显微操作仪快速分离癌细胞并提取微量RNA的方法

目的：建立一种快速分离、纯化肿瘤组织癌细胞并提取微量RNA的方法。方法：将肿瘤组织冰冻切片，快速染色，在镜下用显微操作仪从切片上分离癌巢，收集癌细胞，提取RNA并鉴定。结果：冰冻切片染色清楚，癌巢分离准确，成功抽提到高质量的RNA。结论：显微操作仪可以代替激光捕获显微切割仪进行特定细胞的分离，该方法可用来从少量组织的特定细胞中抽提RNA。     

手工组织显微切割食管癌不同病变阶段细胞提取高质量RNA

目的 建立手工组织显微切割方法准确挖取食管癌不同病变阶段细胞,从中提取高质量RNA,以满足后续基因表达分析的需要。方法 常规制备冰冻组织切片,用无水乙醇一次性脱水固定,显微镜下用1ml注射器针头从组织冰冻切片中分别挖取不同病变阶段的细胞,用TRIzol提取总RNA。结果 手工挖取面积可准确到1／25mm^2,从挖取的细胞中提取出高质量的总RNA,凝胶电泳分析见清晰的18S和28S rRNA带,可满足后续分子水平研究的要求。结论 无水乙醇固定冰冻组织切片可有效保存RNA的完整性,手工组织显微切割能够准确挖取小至1／25mm^2面积的细胞,方法简单、易掌握、易操作,不须特殊仪器设备,适合在一般实验室推广应用。     

一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法

目的 建立一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法.方法 分别提取捕获样本和染色前、染色后1和2 h、持续捕获1和2 h切片及残余组织的RNA,琼脂糖电泳检测;激光捕获显微切割(LCM)样本RNA的产率可通过理论值初步估计.结果 当染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA质量完好时,捕获样本的RNA质量完好,实时定量PCR亦获得了良好的扩增结果.结论 使用琼脂糖凝胶电泳分别检测染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA的质量,可以从不同的环节和过程对捕获样本RNA进行间接检测,该方法简单方便有效,并可进一步用于LCM样本蛋白质及DNA等大分子的质控.     

石蜡包埋组织显微切割后快速DNA提取技术

肿瘤的分子病理和分子遗传学研究常受到肿瘤组织成分多样性和取材准确性的影响 ,如瘤组织间质成分以及出血、坏死物等。这些非肿瘤组织的细胞基因组ＤＮＡ将影响肿瘤的分子生物学研究结果。本文以半巢式ＰＣＲ技术扩增胰腺癌组织Ｋ -ｒａｓ基因为例 ,探讨一种不经过复杂的酚 -氯仿抽提 ,而利用组织细胞显微切割技术快速、准确提取石蜡包埋组织ＤＮＡ的方法。1　材料与方法1.1　仪器　ＰＣＲ扩增仪 (Ｈｙｂｒｉｄ公司 ) ;低温高速离心机 (Ｓｉｇｍａ公司 ,3Ｋ30型 ) ;凝胶图像成像仪 (ＢＩＯ -ＲＡＤ公司 ,ＧＥＬ -Ｄｏｃ2 0 0 0型 ) ;立体镜…     

从培养细胞中快速提取总RNA的简便方法

在分子生物学实验中 ,RNA提取常常是令研究人员尤其是初学者头疼的项目 ,因为 RNA酶在自然环境中广泛存在 ,且不易失活 ,所以 ,很难方便地提取纯度和完整性均满足分子生物学实验需要的 RNA分子。尽管目前已有异硫氰酸胍 - Cs Cl超速离心法 [1 ]、TRIzol试剂法 [2 ]等各种各样提取RNA的方法 ,但是 ,这些方法中有些方法步骤繁琐 ,耗时长 ,有些方法所需试剂昂贵 ,消耗大。笔者在实验中使用肝素作为 RNase抑制剂 ,结合 L i Cl特异沉淀 RNA,摸索一种新的从培养细胞中提取总 RNA的快速简便方法。1　材料与方法1.1　试剂1.1.1　 TEL　 …     

超声快速处理仪快速病理诊断70例分析

目的:探讨超声快速处理仪快速切片在术中快速病理诊断中的应用价值。方法:回顾性分析70例术中超声快速处理仪快速切片病理诊断资料,并和常规石蜡切片诊断相比较。结果:70例术中明确诊断者67例,延迟诊断者3例,与常规石蜡切片诊断结果完全相符。结论:超声快速处理仪快速切片可满足术中快速病理诊断需要,不仅可作出良恶性质的判断,而且能分出各种亚型;且成本小,值得在基层医院推广。     

一种从微量组织中提取RNA的方法

实验动物模型是生命科学领域内一项非常重要的组成部分，小鼠模型因其再现性好，复制率高而被广泛应用。但由于其体积小、组织小，在对某些病变进行分子水平观察时，尤其对微小病变组织的RNA提取更受到了很大限制。用传统的研钵碾碎组织会使微小组织损失更严重，回收率很低，导致实验无法顺利进行。为此，作者改变了传统的研钵碾碎的方法，     

金线莲RNA提取方法的改进

目的：有效提取金线莲RNA，为研究内生真菌促进其生长机制奠定基础。方法：CTAB法制备RNA，1％琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像仪照相。结果：提取的RNAA260／A230为2．054，A260／A280为1．818，产量达154．35μg/g。电泳条带清晰，RNA完整性好。结论：用该方法能高质高量地制定富含多糖和酚类化合物的药用植物RNA。     

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃下保存1周前、后分别测定浓度和纯度,观察两者差异。结果新鲜血来源的总RNA浓度最高,平均306.51ng/μl;冻融2次全血仍可获得足量的RNA,浓度181.98ng/μl,RNA完整性有所下降;-80℃保存1周的RNA,浓度和纯度都略有下降。结论利用Trizol法可从小体积全血标本中获取足量有效的总RNA;不同保存条件全血中所获取的总RNA浓度存在差异;总RNA-80℃短期保存也会略有降解。     

lncRNA HOTAIR在宫颈癌组织及HeLa细胞中的表达及其生物学功能研究

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在宫颈癌组织中的表达及其生物学功能.方法 选取简阳市人民医院2014年8月至2016年7月收治并手术治疗的宫颈癌患者47例,采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织及癌旁正常宫颈组织中HOTAIR RNA的相对表达量;以人宫颈癌Hela细胞为研究材料,应用小RNA干扰技术下调宫颈癌Hela癌细胞HOTAIR RNA表达,分别应用CCK-8实验、Wound Healing实验检测小干扰RNA下调HOTAIR表达前后Hela细胞增殖和迁移能力变化情况.结果 HOTAIR在宫颈癌患者癌组织与癌旁正常宫颈组织中的相对表达量分别为(6.89±2.12)与(4.02±1.89),癌组织显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组细胞相比,外源性小干扰RNA可显著敲低Hela细胞中HOTAIR的表达并影响其增殖和迁移(P<0.05).结论 宫颈癌患者癌组织中HOTAIR表达水平高于癌旁正常宫颈上皮;HOTAIR可能参与了宫颈癌细胞增殖和迁移等生物学功能.     

快速提取白念珠菌总RNA的新方法研究

目的 探讨快速提取理想白念珠菌总RNA的实验方法.方法 对静止相和菌丝相的白念珠菌国际标准菌株ATCC90028采用冷酸洗玻璃珠联合Tripure法提取总RNA,用紫外分光光度计测量其OD260、OD280的值,并进行琼脂糖凝胶电泳.结果 提取的白念珠菌酵母和菌丝相总RNA产量分别为1.944 0、1.962 4,且OD260/OD280比值介于1.8～2.0范围内,电泳显示提取的总RNA呈现28s rRNA,18s rRNA和5s rRNA 3条清晰的条带.结论 冷酸洗玻璃珠联合Tripure新方法快速且完整性好,值得推广.     

真核细胞RNA的提取和mRNA纯化方法探讨

为采取简便、快速、经济的方法获得高质量的RNA和mRNA，本实验比较了氯化铯超速高心、胍盐／热酚法和“一步法”提取总RNA以及采用Oligo（dT）玻璃柱或离心柱分离纯化mRNA的方法.结果表明:“一步法”与任一种纯化mRNA的方法合用均能获得高纯度、未被降解的RNA和mRNA而可被用于多种实验研究。     

结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞

目的：探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞（mDCs）的转染效率及对树突状细胞(DCs）特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法： 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞（imDCs）,肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）作用24 h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果：rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4 h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高（P＜0.01), 而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性（P>0.05)。结论：结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。     

从福尔马林固定-石蜡包埋淋巴组织抽提RNA的影响因素研究

目的探讨从福尔马林固定-石蜡包埋(FFPE)淋巴组织提取RNA的影响因素.方法以新鲜淋巴组织为对照,改变福尔马林固定时间及组织裂解方法,采用22对TCR Vβ CDR3区域特异性引物,观察从FFPE淋巴组织提取RNA的产量及其作为RT-PCR模板的扩增效率.结果蛋白酶K法提取效率显著高于Trizol法,所提取RNA的可扩增性随福尔马林固定时间的延长而下降,TE 70 ℃孵育60 min去修饰处理可显著提高所提RNA的可扩增性.结论从FFPE组织提取RNA完全可行,尽量短的固定时间、蛋白酶K消化及去修饰处理是必要的.     

适于基因芯片实验的小鼠脑组织RNA提取方法的改进

目的 比较Trizol与两种常用提取试剂盒对小鼠脑组织RNA提取质量的差异,并进行方法改进,以期找到适合于基因芯片的高质量组织RNA提取方法. 方法 以小鼠脑组织为材料,Trizol试剂、Ambion和天根组织RNA提取试剂盒提取总RNA,并对试剂盒提取方法进行改良,检测改良前后RNA浓度、纯度和完整性以及反转录成cRNA的浓度. 结果 与改良前相比,试剂盒经方法改良后提取的RNA产量均有提高;Ambion试剂盒提取的RNA纯度优于Trizol和天根试剂盒. 结论 Ambion试剂盒经方法改良后RNA提取质量优于其他方法,适合于基因芯片的实验要求.     

乳癌组织中端粒酶活性与端粒酶RNA的表达

目的:分析乳癌组织中端粒酶(telomerase)活性和端粒酶mRNA(hTR)的表达.方法:采用PCR-TRAP-ELISA法对54例乳癌、配对癌旁及30例乳腺良性病变组织中端粒酶活性进行半定量检测,运用原位杂交方法检测hTR的表达.结果:癌组织中端粒酶活性及hTR表达率高于癌旁及良性病变组织(P＜0.01).乳癌组织中端粒酶活性的表达与患者年龄、肿块大小、分化程度无关(P＞0.05),但与组织学类型及淋巴结转移关系密切(P＜0.05).结论:端粒酶激活与乳癌的发生关系密切.     

简便快速提取心肌组织总RNA

利用高浓度尿素变性蛋白质抑制ＲＮＡ酶，氯化锂（ＬｉＣｌ）选择性沉淀ＲＮＡ，酚／氯仿抽提除去变性的蛋白质、脂类及ＤＮＡ。结果表明：该法适合大量样品少量组织细胞的ＲＮＡ提取。