He-Ne激光对兔眼小梁切除术后滤过道瘢痕化的影响及其机制

目的:研究He-Ne激光对兔眼小梁切除术后滤过道瘢痕化的影响及其机制,探讨He-Ne激光在青光眼小梁切除术中的应用价值。方法:于小梁切除手术前采用功率密度200mW/cm2He-Ne激光照射兔眼(右眼)手术区,照射部位选择鼻上象限角膜缘紧邻上直肌处,光斑直径4mm,照射时间10min,1次/d,连续照射3d。最后一次照射后24h实施双眼小梁切除术。手术后第7,14,28d检测手术区组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF);第14和第28d检测胶原密度(masson染色)。左眼设为单纯手术对照组。每时间点各7只兔。结果:手术后第7,14d,He-Ne激光组CTGF表达较对照组减少(P=0.01;P=0.005)。手术后第14,28dHe-Ne激光组胶原密度显著低于对照组(P=0.013;P=0.01)。结论:功率密度200mW/cm2He-Ne激光预照射小梁切除术手术区域,可下调术后该区域成纤维细胞CTGF表达并减少胶原合成,可能有助于减少兔眼小梁切除术后滤过道瘢痕形成。He-Ne激光有可能为预防青光眼滤过手术后瘢痕化提供新的方法。     

The influence of He-Ne laser on scar formation after trabeculectomy in rabbits

AIM: To investigate the influence of He-Ne lasers on scar formation in the filtration canal after trabeculectomy in a rabbit model, as well as to explore the mechanisms for preventing scar formation when using He-Ne lasers in vivo. METHODS: Experiment 1: Four groups were established (four eyes in each group). In 12 eyes, the upper nasal limbus area next to the upper rectus muscle received 10 minutes of He-Ne laser irradiation (100, 150, 200mW/cm2; 60, 90, 120J/cm2) every day for three days. Four eyes served as controls. Twenty-four hours after the final irradiation, the rabbits were sacrificed and the irradiated tissue was excised, fixed with paraformaldehyde and tested for proliferating cell nuclear antigen (PCNA), connective tissue growth factor (CTGF) and apoptosis (TUNEL). Experiment 2: Forty-two rabbits were randomly divided into two groups and standard trabeculectomy was performed in the right eyes either after 200mW/cm2 He-Ne laser irradiation or not in the filtration area. The expression of PCNA and CTGF, apoptosis and collagen density in the filtration area were tested on the 7th, 14th and 28th day after surgery. RESULTS: Experiment 1: There were no more PCNA and CTGF positive cells in the He-Ne irradiation group than in the control group. No apoptotic cells were found in either group. Experiment 2: The expression of PCNA and CTGF was lower in the He-Ne irradiation group than in the control group on the 7th and 14th day after trabeculectomy surgery (P＜0.05); no apoptotic cells were detected in either group. Collagen density was significantly lower in the He-Ne irradiation group than in the control group on the 14th and 28th day after surgery (P＜0.05＝. CONCLUSION: Pretreating the filtration area with 200mW/cm2 (120J/cm2) of He-Ne laser irradiation may be helpful in preventing scar formation after trabeculectomy, possibly due to the downregulation of the expression of PCNA, CTGF and collagen synthesis in fibroblasts.     

CTGF在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成中的表达

目的:以兔为动物模型,观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成过程中的表达,初步探讨CTGF在滤过泡瘢痕形成机制中的作用。方法:健康成年家兔28只,随机选取1眼行小梁切除术,另1眼不手术作为对照,分别于术后第1,3,5,7,10,14,21d分批处死,另取2只兔不手术作为正常对照,于术前处死。摘除眼球,剪取滤过泡区域组织,制成病理切片,行常规HE染色及免疫组织化学检测(SABC法),光镜下观察并行图像定量分析。结果:CTGF在对照组织标本中几乎无阳性表达,手术后表达上调,主要表达于成纤维细胞胞浆中,手术后第5d达高峰。结论:在滤过泡瘢痕形成过程中,CTGF发挥了重要的作用,阻断CTGF的基因表达或抑制其活性,可能为防止青光眼滤过手术的失败提供一个新的治疗途径。     

紫杉醇在小梁切除术中的应用及其抗增生作用的研究

背景青光眼滤过手术是控制高眼压的主要方法,而滤过泡的纤维增生是手术失败的主要原因。寻找安全、有效的抗瘢痕药物是抗青光眼研究的主要目标之一。目的探讨紫杉醇在小粱切除术中的应用,评价紫杉醇对结膜下滤过泡的抗增生作用。方法32只家兔双眼行标准小梁切除术,随机分为生理盐水组、0．3g／L丝裂霉素C（MMC）组、0．2g／L紫杉醇组及0．3g／L紫杉醇组,每组8只兔16只眼。滤过手术术中巩膜瓣下分别用生理盐水、MMC、0．2g／L紫杉醇及0．3g／L紫杉醇浸泡3min。术后4、7、14、28d用Schlitz眼压计测量眼压、裂隙灯下观察滤过泡情况,并分别在上述各时间点处死2只兔,摘除动物眼球,取5mmx5mm滤过道处组织行苏木精一伊红染色、Massoni色染色比较各组滤过道开放情况、炎性细胞数量和新生胶原纤维的增生情况。结果手术前及手术后第4天,4个组兔眼压的总体比较差异均无统计学意义（F=0．54,P=0．83;F=0．57,P=0．87）。术后第7、14、28天,MMC组、0．2g／L紫杉醇组及0．3g／L紫杉醇组眼压明显低于生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;0．3g／L紫杉醇组眼压值均低于其他3组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。术后第4天,4个组兔手术眼均为功能型滤过泡,术后第7、14、28天,MMC组、0．2g／L紫杉醇组功能型滤过泡的眼数均明显多于生理盐水组,但少于0．3g／L紫杉醇组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。苏木精一伊红染色表明,术后生理盐水组滤过道炎性细胞数量明显多于其他3组,0．3g／L紫杉醇组炎性细胞浸润最少。Masson染色显示,0．3g/L紫杉醇组新生胶原纤维增生情况明显少于其他3组。结论小梁切除术中局部应用紫杉醇能抑制炎性细胞、胶原纤维的增生,有助于功能型滤过泡的形成,可有效降低眼压。     

兔眼小梁切除术后结缔组织生长因子的表达

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在兔眼小梁切除术后滤过泡中的表达及意义.方法 对照实验研究.将49只健康家兔分为5组:正常眼未手术组(A组),高眼压未手术组(B组),高眼压模型小梁切除术组(C组),正常眼小梁切除术组(D组),正常眼假手术组(E组),并分别在术后第2、5、7、14及21天,取右眼滤过泡部位的球结膜和浅层巩膜组织,A组和B组作为对照组.采用RT-PCR法检测CTGF mRNA的相对表达量,应用免疫组织化学方法 检测CTGF蛋白表达水平,HE染色行组织病理学检查.采用SAS 9.1.3统计学软件,对逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测结果 采用析因设计定量资料方差分析.结果 C、D、E组术后CTGF表达水平高于A组和B组,术后第5天CTGF表达水平达到高峰,与其他时间点的表达差异有统计学意义(F=19.54,P<0.05);术后第2和5天,CTGF mRNA表达水平,C组高于同期D组(t=2.300,5.140;P<0.05);术后第2、5、7、14天,D组高于同期E组(t=-2.927,-6.424,-4.176,-4.997,P<0.05).CTGF蛋白表达水平,术后第2、5、7、14天,C组高于同期D组(t=-7.147,-10.955,-9.900,-6.385,P<0.05);术后第2、5、7、14天,D组高于同期E组(F=68.33,P<0.05).组织病理学检查结果 显示,术后第5天,C、D、E组局部炎性反应达高峰,表现为中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞浸润,成纤维细胞增殖达高峰.结论 小梁切除术后家兔CTGF表达水平的变化趋势表明,CTGF在伤口愈合及瘢痕形成过程中可能起重要作用,高眼压状态可促进CTGF表达水平上调.(手华眼科杂志,2009,45:168-174)     

重组人干扰素α-2b原位凝胶滴眼剂对兔小梁切除术后滤过瘢痕的影响

目的与传统干扰素α-2b(IFNα-2b)滴眼液相比,观察IFNα-2b原位凝胶滴眼剂在家兔实验性滤过手术后的抗瘢痕化作用。方法选取健康新西兰大白兔10只,随机平均分为两组。全部家兔均双眼进行标准小梁切除手术。右眼作为实验眼,左眼作为对照眼。手术第2天起右眼滴用IFNα-2b原位凝胶或滴眼液,4次/d,持续至术后14d。观察术前、术后眼压变化。术后28d,处死所有家兔,取滤过区组织,进行苏木素-伊红(HE)染色,观察滤过区瘢痕形成情况。结果除术后第2周滴用IFNα-2b滴眼液组双眼眼压差异无统计学意义(P=0.145)外,其余术后各时间点,两组家兔眼压右眼均低于左眼,差异有统计学意义(P<0.05)。术后各时间点,使用原位凝胶眼的眼压均低于使用滴眼液眼的眼压,但是差异并不具有统计学意义(P>0.05)。滤过区HE染色发现IFNα-2b滴眼液组巩膜瓣下纤维结缔组织明显较对照组少,成纤维细胞相对较少,并可见部分滤过泡间隙。IFNα-2b原位凝胶组可见巩膜瓣下结缔组织形态较规则,成纤维细胞较少,可见明显滤过泡间隙。所有手术眼均未发现明显眼部炎症表现。结论 IFNα-2b原位凝胶及IFNα-2b滴眼液均能显著抑制家兔实验性滤过性手术后的瘢痕形成。IFNα-2b原位凝胶的抗瘢痕作用略优于滴眼液。     

Control of filtering bleb structure through tissue bioengineering: An animal model

PURPOSE: To devise a means of providing controlled resistance between the anterior chamber and the subconjunctival space after trabeculectomy by implantation of a biodegradable, porous collagen matrix. METHODS: Matrices were implanted in the right eyes of 17 rabbits after trabeculectomy, while left eyes served as surgical controls. The scleral flap was sutured loosely, and the implant provided pressure on the scleral flap to reduce overfiltration. Trabeculectomy in the control eyes was performed with tight sutures using standard methodology. Intraocular pressure (IOP) was measured before surgery and on days 3, 7, 14, 21, and 28 after surgery. Masson trichrome and alpha-smooth muscle actin stains were used for histologic study of the filtering blebs. RESULTS: The initial postoperative IOP reduction was approximately equal, at 14% to 16%, for both groups. In the implanted group, the IOP continued to decrease to 55% below baseline at day 28 as the implant gradually degraded. In the control group, IOP had returned to the preoperative level by day 21. Histologic examination with Masson trichrome and alpha-smooth muscle actin stains showed a prominent bleb in the implanted group compared with scar formation and limited bleb formation in the control group. CONCLUSIONS: Implantation of a biodegradable, porous collagen matrix in the subconjunctival space offers the potential for a new means of avoiding early scar formation and maintaining long-term IOP control by creating a loosely structured filtering bleb.     

大蒜素对青光眼滤过术后兔眼滤过泡瘢痕化的抑制作用

目的　探讨大蒜素对青光眼滤过术后兔眼滤过泡瘢痕化的抑制作用。方法　取健康同品系大白兔36只72眼,随机分成大蒜素组、丝裂霉素组、生理盐水组,每组24眼,均行小梁切除术。各组分别将浸有大蒜素（1.112 kg·L^-1）、丝裂霉素（0.3 g·L^-1）、生理盐水的棉片放置于结膜囊-巩膜瓣-巩膜床层间,5 min后完全取出棉片,充分冲洗。术后各组分别测眼压,观察滤过泡的形态,计算滤过泡面积并行眼前节照相。术后28 d处死各组兔,行HE染色及Masson染色对比观察各组结膜下瘢痕增生情况。结果　术后第1天3组眼压较术前降低,随后眼压逐渐回升。各组不同时间内的眼压差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术前及术后1 d、4 d、7 d、14 d两两比较中除术后4 d丝裂霉素组眼压比生理盐水组低（P=0.025）外,其余各时间眼压两两比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。术后28 d生理盐水组眼压高于大蒜素组和丝裂霉素组（均为P<0.05）,大蒜素组和丝裂霉素组相比差异无统计学意义（P>0.05）。术后1~4 d 3组滤过泡面积分别达到最大值,之后滤过泡面积逐渐减小。统计学分析结果示3组滤过泡面积减小量在不同的时间点上是不同的（P<0.05）。不同分组之间的滤过泡面积减小量有明显差异（P<0.05）。术后大蒜素组与丝裂霉素组滤过泡面积减小幅度相同,差异无统计学意义（P>0.05）,生理盐水组比大蒜素组和丝裂霉素组的滤过泡面积减小速度更快,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术后28 d各组结膜上皮均完整无破损及增厚。HE染色显示大蒜素组和丝裂霉素组兔眼瘢痕组织较少,滤过通道较宽;生理盐水组兔眼瘢痕组织较多,滤过通道狭窄。Masson染色显示大蒜素组和丝裂霉素组可见少量炎性细胞浸润,滤过区成纤维细胞及胶原纤维疏松,结膜及巩膜间隙较宽;生理盐水组可见大量炎性细胞浸润,滤过区成纤维细胞及胶原纤维致密,结膜及巩膜间隙较窄,形成大量的瘢痕组织。术后 28 d 根据胶原纤维占整个结膜和巩膜空间总面积的百分比分析,大蒜素组［（58.13±5.33）%］比丝裂霉素组［（62.42±2.95）%］胶原纤维少,差异有统计学意义（P<0.05）,大蒜素组和丝裂霉素组均比生理盐水组［（89.75±3.91）%］胶原纤维少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　大蒜素和丝裂霉素有着相同的功效,可通过抑制小梁切除术后滤过泡瘢痕化,对功能性滤过泡有一定的维持作用。     

应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型的研究

目的探讨应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型的可行性。方法选用35只健康成年SD大鼠作为实验动物,在全身麻醉下行单侧眼球滤过性手术,术后观察结膜滤过泡的形成情况,并观察眼前节反应;手术后1、3d,1、2、4周共5个时间点各处死3只大鼠,摘除其眼球,常规10％福马林固定,切片,HE染色,观察其病理改变,并以对侧眼作为正常对照。结果所有大鼠在手术后7d均有结膜滤过泡形成;手术后8d,结膜滤过泡消失,最长的结膜滤过泡能够维持21d。组织病理学观察显示,术后1d,结膜下组织疏松水肿,血管扩张、充血明显,有较多中性粒细胞浸润;术后3d,结膜下组织血管扩张、充血,除有中性粒细胞浸润外,还可见单核巨噬细胞浸润,结缔组织疏松、水肿较前减轻;术后7d,血管扩张充血程度较术后3d时减轻,有较多的纤维母细胞增生,纤维母细胞的细胞核呈椭圆形、胞质丰富,在纤维母细胞周围,可见少量疏松的胶原纤维形成;术后2周,纤维母细胞数量较术后1周时有所减少,细胞变细长,细胞核两端变尖,周围胶原纤维较术后1周时致密;术后4周时,结膜下组织血管多数闭合,细胞成分明显减少,纤维母细胞演变为纤维细胞,细胞核变细长,周围伴大量胶原纤维沉积,呈现瘢痕样改变。结论应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型具有可行性,其病理改变是一个创伤修复的过程,该模型的建立不仅为青光眼手术后结膜滤过泡瘢痕化的防治,同时也为防治其他原因导致的结膜瘢痕化提供了新的研究方法。     

Fibrin glue as a suture substitute: histological evaluation of trabeculectomy in rabbit eyes

PURPOSE: To describe the outcome of the use of fibrin adhesive (Quixil) in penetrating trabeculectomy in a rabbit model. METHODS: Fibrin adhesive was used experimentally to attach the conjunctiva and the scleral flap in two groups of 17 New Zealand albino adult rabbits (34 eyes). In the first experiment (20 eyes), the fibrin adhesive was used to reattach the tissue after conjunctival peritomy and scleral flap only in 14 eyes (experiment I). In 6 eyes (controls), the conjunctiva was attached with nylon sutures. In the second experiment (14 eyes), the fibrin adhesive was used after conjunctival peritomy, scleral flap, and penetrating trabeculectomy in 8 eyes (experiment II). In a control group of 6 eyes, nylon sutures were used to attach the scleral flap and the conjunctiva after penetrating trabeculectomy. Biomicroscopy and histopathological examinations were performed on postoperative days 1, 3, 7, 14, 21, and 30. Intraocular pressure was measured before and after surgery in the second experiment. Main outcome measures are histological presence of adhesive in the tissue, degree of capillary congestion, inflammatory reaction, collagen density [scar formation] and clinical (IOP measurements before and after surgery, conjunctival chemosis, anterior chamber reaction, presence of filtering bleb and wound leakage). RESULTS: In experiments I and II, the adhesive was well identified histologically in the tissue as an amorphic eosinophilic substance for up to day 3 and nearly disappeared by day 7. An acute inflammatory reaction was noted for up to 14 days, which converted to chronic inflammation with collagen deposits and scar formation by day 30. Similar inflammatory reaction was observed in the control group. The adhesive had no adverse effects on ocular tissue compared with sutures. One eye in experiment II demonstrated wound dehiscence. Intraocular pressure dropped from 17.35 mmHg preoperatively to 8.28 mmHg on postoperative day 1 in experiment II, and from 17.2 mmHg to 11.5 mmHg in the controls. No significant change in intraocular pressure was noted in experiment I. CONCLUSIONS: The fibrin adhesive had no adverse effects on ocular tissue compared with sutures. It might serve as an effective substitute for conjunctival and scleral wound closure in trabeculectomy surgery.     

兔眼不同青光眼滤过手术模型术后并发症的评价研究

目的　评价兔眼全层巩膜咬切术、小梁切除术和植管引流手术三种青光眼滤过手术模型的优缺点。方法　健康新西兰白兔７２只９６眼,分别接受全层巩膜咬切术（３０只,３０眼）、小梁切除术（１８只,１８眼）和植管引流手术（２４只,４８眼）,观察三种滤过手术术中虹膜周边切除后是否出血,术中是否玻璃体脱出,术后第１天眼压、滤过泡、前房炎症反应和前房积血情况。结果　全层巩膜咬切术、小梁切除术中虹膜周边切除后出血发生率分别为９０．０％、５０．０％,差异有统计学意义（χ２ ＝６５．２８０,Ｐ＜０．０５）。全层巩膜咬切术、小梁切除术中玻璃体脱出率分别为１００．０％、２７．８％,差异有统计学意义（χ２＝８０．４１２,Ｐ＜０．０５）。三种手术模型术前和术后第１天眼压分别为（１３．４８±１．７３）ｍｍＨｇ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）和（１０．５８±３．１２）ｍｍＨｇ（全层巩膜咬切术）,（１０．０３±１．０３）ｍｍＨｇ和（８．７１±４．６５）ｍｍＨｇ（小梁切除术）,（１１．９４±１．１９）ｍｍＨｇ和（６．９６±３．２５）ｍｍＨｇ（植管手术）;各滤过模型术后第１天降眼压幅度之间差异有统计学意义（Ｆ＝５．９４０,Ｐ＜０．０５）。全层巩膜咬切术、小梁切除术和植管引流手术后第１天滤过泡直径在３ｍｍ以上分别为２８眼、１８眼、４８眼,差异有统计学意义（χ２＝１１．４６０,Ｐ＝０．０１２）;前房炎症反应在１级以上分别为３０眼、１８眼、２９眼,差异有统计学意义（χ２＝４６．６０４,Ｐ＝０．０００）;前房积血分别为１１眼、３眼、１眼,差异有统计学意义（χ２＝１６．８２０,Ｐ＝０．０００）。结论　植管手术模型术中并发症少,术后滤过泡形成好,眼压控制低,前房炎症反应轻,前房出血发生率低,是三种青光眼滤过手术模型中最为理想的模型。     

虹膜色素颗粒对兔眼小梁切除术后滤过通道瘢痕化影响的实验研究

目的探讨虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)层色素颗粒对兔眼小梁切除术后滤过通道瘢痕化过程及Tenon囊成纤维细胞增生的影响。设计实验研究。研究对象新西兰大白兔18只。方法单眼做小梁切除手术模型。实验组巩膜瓣下放置0.1 ml(100μg/ml)猪IPE层色素颗粒并保留,阳性对照组和阴性对照组分别放置0.4 mg/ml丝裂霉素C棉片和生理盐水棉片3分钟。术后观察眼压、滤过泡形态30天,并对滤过泡及其周边组织进行组织病理学检查。主要指标眼压、滤过泡形态、手术滤过区瘢痕化程度。结果实验组、阳性对照组、阴性对照组兔眼术前平均眼压分别为(24.78±1.40)、(24.11±1.18)、(24.00±1.53)mmHg(F=0.241,P=0.789)。术后30天平均眼压分别为(20.28±1.87)、(20.39±2.28)、(23.33±1.14)mmHg(F=22.500,P=0.000)。实验组与阳性对照组无显著差异(P=0.86),实验组与阳性对照组均低于阴性对照组(P均=0.000)。滤过泡平均存留时间分别为(28.17±1.72)、(27.00±2.37)、(10.67±1.97)天(F=138.592,P=0.000)。组织病理学检查示实验组和阳性对照组兔眼滤过区结构相似,胶原纤维和瘢痕组织相对较少,而阴性对照组胶原纤维和瘢痕组织明显增生。结论小样本量短期实验研究表明,IPE层色素颗粒可能阻止Tenon囊成纤维细胞增生过程,有助于延缓小梁切除术后滤过通道瘢痕化。     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对兔眼滤过术后肌成纤维细胞分化及细胞外基质合成的作用

背景 各种原因导致滤过手术失败的共同点是滤过通道的成纤维细胞过度增生、分化,导致过度纤维化、瘢痕形成.研究发现,p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通道在成纤维细胞表型转化过程中发挥重要作用. 目的 探讨p38 MAPK抑制剂SB203580对滤过手术后结膜下纤维化反应的抑制效果及其作用机制.方法 12只清洁级新西兰白兔行常规青光眼滤过手术制作双眼滤过手术模型,模型兔按随机数字表法随机分为单纯滤过手术组、SB203580治疗组和丝裂霉素C(MMC)对照组.SB203580治疗组兔眼滤过术毕立即结膜下注射0.2 g/L SB203580溶液1 ml,MMC对照组兔眼术中用浸泡0.2 g/L MMC的棉片置于术区结膜下及巩膜瓣下3 min.各组兔术后进行裂隙灯显微镜观察,术后1、3、7、10、14d使用Icare回弹式眼压计测量眼压,术后14 d抽取房水0.2ml,并获取手术滤过区结膜下组织标本,用ELISA法检测房水及滤过区结膜组织中的α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、纤维连接蛋白的表达,用荧光实时定量PGR检测各组兔术眼滤过区结膜组织中ACTA2、结缔组织生长因子(CTGF)和Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1 A2) mRNA的表达. 结果 术后14d,单纯滤过手术组滤过泡血管化、瘢痕形成,SB203580治疗组滤过泡扁平、弥散,MMC对照组滤过泡呈苍白缺血状、扁平弥散.单纯滤过手术组、SB203580治疗组和MMC对照组兔间术前眼压值差异无统计学意义( F=0.065,P=0.937),术后眼压值随着时间的延长逐渐升高,各时间点的总体比较差异有统计学意义(F=32.873,P=0.030).ELISA法检测SB203580治疗组和MMC对照组兔房水及滤过区结膜下组织中的α-SMA质量浓度均明显低于单纯滤过手术组,而MMC组α-SMA质量浓度明显低于SB203580治疗组,差异均有统计学意义(P＜0.05).SB203580治疗组和MMC对照组兔房水及滤过区结膜下组织中的纤维连接蛋白质量浓度均明显低于单纯滤过手术组,而MMC对照组α-SMA质量浓度明显低于SB203580治疗组,差异均有统计学意义(P＜0.05).荧光实时定量PCR检测表明,各组兔术眼滤过区结膜下组织ACTA2、CTGF、COL1A2mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.01),以单纯滤过手术组表达量最高,SB203580治疗组次之,MMC对照组最低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 p38 MAPK抑制剂SB203580能减少肌成纤维细胞分化及细胞外基质合成,减轻兔眼滤过手术后的组织纤维化反应.     

苦参碱对兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕的影响

目的 研究苦参碱对青光眼滤过泡瘢痕形成是否有抑制作用.方法 选取40只新西兰大白兔,随机分为A、B、C、D四组,均行小梁切除术,巩膜瓣下分别放置1.0g·L-1苦参碱棉片、0.4g·L-1苦参碱棉片、0.2 mg · L-1丝裂霉素棉片、生理盐水棉片.于术前,术后1、3、7、14、28 d观察各组眼压、滤过泡、前房反应、并发症等,于术后1、3、7、14、28 d各组随机处死2只兔,摘出眼球分别做病理切片、免疫组织化学染色及Masson三色染色观察炎症细胞、成纤维细胞增殖情况及新生胶原纤维情况,选取术后7d的角膜行透射电镜,观察药物的毒性反应.结果 术后7、14、28 dA、B、C组与D组两两对比眼压值有明显差异(P＜0.05),A组与B组术后7、14、28 d两组眼压有明显差异(P＜0.05).术后7、14、28 dA、B、C三组成纤维细胞计数与D组比较有显著差异(P＜0.01),A、B组成纤维细胞计数比较差异有显著性(P＜0.05).结论 苦参碱能减少成纤维细胞的增殖,减少滤过泡瘢痕形成,对眼部组织无明显毒副作用.     

兔眼高眼压模型行CO_2激光滤过术的研究

目的探讨应用CO2激光对兔眼高眼压模型行滤过性手术的可行性和有效性。方法日本大耳白兔20只40只眼后房注入1000U/mL（商品单位）α-糜蛋白酶0.15～0.20mL提高眼压至25mmHg或眼压增幅达8mmHg制备高眼压模型。造模成功后,右眼应用超脉冲CO2激光行巩膜瓣下巩膜床扫射及小梁切除术为激光组;左眼行传统小梁切除术为手术组。激光扫射参数：功率1～2W,脉宽0.1ms,频率100Hz。小梁及虹膜根部切除孔（直径800μm）的激光参数为：功率4～5W,脉宽0.8ms,频率100Hz。比较2组兔眼术后不同时间的前房反应、滤过泡情况、眼压、组织病理学变化。结果激光组术后前房反应轻微,手术组较重。术后3d时激光组功能性滤过泡为20眼,手术组19眼;术后30d时手术组功能性滤过泡比例下降明显,2组间差异有统计学意义（P〈0.05）。2组术后眼压均逐渐升高,手术组较激光组眼压升高较早,术后第14、30、60天2组眼压差异均有统计学意义（P〈0.05）。组织病理学显示,2组早期滤过道均通畅,但手术组出血和炎性渗出明显,激光组较手术组增生反应出现晚,且程度轻。结论应用超脉冲CO2激光在兔高眼压模型眼进行小梁切除术安全可行,降眼压效果稳定持久。     

晶状体前囊膜在青光眼白内障联合手术中抗滤过泡瘢痕形成的实验研究

目的:评价晶状体前囊膜作为植入物应用于兔眼青光眼白内障联合手术中阻止滤过口瘢痕形成的作用。方法:选取12只(24眼)科研用新西兰大白兔,先制作高眼压模型。采用随机对照的方法,选择右眼(12眼)为实验组,左眼(12眼)为对照组,实验组在手术显微镜下行青光眼小梁切除联合小切口白内障囊外摘除术,并将自体前囊膜放置于巩膜瓣下,对照组单纯行青光眼小梁切除联合小切口白内障囊外摘除术,观察时间为1d～6mo。术后不同时间点观察眼压、滤过泡、结膜、角膜、前房形成、房水炎症反应,眼部并发症情况及显微镜下观察巩膜滤过道内细胞病理学改变。结果:术后手术成功率、功能滤过泡的累积存活率及并发症均存在有显著性差异。实验组术后1,2,4wk眼压明显低于对照组(P<0.05),术后12,24wk眼压低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。实验组术后1wk手术区大量炎细胞和成纤维细胞,随后炎细胞数量和成纤维细胞减少。术后3mo晶状体前囊膜部分溶解,滤过道内仅存少量异物巨细胞,并于术后6mo接近消失,滤过道保持开放。对照组术后1wk手术区有大量炎细胞和成纤维细胞,于术后1mo左右出现部分滤过通道关闭。在整个实验观察过程中,实验组手术区成纤维细胞数量无明显变化(P>0.05),但与对照组相比较有明显统计学差异(P<0.05)。结论:晶状体前囊膜在术后6mo大部分溶解吸收。在实验动物中将将其应用于青光眼白内障联合术中可有效地降低眼压,并能抑制成纤维细胞增殖,长期有效保留功能性滤泡,保持滤过道开放,且并发症较少。     

贝伐单抗结膜下注射对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的抑制作用

背景 青光眼滤过手术术后滤过道的瘢痕化是导致手术失败的主要原因.传统的抑制滤过道瘢痕化的方法是丝裂霉素C的应用,但存在较多的并发症.研究表明贝伐单抗具有抑制新生血管和纤维增生的作用,其对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是否有抑制作用受到关注. 目的 观察贝伐单抗结膜下注射对兔眼小梁切除术后滤过泡纤维瘢痕形成的抑制效果. 方法 按随机数字表法将7～9周龄新西兰大白兔40只随机分为4个组,各组兔右眼均行常规小梁网切除术.贝伐单抗单次注射组兔眼术毕结膜下注射贝伐单抗0.05 ml(25 mg/ml),贝伐单抗多次注射组兔眼分别于术毕及术后3、7d注射贝伐单抗,每次均注射0.05 ml,丝裂霉素C组兔眼术毕局部涂用丝裂霉素C,生理盐水组兔眼术毕以同样的方法注射0.05 ml生理盐水.所有兔眼术后每隔1日用Schi(o)tz眼压计测量眼压,行裂隙灯显微镜检查以观察滤过泡形态及其表面的血管分布,并用卡尺测量和计算滤过泡面积.分别于术后14d和28 d摘取实验眼行滤过泡组织病理学检查,采用免疫组织化学法检测滤过道组织中血管内皮细胞标志物CD31的表达以计算微血管数目. 结果 各组兔眼术后眼压值的总体比较差异无统计学意义(F=0.88,P=0.47).与贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素C组和生理盐水组兔眼滤过泡的形态比较,术后7d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过泡高度隆起且弥散,表面血管稀疏.贝伐单抗多次注射组兔眼滤过泡生存时间为27 d,而贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素C组均为19d,生理盐水组为13d.术后14d各组兔眼滤过道胶原纤维百分比分别为(49.18±1.54)％、(26.41±1.23)％、(50.68±1.87)％和(70.63±1.81)％,贝伐单抗单次注射组、贝伐单抗多次注射组、丝裂霉素C组滤过道胶原纤维百分比均低于生理盐水组,贝伐单抗多次注射组低于贝伐单抗单次注射组,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后28 d贝伐单抗多次注射组胶原纤维百分比为(66.82±1.53)％,其他3个组出现瘢痕化.术后14d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过道组织中微血管数目明显低于贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素C组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).术后28 d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过道组织中微血管数且为3.51±0.31,均高于贝伐单抗注射组、丝裂霉素组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 青光眼滤过术后结膜下注射贝伐单抗有助于维持功能滤过泡的形态,抑制滤过道瘢痕化,提高手术的成功率.     

兔视网膜光凝术后GFAP和CTGF蛋白的表达

目的：探讨色素家兔视网膜光凝术后Müller细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）)在激光斑的表达。 方法:采用倍频532nm绿激光光凝色素家兔视网膜后极部30点（光斑效应为Tso分级Ⅲ级）,建立色素兔视网膜光凝Ⅲ级光斑效应动物模型。24只有色家兔右眼为视网膜光凝眼、左眼为正常对照眼。按术后观察时间1,3,7,14,21,28d分为6个亚组,各组动物于光凝术后相应的时间点处死,取出眼球进行免疫组织化学方法测定GFAP和CTGF的表达,Pearson直线相关分析两者之间有无相关性。 结果:GFAP蛋白在色素家兔正常对照眼神经节细胞层弱表达,光凝后3d,激光斑Müller细胞表达GFAP,表达持续增强到光凝术后28d。光凝后3d,CTGF在光斑处弱表达,持续增强至术后28d,CTGF阳性表达在视网膜光凝斑的视网膜神经节细胞层（GCL）、成纤维细胞、视网膜色素上皮层（RPE）细胞和无定形的胶原基质。CTGF蛋白在正常对照眼无表达。 Pearson直线相关分析：视网膜光凝斑GFAP与CTGF表达强度在时序上呈密切正相关（r=0.786,P<0.01）。 结论: CTGF与GFAP参与了视网膜光凝术后激光斑损伤修复的调控过程。可能是视网膜神经胶质瘢痕形成的一个重要的病理学基础。     

兔眼小梁切除术后滤过泡组织Fas mRNA的表达

目的　对小梁切除术后滤过泡组织ＦａｓｍＲＮＡ的表达进行初步研究。方法　新西兰白兔４８只单独笼养,随机选取４０只兔右眼行小梁切除术,使上方结膜形成滤过泡,按术后时间又分为１ｄ、７ｄ、１４ｄ、２０ｄ、２８ｄ共５个亚组,每组８只兔。另外８只兔的右眼未进行手术为正常对照组。在行小梁切除术后１ｄ、７ｄ、１４ｄ、２０ｄ、２８ｄ,切下滤过手术区组织,同时于２８ｄ时切除正常对照组相应部位的结膜组织。实时荧光定量ＰＣＲ检测各组标本的ＦａｓｍＲＮＡ表达情况。结果　兔眼小梁切除术后１ｄ、７ｄ、１４ｄ三个亚组ＦａｓｍＲＮＡ的相对表达量分别为１．３３±０．３５、１．４１±０．２８、１．３８±０．２５,与正常对照组的表达量１．４２±０．３４相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,术后２０ｄＦａｓｍＲＮＡ相对表达量为０．９０±０．１８,较对照组明显下降,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,２８ｄ时进一步下降至０．７８±０．０９（Ｐ＜０．０５）。结论　在兔眼结膜滤过泡组织愈合过程中,术后２０ｄ及２８ｄ凋亡主要基因ＦａｓｍＲＮＡ表达量明显减少,可能为减少青光眼小梁切除术后瘢痕化寻找到一个新的突破口。     

实验性增殖性玻璃体视网膜病变玻璃体内Ⅲ型前胶原的放射免疫测定

目的:检测巨噬细胞诱发的增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）模型玻璃体内Ⅲ型胶原的合成活性。方法:用放射免疫法测量14只兔PVR眼及14只对照眼玻璃体中Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ，PCⅢ）含量。结果:巨噬细胞注入7天时玻璃体中PCⅢ平均含量是257.58μg/L（236.04～266.88μg/L；n＝4），14天以后明显增加，28天时平均为912.23μg/L（881.36～943.10μg/L；n＝2）.14只对照眼未能检出。结论:实验性PVR玻璃体中可测得较高水平的PCⅢ，且含量随病程明显增加，与PVR的瘢痕化过程和牵拉性视网膜脱离（traction retinal de tachment，TRD）发生在时相上明显一致。(中华眼底病杂志,1998,14:43-44)