液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

目的 建立液质联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法.方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相组成:1‰甲酸水-甲醇(95:5),流速:0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温:25 ℃;ESI电离源:负离子检测模式;干燥气流速:10.0 L/min;雾化室压力:30 psig;干燥气温度:350 ℃.选择离子方式检测(SIM):S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176.结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5～2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%.结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg.     

液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

 目的 建立液质联用（liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法。方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,流动相组成：1‰甲酸水-甲醇（95:5）,流速：0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温：25℃;ESI电离源：负离子检测模式;干燥气流速：10.0 L/min;雾化室压力：30 psig;干燥气温度：350℃。选择离子方式检测（SIM）：S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176。结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5~2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%。结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg。     

S-三苯甲基-L-半胱氨酸对慢性粒细胞白血病K562细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响

目的研究S-三苯甲基-L-半胱氨酸（STLC）对慢性粒细胞白血病K562细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响,探讨药物阻滞和凋亡机制及Eg5与bcr/abl信号通路联系。方法将K562细胞分成不加药对照组和不同剂量STLC加药组,药物作用一定时间后,用MTT法检测其对K562细胞的抑制效应,流式细胞术分析细胞周期和亚二倍体峰的变化,Annexin-v/PI双染检测药物处理前后细胞凋亡比率,共聚焦显微镜观察纺锤体与细胞核空间位置关系及凋亡诱导因子（AIF）位移情况,小分子抑制剂阻断结合RT-PCR研究Eg5与bcr/abl信号通路联系。结果STLC可显著抑制K562细胞生长;药物处理早期可阻滞细胞周期进程于G2/M期,且85.5%细胞纺锤体结构呈单星状排列,处理晚期可致细胞凋亡且不依赖于AIF的参与;K562细胞中Eg5表达由bcr/abl酪氨酸激酶所调节。结论STLC诱导K562细胞阻滞在G2/M期并致其凋亡,显示较强的抗有丝分裂和抗肿瘤效果。     

药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸的酶法合成

目的 利用在大肠杆菌中高效重组表达的O-乙酰丝氨酸(硫醇)裂解酶A(OASS-A)合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸,并对合成产物进行纯度及结构鉴定.方法 通过PCR扩增目的基因Cys K,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白采用Ni2-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE鉴定表达纯化蛋白,通过HPLC对合成产物纯度进行检测,应用1H NMR技术对化合物进行结构鉴定.结果 成功构建了OASS-A原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达.重组酶高效合成非蛋白质氨基酸S-苯基-L-半胱氨酸.合成的化合物以晶体形式析出,采用HPLC和1HNMR技术对其结构进行了鉴定,合成产物的纯度为100％.结论 利用大肠杆菌中重组表达的OASS-A能够高效合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸.     

PET肿瘤显像剂S-11C-甲基-L-半胱氨酸的制备与质量控制

目的 S-11C-甲基-L-半胱氨酸是一种肿瘤显像剂,是11C-MET类似物,我们自行研制合成了11C-MCYS,并对其质量控制.方法由医用回旋加速器生产11CO2,11CO2通过11CH3I全自动合成系统转化为11C-碘代甲烷(11CH3I).11CH3I与前体L-半胱氨酸的碱性溶液在Sep-Pak Plus C18小柱上发生烷基化反应,经Sep-Pak Plus C18小柱分离,得到11C-MCYS.并对新制剂进行质量控制.结果回旋加速器生产的11CO2传输到11CH3I全自动合成模块,11CO2经氢化锂铝还原转化为11CH3OH,再经氢碘酸(HI)碘代法生产出11CH3I,11CO2转化为11CH3I的时间约为8-10min,未校正放化产率约60%-70%.11C-MCYS放化合成时间约为2min,放化纯度大于98%,总合成时间约12min.主要质量控制指标达到正电子放射性药物质量要求.结论11C-MCYS的合成操作简便,产品化学纯度、放化纯度、pH值都符合注射剂的要求,符合进一步的动物探索性研究要求.     

N-乙酰-L-半胱氨酸与缺血再灌注损伤的研究进展

缺血再灌注损伤一直是临床上一个亟待解决的问题，但其发病机制仍未彻底阐明。目前，发现一个巯基化合物N-乙酰-L-半胱氨酸具有多种生物活性，不仅能够转化为谷胱甘肽起保护细胞的作用，也能直接清除自由基，抑制内皮细胞粘附和白细胞浸润，对心、肝、肺等多种内脏器官具有很好的抗缺血再灌注损伤作用。本文对N-乙酰-L-半胱氨酸在缺血再灌注损伤防治方面的应用进行了综述。     

氧化应激与脓毒症大鼠心肌损伤的关系

目的观察脓毒症大鼠心肌组织的病理改变、血压的变化以及氧化应激的有关指标的变化,分析氧化应激与脓毒症大鼠心肌损伤的关系。方法取30只SD大鼠随机分为两组,对照组10只,实验组20只,实验组再分2个亚组,每组10只,分别于术后6h和12h颈动脉采血并处死摘取心脏,并取部分心脏HE染色,显微镜下观察心肌损伤的情况。分别检测对照组和实验组6h、12h大鼠血清及心肌组织的丙二醛（MDA）、大鼠晚期氧化蛋白产物（AOPP）和大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）。结果①脓毒症组大鼠心肌病理学改变包括间质充血水肿、炎性细胞浸润,心肌纤维断裂分层,核膜破裂,细胞基质稀少,心肌细胞空泡变性,嗜酸性变,而对照组大鼠心肌无明显病变。与对照组相比,脓毒症组大鼠血清和心肌组织中多项氧化应激指标在12h后均有明显升高。结论氧化应激参与了脓毒症大鼠心肌损伤的发生。     

盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠心肌损伤的相关研究

【摘要】目的 通过盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠心肌细胞凋亡率的变化,探讨心肌细胞凋亡与心肌损伤的关系。方法 将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（SH组,n=20）及脓毒症组（CLP组,n=20）,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症动物模型,24小时后,检测各组的血清脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)水平。观察心肌组织病理变化、心肌组织TNF-α的表达水平及心肌细胞凋亡率。结果 CLP组出现明显的心肌损伤,CLP组血清BNP、cTnI高于SH组（P＜0.01）,心肌组织TNF α、心肌细胞凋亡率高于SH组（P＜0.01）。结论 心肌细胞凋亡在脓毒症心肌损伤发病机制中可能起着重要的作用。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对染矽尘大鼠肺间质成纤维细胞MMP-2表达的影响

本研究以N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)为抗氧化剂,应用免疫细胞化学和RT-PCR方法,探讨NAC阻断肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)过氧化后肺间质成纤维细胞(lung fibroblast,LFb)基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响.     

NEU-P11对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用研究

目的:研究NEU-P11对脓毒症大鼠心肌的保护作用,并探讨其作用机制。方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和Neu-p11处理组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症大鼠模型。术后6h收集血清,取心肌,检测血清中LDH、CK的活性,检测心肌组织中MDA、SOD的含量。结果:NEU-P11处理可明显改善脓毒症大鼠的心肌损伤,减少血清中LDH、CK的释放和心肌组织中MDA的产生,增加心肌组织中SOD的含量。结论:NEU-P11对脓毒症大鼠心肌有显著的保护作用,可能与其能减少血清中LDH、CK的释放和心肌组织中MDA的产生,增加心肌组织中SOD的含量有关。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对H2O2引起的血管内皮细胞损伤的拮抗效应

目的 观察N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC，痰易净)对H2O2引起的血管内皮细胞损伤的影响。方法 通过测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率和脂质过氧化物(LPO)值，MTT法测定细胞增殖活性，流式细胞术测细胞凋亡率，研究体外培养的人脐静脉内皮细胞在不同浓度H2O2作用下的细胞损伤及凋亡，以及NAC对抗细胞损伤及凋亡的效应。结果 随着H2O2浓度增加，细胞凋亡率明显增高，细胞增殖活力降低，细胞脂质过氧化物生成增加，LDH释放率增加，并在一定范围内呈剂量-效应关系。在H2O2中同时加入0．5mmol／L NAC，可使细胞活力增强，凋亡率降低，细胞脂质过氧化物生成显减少，LDH释放率降低。结论 NAC可以对抗H2O2引起的血管内皮细胞损伤。     

NEU-P11对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用研究

目的：研究NEU-P11对脓毒症大鼠心肌的保护作用,并探讨其作用机制。方法：30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脓毒症模型组（CLP组）和Neu-p11处理组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症大鼠模型。术后6h收集血清,取心肌,检测血清中LDH、CK的活性,检测心肌组织中MDA、SOD的含量。结果：NEU-P11处理可明显改善脓毒症大鼠的心肌损伤,减少血清中LDH、CK 的释放和心肌组织中MDA的产生,增加心肌组织中SOD的含量。结论：NEU-P11对脓毒症大鼠心肌有显著的保护作用,可能与其能减少血清中LDH、CK 的释放和心肌组织中MDA的产生,增加心肌组织中SOD的含量有关。     

大黄素对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用

目的 研究大黄素对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用。方法 将50只淘汰剩余清洁级雄性SD大鼠分为对照组、模型组（脓毒症大鼠模型）、低剂量组（脓毒症大鼠模型,30mg/kg大黄素灌胃）、中剂量组（脓毒症大鼠模型,60mg/kg大黄素灌胃）、高剂量〖JP2〗组（脓毒症大鼠模型,90mg/kg大黄素灌胃）,每组10只,检测大鼠血流动力学指标和血清心肌酶,qRT PCR检测心肌组织中TNF α、〖JP〗IL 1β、IL 6 mRNA水平,试剂盒检测心肌组织中MDA、SOD、GSH PX水平,TUENL法检测心肌细胞凋亡,试剂盒检测心肌组织Caspase 3活性。结果 与对照组比较,模型组大鼠MAP和LVSP降低,LVEDP、心肌酶水平升高,心肌组织中TNF α、IL 1β、IL 6 mRNA水平升高,SOD、GSH PX活性降低,MDA水平升高,心肌细胞凋亡率和C Caspase 3活性升高。与模型组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠MAP和LVSP依次升高,LVEDP、心肌酶水平依次降低,心肌组织中TNF α、IL 1β、IL 6 mRNA水平依次降低,SOD、GSH PX活性依次升高,MDA水平依次降低,心肌细胞凋亡率和C Caspase 3活性依次降低。结论 大黄素通过减少心肌氧化应激、细胞凋亡和炎症因子水平可对脓毒症大鼠心肌损伤起到保护作用。     

CTRP1血清浓度与患者脓毒症心肌损伤预后的关系

目的 研究脓毒症患者CTRP1血清水平高低与心肌损伤及预后的相关性。方法 本研究收集2018年10月～2021年4月就诊于武汉大学人民医院脓毒症患者176例作为研究对象,分为心肌损伤组与非心肌损伤组,选取体检患者63例作为健康对照。采用ELISA法测定CTRP1浓度,并收集结合其临床资料分析研究健康人群与脓毒症患者CTRP1水平,及CTRP1水平与其预后是否有关。结果 脓毒症组CTRP1浓度明显高于健康组[58.84(40.30,100.06)ng/ml vs 39.38(28.98,53.97)ng/ml,P<0.01];非心肌损伤组CTRP1浓度明显高于心肌损伤组[65.08(46.65,117.62)ng/ml vs 52.31(39.87,82.50)ng/ml,P=0.01];斯皮尔曼相关性分析显示,CTRP1与休克、心功能不全、心律失常的呈负相关(相关系数:-0.20、-0.19、-0.15,P<0.05)。结论 CTRP1可以保护脓毒症患者引起的心功能损伤,为临床脓毒症心功能不全的治疗提供了新的研究方向。     

脓毒症心肌损伤与血流动力学

心肌损伤是脓毒症常见的并发症,可导致多种血流动力学参数的异常.人们对脓毒症心肌损伤的认识是一个不断发展的过程.脓毒症心肌损伤曾经一度被认为特指心脏收缩功能损伤,一个重要原因是收缩功能异常比较容易被发现.近年来随着床边血流动力学监测技术的不断完善,心脏舒张功能测定困难的状况逐渐得到改善.到目前为止,床边血流动力学监测技术的发展可分为以下4个阶段:前肺动脉导管阶段、床边肺动脉导管阶段、放射性核素检测阶段和床边多普勒超声心动图检测阶段.     

益气凉血化瘀汤对脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的:观察益气凉血化瘀汤对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用。方法:雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常组、假手术组、模型组和治疗组,每组8只。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立脓毒症大鼠动物模型,观察各组大鼠心肌酶谱的变化,并通过透射电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构改变。结果:模型组及治疗组大鼠心肌酶谱均较假手术组显著升高,差异有统计学意义(均P<0.01);模型组心肌酶谱升高更为显著,与治疗组比较差异有统计学意义(P<0.05)。超微结构示,模型组大鼠心肌细胞线粒体肿胀,部分空泡变性、自溶;治疗组心肌细胞病变轻于模型组。结论:益气凉血化瘀汤能减轻脓毒症大鼠的心肌损伤。     

25%抗坏血酸注射液中盐酸-L-半胱氨酸与焦亚硫酸钠浓度的测定

本文研究了在抗坏血酸浓溶液中有少量乙二胺四乙酸二钠、盐酸-L-半胱氨酸和焦亚硫酸钠同时存在时,后二者的测定方法。其中盐酸-L-半胱氨酸用改良的茚三酮比色法,焦亚硫酸钠用品红法。方法操作简便,不需特殊仪器,分析结果稳定。     

焦亚硫酸钠与盐酸-L-半胱氨酸在延缓抗坏血酸注射液变色中的作用

本文探讨了焦亚硫酸钠与盐酸-L-半胱氨酸这两种稳定剂在延缓抗坏血酸注射液变色中的作用。盐酸-L-半胱氨酸能延缓2-酮-L-古洛糖酸的降解速率,也能与丙酮醛发生化学反应,延缓丙酮醛的变色速率;焦亚硫酸钠可能改变了丙酮醛的聚合方式而延缓丙酮醛的变色速率。从而在一定程度上解释了这两种稳定剂延缓抗坏血酸注射液变色的原因。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对急性胰腺炎大鼠脑保护作用的实验研究

目的探讨N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对急性胰腺炎(AP)大鼠脑组织损坏的保护作用,为临床应用NAC治疗胰性脑病(PE)提供实验依据。方法将90只SD大鼠随机分成正常对照组,经胰胆管逆行注射5%牛黄胆酸钠复制AP模型组和AP伴NAC处理组。AP伴NAC组在注射牛黄胆酸同时静脉注射NAC。造模后第24 h,处死所有实验组大鼠检测脑组织水含量、肿瘤坏死因子α和丙二醛(MDA)的含量以及微血管内白细胞聚集附壁,在电镜下观察海马CA1区结构。结果经NAC干预后,脑组织含水量、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛量以及微血管内白细胞聚集附壁现象显著降低。结论 NAC对大鼠急性胰腺炎时的脑损伤有明显的保护作用。