Survivin、Caspase-3表达对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的探讨Survivin、Caspase-3表达对鼻咽癌发生、发展及放疗后复发的影响,并研究两者间的相互关系。方法采用免疫组化SP法检测31例放疗后复发鼻咽癌、30例鼻咽非角化型鳞癌、30例鼻咽粘膜慢性炎标本中Survivin及Caspase-3的表达情况。结果 Survivin、Caspase-3表达的阳性率,鼻咽粘膜慢性炎分别为23.33%和96.67%,在鼻咽非角化型鳞癌中分别为73.33%和16.67%,在放疗后复发鼻咽癌分别为83.87%、22.58%,两者在三组中的表达,差异有统计学意义（P〈0.001）,在鼻咽非角化型鳞癌组与放疗后复发组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。在放疗后复发鼻咽癌中,Survivin与Caspase-3的表达有显著负相关性（r=-0.398,P〈0.05）。结论 Survivin的激活以及Caspase-3的失活参与了鼻咽癌的发生发展过程,Survivin在胞核的阳性表达可能与放射抗性相关。     

IFITM3基因表达对胃癌细胞侵袭和转移的影响

目的探讨胃癌组织IFITM3基因表达对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学、Western blot等方法检测120例胃癌患者癌及癌旁组织IFITM3基因表达情况;运用Transwell侵袭实验和划痕实验检测转染shRNA-IFITM3质粒对胃癌细胞株(AGS和MKN45细胞)侵袭和转移能力的影响。同时观察裸鼠体内接种低表达的IFITM3胃癌AGS细胞后发生肺转移情况。结果胃癌组织IFITM3mRNA和蛋白表达水平均显著高于对应癌旁组织(P<0.05);AGS和MKN45细胞中IFITM3mRNA呈高表达。转染shRNA-IFITM3质粒后AGS和MKN45细胞侵袭能力均明显降低(P<0.05),AGS细胞迁移能力显著下降(P<0.05)。裸鼠体内接种低表达的IFITM3胃癌AGS细胞后肺转移率显著下降(P<0.05)。结论 IFITM3基因在胃癌组织呈高表达,IFITM3基因在胃癌的侵袭和转移过程中发挥重要作用。 更多还原     

人脑胶质瘤克隆细胞的放射敏感性

本实验以体外集落形成单位为终点指标,观察了人脑胶质瘤细胞DEF 7A的4个克隆细胞株 K_1、K_2、K_4及K_5受小剂量 0、0.1、0.2、0.5、1.0和2.0 Gy X线照射及受大剂量0、4、8、10和12Gy照射后细胞的种植系数、存活分数及剂量存活曲线。结果表明,K_1细胞的D_0值为4.56Gy,K_2的D_0值为4.43Gy,K_4的D_0值为3.63Gy,K_5的D_0值为4.58Gy。说明DEF7A人脑胶质瘤的4个克隆细胞具有不同的放射敏感性。     

抑制糖基转移酶GnT-V的表达可增强胶质瘤细胞放射敏感性

目的:探讨N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)介导的N-糖基化修饰在胶质瘤细胞放射敏感性中的作用及调控机制。方法:采用RT-PCR和Western blot技术筛选GnT-V高表达的胶质瘤细胞;运用RNA干扰技术抑制GnT-V基因和蛋白表达,流式细胞术和荧光显微镜观察细胞N-糖基化修饰改变;4 Gy X-射线处理后分析细胞放射敏感性差异。结果:成功筛选GnT-V高表达的U251细胞;下调U251细胞中GnT-V的表达,可阻断N-糖链合成,逆转X-射线诱导的G2/M期阻滞,促进细胞凋亡。结论:抑制GnT-V的表达可通过阻断N-糖基化修饰增强胶质瘤细胞的放射敏感性。     

RNAi沉默clusterin基因对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响

目的:研究clusterin(CLU)基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响.方法:靶向CLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,Western blot法测定CLU基因蛋白表达水平.给予不同放射剂量(2、4、6Gy)处理后,通过MTT法及克隆形成实验检测卵巢癌SKOV3细胞的存活率及克隆形成率,流式细胞...     

放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响

目的 探讨放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响.方法 以低放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1、高放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-2为研究对象,采用析因设计的方法,分别给予CHE-1、CNE-2假照(0 Gy)、低剂量照射(2Gy)、高剂量照射(8Gy).Trizol法提取总RNA,设计特异性茎环引物逆转录miR-7,随机六引物逆转录18 s rRNA,所得cDNA进行染料法荧光定量PCR,以0 Gy照射的CNE-1细胞为参照样本,△△Ct法计算各组细胞miR-7的相对表达值,SPSS13.0行析因设计资料方差分析.结果 CNE-1和CNE-2的miR-7表达量有显著差异(F=135.483,P<0.001),CNE-1的miR-7表达量(x=4.49±3.62)高于CNE-2(x=1.29±1.10),不同剂量照射后,鼻咽癌细胞株miR-7表达量也有显著性差异(F=39.565,P<0.001),CNE-1接受2 Gy X线照射后miR-7表达最高,8 Gy照射组次之,0Gy照射组最低.CNE-2接受2GyX线照射后miR-7表达最低,8Gy照射组次之,0Gy照射组最高.结论 放射敏感性不同导致细胞受X线辐射后,miR-7表达调整方向不同,即低放射敏感细胞上调,而高放射敏感性细胞下调;X线辐射剂量将影响miR-7的表达调整幅度,即低剂量照射后miR-7调整幅度大,高剂量照射后调整幅度小.抑制miR-7表达可能会提高鼻咽癌细胞的放射敏感性.     

糖酵解参与的黑色素瘤细胞放射敏感性lncRNAs的初步筛选及相关性分析

目的:通过微阵列芯片技术筛选糖酵解参与的黑色素瘤细胞放射治疗(以下简称放疗)敏感性相关的lncRNA和mRNA表达谱,初步探索lncRNA调控糖酵解途径影响黑色素瘤细胞放疗敏感性的分子机制.方法:以不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00mmol/L)的2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose...     

两株人肝癌细胞放射敏感性的体外研究

目的用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402的放射敏感性.方法人肝癌细胞HepG2和BEL-7402体外培养,应用集落形成法测定6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率,计算细胞放射敏感性参数;应用HE染色和流式细胞术测定细胞受5Gy照射后细胞凋亡率.结果HepG2的D0为1.5Gy,Dq值为0.8Gy,n为1.8,SF2为0.45±0.05;BEL-7402的D0为1.6Gy,Dq为1.3Gy,n为2.4,SF2为0.63±0.05.两株细胞受照后出现凋亡现象,照射后24h内随时间延长细胞凋亡率逐步升高.结论HepG2和BEL-7402具有较高的放射敏感性,可能与其受照后发生凋亡有关.     

干扰RNA抑制EGFR对乳腺癌细胞放射敏感性的影响

目的采用干扰RNA技术(small interfering RNA,siRNA)抑制SKBR-3,即HER-2(+++),EGFR(+++)乳腺癌细胞EGFR的表达,研究EGFR受抑制后HER-2过表达细胞对X线敏感性的变化.方法质粒转染及鉴定:将细胞随机分为实验组、阴性对照组和空白组,重组质粒EGFR-siRNA和Neg-siRNA分别被转染入实验组及阴性对照组;Western blot检测各组细胞EGFR的表达水平;6MV射线照射4 Gy后0,24 h,48 h收集细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞D0,SF2和α等值.结果质粒转染SKBR-3细胞,Western分析表明转染EGFR-siRNA的阳性细胞株在蛋白质水平受到明显抑制;X线照射24 h及48 h后,EGFR表达受抑制细胞凋亡率均高于转染阴性质粒组和空白对照组(P分别为0.045及0.039);EGFR受抑制的细胞D0值和SF2值分别为1.218和0.376,α值为0.335.结论运用RNAi技术可以有效抑制EGFR的表达从而提高SKBR-3细胞对X线的放射敏感性,EGFR是一个较理想的肿瘤分子治疗靶点.     

反义mdr1对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨用反义技术抑制多药耐药基因1(Multidrug resistance gene 1,mdr1基因)对鼻咽癌细胞CNE放射敏感性的影响.方法:设立空白组、脂质体组(仅加入等量的脂质体)和mdr1正义寡核苷酸组作对照,用RT-PCR检测鼻咽癌细胞转染反义mdr1前后mdr1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人鼻咽癌CNE细胞株的集落形成率,免疫组织化学法测定甲基鸟嘌呤甲基转移酶(Methylguanine-methyhransferase,MGMT)的表达.结果:mdr1反义寡核苷酸能有效抑制mdr1基因的表达.mdr1反义寡核苷酸 60Coγ射线照射组,其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,MGMT蛋白的表达也显著下调.与各对照组比较有显著差异(P<0.05).结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低了人鼻咽癌CNE细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸下调照射后鼻咽癌细胞MGMT蛋白表达有关.     

皮肤恶性黑色素瘤组织中Runx3与Smad4蛋白的表达

目的：检测皮肤恶性黑色素瘤（CMM）组织中Runt相关转录因子3（Runx3）和Smad4蛋白的表达。方法：采用免疫组化SP法检测42例CMM、20例皮肤交界痣组织和20例正常皮肤组织中Runx3和Smad4蛋白的表达。结果：正常皮肤、皮肤交界痣及CMM组织中Runx3蛋白的阳性表达率分别为90.0%（18/20）、85.0%（17/20）和26.2%（11/42）,3者相比,差异有统计学意义（χ2=31.371,P〈0.001）;正常皮肤、皮肤交界痣及CMM组织中Smad4蛋白的阳性表达率分别为85.0%（17/20）、85.0%（17/20）和42.9%（20/42）,3者相比,差异有统计学意义（χ2=12.731,P=0.002）。CMM组织中Runx3和Smad4蛋白的表达存在关联性（rp=0.378,P=0.008）。结论：CMM组织中Runx3蛋白低表达或失表达,可能抑制了TGF-β/Smad4信号通路的激活,从而促进细胞的恶性转化和增殖。     

多核细胞的形成与细胞放射敏感性关系的研究

目的：探讨肿瘤细胞在接受γ射线照射后多核细胞的形成与细胞放射敏感性的关系。方法：利用定时显微摄影装置对人膀胱癌细胞株ＲＴ１１２和人胚胎肠上皮细胞株１４０７Ｄ ８Ｇｙ γ射线照射后的细胞改变进行２４０ｈ连续观察。结果：两个细胞株受γ射线照射后不仅出现细胞的凋亡和坏死，还有双核或多核细胞的形成。两个细胞株的双核或多核细胞的形成方式各不相同，１４０７主要是细胞融合，ＲＴ１１２则基本上是由于细胞分裂失败而     

MTT法在测定细胞放射敏感性中的运用

本研究用ＭＴＴ法和细胞克隆计数法检测了人肺腺癌细胞株Ａ 5 49在不同剂量Ｘ射线照射后的存活分数 ,发现在一定照射剂量内两种方法相关性较好。1　材料和方法　　细胞培养 :人肺腺癌细胞株Ａ 5 49由附属新桥医院全军呼吸内科研究所提供。培养在含有 1 0 %小牛血清 ,青 链毒素 (各1 0 0Ｕ/ｍｌ)的ＲＰＭＩ 1 6 4 0培养液中。　　Ｘ线照射 :在室温下 ,Ｖａｒｉａｎ 2 30 0直线加速器 6ＭＶ Ｘ线照射 ,加 3ｃｍ标准等效填充物 ,平均剂量率 2Ｇｙ/ｍｉｎ。　　细胞存活分数测定 :将处于对数生长期的细胞分为 4组 ,分别照射 0、2、6、1 0Ｇｙ后 …     

侵袭性恶性黑色素瘤细胞凋亡及PCNA的表达

目的：探讨恶性黑色素瘤（恶黑）细胞凋亡，PCNA表达水平关系，找出评价恶黑预后的可靠指标。方法：用原位末端标记法检测细胞凋亡的免疫组化法检测PCNA共20例恶黑石蜡包埋标本。结果：恶黑组织中有细胞凋亡与PCNA阳性表达，阳性率分别为50％和100％,有50％赤组织同时有细胞凋亡与PCNA表达。结论：细胞凋亡及增殖异常与恶黑发生发展有关系，二者的比值可能是判定恶黑预后的又一可靠指标。     

恶性黑色素瘤细胞凋亡特点的研究进展

对外界广泛刺激原的反应失去诱导细胞凋亡的能力，使恶性黑色素瘤在进展和转移方面获得选择的优势及对常规治疗方法的不敏感性。基因组的突变（p53）、G蛋白和蛋白激酶（Ras等）转录、转录后水平及转录因子效应基因（NF-kB、c-jun、stat3、ATF2）的变化、抗凋亡基因（Bcl-2、Bcl-XL、surviving、ML—IAP等）的表达上调，均影响TNF、Fas、TRAIL受体等诱导细胞凋亡的途径，在恶性黑色素瘤获得抗凋亡能力方面起重要作用。参与凋亡通路信号传导的分子蛋白其复杂的变异性，说明恶性黑色素瘤细胞有许多种调节凋亡及产生凋亡不足的可能性。进一步理解这些分子信号蛋白的相互作用机制及参与调控凋亡的途径，认识他们在黑色素瘤细胞凋亡失调过程中的作用，识别黑色素瘤逃避凋亡刺激的不同路线，或许能为黑色素瘤提供一个新的预防、治疗方法。     

直肠癌自发性细胞凋亡指数、ATM蛋白表达和放射敏感性的关系

目的探讨直肠癌自发性细胞凋亡指数(SAI)、ATM蛋白表达水平和放射敏感性的关系。方法对56例直肠癌活检标本分别采用TUNEL和免疫组化法检测SAI和ATM蛋白表达,对放疗后手术切除标本进行放射敏感性测定,观察其与SAI,ATM蛋白表达的关系。结果放疗前直肠癌组织均能检测到细胞凋亡,平均SAI(1.01±0.25)%;SAI与ATM蛋白阳性表达率呈负相关(r=-0.75,P<0.05);高凋亡指数组(SAI>1.01%)放射敏感性明显高于低凋亡指数组(SAI<1.01%)(P<0.05);ATM蛋白阳性表达率与放射敏感性呈负相关。当SAI>1.01%,ATM(-)时,放疗敏感性明显增高。结论SAI和ATM与直肠癌放射敏感性密切相关,是直肠癌放射敏感性的两个重要预测因素。     

非小细胞肺癌EGFR表达与临床分期放射敏感性关系的研究

目的 探讨非小细胞肺癌表皮生长因子受体表达与临床分期、放射敏感性的关系.方法 56例无远处转移经病理活检证实的非小细胞肺癌患者,行三维适形放射治疗,放射剂量60～70Gy/30～35F/6～7weeks.放疗结束前后CT胸部增强扫描.病理切片用免疫组化染色法检测EGFR表达情况.结果 NSCLC患者EGFR表达水平明显高于正常肺组织(18.8%)(P＜0.01),EGFR表达与年龄、性别、病理分类、组织分化程度无关(P＞0.05),与TNM分期、淋巴转移显著相关(P＜0.01),EGFR的表达与肿瘤消退CR呈负相关(P＜0.05).结论 EGFR过度表达可降低肿瘤的放射敏感性,是影响预后的因素之一.提示可以将EGFR作为提高肿瘤敏感性的治疗靶点,为EGFR酪氨酸激酶抑制剂将分子靶向性药物协同放疗治疗NSCLC提供了初步的临床证据.放疗前评估肿瘤EGFR表达水平可以作为预测放疗疗效的指标之一.     

干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制。方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化。结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P<0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P<0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点。