寻常性银屑病皮损表达转化生长因子-β的免疫组化研究

目的研究转化生长因子（TGF）-β在寻常性银屑病皮肤中的表达，并探讨其在银屑痛发病中的作用。方法应用ABC过氧化物酶技术检测寻常性银屑痛患者皮损中表达TGF-β的情况和健康对照皮肤的染色情况。结果银屑痛患者TGF-β在角质形成细胞（KC）中表达减少。结论抑制性细胞因子TGF-β在皮损处的表达降低，对KC增殖调控作用减弱，对银屑病表皮KC失去部分抑制作用，致使KC过度增殖，形成银屑病的临床病理表现，可能在银屑痛的发病机理中有一定意义。     

阿维A酸对系统性硬皮病患者成纤维细胞增殖及分泌TGF—β1的影响

目的：确定阿维A酸对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法：原代培养系统性硬皮病（SSc）患者皮肤成纤维细胞（FB），使用不同浓度的阿维A酸作用48h，四甲基偶氮唑盐（M1T）方法及ELISA法测定阿维A酸对成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1的影响。结果：阿维A酸可明显抑制患者皮肤成纤维细胞的增殖，显著减少成纤维细胞TGF-β1的分泌，并具有浓度依赖性。与空白对照组相比，差异有显著性（P〈0．05）。结论：阿维A酸对SSc皮肤成纤维细胞的增殖及TGF—β1的分泌均有显著抑制作用，为其治疗硬皮病提供了理论基础。     

银屑病患者皮肤转化生长因子β原位表达的研究

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一种多功能的细胞生长因子,在哺乳类中主要有TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三种异构体,与受体结合后能够调节多种细胞的增殖、分化、迁移,促进细胞间质的形成和调控免疫反应^[1],但主要是一种负的免疫调节作用,能够抑制角质形成细胞(KC)的生长。我们通过免疫组化的方法对银屑病皮损和非皮损处TGF-βs(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)的原位表达进行了比较研究,以期对TGF-βs在银屑病发病中的关系作一初步探讨.     

复方甘草酸苷对体外培养的角质形成细胞的作用

目的观察复方甘草酸苷(CG)对角质形成细胞表达CXCR2及分泌TGF-β1的影响。方法不同浓度CG处理人角质形成细胞株HaCat,MTT法检测CG对HaCat的增殖抑制作用,流式细胞仪分析CG处理后的HaCat细胞的CXCR2表达。培养正常人表皮角质形成细胞,观察CG处理后,培养液中TGF-β1含量的变化。结果50~200μl/m l的CG抑制HaCat细胞的增殖,干预24 h即可见到明显的抑制作用,CXCR2的表达明显低于正常对照组。正常原代角质形成细胞的培养上清中TGF-β1分泌增加。结论50~200μl/m l CG促进素角质形成细胞表达CXCR2和TGF-β1分泌,抑制角质形成细胞的增殖。     

烟酰胺对紫外线照射后角质形成细胞分泌TGF-β1和CXCR2表达的影响

目的观察烟酰胺对紫外线照射后角质形成细胞HaCaT分泌功能的影响。方法将细胞分为紫外线照射组和未照射两组,分别用浓度为0.1,0.5,1.0,2.0 mg/mL的烟酰胺干预细胞,根据需要选择作用时间为24,48和72 h。采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞仪分析HaCaT细胞CXCR2表达;ELESA测定细胞培养液中TGF-β1含量的变化。结果0.1-2.0 mg/mL的烟酰胺对HaCaT细胞的生长活性无明显影响。不加药物时,经紫外线照射的HaCaT细胞分泌TGF-β1和表达CXCR2均显著强于未照射组(P<0.05),加入0.1-2.0 mg/mL的烟酰胺后,TGF-β1的分泌受到抑制,呈浓度依赖性。而小于0.1 mg/mL的烟酰胺则促进TGF-β1的分泌。TGF-β1的分泌随药物浓度变化的曲线,照射组和未照射组一致。烟酰胺对未照射组细胞上CXCR2表达无明显影响,但0.5-1.0 mg/mL浓度时即显著抑制照射后HaCaT细胞上CXCR2的表达。结论烟酰胺对紫外线照射后角质形成细胞分泌TGF-β1和表达CXCR2有显著抑制作用。     

2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌Ⅰ型干扰素的影响

目的：评价2型单纯疱疹病毒（HSV-2）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）分泌Ⅰ型干扰素（IFN—α、IFN-β）的影响，探讨角质形成细胞（KC）对HSV-2感染的免疫防御机制。方法：以HSV-2感染HaCaIⅫ细胞，采用荧光实时定量PCR检测感染后24h、48h、72hIFN—αl、a2、β1mRNA的表达。结果：HaCaT细胞静息状态存在IFN—a1、a2、p1三种细胞因子的mRNA表达，但HSV-2感染HaCaT细胞后IFN-al、以、plmRNA的表达较对照组明显升高（P〈0．05），且在72h内随时间的递增而逐渐升高。结论：在HSV-2感染KC的初期，KC分泌的Ⅰ型干扰素参与HSV-2感染的免疫防御反应，对清除HSV-2及防止其扩散有积极作用。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型对HaCaT细胞表达KGF和TGF-α的影响

目的：探讨HaCaT细胞在HSV-II刺激前后角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor, KGF）和转化生长因子α（Transforming growth factor- α, TGF-α）的分泌变化及意义.方法：以VERO细胞进行HSV-II扩增;采用RT-PCR和荧光实时定量PCR检测HSV-II感染HaCaT细胞前及感染后24 h、48 h、72 h KGF和TGF-α的分泌量.结果：HaCaT细胞可自分泌KGF和TGF-α;感染HSV-II后,KGF明显升高,而TGF-α的分泌与对照组相比差异无统计学意义.结论：HaCaT细胞可以自发分泌KGF和TGF-α;KGF可能参与HSV-II感染角质形成细胞（keratinocyte, KC）后皮肤的修复过程;而TGF-α在此过程中不起主要作用     

TGF-β1对巨噬细胞抗白念珠菌活性影响的实验研究

目的：探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对巨噬细胞（MΦ）抗白念珠菌活性的影响及其影响机制。方法：分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞，与不同浓度重组人TGF-晶（rhTGF-晶）共同培养24h，收集上清，酶联免疫法测定TNF—α浓度，Griess反应法测定NO的活性；收集培养后的细胞与一定浓度的白念珠菌共同培养4h后，检测每毫升中白念珠菌菌落形成单位（cfu／mL）。结果：rhTGF-β1在10n/mL及100ng／mL时，对MΦ抗白念珠菌活性具有明显抑制作用（P〈0．05），而其在0．1ng／mL-100ng/mL时对MΦ产生TNF—α具有明显抑制作用（P〈0．05）；rhTGF-β1在1ng／mL-100ng／mL时，对MΦ产生NO具有明显促进作用（P〈0．05）。结论：rhTGF-β1可以抑制MΦ的抗白念珠菌活性，这种抑制作用可能与rhTGF-β1抑制MΦ的杀伤活性和影响MΦ的分泌功能有关。     

转化生长因子-β1 mRNA在银屑病皮损和外周血单一核细胞中的表达

银屑病是一种以表皮角质形成细胞(KC)过度增生为特征的皮肤慢性炎症性疾病。许多细胞因子促进了KC的增生，但转化生长因子β1(TGF—β1)对KC具有抑制生长作用。笔者的前期研究结果显示：TGF—β1在银屑病表皮KC中表达减少或缺失，那么在银屑病皮损损TGF—β1mRNA表达水平如何?患者外周血单一核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)中     

马拉色菌在花斑癣色素改变中的作用

目的 观察引起不同临床色素表现的马拉色菌与角质形成细胞（KC）共培养液对B16F10黑素瘤细胞黑素合成的影响，及共培养液中与黑素合成相关的细胞因子产生情况。方法 将1 × 106/mL KC与分离自色素沉着区的马拉色菌（简称C株）、分离自色素减退区的马拉色菌（简称J株）按4个浓度比例（KC ∶ 马拉色菌为1 ∶ 1、1 ∶ 10、1 ∶ 20、1 ∶ 30）分别共培养，用MTT法测定KC增殖率。将C株或J株马拉色菌分别加入KC培养体系共培养，真菌孢子和KC密度均为1 × 106/mL（1 ∶ 1），制备的培养液分5组，KC单独培养液、C株或J株马拉色菌与KC共培养液、C株或J株马拉色菌单独培养后再次培养KC的二次培养液，用上述各组培养液分别培养B16F10细胞，用MTT法测量各组B16F10细胞增殖率，NaOH裂解法测量黑素含量，Western印迹法测定酪氨酸酶和β-肌动蛋白的表达，多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。ELISA法测定各组培养液中细胞因子的浓度。结果 KC与马拉色菌在1 ∶ 10比例以下，KC的生长不受马拉色菌的影响。C株马拉色菌与KC共培养液引起B16F10细胞黑素含量、酪氨酸酶活性和酪氨酸酶蛋白表达增加，细胞增殖率无明显变化。J株马拉色菌共培养液的作用与之相反。C株马拉色菌刺激产生的内皮素1显著高于J株马拉色菌（P < 0.01）。结论 马拉色菌通过与KC相互作用，影响B16F10细胞酪氨酸酶的活性和表达，调节黑素合成。内皮素1在花斑癣色素沉着中可能起一定作用。     

寻常型银屑病皮损TGF-β受体的表达

目的:检测TGF-β受体在寻常型银屑病皮损中的表达.方法: 应用ABC过氧化物酶技术检测21例寻常型银屑病患者皮损中TGF-β受体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的表达.结果:银屑病患者TGF-β受体RⅠ,RⅡ和RⅢ表达于基底和基底上层角质形成细胞(KC),与正常表皮相比明显减弱;TGF-βRⅠ和RⅢ的表达明显弱于RⅡ.进展期皮损(17例)TGF-β受体的表达弱于静止期皮损(4例).结论:抑制性细胞因子TGF-β受体在皮损处的表达降低,对银屑病表皮KC失去部分抑制作用,致使KC过度增殖,形成银屑病的临床病理表现.     

尖锐湿疣患者外周血CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的检测

目的 探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞（Treg细胞）表型和功能改变所致的细胞免疫抑制效应在尖锐湿疣发病机制中的作用。方法 采用免疫荧光标染技术,经流式细胞仪检测46例尖锐湿疣患者和43例正常人外周血CD4+CD25+ T细胞转录因子Foxp3及细胞毒T细胞相关抗原4（CTLA-4）、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因（GITR）、程序性死亡1（PD-1）等抑制性膜分子的表达水平。同时,用免疫磁珠细胞分选技术从外周血中分选出高纯度的CD4+CD25+ T细胞,经体外刺激后分析胞内分泌白介素10（IL-10）和转化生长因子β（TGF-β）阳性细胞数。结果 尖锐湿疣患者外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞数量比正常人对照组显著增加（P ＜ 0.01）,CD4+CD25+ T细胞表面抑制性膜分子CTLA-4、PD-1表达明显增强（P分别为 ＜ 0.05及 ＜ 0.01）,胞内TGF-β阳性细胞增多（P ＜ 0.001）。结论 人乳头瘤病毒感染可诱导CD4+CD25+ Treg细胞活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答。     

脉冲染料激光对体外瘢痕成纤维细胞中TGF-β1和TGF-β3表达的影响

目的探讨不同能量脉冲染料激光(Pulsed dye laser,PDL)对体外人瘢痕成纤维细胞转化生长因子(TGF)-β1和TGF-β3表达的影响。方法按组织块法体外培养人瘢痕成纤维细胞,分别用4、6、8、10、11、12 J/cm2能量的PDL照射细胞,观察不同能量PDL对细胞周期的影响,酶联免疫吸附测定(ELLSA)法检测激光照射后TGF-β1、TGF-β3的分泌量。结果 PDL照射后,处于G1期的瘢痕成纤维细胞较对照组明显增多;不同能量PDL照射瘢痕成纤维细胞后,TGF-β1的分泌量随激光能量密度的升高而降低,TGF-β3的分泌量则增加,差异有统计学意义。结论 PDL对瘢痕的治疗作用可能与抑制细胞增殖,减少瘢痕成纤维细胞TGF-β1分泌,增加TGF-β3的分泌有关。     

2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌I型干扰素的影响

目的: 评价2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)分泌I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的影响,探讨角质形成细胞(KC)对HSV-2 感染的免疫防御机制.方法: 以HSV-2感染HaCaT细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24 h、48 h、72 h IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达.结果: HaCaT细胞静息状态存在IFN-α1、α2、β1三种细胞因子的mRNA表达,但HSV-2感染HaCaT细胞后IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达较对照组明显升高(P<0.05),且在72 h内随时间的递增而逐渐升高.结论: 在HSV-2感染KC的初期,KC分泌的I型干扰素参与HSV-2感染的免疫防御反应,对清除HSV-2及防止其扩散有积极作用.     

毛发研究的新模型——猪毛囊体外培养的研究

目的：对猪毛囊体外无血清培养的条件和方法进行了研究，并就其在体外培养中对环孢素A(CsA)、胰岛素生长因子-1（IGF-I）和转化生长因子β-1（TGF-β）的反应性进行观察。结果发现：（1）猪毛囊在Williams E加L-谷酰氨等成分的培养基上生长良好，从而建立了猪毛囊体外无血清培养模型，并使毛囊分离和培养的方法标准化。建立的猪毛囊体外培养模型毛囊生长曲线与人毛囊非常相似。（2）体外培养的猪毛囊对CsA、IGF-I和TGF-β1均有敏感的反应性，反应浓度与人毛囊体外培养的浓度相似。（3）猪毛囊体外培养中CsA明显促进毛囊细胞分裂增殖和抑制毛囊细胞凋亡。所以猪毛囊体外培养模型是研究毛囊生理较好的方法。     

阿维A酸对系统性硬皮病患者成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1的影响

目的 确定阿维A酸对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 原代培养系统性硬皮病(SSc)患者皮肤成纤维细胞(FB),使用不同浓度的阿维A酸作用48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)方法及ELISA法测定阿维A酸对成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1的影响.结果 阿维A酸可明显抑制患者皮肤成纤维细胞的增殖,显著减少成纤维细胞TGF-β1的分泌,并具有浓度依赖性.与空白对照组相比,差异有显著性(P＜0.05).结论 阿维A酸对SSc皮肤成纤维细胞的增殖及TGF-β1的分泌均有显著抑制作用,为其治疗硬皮病提供了理论基础.     

角质形成细胞与特应性皮炎相关研究进展

角质形成细胞（keratinocytes，KCs）的异常导致角蛋白的表达出现异常，从而导致表皮屏障功能失调。在特应性皮炎(Atopic Dermatitis，AD)皮损中，KC大量表达胸腺淋巴基质生成素、肿瘤坏死因子α以及一些白细胞介素如IL-1α、IL-1β和IL-18等介导皮肤的炎症反应。在AD中KC还可表达模式识别受体，通过先天免疫系统，产生和维持炎症反应。另外，AD皮损中KC损伤导致抗菌肽的表达缺乏可能有助于增加AD患者皮肤对感染病毒、细菌和真菌的易感性。本文对角质形成细胞与特应性皮炎相关研究进展进行综述。     

当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞NF-κB及IFN-γ的影响

目的：确定体外当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）与角质形成细胞（KC）NF-κB表达及IFN-γ分泌的影响.方法：将正常人KC＋银屑病患者PBMC混合培养（A组）,正常人KC和正常人PBMC混合培养作为作对照（B组）.当归多糖作用于两组,采用Western Blot检测混合细胞中NF-κB的蛋白表达水平,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中IFN-γ的水平.结果：A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平明显高于B组（P＜0.01）;经当归多糖作用后,A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前降低（P＜0.05）,而B培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前升高（P＜0.05）.结论：当归多糖可能通过抑制NF-κB活化、减少IFN-γ分泌,对银屑病治疗发挥作用.     

他克莫司对TNF—α诱导的HaCaT细胞NO分泌的影响

目的：观察他克莫司（FK506）对体外培养的HaCaT细胞NO分泌的影响，以判断FK506对炎性状态下HaCaT细胞NO的分泌有无抑制作用。方法：本实验采用TNF－α诱导的HaCaT细胞，使其处于炎性状态，采用Griess法检测FK506作用之后的NO水平变化。结果：FK506对TNF－α诱导的HaCaT细胞NO分泌有抑制作用。结论：本实验提示银屑病皮损中，某些细胞因子触发了NO的分泌。FK506可能直接抑制角质形成细胞分NO和（或)通过调节某些细胞因子，进而抑制NO分泌。     

他克莫司对人角质形成细胞增殖及干细胞因子分泌的影响

目的 探讨他克莫司对人角质形成细胞的增殖及干细胞因子（SCF）分泌的影响。方法 体外HaCaT细胞（人永生化角质形成细胞）培养,用MTT和ELISA分别测定他克莫司对HaCaT细胞增殖及SCF含量的影响。结果 103 nmol/L ~ 104 nmol/L的他克莫司对人HaCaT细胞增殖有抑制作用。10 nmol/L ~ 102 nmol/L的他克莫司可以促进HaCaT细胞SCF分泌量的增加;103 nmol/L的他克莫司对HaCaT细胞SCF的分泌无影响;高浓度104 nmol/L的他克莫司则可抑制HaCaT细胞SCF的分泌。结论 适当浓度的他克莫司能够促进角质形成细胞SCF的分泌。