逍遥散对慢性应激肝郁脾虚证大鼠行为学及学习记忆能力的影响

目的:观察慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠行为学与学习记忆能力的变化及逍遥散的调节作用。方法:采用慢性束缚应激方法(每天束缚3 h,连续21 d)制作大鼠模型并用逍遥散进行干预。将45只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、逍遥散组,15只/组。观察各组大鼠一般状态,测量大鼠体重、摄食量、旷场实验行为学指标,并用Y迷宫测试各组大鼠学习记忆能力。结果:1)模型组大鼠在慢性束缚应激初期表现为强烈的反抗、嘶叫,后期表现为神态倦怠、情志抑郁及不再抵抗的行为绝望状态;2)与正常组比较:模型组大鼠体重、摄食量显著下降(P0.01);旷场实验模型组大鼠5 min运动总距离减少(P0.05),5 min平均移动速度减慢(P0.05),中央区停留时间增加(P0.05);Y迷宫测试,模型组大鼠正确反应率降低(P0.01),全天总反应时间增加(P0.01);3)逍遥散对模型组大鼠上述改变均有一定的调节作用。结论:逍遥散对肝郁脾虚证大鼠体重、摄食量及行为学的异常变化具有改善作用,并能提高其学习记忆能力,表现出抗抑郁、焦虑作用。     

逍遥散对慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠饥饿素的影响

目的观察逍遥散对慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠饥饿素(Ghrelin)的影响,探讨逍遥散的作用机制。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、逍遥散组,每组8只;正常组不进行任何处理,模型组和逍遥散组通过连续21 d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,逍遥散组于每天上午束缚前灌服逍遥散混悬液3.854 g/kg,正常组和模型组灌服生理盐水2 m L。比较各组大鼠的一般情况、饮水量及摄食量、体质量变化情况,用ELISA方法测定大鼠血浆及胃底部组织中Ghrelin的浓度。结果束缚21 d后,模型组大鼠体质量、摄食量、饮水量较正常组降低,增加减缓。与模型组相比,逍遥散组体质量、摄食量、饮水量均增加,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。模型组的血浆及胃底部Ghrelin含量比正常组低(P0.05),而逍遥散组的胃底部Ghrelin含量比模型组高(P0.05),与正常组相近;模型组的血浆Ghrelin含量低于逍遥散组(P0.01)。结论肝郁脾虚证模型大鼠血浆及胃底部组织中Ghrelin含量下降,逍遥散能提高Ghrelin水平,对肝郁脾虚证有明显调节作用,对Ghrelin的调节作用可能是逍遥散治疗肝郁脾虚证的可能机制之一。     

逍遥散调节慢性应激肝郁脾虚模型大鼠下丘脑弓状核ob-R、α-MSH变化机制

目的:研究中药复方逍遥散(《太平惠民和剂局方》)疏肝解郁、健脾以调节食欲的作用机制。方法:以每天持续3 h慢性束缚应激方法制备动物模型。SD健康雄性大鼠随机分为正常组、7 d模型组、21 d模型组和逍遥散组4组,正常组予常规饲养,模型组和逍遥散组每天选择随机时间点进行束缚应激,7 d模型组束缚应激7 d,21 d模型组束缚应激21 d,逍遥散组在连续束缚应激21 d同时予逍遥散灌胃。观测各组大鼠体重、摄食量、行为学、血清D-木糖含量变化;免疫荧光双染、RT-q PCR方法观测下丘脑ARC中瘦素受体(Leptin Receptor,ob-R)、α-促黑素细胞激素(α-melanocyte Stimulating Hormone,α-MSH)基因与蛋白表达水平。结果:与正常组比较,束缚应激21 d模型大鼠体重、摄食量和血清D-木糖含量明显降低,行为学实验表明模型大鼠自主活动能力下降、对新异环境探究行为明显减少,而逍遥散则具有相应的调节作用。综合表明,每天3 h连续21 d捆绑束缚可制备慢性应激肝郁脾虚样动物模型,慢性束缚应激大鼠下丘脑弓状核(Arcuate Nucleus,ARC)中ob-R、α-MSH表达水平增加,逍遥散可下调其表达。结论:逍遥散调节下丘脑ARC中ob-R和α-MSH表达变化,可作为其疏肝健脾,调节机体食欲和能量代谢影响脾胃功能的作用靶点之一。     

逍遥散对肝郁脾虚证实验大鼠的治疗作用

目的：观察逍遥散对肝郁脾虚证实验大鼠的治疗作用。方法：以慢性束缚应激方法建立肝郁脾虚证大鼠模型,模型大鼠随机分为逍遥散治疗组、自然恢复组和模型组。正常组大鼠给予生理盐水每日灌胃。观察各组大鼠宏观表征、体重变化,利用Observer 5．0和Etho Vision3．0分析软件监测大鼠行为学变化。结果：①灌胃1周后逍遥散组大鼠宏观表征、体重、行为等各项指标变化明显,与正常组相比无明显差异,与自然恢复组相比有明显差异。②与模型相比,自然恢复组各项指标无显著性变化。结论：逍遥散对慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠有良好的治疗作用。本课题组所采用慢性束缚应激法建立的肝郁脾虚证大鼠模型有着良好的稳定性。     

慢性焦虑应激大鼠行为学的变化及高架十字迷宫的测评

目的:以慢性焦虑应激大鼠为载体,探讨其焦虑状态及行为学的变化,旨在探索能较好模拟广泛性焦虑障碍的动物模型。方法:采用慢性情绪应激的方法建立焦虑大鼠模型,以国际公认的高架十字迷宫试验对其行为学进行评价。结果:应激后大鼠处于易激惹的状态,表现出频繁的修饰和攻击行为,经高架十字迷宫测试发现大鼠较少进入并停留于开放臂中,倾向于探究封闭臂,且在封闭臂的停留时间延长。结论:不确定性空瓶刺激作为一种慢性心理应激模型,从病因学上较好模拟了广泛性焦虑障碍的发病状态和行为学表现。     

逍遥散对慢性应激肝郁脾虚证模型大鼠行为学的影响

目的以咯利普兰为阳性对照,观察慢性应激肝郁脾虚证模型大鼠21天束缚过程中行为学的动态变化,及逍遥散对其影响。方法采用随机区组方法,将48只SD雄性大鼠等分为4组:正常对照组、模型组(S)、逍遥散+模型组(X)、咯利普兰+模型组(R)。以21d慢性束缚应激造肝郁脾虚证模型组,X组灌胃逍遥散悬液,R组腹腔注射咯利普兰,S组给予相应生理盐水。通过一般状态、体重变化曲线、蔗糖水消耗实验来观察各组大鼠行为学的变化。结果模型大鼠在慢性束缚应激过程中初期对束缚抵抗态度积极,后期表现情志抑郁及不再抵抗的行为绝望状态,而逍遥散和咯利普兰均能够在一定程度上缓解此状态。第14、21天,与模型组比较:逍遥散组和咯利普兰组大鼠的体重明显增加,差异有统计学意义(P0.05);逍遥散组和咯利普兰组的糖水消耗量明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论逍遥散能够在一定程度上改善慢性束缚应激所造成的大鼠体重下降,能够改善模型大鼠对奖赏的反应。     

逍遥散对慢性不可预知温和应激大鼠下丘脑弓状核JAK/STAT通路变化的影响

目的:观测慢性不可预知温和应激(CUMS)模型大鼠下丘脑弓状核(ARC)中瘦素受体(ob-R)-酪氨酸激酶Janus2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)通路变化及逍遥散的调节作用。方法:60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组。适应性喂养1周,模型组、逍遥散组、氟西汀组大鼠通过不可预知温和刺激方式复制慢性心理应激大鼠模型,同时灌服相应药物,逍遥散19.27 g·kg~(-1)·d~(-1),氟西汀2 mg·kg~(-1)·d~(-1)(按成人平均体质量60 kg用药量换算),正常组和模型组大鼠灌服同体积生理盐水,实验6周。观察各组大鼠体质量、摄食量、糖水消耗率、行为学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑弓状核ob-R,JAK2,STAT3 mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、摄食量明显下降(P0.05,P0.01),糖水消耗、旷场实验行为学总路程和中央区总路程均有明显减少,下丘脑弓状核ob-R,JAK2,STAT3蛋白及mRNA表达升高明显(P0.05,P0.01);与模型组比较,逍遥散组大鼠体质量于实验第7,14,21,28天明显升高(P0.05,P0.01),大鼠摄食量于实验第21,35天明显升高(P0.05),糖水消耗、旷场实验行为学总路程和中央区总路程均明显改善;逍遥散对模型大鼠下丘脑弓状核ob-R,JAK2,STAT3蛋白及mRNA表达有相应的调节作用(P0.05,P0.01)。结论:逍遥散调节慢性不可预知温和应激大鼠体质量、食欲和能量代谢作用,可能与下丘脑弓状核ob-RJAK2/STAT3通路相关。     

丹栀逍遥散干预焦虑行为大鼠的血浆代谢组学研究

目的:探索丹栀逍遥散对慢性束缚应激大鼠焦虑行为的干预作用，并通过血浆代谢组学探讨相关机制。方法:选取8 w龄雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、丹栀逍遥散组，除正常对照组外其余组每日束缚应激1 h。2 w后进行行为学测试，收集血浆，采用超高效液相色谱-串联四极杆/飞行时间质谱分析血浆代谢物组，并采用多元统计分析方法进行模式识别及寻找差异标记物。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增长缓慢(P<0.01),高架十字迷宫开放臂时间比明显下降(P<0.05),旷场试验总路程及穿越格子数显著降低(P<0.01),丹栀逍遥散对以上焦虑行为有明显改善(P<0.05)。共鉴定出内源性差异代谢物23种，正常对照组和模型对照组差异性代谢物共有13种，主要涉及色氨酸、谷氨酸代谢通路；模型对照组和丹栀逍遥散组差异性代谢物共有16种，主要涉及色氨酸、脂肪酸、胆汁酸代谢通路；二者共有6种代谢物重合。结论:丹栀逍遥散能够缓解慢性束缚应激引起的大鼠焦虑样行为，其机制与调节色氨酸、脂肪酸及胆汁酸代谢相关。     

电针对肝郁脾虚型慢性疲劳综合征大鼠血清炎症因子及肠道菌群的影响

目的观察电针对肝郁脾虚型慢性疲劳综合征(CFS)模型大鼠血清炎症因子和肠道菌群的影响,探讨其作用机制。方法 SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组6只。采用强迫游泳、慢性束缚和饮食控制制备肝郁脾虚型CFS大鼠模型。造模同时予电针"足三里""合谷""太冲",频率2 Hz/15 Hz,强度1 mA,每次20 min,每日1次,持续21 d。旷场实验评价大鼠自发运动能力,高架十字迷宫评价大鼠焦虑样表现,负重力竭游泳评价大鼠疲劳情况,ELISA检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂多糖水平,16S rDNA测序分析大鼠肠道菌群门水平变化。结果与对照组比较,模型组大鼠旷场活动总路程和平均速度明显减少(P0.01),高架十字迷宫开放臂进入次数和停留时间明显减少(P0.05),负重力竭游泳时间明显缩短(P0.01),血清TNF-α、脂多糖水平明显升高(P0.01);肠道菌群厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门丰度下降,变形菌门和螺旋体门丰度升高,但差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,电针组大鼠旷场活动总路程和平均速度明显增加(P0.01),高架十字迷宫开放臂进入次数和停留时间明显增加(P0.01),负重力竭游泳时间明显延长(P0.01),TNF-α、脂多糖水平明显降低(P0.01);肠道菌群厚壁菌门和放线菌门丰度升高,变形菌门和螺旋体门丰度降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论电针"足三里""合谷""太冲"可改善肝郁脾虚型CFS模型大鼠运动能力、疲劳和焦虑样表现,其机制可能与下调血清TNF-α、脂多糖水平,抑制炎性反应有关。     

肝郁脾虚证大鼠双侧杏仁核注射CNQX后行为变化及逍遥散的调节作用

目的:从行为学角度探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的调节机制。方法:75只雄性SD大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)组和逍遥散组。以21d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型组,在此基础上,运用脑立体定位仪埋管微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体的拮抗剂造CNQX组,为评估手术创伤对模型的影响程度加造假手术组。逍遥散组造模方法和CNQX组相似,突出逍遥散和CNQX二者干预的可比性,于第1、7、14、21天分别比较CNQX组和逍遥散组行为变化各项指标趋势是否一致。结果:模型组大鼠逐步呈现肝郁脾虚证表现;CNQX组起到干预治疗作用,大鼠焦躁状态得到抑制;逍遥散组大鼠表现自然,逍遥散起到较好的调节作用。排除了手术创伤等混杂因子,逍遥散组和CNQX组行为学实验结果变化趋势逐步相似。结论:结合前期RT-PCR和免疫组化实验,从宏观行为学角度,进一步推断逍遥散和CNQX有一条相似作用通路,即通过纠正杏仁核和海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。     

逍遥散对肝郁脾虚证大鼠边缘系统神经元超微结构的影响

目的:探讨慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠海马CA1区和杏仁核细胞超微结构的变化,明确逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性应激所致肝郁脾虚证的保护作用及其机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠在第1、4、7、10、13、16、19、21d右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX0.5μl。第22d处死动物,用透射电镜方法观察海马CA1区和左侧杏仁核神经细胞和突触的形态结构。结果:模型组大鼠海马出现了细胞核变形、线粒体嵴模糊,突触结构不清等,正常组、假手术组和给药各组大鼠CA1区未见明显异常;各组大鼠杏仁核均未见明显异常。结论:逍遥散可改善慢性束缚应激导致的海马CA1区超微结构的损伤,其作用机制可能与CNQX一致。     

肝郁脾虚证模型大鼠HPA轴中枢相关受体的表达及疏肝健脾方药的干预作用

目的观察肝郁脾虚证模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质激素（HPA）轴中枢相关受体的变化及疏肝健脾方药的干预作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、肝郁脾虚模型组、疏肝组（柴胡疏肝散组）、健脾组（四君子汤组）、疏肝健脾组（柴疏四君子汤组）,后4组大鼠采用慢性束缚＋饮食失节＋游泳疲劳的方法,连续造模4周,正常组不予处理。于造模第15天,中药各组分别给予柴胡疏肝散4．2g／kg、四君子汤4．53g／kg、柴疏四君汤4．27g／kg灌胃,连续14d。检测大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素受体（ACTHR）、糖皮质激素受体（GR）和垂体下丘脑促皮质素释放激素受体（CRHR）、GRmRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠下丘脑ACTHR、GRmRNA及垂体CRHR、GRmRNA表达水平明显降低（P〈0．05,P〈0．01）;与模型组比较,柴疏四君汤组下丘脑ACTHR、GRmRNA及垂体CRHR、GRmRNA表达水平均呈显著性增加（P〈0．05,P〈0．01）,柴胡疏肝散组大鼠下丘脑GR和垂体CRHR、GRmRNA的表达水平均见显著性增加（P〈0．05）,四君子汤组大鼠垂体CRHR、GRmRNA的表达水平显著性增加（P〈0．05）。与四君子汤和柴胡疏肝散比较,柴疏四君汤组大鼠下丘脑ACTHR、GRmRNA的表达水平显著性增加（P〈0．05）,其中柴胡疏肝散组较四君子汤比垂体GRmRNA的表达水平增加更显著（P〈0．05）。结论肝郁脾虚证模型大鼠HPA轴中的中枢相关受体表达呈全面下调,中药三方对模型大鼠下丘脑ACTHR、GRmRNA及垂体CRHR、GRmRNA的表达均有不同程度或选择l生上调作用,其中柴疏四君汤的作用最优,其次是柴胡疏肝散,四君子汤则作用较差。     

Xiaoyao San,a Chinese herbal formula,ameliorates depression-like behavior in mice through the AdipoR1/AMPK/ACC pathway in hypothalamus

ObjectiveDepression and metabolic disorders have overlapping psychosocial and pathophysiological causes. Current research is focused on the possible role of adiponectin in regulating common biological mechanisms. Xiaoyao San (XYS), a classic Chinese medicine compound, has been widely used in the treatment of depression and can alleviate metabolic disorders such as lipid or glucose metabolism disorders. However, the ability of XYS to ameliorate depression-like behavior as well as metabolic dysfunction in mice and the underlying mechanisms are unclear.MethodsAn in vivo animal model of depression was established by chronic social defeat stress (CSDS). XYS and fluoxetine were administered by gavage to the drug intervention group. Depression-like behaviors were analyzed by the social interaction test, open field test, forced swim test, and elevated plus maze test. Glucose levels were measured using the oral glucose tolerance test. The involvement of certain molecules was validated by immunofluorescence, histopathology, and Western blotting. In vitro, hypothalamic primary neurons were exposed to high glucose to induce neuronal damage, and the neuroprotective effect of XYS was evaluated by cell counting kit-8 assay. Immunofluorescence and Western blotting were used to evaluate the influences of XYS on adiponectin receptor 1 (AdipoR1), adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase (AMPK), acetyl-coenzyme A carboxylase (ACC) and other related proteins.ResultsXYS ameliorated CSDS-induced depression-like behaviors and glucose tolerance impairment in mice and increased the level of serum adiponectin. XYS also restored Nissl bodies in hypothalamic neurons in mice that exhibited depression-like behaviors and decreased the degree of neuronal morphological damage. In vivo and in vitro studies indicated that XYS increased the expression of AdipoR1 in hypothalamic neurons.ConclusionAdiponectin may be a key regulator linking depression and metabolic disorders; regulation of the hypothalamic AdipoR1/AMPK/ACC pathway plays an important role in treatment of depression by XYS.     

逍遥散改善卵巢切除大鼠脂代谢异常和脂肪性肝炎的作用机制

目的:研究逍遥散(Xiaoyaosan,XYS)对卵巢切除(OVX)SD雌性大鼠肝脏脂代谢和脂肪性肝炎的影响及作用机制。方法:将40只雌性SD大鼠随机分为假手术组,OVX模型组,XYS低、高剂量组(3,9 g·kg^-1)。切除大鼠双侧卵巢制作去势大鼠肥胖模型,连续灌胃给药6周后,比较各组大鼠的体质量变化率、血脂及肝功能水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝细胞组织形态;油红染色比较肝内脂肪沉积情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肝内促炎症因子和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达的水平。结果:与假手术组比较,OVX模型组大鼠随给药周期变化体质量变化率显著增加(2~6周,P<0.05,P<0.01);OVX模型组血清总胆固醇(TC),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),低密度脂蛋白(LDL)水平明显增加(P<0.05,P<0.01);肝组织学中的肝索结构紊乱,肝细胞胞浆内出现脂滴堆积;OVX模型组肝脏白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)mRNA转录水平亦明显增高(P<0.05)。与OVX模型组比较,XYS低、高剂量组体质量变化率随给药周期增加均显现出不同程度的下降(3~6周);XYS可明显降低OVX模型大鼠的血清TC,ALT,AST,LDL水平(P<0.05),呈剂量依赖性;而血清甘油三酯(TG),碱性磷酸酶(AKP),高密度脂蛋白(HDL)水平各组之间无统计学意义;XYS可改善OVX模型大鼠肝细胞排列结构和脂质变性;XYS可剂量依赖地降低OVX模型大鼠肝脏IL-6,IL-1βmRNA转录水平(P<0.05,P<0.01),但肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA转录水平各组之间无显著差异;XYS低、高浓度均可提高OVX模型组肝脏ERβ的转录水平(P<0.05,P<0.01)。结论:XYS可以改善OVX模型大鼠的体质量增长率,肝脏脂质代谢异常和脂肪性肝炎,其机制可能与XYS促进肝脏ERβ表达,进而抑制肝内促炎因子表达有关。     

肝郁脾虚证多发性抽动症大鼠模型的建立及评价

目的:建立肝郁脾虚证多发性抽动症大鼠动物模型,初步了解该模型的一般特征。方法:亚氨基二丙腈(IDPN)腹腔注射诱导法后,用饮食失节、慢性束缚以及过度疲劳法建立多发性抽动症肝郁脾虚证大鼠模型。通过自主活动计数、刻板运动评分、体重、食量、胸腺及脾脏指数、胃泌素、D-木糖等指标对肝郁脾虚证多发性抽动症大鼠进行评价。结果:模型组、肝郁脾虚组大鼠造模后在相同的时间内活动路程及平均速度较空白对照组明显增加。肝郁脾虚组大鼠的进食量减少,胸腺与脾脏指数,胃泌素及D-木糖浓度差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论:本模型有儿童多发性抽动症的动作性抽动和发声性抽动的症状,同时具有小儿多发性抽动症中医证型中的肝郁脾虚证中情志抑郁,神疲气短,少气懒言,食少便溏等相似症状。动物模型的表面效度方面具有较大的相似程度。     

An Investigation of the Antidepressant Action of Xiaoyaosan in Rats Using Ultra performance Liquid Chromatography–Mass Spectrometry Combined with Metabonomics

A rapid, highly sensitive, and selective method was applied in a non‐invasive way to investigate the antidepressant action of Xiaoyaosan (XYS) using ultra performance liquid chromatography–mass spectrometry (UPLC‐MS) and chemometrics. Many significantly altered metabolites were used to explain the mechanism. Venlafaxine HCl and fluoxetine HCl were used as chemical positive control drugs with a relatively clear mechanism of action to evaluate the efficiency and to predict the mechanism of action of XYS. Urine obtained from rats subjected to chronic unpredictable mild stress (CUMS) was analyzed by UPLC‐MS. Distinct changes in the pattern of metabolites in the rat urine after CUMS production and drug intervention were observed using partial least squares–discriminant analysis. The results of behavioral tests and multivariate analysis showed that CUMS was successfully reproduced, and a moderate‐dose XYS produced significant therapeutic effects in the rodent model, equivalent to those of the positive control drugs, venlafaxine HCl and fluoxetine HCl. Metabolites with significant changes induced by CUMS were identified, and 17 biomarker candidates for stress and drug intervention were identified. The therapeutic effect of XYS on depression may involve regulation of the dysfunctions of energy metabolism, amino acid metabolism, and gut microflora changes. Metabonomic methods are valuable tools for measuring efficacy and mechanisms of action in the study of traditional Chinese medicines. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

逍遥散对应激大鼠海马神经元内Ca^2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响

目的：研究逍遥散对慢性应激大鼠海马神经元内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响,探讨逍遥散对应激损伤学习记忆保护的作用机制。方法：采用慢性多相性应激大鼠模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2＋浓度,RT-PCR法检测海马神经元内NR1 mRNA表达的变化。结果：模型组大鼠海马突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达均明显上升（P〈0.01）,而与模型组比较,逍遥散组大鼠突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达明显回落（P〈0.05,P〈0.01）。结论：抑制慢性应激所导致的大鼠海马神经元内NR1 mRNA的过度表达,减少神经细胞膜上NR的数量,从而减轻慢性应激状态下海马神经元内Ca2＋超载所致的细胞毒性损伤。这可能是逍遥散抗应激损伤的关键机制。     

逍遥散及其功效拆方对CUMS抑郁模型大鼠行为学的影响

目的: 探讨逍遥散及其功效拆方水煎液对慢性不可预见性轻度应激(CUMS)抑郁模型大鼠行为活动和学习记忆能力的影响,初步揭示方中体现不同治法的功效药组的作用特点。 方法: 采用慢性不可预知温和应激+孤养方法制备CUMS大鼠抑郁模型,观察逍遥散(30 g·kg^-1)、疏肝药(即柴胡+薄荷,5.25 g·kg^-1)、养血药(即当归+白芍,9 g·kg^-1)、疏肝药+健脾药(即柴胡+薄荷+白术+茯苓+生姜+炙甘草,21 g·kg^-1)、养血药+健脾药(即当归+白芍+白术+茯苓+生姜+炙甘草,24.75 g·kg^-1)、阿米替林(10 mg·kg^-1)连续ig给药4周,观察对模型大鼠体重、糖水偏爱程度、自主活动和Morris水迷宫指标的影响,并设空白和模型对照组。 结果: 与模型组比较,逍遥散组、疏肝药组、养血药组、疏肝药+健脾药组、养血药+健脾药组均能显著提高模型大鼠的体重增长度、糖水偏爱百分比及自主活动量,缩短Morris水迷宫测试中定位航行的潜伏期,增加空间搜索时目标象限运动百分比与有效区域进入次数。各药物组之间比较,逍遥散组、疏肝药组、疏肝药+健脾药组的改善作用优于养血药组和养血药+健脾药组,其中疏肝药组在连续给药2周时,其对模型动物行为学的改善作用甚至优于逍遥散全方与疏肝药+健脾药组。 结论: 逍遥散对CUMS抑郁模型大鼠表现出良好的抗抑郁作用。在其功效拆方中,柴胡+薄荷药组所代表的疏肝治法是体现逍遥散抗抑郁效应的主要治法,当归+白芍药组所代表的养血治法则发挥重要的辅助作用。     

逍遥散对大鼠肝细胞脂肪变性及内质网/SREBP1/脂代谢通路的影响

目的:从内质网应激及其调控的与脂质合成相关的SREBP1通路的角度探讨逍遥散防治大鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法:健康Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、逍遥散组和东宝肝泰组4组,建立四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝动物模型,观察各组肝组织病理变化、血清肝功能、肝组织中胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量及肝组织GRP78、SREBP1及生脂相关酶分子的表达。结果:逍遥散组的肝指数(P0.01)、血清ALT(P0.01)、AST(P0.05)水平及肝组织中TG(P0.05)含量较模型组明显降低。病理HE染色显示,逍遥散组肝脂肪变性较模型组明显减轻;RT-PCR和Western blot结果表明,逍遥散组GRP78分子、SREBP1 mRNA及部分生脂相关酶mRNA的表达低于模型组。结论:逍遥散对大鼠肝细胞脂肪变性的抑制作用与内质网应激有关,其可能分子机制为:逍遥散降低内质网应激,引起转录因子SREBP1的表达与入核转位的减少,在细胞核内被SREBP1激活的生脂相关酶基因的诱导表达降低,使肝细胞内甘油三脂、胆固醇合成减少,导致肝细胞脂肪变性的减轻。