刺槐素对小鼠骨髓巨噬细胞AIM2炎症小体活化的抑制作用

目的 探讨刺槐素对脂多糖（LPS）和双链DNA模拟物poly(dA:dT)共诱导的小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体活化的影响。方法 在小鼠股骨中分离并培养BMDMs，将其分为对照组、LPS组、LPS+poly(dA:dT)组和LPS+poly(dA:dT)+刺槐素组。对照组将BMDMs继续在完全培养基中培养3 h;LPS组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h;LPS组+poly(dA:dT)组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h，再加入poly(dA:dT) 10μmol/L作用0.5 h;LPS+poly(dA:dT)+刺槐素组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h，然后加入刺槐素10μmol/L作用0.5 h，最后加入poly(dA:dT) 10μmol/L作用0.5 h。采用Western blotting法检测细胞裂解液pro-Caspase-1、pro-白细胞介素（IL）-1β和上清液Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达量，ELISA法检测细...     

米诺环素对黑质急性炎症的保护作用及与自噬相关性研究

目的观察米诺环素对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)模型小鼠黑质急性炎症的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取3月龄C57BL雄性小鼠,设立对照组、LPS组、中剂量米诺环素组(50 mg M组)、高剂量米诺环素组(75 mg M组)及75 mg M+LPS组、50 mg M+LPS组、25 mg M+LPS组,其中LPS组为单次腹腔注射LPS(5 mg/kg)。随后进行爬杆试验的行为学检测;并采用免疫组化法观察黑质部位小胶质细胞数量,免疫印迹法检测小鼠黑质部位α-突触核蛋白(α-synuclein)、LC3-Ⅱ、P62和HDAC6蛋白表达量。结果与LPS组相比,75mg M+LPS组小鼠爬杆速度下降更显著(P0. 05),25 mg M+LPS组及50 mg M+LPS组小鼠爬杆速度则较LPS组明显加快(P0. 01); 25 mg M+LPS组及50 mg M+LPS组小鼠黑质部位小胶质细胞的活化数量减少,且α-synuclein、LC3-Ⅱ、p62、HDAC6蛋白水平下降(P0. 01),而75 mg M+LPS组α-synuclein、LC3-Ⅱ、p62、HDAC6蛋白水平有所增加(P0. 05)。结论低、中剂量米诺环素不仅能减轻LPS单次腹腔注射造成的小鼠黑质部位急性炎症反应,而且能缓解该部位出现的自噬功能障碍,减少p62和α-synuclein黑质部位的积聚,改善小鼠的运动能力。     

刺槐素干预阵发性心房颤动小鼠的量效及作用机制研究

目的:探讨不同剂量刺槐素对阵发性心房颤动小鼠的作用及其电生理机制。方法:动物实验中,将48只C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、胺碘酮组、刺槐素低剂量组(12 mg/kg)、刺槐素中剂量组(24 mg/kg)、刺槐素高剂量组(48 mg/kg),每组8只。连续给药3 d后,腹腔注射0.5 mg/kg盐酸异丙肾上腺素,1 min后给予电刺激(连续单刺激,电压0.08 V,频率90 Hz)21 min,测量并统计小鼠心房颤动发作总时间。细胞实验中,选取中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),通过转染小鼠Kv1.5质粒,运用膜片钳全细胞记录技术,观察刺槐素对mKv1.5的作用。结果:动物实验发现,与空白组相比,模型组心房颤动持续时间明显延长(P<0.01);与模型组相比,刺槐素高剂量组、胺碘酮组心房颤动持续时间明显缩短(P<0.05)。刺槐素呈剂量依赖性抑制小鼠心房颤动发作,半数抑制浓度为4.235 mg/kg。细胞实验发现刺槐素可抑制中国仓鼠卵巢细胞Kv1.5通道的峰值电流幅度,并呈电压依赖性地抑制Kv1.5通道电流,对Kv1.5通道的电流稳态激活曲线门控机制无明显作用。结论...     

鸢尾素对脂多糖诱导的小鼠炎性认知障碍的保护作用

目的 探讨鸢尾素(Irisin)对脂多糖(LPS)诱导的炎性认知障碍的作用及可能机制。方法 利用LPS腹腔注射C57BL/6J雄性小鼠建立炎性认知障碍小鼠模型。48只小鼠随机分为正常对照(Control)组、LPS组、LPS+多奈哌齐(Donepezil)组和LPS+Irisin组，每组12只。LPS+Donepezil组和LPS+Irisin组在LPS腹腔注射2 h后分别予小鼠灌胃3 mg/(kg·d)Donepezil、腹腔注射2 mg/(kg·d)Irisin, Control组腹腔注射相同体积的生理盐水。采用水迷宫评估各组认知功能；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测脑内白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA相对表达水平；采用免疫荧光法观察Irisin对脑皮层和海马各区星形胶质细胞的激活水平；采用Western印迹检测各组磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键蛋白表达水平。结果 水迷宫结果：Irisin可使LPS模型小鼠2、3、4、5 d逃避潜伏期明显缩短，而目标象限停留时间、穿越原平台次数均显著增加(P&...     

SDF-1a模拟物CTCE-0214对重症肺炎的治疗作用及机制

目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF)-1a模拟物CTCE-0214(CTCE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠重型肺炎(SP)的治疗作用及机制。方法 将成年CD-1小鼠分为正常对照组、LPS组、LPS+CTCE组、LPS+SDF-1α组各12只。LPS组小鼠气管内滴注LPS(5 mg/kg),正常组小鼠气管内滴注生理盐水(5 mg/kg),LPS+CTCE组和LPS+SDF-1α组在小鼠滴注LPS(5 mg/kg)2 h后通过尾静脉注射CTCE或SDF-1α(10 mg/kg)。在LPS造模24 h后处死小鼠并收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BAL)。测定各组小鼠肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAL中白细胞介素(IL)-6、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α、MIP-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测肺组织中miR-126的表达水平,Western印迹检测肺组织中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和Rac1的表达水平。结果 与正常对照组比较,LPS组肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞...     

尼古丁通过增强自噬减轻脂多糖诱导的急性肺损伤炎症反应

目的探讨尼古丁在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤炎症反应中的作用及机制。方法本研究为实验研究。动物实验部分, 应用LPS构建急性肺损伤小鼠模型, 将C57BL/6J小鼠24只, 按体质量排序, 采用蛇形分组法分为4组, 每组6只, 对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组。留取肺组织行HE染色, 肺泡灌洗液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)水平。细胞实验部分, 采用MH-S细胞系, 分为4组, 对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组, 取细胞上清液行ELISA检测IL-1β水平, 采用细胞裂解液提取总蛋白行蛋白免疫印迹法检测NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1、LC3BⅡ、LC3BⅠ、P62蛋白水平, 免疫荧光检测LC3B表达, 透射电镜观测自噬小体数量。结果 LPS组较对照组, 肺组织出现明显炎性细胞浸润。支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高;LPS+尼古丁组较LPS组, 肺组织炎性细胞浸润减轻, 支气管肺泡灌洗液和细胞上清液中IL-1β水平降低;LPS+...     

两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠腹腔渗出细胞一氧化氮产生及细胞因子分泌的影响

目的观察两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)体外对小鼠腹腔渗出细胞(PEC)一氧化氮(NO)的产生及细胞因子分泌的影响。方法无痛处死BALB/c小鼠10只,收集腹腔内液体,制备渗出细胞(PEC),主要为巨噬细胞。将源自旋毛虫(Trichinella spiralis)及广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)的cystatin(Tscystatin,Accystatin)与脂多糖(LPS)刺激的小鼠PEC共孵育,实验分为RPMI组、LPS组、Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组,除RPMI组外,其余3组均提前2 h用LPS(2μg/ml)刺激贴壁细胞制备炎症模型,Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组分别用2μg/ml Accystatin或Tscystatin与LPS刺激后的细胞共孵育,每组6孔,培养24 h后,收集上清,用ELISA和硝酸还原酶法检测上清中α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10等细胞因子和NO的水平。采用SPSS11.5统计学软件处理实验数据。结果ELISA检测结果显示:Accystatin+LPS组细胞上清中促炎因子TNF-α和IL-6分别为(507.50±66.32)和(1 440.49±77.25)pg/ml,较LPS组的(454.15±53.11)和(1 016.2±115.10)pg/ml明显升高(P0.05)。Tscystatin+LPS组分别为(296.35±55.30)和(793.54±86.61)pg/ml,较LPS组和Accystatin+LPS组明显降低(P0.05)。RPMI组和LPS组的IL-10分别为(38.80±6.71)和(53.66±7.72)pg/ml,差异无统计学意义(P0.05),Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组的IL-10分别为(149.74±26.01)和(158.76±19.67)pg/ml,较LPS组均明显升高(P0.05)。Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组NO水平分别为(12.54±2.12)和(7.95±1.40)μmol/L,较LPS组的(20.18±3.99)μmol/L均明显降低(P0.05),且Tscystatin+LPS组NO水平低于Accystatin+LPS组(P0.05)。结论旋毛虫和广州管圆线虫的cystatin均可抑制小鼠腹腔渗出细胞NO释放、上调IL-10的水平,Accystatin明显促进TNF-α及IL-6的分泌,Tscystatin则明显抑制两种细胞因子的水平。     

免疫相关GTP酶1通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控巨噬细胞自噬

目的 探讨免疫相关GTP酶1(IRGM1)调控PI3K/AKT/mTOR通路对巨噬细胞自噬活动的影响。方法 小鼠RAW264.7细胞常规传代培养,siRNA-IRGM1序列通过Lipofectamine 2000转染RAW264.7细胞制备siRNA-RAW246.7细胞;利用脂多糖(LPS, 20 ug/mL)诱导RAW246.7构建细胞自噬模型,分为四组：RAW246.7组,siRNA-RAW246.7组,RAW246.7+LPS组,siRNA-RAW246.7+LPS组;Western blot检测各组IRGM1及自噬相关分析分子(LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62)、AKT及mTOR磷酸化水平;qRT-PCR检测各组IRGM1及P62表达水平;利用流式细胞学比较各组细胞调亡率和ELISA检测各组IL-6炎症因子表达情况。结果 Western blot结果显示：与RAW246.7组、siRNA-RAW246.7组比较,LPS诱导巨噬细胞(RAW246.7+LPS组、siRNA-RAW246.7+LPS组)自噬相关基因LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例蛋白表达升高(P<0.05),P62表达明显...     

刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用

目的 探讨刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用.方法 培养神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分为正常培养组、氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组以及刺槐素小剂量组(1μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和大剂量组(10 μmol/L),复氧24 h后应用噻唑蓝染色法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定LDH漏出率.60只C57小鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组以及小剂量组、中剂量组和大剂量刺槐素组,每组12只.采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,缺血再灌注时给予刺槐素腹腔注射(小、中、大剂量组分别为6.25、12.5和25 mg/kg).再灌注后24 h时进行神经功能评分,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死体积.结果 体外实验显示,1 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L刺槐素组SH-SY5Y细胞存活率分别为(90.34±6.87)％(P=0.000)、(85.47 ±2.24)％ (P=0.001)和(81.79±1.77)％(P=0.008),均显著高于OGD组的(70.62± 8.89)％.1μmol/L、5μm/L和10 μm/L刺槐素组SH-SY5Y细胞LDH漏出率分别为(159.11 ±13.11)％ (P=0.021)、(155.12±24.72)％(P=0.011)和(160.92 ±7.83)％ (P =0.027),均显著低于OGD组的(180.35±10.60)％.体内实验显示,大剂量刺槐素组神经功能评分显著低于与脑缺血再灌注组[(1.67±0.85)分对(2.50±0.55)分;P=0.018].小剂量、中剂量和大剂量刺槐素组梗死体积分别为(24.14±7.10)mm3、(17.18±3.19)mm3和(12.86±1.88)mm3,均显著小于脑缺血再灌注组的[(48.81±9.48) mm3](P均=0.000).结论 体外和体内实验均显示,刺槐素具有神经保护作用.     

多房棘球蚴分泌物抗原对脂多糖诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞表型及功能的影响

目的 探究不同浓度多房棘球蚴分泌物抗原(Em-sAg)对脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)表型和功能的影响。方法 小鼠骨髓腔中所分离的骨髓前体细胞,经小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激后形成BMDC,于正倒置显微镜下观察细胞形态。用流式细胞术鉴定BMDC纯度后,分为Control组、阳性对照组(LPS 1μg/mL)、LPS+3 mg/mL Em-sAg组、LPS+1.5 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.75 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.375 mg/mL Em-sAg组共6组。流式细胞术检测各组BMDC表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子)的表达情况,ELISA法检测各组细胞因子IL-12p70的表达水平。满足正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验表示。结果 在正倒置显微镜下观察到,培养8～10 d的细胞可见毛刺样突起,细胞呈完全悬浮状态。流式细胞术检测发现,CD11c的阳性率均在70%以上,据此鉴定所培养的细胞大部分为BMDC。流式细胞术的进一步结果表明,与Control...     

髓系细胞触发受体1结合多肽与脓毒症炎症反应

目的 研究髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1,TREM-1)结合多肽对脓毒症小鼠保护作用.方法 经噬菌体表面展示肽库筛选出的TREM-1结合多肽,42只健康雄性Balb/c小鼠随机分为空白组,脂多糖(LPS)组,对照1(多肽)组,对照2(LPS+TREM-1单抗)组,对照3(LPS+多肽+TREM-1单抗)组,早期治疗(LPs+LPS前1h多肽)组,延迟治疗(LPS+LPS后4 h多肽)组,各组分别于设定时间点麻醉处死小鼠,取肝组织提mRNA行逆转录、荧光定量PCR检测TREM-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,并取肺组织病理组织学观察.结果 LPS能增加小鼠肝细胞TREM-1 mRNA表达,早期治疗组可抑制LPS引起的肝组织TNF-α、IL-1β mRNA增加且能减轻LPS导致的肺病理组织炎症反应而延迟治疗组并未见以上抑制作用,此抑制作用能为TREM-1单抗所拮抗.结论 LPS诱导的脓毒症可见TREM-1 mRNA表达上调.TREM-1结合多肽对脓毒症小鼠具有保护作用,阻断TREM-1介导的全身炎症反应综合征可能足其发挥作用的机制.     

急性胰腺炎小鼠对脂多糖耐受性及其机制的研究

目的　观察急性胰腺炎(AP)小鼠对脂多糖(LPS)的耐受性并探讨其可能机制。方法　210只C57BL/6J小鼠分为生理盐水(NS)+LPS组(n=105)和AP+LPS组(n=105),两组均以不同LPS剂量分为7个亚组。AP模型制备采用间隔1 h腹腔内注射雨蛙肽(50μg/kg),共7次,于第1次雨蛙肽注射后6 h腹腔内注射LPS;NS+LPS组以NS代替雨蛙肽。每个亚组随机分出10 只观察7 d死亡率,其余5只于第1 次雨蛙肽注射后12 h处死,留取血清及肝、肺、肾、胰腺等组织,检测血清淀粉酶(AMS)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及各脏器病理学改变。应用含12 489条小鼠全长基因的寡核苷酸芯片分别检测NS+LPS(15 mg/kg)亚组和AP+ LPS(15 mg/kg)亚组小鼠血白细胞基因表达谱并重复3次,筛选两组间的表达差异基因。结果　NS+LPS组和AP+LPS组死亡率均随LPS剂量增加逐步升高,AP+LPS组死亡率均显著低于同等LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05)。AP+LPS组LDH水平明显低于相同LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05),而AMS水平显著高于相同LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05)。AP+LPS组肝、肺、肾组织损伤较相同LPS剂量的NS+LPS组明显减轻。基因芯片筛选结果显示,AP+LPS(15 mg/kg)亚组与NS +LPS(15 mg/kg)亚组相比炎症反应基因、细胞内信号传导基因、转录调节基因表达下调。结论　AP可增强小鼠对LPS耐受性,其可     

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的：探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组：对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外，其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；以流式细胞术检测细胞凋亡率；以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果：与对照组比较...     

抑制PI3K/AKt信号通路对帕金森病炎症细胞模型反应的影响

目的探讨LY294002(LY)抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKt)信号通路后对帕金森病(PD)细胞模型中炎症反应的影响。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞(BV2),分为对照组、脂多糖(LPS)组、LY+LPS组及LY组。LPS刺激BV2细胞来诱导炎症反应,运用Western印迹检测PI3K/AKt信号通路标志物磷酸化(p)-AKt蛋白表达情况;LY抑制PI3K/AKt信号通路后,运用荧光定量PCR (Q-PCR)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA的表达情况,Western印迹检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组p-AKt蛋白表达显著下降(P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组p-AKt蛋白下降更明显(P0.01);与对照组相比,LPS组IL-1β、TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著升高(均P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组中IL-1β和TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著下降(均P0.01)。结论 LY抑制PI3K/AKt信号通路对BV2细胞中的LPS诱导的炎症反应有一定的抑制作用。     

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的 探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法 将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果 与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降...     

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子的调控作用

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子表达的影响。方法选用4~6代的HCASMC,将细胞分为空白对照组(正常HCASMC,未做任何处理)、LPS模型组(LPS干预)、紫杉醇水蛭素高浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.2 mg/ml水蛭素+LPS干预)、紫杉醇水蛭素低浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.0125 mg/ml水蛭素+LPS干预)。每组设置3个复孔。ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的表达水平,用Q-PCR法对各组细胞NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA进行检测,用Western Blotting检测NF-κ B p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,LPS模型组NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P均0.05);HCASMC经高、低浓度紫杉醇水蛭素复合物预处理,LPS刺激后,上述指标低于LPS模型组,差异有统计学意义(P均0.05)。LPS模型组NF-κ B p65蛋白表达水平明显高于空白对照组,而紫杉醇水蛭素预处理组NF-κ B p65蛋白表达水平较LPS模型组明显降低,其中高浓度处理组降低更为显著。与空白对照组比较,LPS模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高,差异有统计学意义(P均0.05)。与LPS模型组比较,紫杉醇水蛭素低浓度与高浓度组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。其中高浓度紫杉醇水蛭素干预后IL-1β表达下降较低浓度更为显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中NF-κ B p65的激活具有明显的抑制作用,有效下调核转录因子NF-κ B p65的转录活性,显著抑制下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。     

肝纤维化能够保护小鼠抵抗D-GalN/LPS诱导的致死性损伤

目的:证明四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化小鼠对致死性D-氨基半乳糖/脂多糖(D-galactosamine and lipopolysaccharide,D-GalN/LPS)攻击的耐受性.方法:建立CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型,于纤维化6 wk时以致死剂量的D-GalN(700 mg/kg)/LPS(50μg/kg)进行攻击,以同样处理的正常小鼠作为对照,即实验共分为4组:正常对照组(Nor)、急性损伤组(Nor+D-GalN/LPS)、肝纤维化组(Fib)、肝纤维化+急性攻击组(Fib+D-GalN/LPS).根据攻击前后小鼠生存率、转氨酶水平及肝组织学的变化来评估正常和纤维化小鼠对致死性D-GalN/LPS损伤的耐受性.结果:生存分析显示,Fib+D-GalN/LPS组的生存率显著高于Nor+D-GalN/LPS组(100%vs20%).血清转氨酶结果表明,Fib+D-GalN/LPS组肝损伤程度明显轻于Nor+D-GalN/LPS组,其sALT水平分别为(6630 U/L±1675 U/L)和(22429 U/L±5446 U/L)(P<0.01).接受攻击的纤维化和正常小鼠的sALT分别升高了14.3倍和455.9倍.肝组织学检查结果也证明,接受致死性D-GalN/LPS攻击的纤维化小鼠的肝损伤较同样处理的正常小鼠明显减轻.结论:CCl4诱导的肝纤维化可保护小鼠抵抗致死性D-GalN/LPS损伤的攻击.     

构建以中性粒细胞浸润为主的小鼠重症支气管哮喘模型的初步探讨

目的：探讨构建以中性粒细胞浸润为主的重症支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型的方法。方法 C57BL/6小鼠15只,随机分成 NS 组(生理盐水组)、第1 组(50μg HDM+50μg OVA +15μg LPS)、第2 组(50μg HDM+100μg OVA+15μg LPS)、第 3组(100μg HDM+50μg OVA+15μg LPS)、第4组(100μg HDM+100μg OVA+15μg LPS),每组3只。于实验第0、1、2天腹腔注射致敏,第14、15、18、19天进行激发,第21天处理小鼠,检测相关指标。结果①小鼠行为学变化：致敏后第1~4组小鼠出现不同程度挠耳抓鼻、躁动不安、呼吸加快、大小便失禁等改变,第4组甚至出现嗜睡、匍匐不起等症状,而 NS 组未见上述表现。②小鼠肺功能：与 NS 组、第1 ~3组比较,第4组 小 鼠 在 乙 酰 甲 胆 碱 (Mch)刺激下气道阻力明显升高,呈现明显气道高反应性(P <0.05);NS、第1、第2、第 3组小鼠气道阻力变化不明显。③小鼠肺泡灌洗液细胞总数及分类计数：与 NS 组、第1 ~3组比较,第4组小鼠 BALF 中细胞总数最多,相较 NS 组有3倍以上升高(F =66.971,P <0.001);且第4组小鼠 BALF 中性粒细胞数量最高,约3×105/ml;与 NS 组、第1 组比较,第4组小鼠 BALF 嗜酸粒细胞数量偏高(F =23.888,P <0.01),而第2-4组比较,3组 BALF嗜酸粒细胞数量差异无统计学意义(P >0.05)。④小鼠肺组织病理：HE 染色,NS 组小鼠可见各级支气管及肺泡结构正常,支气管黏膜上皮完整连续,纤毛排列整齐,未见明显炎性细胞浸润;第1 ~4组小鼠可见不同程度支气管黏膜充血水肿明显、管腔变狭窄,杯状细胞增生及上皮细胞的坏死脱落,而气道、肺间质和小血管周围散布着大量的炎性细胞,而 第4组 小 鼠 肺 部 炎 症 浸 润 最 明 显(χ2=23.888,P <0.05);粒细胞分化抗原-1免疫组织化学染色,NS 组小鼠未见明显中性粒细胞浸润,第1~4组小鼠可见不同程度中性粒细胞浸润,而第4组小鼠肺部中性粒细胞浸润最明显(F =28.411, P <0.05);嗜酸粒细胞阳离子蛋白免疫组织化学染色,NS 组小鼠未见明显嗜酸粒细胞浸润,第1 ~4组小鼠可见不同程度嗜酸粒细胞浸润,但差异无统计学意义(F =0.206,P >0.05);中性粒细胞/嗜酸粒细胞比值比较,第4组 小 鼠 肺 组 织 比 值 最 高。结 论 在 15μg LPS 环境下,100μg HDM 联合100μg OVA 可成功建立以中性粒细胞浸润为主的小鼠重症哮喘模型。     

金银花提取物对脂多糖致心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应的影响

目的:探讨金银花提取物对脂多糖(LPS)致心肌细胞氧化应激、细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:将H9c2细胞分为对照(Con)组、LPS组、LPS+金银花低剂量组、LPS+金银花中剂量组、LPS+金银花高剂量组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-含山梨醇和SH3结构域连接蛋白2(SORBS2)组、LPS+金银花高剂量+si-NC组、LPS+金银花高剂量+si-SORBS2组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白免疫印记(Western Blot)法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)水平。结果:金银花提取物呈剂量效应降低LPS诱导的H9c2细胞凋亡率、MDA含量、LDH活性,升高SORBS2蛋白表达、SOD活性,降低TNF-α、IL-1、IL-6水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达SORBS2与金银花提取物作用相同;敲除SORBS2逆转了金银花提取物对LPS致心肌细胞氧化应激、细胞凋亡和炎症反...     

MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+siCDKN1B组。使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组。同时将正常培养的心肌细胞作为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P0.05),细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);与LPS+pc DNA组比较,LPS+pc DNACDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05)。结论抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡。