RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

乙肝相关性肝癌组织中HBx和CEACAM1的表达水平及意义

目的研究HBx和CEACAM1在乙肝相关性肝癌组织中的表达水平,以期为肝癌发病机制提供新的理论依据和防治策略。方法收集本院血清乙肝病毒表面抗原(HBVsAg)阳性的原发性肝癌患者癌组织标本80例,采用免疫组化法检测HBx和CEACAM1的表达水平;采用Western blot和RT-PCR检测转染乙肝病毒(HBV)X基因的人肝细胞株(PcDNA3-X/HL-7702细胞)、转染空质粒的人肝细胞株(PcDNA3/HL-7702细胞)及未表达乙肝病毒(HBV)X基因的人肝细胞株(HL-7702细胞)中HBx和CEACAM1的表达水平。结果 HBx和CEACAM1表达呈负相关,两者的相关系数为-0.248;PcDNA3-X/HL-7702细胞中CEACAM1基因mRNA的相对表达量明显低于HL-7702细胞和PcDNA3/HL-7702细胞(P=0.000)。结论 HBx能够通过抑制CEACAM1的表达,促进肝癌细胞的发生。     

HBx及其截短体与HBV复制

HBx是HBV最小的开放读码框(open reading frame,ORF)编码的一个154个氨基酸(amino acid,aa),分子量约17kDa的多功能蛋白,它通过多种作用影响HBV的复制,如细胞周期、胞质信号转导以及与胞核转录作用元件的直接作用[1-2]。HBx结构包含C-端2/3(aa51～154)反式激活区域与N-端1/3(aa1～50)负性调节区域[3]。丙氨酸诱变突变扫描方法已经证实aa52～65及aa88～154对增强HBx在HBV中的     

乙肝相关性肝细胞癌中HBx、miR-122表达及临床意义

目的 研究乙肝相关性肝细胞癌（HCC）中乙肝病毒X蛋白（HBx）、微小RNA(miR)-122表达的相关性及临床意义。方法 选择2018年3月至2020年4月期间在焦作煤业集团有限责任公司中央医院接受手术切除的乙肝相关HCC患者作为研究对象,收集HCC组织和癌旁组织,检测HBx的阳性表达率,miR-122、细胞周期蛋白G1(cyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、β-连环蛋白（β-catenin）的mRNA表达水平,随访患者的无病生存（DFS）和总生存（OS）情况。结果 HCC组织中HBx的阳性表达率及cyclinG1、XIAP、β-catenin的mRNA表达水平均高于癌旁组织,miR-122的表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）;HBx阳性表达的HCC组织中miR-122的表达水平低于HBx阴性表达的HCC组织,cyclinG1、XIAP、β-catenin的mRNA表达水平高于HBx阴性表达的HCC组织,差异有统计学意义（P<0.05）;HCC组织中miR-122的表达水平与cyclinG1(r=-0.361)、XIAP(r=-0.412...     

HBx在HCC发病机制中的作用

乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)，在原发性肝癌(HCC)的发生发展过程中起关键作用。本文就其通过与P53、生长因子等之间的蛋白一蛋白相互作用，调节细胞生长增殖与凋亡等方面阐述HBx与HCC形成中的可能机制。     

乙肝病毒X蛋白对CCL13细胞Period1基因启动子甲基化及其表达的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)表达与肝细胞Period1基因低表达的关系及其机制。方法 采用脂质体法将pcDNA3.1-HBx质粒转入CCL13细胞,采用甲基化聚合酶链式反应(PCR)、反转录PCR(RT-PCR)、蛋白质印迹法(western blot)检测CCL13细胞转染HBx质粒前后Period1基因启动子甲基化水平、mRNA及蛋白表达水平。结果 pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞后在该细胞中稳定表达,转染HBx质粒后,Period 1在CCL13细胞启动子甲基化水平较转染空质粒CCL13细胞明显增高,其mRNA及蛋白质的表达水平均较后者明显下降。结论 HBx蛋白可通过上调肝细胞Period1启动子甲基化水平,促使其表达下调。     

乙型肝炎病毒X蛋白的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）慢性持续感染与肝细胞癌（HCC）的发生密切相关。由HBVX基因编码的X蛋白（HBx）是一个多功能蛋白,可通过反式激活和蛋白相互作用持续调控病毒的生活周期和宿主细胞的代谢,最终导致肝细胞癌变。因此,近年来对于HBx在病毒复制和致HCC中的作用机制成为研究热点。     

AQP1、HBx蛋白在乙肝相关性肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨水通道蛋白1(APQ1)、乙肝病毒基因X开放读框编码的乙肝病毒X蛋白(HBx)在乙肝相关性肝癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法选取我院手术后肝癌组织标本80例(病灶组)、40例癌旁组织(癌旁组),收集时间2015年1月-2017年6月,检测两组标本中的APQ1、HBx蛋白,并分析其与患者临床病理学特征的关系。结果病灶组的APQ1、HBx蛋白表达阳性率分别为71.25%、68.75%均显著高于癌旁组5.00%、10.00%(P0.05);肝癌组织中APQ1蛋白表达与患者TNM分期、发生淋巴结转移、肿瘤分化程度具有显著相关性(P0.05);肝癌组织中HBx蛋白表达阳性率与肿瘤发生门脉侵袭、TNM分期、发生淋巴结转移具有显著相关性(P0.05)。结论 APQ1、HBx蛋白在乙肝相关性肝癌组织中高表达,并且与肿瘤的发生发展关系密切。     

乙型肝炎病毒X基因原核表达载体的构建及蛋白表达

[目的] 构建和表达乙型肝炎病毒x基因原核表达载体，获得重组HBx蛋白。[方法] 用PCR方法扩增含有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列，分别以pMD18-T载体和pET32a（＋）载体构建pMD18-T-HBX克隆载体和pET32a-HBX原核表达载体，随后把pET32a-HBX转化大肠杆菌BL-2l进行诱导表达和纯化，Western blot检测原核表达的HBx蛋白的免疫活性。[结果] 经IFFG诱导后可见分子量约38KD的融合蛋白表达；表达的蛋白主要以包涵体形式存在；Western blot结果表明HBx融合蛋白具有较好的免疫活性。[结论] HBVX基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化。为研究HCC患者血清中HBx蛋白和抗-HBx抗体滴度水平奠定了坚实的基础。     

人肝癌细胞株HepG2中原钙粘附蛋白10基因异常甲基化及其与HBx蛋白的关系

目的研究原钙粘附蛋白10(PCDH10)启动子在人肝癌细胞株HepG2中的甲基化状态及与HBx调控的相关性。方法用逆转录PCR(RT-PCR)和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),检测去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(Aza)联合组蛋白乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)处理前后,HepG2细胞中PCDH10基因的表达及启动子甲基化水平;用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)定位检测发生甲基化的CG位点。用MSP检测表达HBx基因的重组腺病毒感染HepG2细胞后PCDH10基因的表达及甲基化水平。结果 PCDH10基因在HepG2细胞株中表达沉默,其启动子发生明显甲基化,Aza可以部分去除PCDH10甲基化从而上调其mRNA表达水平。但HBx蛋白表达不影响HepG2细胞中PCDH10的甲基化程度。结论 PCDH10启动子异常甲基化使HepG2细胞内转录沉默,但其甲基化状态与HBx蛋白表达无关。     

HBx蛋白对人T细胞抗炎性细胞因子分泌的影响

目的探讨HBx蛋白对人T细胞抗炎性细胞因子分泌的影响。方法构建HBx蛋白的绿色荧光蛋白真核表达载体HBx-pEGFP-C1,双酶切(HindⅢ和KpnⅠ)、DNA测序鉴定。利用脂质体转染技术将质粒HBx-pEGFP-C1瞬时转染人T细胞系Jurkat细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,RT-PCR方法检测X基因的表达情况。PHA(10μg/ml)刺激活化预转染的Jurkat细胞6h、24h和48h后,采用RT-PCR技术在mRNA水平检测Jurkat细胞分泌IL-4、IL-10、IL-13和IL-14等抗炎性细胞因子的变化。结果成功构建HBx-pEGFP-C1真核表达载体,并成功转染Jurkat细胞;与对照组相比,转染HBx蛋白组Jurkat细胞分泌IL-4、IL-10、IL-13和IL-14均明显降低(P<0.05)。结论 HBx蛋白即时高表达可降低人T细胞抗炎性细胞因子的表达。     

乙型肝炎病毒X抗体检测的临床意义

[目的]了解乙型肝炎病毒X抗体（HBxAb）在急慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者血清中的表达情况，探讨HBxAb与上述疾病的相关性及临床意义。[方法]应用单克隆HBxAg包被反应板，检测患者血清中HBxAb的酶联免疫吸附方法。共检测33例急性乙型肝炎、44例慢性乙型肝炎、39例肝癌、59例肝硬化患者血清中抗HBx的分布情况。[结果]在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝癌、肝硬化患者血清中抗HBx的阳性率分别为27．8％、52．2％、66.7％、64.4％，以在肝癌中的检出率最高。上述抗HBxAb阳性检出率与42例乙型肝炎表面抗原阴性结果比较P〈0．01，有统计学意义。[结论]HBxAb在乙型肝炎后的肝硬化和肝癌患者检出率高。可提示，随着肝病的发展与迁延，抗HBx的表达似乎在增加，提示抗HBx可能参与肝组织的免疫病理性损伤。     

乙型肝炎患者血清抗-HBx抗体的检测及临床意义研究

目的 获得重组HBx蛋白，检测乙型肝炎患者血清抗-HBx抗体并探讨其临床意义。方法 利用分子克隆技术克隆HBVX基因构建PET32a-HBX原核表达载体，表达和纯化HBx蛋白，用该重组蛋白建立检测抗-HBx抗体的间接ELISA方法；采用该ELISA分别检测正常人组、急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组患者血清中的抗-HBx抗体。结果 获得具有免疫原性的HBx融合蛋白；ELISA检测表明，慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体的水平均高于急性肝炎组，差异具有显著性；在这三组之间，慢性肝炎组高于肝硬化组和肝细胞癌组，差异具有显著性，肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体水平无显著性差异。结论 HBV患者血清中抗-HBX抗体是乙型肝炎病毒感染的一种特异性抗体，是HBV感染的血清学指标之一，可以反映乙型肝炎肝炎患者病情的变化。     

慢性乙型肝炎和肝硬化及肝癌患者血清中anti-HBx测定及其临床意义

目的建立检测患者血清中HBV的x抗原（HBxAg）及其抗体（anti-HBx）的方法，阐明其在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中的临床意义。方法将HBV的x基因全长克隆至原核表达载体pET30a（＋）中，构建pET30a-X原核表达载体，转化人大肠杆菌BL21（DE3）后，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达His-HBx融合蛋白，纯化后将重组蛋白免疫家兔，制备兔抗HBx多克隆抗体。应用纯化后的兔抗HBx多克隆抗体和纯化后的重组蛋白，建立检测血清中HBxAg和anti-HBx的方法。应用建立的ELISA法，分别对慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者组及正常对照组血清中HBxAg和anti-HBx进行检测。结果HBxAg／anti-HBx在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的阳性率分别为8．7％／10．4％，17．9％／40．6％，9．8％／34．4％。统计学分析显示，与慢性乙型肝炎相比，肝硬化或肝癌患者血清中anti—HBx的阳性率较高（P〈0．01）。结合临床检测的其他HBV血清学指标，发现在anti-HBs阳性病例中，anti-HBx阳性率为5．2％（1／19）；而在HBsAg、HBeAg和anti-HBc3项同时为阳性的病例中，anti-HBx的阳性率为28．9％（39／135），二者相比，差异具有统计学意义（P〈0．05）。213名正常对照血清中HBxAg和anti-HBx均为阴性。结论血清中anti-HBx并非一个保护性抗体，标志HBV的感染和复制，是从慢性乙型肝炎向肝硬化和（或）肝癌发展的血清标志之一。     

乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建

目的构建含有乙型肝炎病毒(HBV)X基因的真核表达载体,并对其表达进行鉴定。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增X基因序列,对pcDNA6(+)载体及X基因PCR产物双酶切并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HBV X基因真核表达载体pcDNA6(+)-HBx。以多聚乙烯酰胺(PEI)法将其转染到HepG2细胞,Western Blot鉴定目的蛋白。结果 pcDNA6-HBx酶切后,琼脂糖电泳可见到HBx基因片段,经序列测定其含有完整的X基因片段;Western Blot结果显示pcDNA6(+)-HBx能在HepG2细胞中表达X蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA6(+)-HBx,并能在HepG2细胞中表达X蛋白,为进一步研究HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌的关系提供便利条件。     

乙型肝炎病毒X蛋白在HBV复制中作用的研究进展

乙型肝炎是全球范围的严重公共卫生问题之一,而我国是乙型肝炎的高发区,全球3&#183;7亿乙型肝炎病毒(HBV)携带者中,中国即占1/3。HBV属嗜肝DNA病毒家族,研究表明,HBV诱导机体免疫反应,直接或间接地改变肝脏细胞的结构和功能,引发肝脏细胞的凋亡、坏死或癌变。由HBV编码众多蛋白中,乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的作用相对不是很明确。目前研究认为,它是一种多功能调节蛋白,可反式激活多种细胞及病毒基因,在HBV致病和致癌机制中具有重要作用,从而引起广泛关注。1 HBV基因组结构及其转录与复制的特点HBV为含3&#183;2kb部分双链环状DNA的包膜病毒,其基因组含有4个重叠的开放读码框架,分别称为S、C、P和X区。此外,还包括4个启动子(SP1,SP2,XP,CP)和2个增强子(EnhⅠ,EnhⅡ),是HBV基因组的顺式活化元件。HBV感染过程中产生3&#183;5kb、2&#183;4kb、2&#183;1kb、0&#183;7kb等4种转录产物,分别编码HBcAg、HBeAg、DNA多聚酶、HBsAg及HBxAg。HBV的生活周期包括附着、侵入、脱壳、HBV RNA转录、HBV DNA复制、HBV病毒的包装与释放等过程。HBV进入肝细胞后脱去核壳,HBV基...     

顾客是上帝（Customer is God）是医院服务的永恒理念

Customer is God是医院永恒的服务理念，这是现在服务行业最时尚的、经常听到的最动听的语言。医院经常听到的是“病人是上帝”。但现在最具挑战性的是“员工是上帝”。那么，究竟病人(顾客)是上帝的理念好呢?还是员工是上帝的理念好呢。回答应该是：都不是，都是。病人是医院服务的客     

做最好的自己

这是网络所载2007年辽宁省高考作文题。对那些阳光灿烂的孩子来讲,这是理想也是现实,是学习生活的目标,也是人生奋斗的自勉。而于我,这实在是个很严肃的话题。     

白色的天使

<正>白色是纯洁的,是神圣的,是高尚的,是迷人的。它是天使的颜色,是真善美的化身!白衣天使,多么动听的名字,属于你,属于我,属于我们——守护人民健康的使者!爱是一盏灯,照亮别人,同时也会温暖自己;爱是一条船,载着希望,驶向幸福的彼岸。我们的丝丝温情,暖暖关爱,滴滴汗水,日夜忙碌,换来的是千家万户的健康与快乐。我们是天使,是专门来到人间祛病降魔的白衣天使。我幸运我是一名白衣天使,能戴着圣洁的燕尾帽,穿     

做最好的自己

这是网络所载2007年辽宁省高考作文题。对那些阳光灿烂的孩子来讲,这是理想也是现实,是学习生活的目标,也是人生奋斗的自勉。而于我,这实在是个很严肃的话题。