HLA血清特异性鉴定与血清图绘制原理

本文所涉及的课题是白细胞分型研究中的应用软件之一,文中对白细胞分型研究中血清特异性鉴定的数学原理作了阐述,对反应结果的尾巴部份进行聚类,以确定可能存在的新的特异性,并对血清图绘制的原理作了介绍。     

心内膜HLAⅡ类抗原的异常表达

正常心肌组织中不应该有HLAⅡ类抗原表达,我们在间接免疫荧光技术中采用抗HLA-DR 单克隆抗体作为第一抗体,FITC-羊抗鼠抗体作为第二抗体检测了6例扩张性心肌病(DCM)病人心内膜心肌活检标本及8例正常对照(先心开胸手术中或意外死     

成都地区HLA分型的研究——Ⅰ.HLA抗体的筛选

本文报导用微量淋巴细胞毒实验,在初产妇、经产妇及非孕经产妇血清中筛选HLA-A、B、C抗体的结果。前后共用1660人的淋巴细胞对8121份血清进行筛选,以杀死淋巴细胞70％以上为强阳性血清。并对影响试验的因索进行了讨论。     

人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定

目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。     

抗人类白细胞抗原Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体在同种带瓣大动脉移植后的免疫表达

目的:探讨先天性心脏病患者移植液氮保存同种异体带瓣大动脉(CVH)后抗人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体的免疫表达规律。方法:选择2001年10月至2003年10月施行液氮保存的CVH移植术的20例复杂先心病患者,分别于术前、术后1个月、3个月、1年不同时间点,以莱姆德抗原板通过酶联免疫吸附方法检测患者血清内的抗HLA-Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体,并与同期施行其他复杂先心病矫正术的20例患者进行比较。结果:所有患者术前抗体为阴性,CVH移植患者在术后1个月、3个月和1年时抗HLA-Ⅰ类抗体阳性率分别为(9.28±6.64)%、(62.14±11.95)%和(66.79±13.42)%,Ⅱ类抗体阳性率分别为(22.92±15.74)%、(41.67±18.73)%、(52.92±20.01)%,且1年内两类抗体的阳性率均呈上升趋势,对照组患者则全为阴性;两类抗体表达阳性率与患者年龄呈负相关。结论:液氮保存的CVH移植后可诱导受体产生抗HLA-Ⅰ类、Ⅱ类IgG抗体介导的体液免疫反应,而且患者年龄越小这种反应越强烈。     

麻风杆菌特异性抗原酚糖脂-Ⅰ的单克隆抗独特型抗体的制备及初步鉴定

作者将BALB/c鼠造成对人IgM分子的耐受状态后,再用从麻风病患者血清中分离的IgM型抗酚糖脂-Ⅰ(PGL-Ⅰ)抗体免疫,并经细胞融合,获得持续分泌单克隆抗独特型抗体(McAb_2)的细胞株4C_4。经鉴定,该McAb_2与兔抗PGL-Ⅰ抗体(Ab_1)的结合能被NT-O-BSA(PGL-Ⅰ的人工类似物)竞争抑制;McAb_2还能阻断纯化人Ab_1与NT-O-BSA的结合。以上均表明该McAb_2为具有PGL-Ⅰ抗原内影像作用的单克隆抗独特型抗体;McAb_2模拟抗原试验结果显示,该McAb_2具有代替PGL-Ⅰ用于麻风血清学诊断的可能性。     

肺炎克雷伯氏菌特异性抗原的筛选与鉴定

目的寻找肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)血清学检测用特异性抗原。方法双向电泳分离K.pneumoniae总蛋白,通过免疫印迹(Western blotting)与常见病原菌的多抗反应筛选特异性抗原蛋白,原核表达该蛋白并用ELISA法验证。结果获得K.pneumoniae的双向电泳图谱。寻找Western blotting中与K.pneumoniae自身多抗反应而不与与其它病原菌多抗反应的蛋白,质谱鉴定为酸性磷酸酶(Acid phosphatase,GI:238894261)。经表达纯化并以酶联免疫吸附试验(ELISA)验证,证明该蛋白作为包被抗原的灵敏度高,特异性强。结论 K.pneumoniae酸性磷酸酶是适用于该菌感染检测特异性抗原蛋白。     

乙型病毒性肝炎抗原,抗体的调查(Ⅱ、抗核心抗原、抗体)

1982年我们对311例各型肝病病人和200名供血员进行了抗-HBc、HBsAg、抗-HBs的检测,报告如下一、方法与标准 1.检测方法抗-HBc、HBsAg、抗-HBs的检测分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA),反相被动血凝(RPHA)及被动血凝(PH4)法。 2.阳性标准抗-HBc稀释度≥1:100者判定为阳性,HBsAg及抗-HBs稀释度≥1:8及血凝试验集终点超过中和试验二孔以上者判定为阳性。     

抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础.方法 制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200 μg,初次免疫后28 d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10 d.水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化.结果 免疫后55 d的每个鸡蛋能提取40~55 mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35 ku和60 ku,即IgY的轻链和重链.初次免疫后10 d左右出现抗体,至免疫后50~55 d为高峰,效价达到1 ∶ 10 000以上.IgY与人血清抗体均可识别30 ku处钩虫抗原.结论 十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础.     

原发性干燥综合征患者血清 ANA、抗－SSA 抗体、抗－SSB 抗体检测分析

目的：探讨原发性干燥综合征（PSS）患者血清抗核抗体（ANA）、抗干燥综合征 A 抗体（抗－SSA）及抗干燥综合征 B 抗体（抗－SSB）检测的临床意义。方法：采用间接免疫荧光法（IIF）检测血清 ANA,免疫印迹法检测血清抗－SSA、抗－SSB 抗体。收集80例 PSS 患者为疾病组,100例健康人群为对照组,并对结果进行分析。结果：疾病组血清抗－SSA 抗体、抗－SSB 抗体、ANA 阳性率均高于对照组;年龄≥50岁的 PSS 患者抗－SSA、抗－SSB 抗体及 ANA 的阳性率均较高;疾病组 ANA 滴度为1∶100的阳性率较高。结论：血清 ANA、抗－SSA 及抗－SSB 抗体测定对 PSS 的诊断有重要参考价值,是判断病情和评价预后的重要手段。     

骨肉瘤中HLAⅠ类抗原表达的初步观察

检测并比较了ＨＬＡＩ类抗原（ＨＬＡ－Ａ、Ｂ位点）在２５例中国汉人典型骨肉瘤患者及２５０例健康汉人的表达频率，发现ＨＬＡ－Ｂ３５抗原在骨肉瘤组频率为０．４０，对照组为０．０４８，统计显示携带ＨＬＡ－Ｂ３５抗原的中国汉人骨肉瘤发病的相对风险率是不带此抗原者的１３．２２°倍（Ｐ＜０．０１）。此外，ＨＬＡ－Ｂ１３与骨肉瘤患者的不良预后相关，其相对风险率为１２．０４８倍（Ｐ＜０．０５），同时携带ＨＬＡ－Ｂ１３与ＨＬＡ－Ｂ３５抗原的患者，更表现出预后差的趋势。     

原发性肝细胞癌的HLA—Ⅰ类抗原表达

目的 确定体内原发性肝细胞癌细胞的HLA-Ⅰ类抗原表达情况。方法 采用免疫组织化学LSAB法对6例原发性肝细胞癌冰冻组织进行研究。结果 6例标本的肝癌细胞都有较强的HLA-Ⅰ类抗原表达。结论 从HLA-Ⅰ类抗原表达角度看,研制肝癌CTL疫苗是可行的。     

人肝癌细胞的HLA—Ⅰ类抗原表达

为了为肝癌细胞毒性Ｔ细胞疫苗设计、构建及免疫治疗策略的决策提供体外实验研究依据,采用免疫细胞化学ＬＳＡＢ法及流式细胞术观察了体外培养人肝癌细胞的ＨＬＡ－Ⅰ类抗原表达情况。结果显示,人肝癌细胞株Ａｌｅｘａｎｄｅｒ、ＨｅｐＧ２、ＳＭＭＣ－７７２１、ＱＧＹ－７７０３都有较强的ＨＬＡ－Ⅰ类抗原表达,这使细胞毒性Ｔ细胞杀伤肝癌细胞成为可能。     

北京地区汉族人白细胞抗原系统(HLA)的研究Ⅱ淋巴细胞毒抗血清特异性分析与鉴定

本研究应用微量淋巴细胞毒实验筛选出来的261支强阳性抗体血清,在三个棋盘实验中,同83支包含44个特异性的国际标准血清,39个已知型别抗原指定区及北京地区汉族人随机人群(n=92)的已知型别“标准细胞”进行关联分析。通过聚类分析、包含分析、补充聚类包含分析等多条计算途径的分析,得到检定出型别的抗血清162支,包含有39个特异性。其后,我们将这些捡出型别血清,先后分别又在两个棋盘中(应用标准细胞)再次进行了鉴定,挑选出可作为分型试剂使用的血清82支,计包含有25种特异性,其中除掉只有单支血清的特异性之外,可组合成用以鉴定18种抗原特异性的配组血清。     

北京地区汉族白细胞抗原(HLA)抗血清的筛选及其特异性的鉴定(摘要)

人类白细胞抗原(HLA)与器官移植、疾病相关及免疫学基本理论关系密切。白细胞分型的基本工具为分型血清,它是从孕妇血液中通过大规模筛选而得。本文报导了北京地区1,544份孕妇产道自然流血中通过筛选获得了253份细胞素反应阳性的血清。将     

产后阴道血筛选HLA人白细胞抗原定型血清

目前国际上已确定HLA—A、B、C、D、四个位点及DR相关位点,共检出77个抗原。我国上海已检出11个抗原。为研究HLA—A、B、C位点的抗原及DR相关位点的抗原,筛选定型血清是关键问题。自从1958年Dausset利用输血病人血清鉴定了第一     

胃癌MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达的研究

目的探讨组织相容性复合体Ⅰ、Ⅱ(MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)类抗原表达与胃癌发生发展的关系.方法应用流式细胞仪检测胃癌、癌旁组织、慢性胃炎及正常胃粘膜组织MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原的表达,并结合临床病理进行分析.结果MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原在胃癌组织的表达分别为26.58±11.21、29.85±10.84,显著低于癌旁组织(72.36±25.59,63.89±18.46)、慢性胃炎(78.51±21.26,66.55±23.24)、胃溃疡(74.88±24.29,61.36±27.71)及正常胃粘膜组织(76.13±16.22,66.32±16.53)(P均＜0.01),而癌旁组织、慢性胃炎、胃溃疡及正常组织之间无明显差异(P均＞0.05);高、中、低分化胃癌组织MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达分别为(40.32±19.56,31.67±14.38)、(29.51±17.16,30.29±13.78)、(10.83±5.51,28.71±11.64),MHC-Ⅰ在各组比较差异显著(P均＜0.05),MHC-Ⅱ比较无明显差异(P均＞0.05);伴远处淋巴结转移较局部转移和无转移MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达明显降低,后二者也有明显差异(P均＜0.05);伴肠上皮化生及不典型增生胃粘膜MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达较单纯慢性胃炎明显降低(P均＜0.05);肠上皮化生较轻、中度不典型增生无明显差异(P＞0.05);而重度不典型增生较轻、中度不典型增生及肠上皮化生胃粘膜MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达明显降低(P均＜0.05).结论MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类抗原表达降低在胃癌发生发展中起重要作用.     

各型乙型肝炎HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原免疫组织化学研究

用免疫组织化学桥联酶标APAAP法和PAP法对各型乙型肝炎113例检测了肝内的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原、T细胞亚群、HBsAg和HBcAg,同时测定血清HBV DNA(斑点杂交)和β_2微球蛋白(RIA)。结果表明;急性肝炎、慢性活动性肝炎、重症肝炎患者的肝细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达增强,尤以Ⅰ类抗原明显,慢性迁延性肝炎则几乎无表达。肝细胞HLA-Ⅰ类抗原表达与肝内炎症反应、肝细胞膜型HBSAg和浆膜型HBcAg关系密切,肝内活动性病变主要浸润细胞为CD_2~ 细胞,CD_0~ 细胞构成主要的细胞亚群。认为抗原依赖的、HLA限制的细胞毒性T细胞效应是构成乙型肝炎免疫损害的主要机制。     

HLA单抗原特异性抗体检测技术治疗血小板输注无效的应用

目的 分析血小板输注无效（PTR）患者的HLA-I类抗体分布特征,探讨供者特异性抗体（DSA）回避策略对血小板输注疗效的影响。方法 选取2020年4月至2022年5月复旦大学附属儿科医院（安徽省儿童医院）、中国科学技术大学附属第一医院（安徽省立医院）等送检的血小板输注无效患者223例,采用固相凝集法对PTR患者进行血小板抗体筛查,并对确定为HLA-I类抗体阳性患者采用HLA单抗原特异性抗体检测技术进行HLA-I类抗体高分检测,通过DSA回避策略,选择抗体对应抗原阴性的供者血小板进行配合性输注,根据患者24 h血小板计数增加值（CCI）评价血小板输注效果。结果 在223例PTR患者抗体筛查中发现130例患者抗体筛查为阳性,并对确定为HLA-I类抗体的42例患者进行HLA-I类特异性抗体鉴定,HLA-I类特异性抗体阳性率为32.31%(42/130),其中HLA-I类抗体强阳性者21例、中阳性者37例、弱阳性者41例,抗体强弱检出率分别为50%(21/42)、88.10%(37/42)和97.62%(41/42)。统计发现37例PTR患者HLA-I类特异性抗体（Raw Value>4...