring at 24 and 48 h. Due to the low incidence of ulceration, ICH-induced gastric ulceration in rodents may not appropriate for evaluating the potential human risk of gastric ulceration after ICH.     

Comparison of cerebral blood flow and injury following intracerebral and subdural hematoma in the rat

Subdural hematomas (SDH) can induce ischemia and neuronal damage in the underlying cortex. However, the extent to which intracerebral hematomas (ICH) produce reductions in cerebral blood flow (CBF) sufficient to cause ischemic damage is uncertain. Intracranial hemorrhage was induced by the injection of 100 or 200 microl of blood into the subdural space (SDH) or into the caudate nucleus (ICH) of the rat. CBF was measured using [14C]-iodoantipyrine autoradiography at 4 h. Brain damage was measured using 2,3, 5-triphenyl tetrazolium chloride (TTC) staining at 24 h and brain edema was measured using the wet/dry weight method. Brain ion contents were measured at 24 h using a flame photometer and chloridometer. In the CBF studies, the volume of tissue perfused below the ischemic threshold (<20 ml/100 g/min) for SDH was 122+/-35 mm3 (sham: 3.3+/-1.7 mm3). Following ICH, there was a small volume of tissue perfused below the ischemic threshold 50+/-11 mm3 (sham: 3. 3+/-2.5 mm3) but this volume corresponded closely to the volume of clot (71+/-5 mm3). The extent of brain damage, measured by TTC staining, in the cerebral cortex correlated with the increasing volume of the subdural blood clot (sham: 9+/-3 mm3; 200 microl: 81+/-19 mm3; P<0.01). Conversely, minimal brain damage was detected following ICH. The injection of blood into the subdural space or into the brain parenchyma induced blood volume-dependent increases in brain water content at 24 h. Increases in brain water content after SDH, were confined to the cerebral cortex (sham: 0.1+/-0.1 g/g dry weight; 200 microl: 0.8+/-0.3 g/g dry weight; P<0.001). In contrast, increases in brain water content after ICH were predominantly in the subcortical region (sham: 0.1+/-0.1 g/g dry weight; 200 microl: 0.4+/-0.2 g/g dry weight; P<0.01). The present investigations demonstrate differences in CBF, brain injury and edema formation following SDH and ICH indicating that these conditions may require different therapeutic interventions.     

HNG抗脑出血炎性损伤的神经保护作用

目的 研究[Gly14]-humanin(HNG)对脑出血(ICH)模型大鼠的神经保护作用. 方法 将健康雄性SD大鼠30只采用随机数字表法分为HNG治疗组(10只)、模型组(10只)、假手术组(10只),立体定向注射自体血制作ICH模型,假手术组仪插入针,HNG治疗组大鼠在造模后侧脑室注射HNG,72 h后观察血肿周围胶质细胞和凋亡细胞的变化. 结果 术后72 h,HNG治疗组星形胶质细胞和小胶质细胞形态与模型组比较胞体小,突起短、细;HNG治疗组血肿周围胶质纤维酸性蛋白GFAP、OX42阳性细胞数以及凋亡细胞数量005.3±10.19,173.2±21.72.26.1±5.97)较模型组(141.8±9.77,212.2±15.38,48.6±10.94)明显减少,但仍高于假手术组,差异有统计学意义(P均<0.05). 结论 HNG在大鼠ICH后血肿周围脑组织中具有抗炎症性神经保护作用.     

Impaired cerebral autoregulation 24 h after induction of transient unilateral focal ischaemia in the rat

Cerebral blood flow (CBF) and cerebral autoregulation have been investigated 24 h after transient focal ischaemia in the rat. Cerebral blood flow was measured autoradiographically before and during a moderate hypotensive challenge, to test autoregulatory responses, using two CBF tracers, (99m)Tc-d,l-hexamethylproyleneamine oxide and 14C-iodoantipyrine. Prior to induced hypotension, CBF was significantly reduced within areas of infarction; cortex (28 +/- 20 compared with 109 +/- 23 mL/100 g/min contralateral to ischaemic focus, P = 0.001) and caudate (57 +/- 31 compared with 141 +/- 32 mL/100 g/min contralaterally, P = 0.005). The hypotensive challenge (mean arterial pressure reduced to 60 mmHg by increasing halothane concentration) did not compromise grey matter autoregulation in the contralateral hemisphere; CBF data were not significantly different at normotension and during hypotension. However, in the ipsilateral hemisphere, a significant volume of cortex adjacent to the infarct, which exhibited normal flow at normotension, became oligaemic during the hypotensive challenge (e.g. frontal parietal cortex 109 +/- 15% to 65 +/- 15% of cerebellar flow, P < 0.01). This resulted in a 2.5-fold increase in the volume of cortex which fell below 50% cerebellar flow (39 +/- 34 to 97 +/- 46 mm3, P = 0.003). Moderate hypotension induced a significant reduction in CBF in both ipsilateral and contralateral subcortical white matter (P < 0.01). In peri-infarct caudate tissue, CBF was not significantly affected by hypotension. In conclusion, a significant volume of histologically normal cortex within the middle cerebral artery territory was found to have essentially normal levels of CBF but impaired autoregulatory function at 24 h post-ischaemia.