游离脂肪酸抑制大鼠肝细胞胰岛素受体和胰岛素受体底物-1酪氨酸磷酸化

目的　探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响胰岛素在肝细胞内的信号传导。方法　分离培养Ｗｉｓｔａｒ 大鼠肝细胞,以软脂酸（０ ．２５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ） 或油酸（０．１２５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ） 与肝细胞共同孵育６ 、１２ 、２４ 小时,提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１） 的蛋白水平,同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化程度。结果　（１） 软脂酸和油酸实验组肝细胞的胰岛素受体蛋白表达量在各个时间点均无改变。（２） 肝细胞与软脂酸和油酸共同孵育１２ 和２４ 小时后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。（３） 肝细胞与软脂酸或油酸共同孵育６ 小时,ＩＲＳ１ 蛋白量无明显变化,而１２ 和２４ 小时后则显著降低。（４）软脂酸和油酸实验组的肝细胞在胰岛素刺激后ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论　游离脂肪酸可能通过抑制ＩＲＳ１蛋白表达、胰岛素受体和ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导,引起胰岛素抵抗。     

胰岛素作用相关的蛋白酪氨酸磷酸酶及其抑制剂

胰岛素作用相关的蛋白酪氨酸磷酸酶及其抑制剂尹义存邹大进综述胰岛素受体（ＩＮＳＲ）是受胰岛素（ＩＮＳ）调节的酪氨酸蛋白激酶（ＰＴＫａｓｅ）。该受体与ＩＮＳ结合后发生自身磷酸化。受体调节区的某些位点的磷酸化最终可导致内在的酪氨酸（Ｔｙｒ）磷酸转移酶的激...     

酶联免疫吸附法检测胰岛素的初步研究

报道ＥＬＩＳＡ竞争法检测人血清胰岛素与人胎胰组织培养液内胰岛素含量，应用自制的胰岛素抗体，豚鼠ＩｇＧ抗体及酶标记胰岛素。本方法可检测的范围是５～４８６０ｐｍｏｌ／Ｌ，非特异性结合ＯＤ＜０．０４，方法回收率为１０６％，批内ＣＶ５．９％，批间ＣＶ７．４％。３０例正常人空腹血清胰岛素均值４５ｐｍｏｌ／Ｌ，与放射免疫分析法比较，其相关系数ｒ＝０．９６７３。     

血清甲状腺激素（T3,T4）的固相酶联免疫测定——方法学探…

本实验用β－半乳糖苷酶分别标记Ｔ３及Ｔ４，均获得具有良好酶活性及免疫原活性的酶－抗原结合物。以国产聚苯乙烯微孔板为固相载体，建立了血清Ｔ３及Ｔ４的固相酶联免疫测定法。方法学检测数据如下：最小检出量，Ｔ３为０．０２ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｔ４４．０ｎｍｏｌ／Ｌ；回收率，Ｔ２为１．０２，Ｔ４０．９８；批内变异系数，Ｔ３为７．２％，Ｔ４５．３％；批间变异系数，Ｔ３为８．２％，Ｔ４１０．５％；两种抗血清对相应抗原的     

胰岛素抵抗机制的探研——阻断型胰岛素抗体是导致胰岛素抵抗的原因之一

目的　探讨胰岛素抗体导致胰岛素抵抗发生的机制。方法　利用单抗制备技术和酶联免疫方法获得１７ 株抗人胰岛素单克隆抗体（ＭＡｂｓ） ,测定这些抗体阻断胰岛素与其受体结合、抑制ＣＨＯ 细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌｌｓ）上胰岛素受体自身磷酸化、以及免疫结合共价交联的胰岛素胰岛素受体的能力。结果　在这组ＭＡｂｓ 中,多数ＭＡｂｓ（１６／１７）阻断胰岛素与其受体结合或抑制ＣＨＯ细胞上胰岛素受体自身磷酸化,其识别胰岛素上的位点与胰岛素的受体结合区域相重叠。有１ 株ＭＡｂ 具有免疫结合已与受体交联的胰岛素的能力,但不阻断胰岛素的作用。结论　在胰岛素抗体阳性的糖尿病患者中,其胰岛素抗体的识别位点对胰岛素抵抗的发生有重大作用。     

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B与胰岛素信号转导

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)作用于胰岛素受体，胰岛素受体底物(IPS)1、2，生长因子受体结合蛋白(Grb)2，磷脂酰肌醇3激酶(PBK)等与胰岛素信号转导相关的蛋白，使它们的磷酸化酪氨酸残基脱磷酸，衰减胰岛素信号转导，从而产生受体后胰岛素抵抗。PTP-1B(-／-)小鼠、钒盐衍生物等PIRlB抑制剂在不同程度上能增强胰岛素敏感性，促进外周肌肉、脂肪组织对葡萄糖的摄取氧化，增加肝脏糖原合成，降低ob／oh小鼠的血糖。PIR-1B可能会成为治疗2型糖尿病与肥胖症的新靶点。     

高血压性心脏病抗G-蛋白偶联β_1-肾上腺素能受体与M_2-胆碱能受体自身抗体的初步研究

目的抗心肌β１和Ｍ２的自身抗体是否与高血压性心脏病有关。方法以心脏Ｇ－蛋白偶联受体β１和Ｍ２细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原，应用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术检测４４例高血压性心脏病（ＨＣＤ）患者、３６例单纯性高血压患者和４１例正常人（对照组）血清中抗β１和Ｍ２受体的自身抗体。结果抗心肌β１受体自身抗体的检出率，高血压性心脏病患者为４７．７％（２２／４４），显著高于高血压患者１１．１％（４／３６）与正常人１２．１（５／４１）；抗心肌Ｍ２受体自身抗体的检出率，高血压性心脏病患者为４５．５％（２０／４４），显著高于高血压患者８．３％（３／３６）与正常人９．８％（４／３６）。高血压性心脏病患者血清中抗β１和Ｍ２受体的自身抗体滴度分别为１∶９６与１∶１０３，远高于单纯性高血压和对照组的１∶４０与１∶２４的相应抗体滴度（Ｐ＜０．０５）。结论高血压性心脏病患者不仅存在抗心肌β１和Ｍ２受体的自身抗体而且其抗体滴度也明显高于单纯性高血压及正常人，检测该抗体对预测原发性高血压患者是否并发心肌病变，可能有一定的参考价值。     

血清甲状腺激素（T_3、T_4）的固相酶联免疫测定──方法学探讨及临床应用

本实验用β－半乳糖苷酶分别标记Ｔ＿３及Ｔ＿４，均获得具有良好酶活性及免疫原活性的酶－抗原结合物。以国产聚苯乙烯微孔扳为固相载体，建立了血清Ｔ＿３及Ｔ＿４的固相酶联免疫测定法。方法学检测数据如下：最小检出量，Ｔ＿３为０．２ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｔ＿４４．０ｎｍｏｌ／Ｌ；回收率，Ｔ＿３为１．０２，Ｔ＿４０．９８；批内变异系数，Ｔ＿３为７．２％，Ｔ＿４５．３％；批间变异系数，Ｔ＿３为８．２％，Ｔ＿４１０．５％；两种抗血清对相应抗原的同类物的交叉反应率都极低。用本法与放免法同时测定３０份标本，同一激素的两法测定结果呈显著相关。     

血清可溶性幽门螺杆菌抗原测定

目的　测定血清可溶性幽门螺杆菌抗原（ＳＨｐ） 并评价其意义。方法　采用双抗体夹心式酶免疫测定法。结果　６６ 例幽门螺杆菌（Ｈｐ） 感染患者血清ＳＨｐ 含量为８４９．４ ±３８３ ．３μｇ／Ｌ（－ｘ ±ｓ,下同）,阳性率为９０．９１％ ,显著高于２８ 例阴性对照组１９．４±６．２μｇ／Ｌ,阳性率为０％ （Ｐ值均＜ ０．００１） 。１６例Ｈｐ 阳性患者治疗前ＳＨｐ 为６２７ ．１±２１７ ．８μｇ／Ｌ,治疗后为１５．６ ±７．６μｇ／Ｌ（ Ｐ＜ ０ ．００１） 。且ＳＨｐ 含量与Ｈｐ 感染菌量呈正比。结论　本方法操作简单,成本低廉,弥补了现有Ｈｐ 感染诊断方法的不足,可用于临床。     

高胰岛素和高糖对大鼠脂肪细胞胰岛素信号蛋白的影响

目的 探讨高浓度胰岛素和高浓度糖(高糖)共同作用诱导胰岛素抵抗的分子机理。方法 分离的大鼠脂肪细胞在5、25mmo1/L糖或加胰岛素(10^4μU/m1)培养基中孵育24h，然后测定糖的转运率、胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物(IRs)1／2的酪氨酸磷酸化，IRsl／2，肌醇磷脂—3—激酶85亚单位(P85)和蛋白激酶B(PKB)的蛋白表达及PKB活性。结果 高糖使这些细胞的糖摄取率、IR和IRs—1的酪氨酸磷酸化分别下降了69％、43％和52％，IRs-1蛋白表达下降61％及PKB活性降低42％。高胰岛素加重高糖的以上抑制作用(与25mmo1/L葡萄糖组比较，P＜0．05、P＜0．01)；高糖增加IRS—2蛋白表达20．4％，高胰岛素对抗高糖的此作用。结论 高糖能诱导胰岛素抵抗，高胰岛素加重高糖的此作用。其作用机制与影响胰岛素信号通道各蛋白的磷酸化、表达及PKB活性等因素有关。