苦瓜MAP30基因克隆与鉴定

目的克隆苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30全长基因并构建其表达载体。方法提取苦瓜的基因组DNA,根据Genebank中已公开发表的MAP30序列,设计出一对特异性引物。采用PCR技术,从苦瓜的基因组DNA中获得MAP30全长序列共860bp,克隆入pET-28a(+)载体中,进行酶切及测序鉴定。结果克隆了MAP30全长基因,经测序证实与Genbank中收录的SEA基因序列同源性达100%。结论本研究成功地克隆了MAP30全长基因,为进一步研究MAP30基因的靶向抗肿瘤研究奠定了基础。     

MAP30-PEG结合物对A549体外细胞增殖作用的研究

目的探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白MAP30及其聚乙二醇修饰物对人肺腺癌细胞A549增殖、细胞凋亡的影响和caspase3相关凋亡途径的诱导作用。方法用MTT法测定MAP30和MAP30-PEG结合物对人肺腺癌细胞A549的抑制率;通过Hoechst33258荧光染色观察A549细胞凋亡形态,并用流式细胞术测定细胞凋亡率以及用western blot检测凋亡细胞caspase3表达。结果 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性关系;MAP30-PEG结合物对A549细胞增值抑制率约为MAP30的60%;Hoechst33258荧光染色后均呈典型凋亡形态;流式细胞术检测显示,MAP30和MAP30-PEG结合物作用于A549细胞48 h后均可使A549细胞呈现Sub-G1凋亡峰,凋亡率分别为58.7%、42.7%;MAP30和MAP30-PEG结合物对胞内caspase3在凋亡过程中显示有激活作用。结论 MAP30和MAP30-PEG结合物均对A549增殖有明显的抑制作用;两者均能通过caspase3途径诱导细胞凋亡。     

重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30对BGC-823细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30(MAP30)对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法将BGC-823细胞分为对照组(A组)和MAP30 10、20、30、40、50、60μg/ml实验组(分别为B1、B2、B3、B4、B5、B6组)。MTT、集落形成和裸鼠致瘤实验观察细胞增殖的抑制作用,光镜、电镜、荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡。结果与A组相比,MAP30呈剂量依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,IC50为51.67μg/ml。B3组光镜下细胞变圆缩小,细胞膜发泡,可见凋亡小体;电镜下细胞表面微绒毛消失,细胞核和细胞质浓缩,核膜褶皱,染色质凝集。荧光染色和流式细胞术检测显示,B3组BGC-823细胞凋亡率较A组增加(P<0.05)。结论 MAP30可抑制BGC-823细胞增殖,并可诱导其凋亡。     

重组蛋白的糖基化及其影响因素

重组蛋白在生物体内的生物活性、免疫原性、体内代谢周期以及拮抗蛋白酶的水解等方面与其糖基化修饰密切相关。此文综述了重组蛋白的糖基化修饰受细胞内外环境多种因素的影响 ,对其生产工艺的改进具有指导意义。     

苦瓜蛋白提取工艺的研究

目的优选苦瓜蛋白提取工艺。方法考察乙醇浓度、温度、加氯化钠的量三因素对结果的影响,用L9(34)正交表优选提取工艺。结果影响苦瓜蛋白结晶得率的主要因素依次是加入氯化钠的倍数,温度及乙醇浓度,最佳工艺为A3B1C3。结论确定最佳工艺为:在19℃下,用95%的乙醇,加0.05倍氯化钠所得的结晶得率最高。     

外用生物蛋白制剂浮出水面

蛋白疗法并不鲜见,比如胰岛素和人体生长激素就已经使用了数年。但外用蛋白制剂却是前所未有的。 每年有130万美国人被诊断出患有基底细胞瘤或鳞状上皮细胞癌。这两种病是皮肤癌中常见的类型。日光中的紫外线是致使皮肤细     

苦瓜的药理作用

近年来,苦瓜及其提取物在多系统疾病中的治疗效果引起了广泛关注。综述了苦瓜及苦瓜蛋白在抗糖尿病、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗生育、抗溃疡、调节免疫等方面的药理作用。     

重组人干扰素α2a涂剂的研制

研究了重组人干扰素α2a涂剂的制备方法,进行了稳定性、皮肤过敏性、皮肤急性毒性等试验。结果表明,本品性质稳定,2－10℃保存12个月后生物学活性无明显下降,使用安全,无不良反应。     

重组溶血栓药物研制的进展

溶栓治疗是治疗血栓性疾病的安全而有效的手段。文章对新型溶血栓药物及溶栓辅助药的研制进展和临床应用现状进行了综述。     

苦瓜MAP30蛋白功能区段缺失体构建及其生物活性研究

通过PCR技术从质粒pET30a-MAP30中分别得到编码M1(D1-K195)、M2(D1-E187)、M3(A11-K195)、M4(A11-E187)4个功能区段缺失体蛋白的序列,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET22b中,表达载体用CaCl2介导的化学转化法转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,然后利用菌落PCR筛选阳性克隆。工程菌在28℃时经1mmol/LIPTG诱导5h时实现高效表达,4种重组蛋白在大肠杆菌中都以包涵体形式存在。利用MTT法分析4个重组蛋白复性液的抗肿瘤活性,结果表明4个功能区段缺失体重组蛋白均对人羊膜细胞系wish、鼠髓白血病细胞系NFS-60、小鼠腹水瘤细胞S-180有杀伤作用,其中对鼠髓白血病细胞系NFS-60抑制作用最明显。M1、M2、M3和M44个缺失体重组蛋白对NFS-60作用的IC50分别为2.51、2.42、1.89μg/ml和1.90μg/ml。细胞毒性分析表明,4个重组蛋白对人正常肝细胞系HL-70的细胞毒性极小,且都低于重组MAP30蛋白的细胞毒性。     

重组人生长激素长效制剂的研究进展

重组人生长激素长效制剂能延长药物在体内的滞留时间,有效增加患者用药的顺应性、降低用药相关的医护成本。本文重点综述微球、生物可降解性凝胶、聚乙二醇化等重组人生长激素长效制剂的制备方法及其研究进展。     

重组蛋白药物的研究进展

近二十几年来蛋白质药物发展迅速。目前有近百种重组蛋白药物上市,几千种处于研发状态。欧美在蛋白质药物研究上整体实力强,在全球有较大的市场。我国重组蛋白药物的研发起步较晚,但发展较快。本文分析了国际和国内蛋白质药物的研发趋势,针对我国基因重组蛋白药物领域现状及存在的问题提出了相应的建议,对国内蛋白质药物研究具有一定的参考价值。     

日本的乳酸菌制剂

日本的乳酸菌制剂应用较早,在30年代日本武田药厂即生产乳酸菌制剂“表飞鸣”,用于肠内异常发酵、消化不良与腹泻。1961年日本药局方第七版收载了乳酸菌制剂“牛酪乳粉”(Puluis Lactis Deflo-ratus)作为药典品用于医疗。“表飞鸣”是乳酸菌的     

重组人骨形态发生蛋白-2膜片的研制及其稳定性实验

目的研制重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)膜片并对其稳定性进行研究,最终提供用于临床试验的合格样品。方法1.采用医用胶原蛋白海绵作为辅料,与rhBMP-2悬液复合,制作成膜片,钴60消毒后测活并送检各项指标。2.采用血清钙试剂盒的方法,通过检测不同条件处理后的rhBMP-2样品的活性变化来反映样品的生物稳定性。结果rhBMP-2膜片生物活性良好,经中国药品生物制品检定所检验各项指标符合要求;在4℃放置两年,活性依然保持良好;在室温放置6个月,活性略有降低;而在37℃条件下,放置1个月活性明显降低,但放置半年与放置1个月活性差别不大。结论所研制的rhBMP-2膜片,稳定性良好,符合临床试验的各项指标。     

胸腺肽制剂蛋白含量三种测定方法的质疑

胸腺肽蛋白含量测定现有三种方法,即半微量凯氏定氮法、Follin法和紫外法,本文就此三种方法做了比较实验,结果表明同一批号三种方法测定结果存在着很大的差异。定氮法比Follin法约高2～3倍。紫外法比Follin法约高1～2倍。     

皮下注射剂型治疗用重组蛋白类药物的药学专业审评思考

为了提高患者依从性,皮下注射剂型是治疗用重组蛋白类药物差异化开发的重要方向之一。近年来,其临床试验申请和上市申请数量显著增加。而皮下注射剂型产品因治疗用重组蛋白类药物本身的固有属性、高浓度制剂对产品质量和稳定性的潜在影响、以透明质酸酶为代表的特殊辅料的应用等因素,在制剂处方开发、辅料质量控制、制剂质量控制和稳定性研究等方面与静脉给药剂型的药学研究相比存在一些特殊考量。本文汇总了2020年以来皮下注射剂型治疗用重组蛋白类药物申报情况,对药学专业审评中的特殊考量展开讨论,并提出该类药物研发与生产过程中可能存在的挑战,以期通过研发生产机构和监管机构共同努力,强化技术交流,为患者提供安全有效、质量可控、使用便捷的新型治疗用重组蛋白类药物。