miRNA-149改善坐骨神经慢性压迫损伤大鼠神经病理性疼痛的机制研究

目的 探究miR-149对大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性疼痛(NP)的影响及分子机制。方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、CCI组、CCI+miR-149 agomir阴性对照(CCI+agomir-NC)组、CCI+miR-149 agomir组、CCI+miR-149 agomir+pc-NC组、CCI+miR-149 agomir+pc-CaMKⅡγ组，每组12只。采用CCI诱导建立NP大鼠模型，于建模前及建模后的第3天、第7天、第11天、第14天利用Von Frey检测大鼠的机械痛敏，热辐射法检测大鼠的热痛敏；建模后第14天用RT-qPCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-149和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ (CaMKⅡγ) mRNA表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测DRG中CaMKⅡγ蛋白水平；尼氏(Nissl)染色观察DRG神经元尼氏小体变化；免疫荧光法检测脊髓神经元中CaMKⅡγ表达情况；酶联免疫吸附法(ELISA)检测DRG中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素1β (IL-1β)和干扰素-γ (IFN-γ)...     

过表达miR-203a-3p对脂多糖致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制

目的 探讨过表达miR-203a-3p对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制。方法 采用多次小剂量注射LPS制备大鼠急性肺损伤后肺纤维化模型,并将造模成功的大鼠随机分成模型组(Model组)、agomir阴性对照组(agomir-NC组)和miR-203a-3p agomir组(agomir组),另设对照组(Control组),每组15只。造模前1 d及造模开始后1周,给予尾静脉注射miR-203a-3p agomir干预。造模2周后,测定肺组织湿/干比重(W/D)及肺组织羟脯胺酸(Hyp)含量;HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及肺纤维化程度;ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测大鼠肺组织中miR-203a-3p和卵泡抑素样蛋白1(Fstl1)mRNA表达水平;Western blot检测大鼠肺组织中Fstl1蛋白表达水平;双荧光素酶报告系统检测miR-203a-3p和Fstl1的靶向关系。结果与Control组比较,Model组...     

低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后TGF-β1、HIF-1α和Nogo-NgR通路的影响

目的 探讨低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factors 1-α,HIF-1α)和Nogo-NgR通路相关基因及蛋白表达的影响。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、超短波(ultrashort wave, USW)组,每组10只。对照组仅暴露脊髓,模型组、USW组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型,USW组在造模24h后每日给予低剂量超短波干预,持续4周。采用运动评分量表(Basso-Beattie-Bresnahan, BBB)和斜板评分评价大鼠的后肢运动功能情况,利用Real-time PCR及Western blot法检测脊髓组织中TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠BBB评分与斜板评分显著降低(P<0.05),TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,USW组大鼠BBB...     

微小RNA-30b-3p在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肝组织中的表达及意义

目的探讨微小RNA-30b-3p(miR-30b-3p)在肝脏缺血再灌注损伤(IRI)小鼠肝组织中的表达,并阐述可能的机制。方法将40只无特定病原体级雄性健康C57BL/6小鼠随机分为IRI组、假手术组、miRNA阴性对照(miR-NC)组和miR-30b-3p agomir组,每组10只。IRI组、miR-NC组和miR-30b-3p agomir组小鼠建立肝脏IRI模型,假手术组小鼠仅进行开腹及关腹等操作。造模前24 h,miR-NC组和miR-30b-3p agomir组小鼠分别经尾静脉注射10 nmol·L~(-1)的miR-NC或miR-30b-3p agomir 0.3 m L;假手术组和IRI组小鼠术前不进行干预。采用生物化学法检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;苏木精-伊红染色法观察小鼠肝组织病理学改变;荧光脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法标记肝细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中Caspase-3表达与分布;实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠肝组织中miR-30b-3p表达;Western blot法检测小鼠肝组织中Bcl-2、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Bax及Cleave Caspase-3蛋白的表达。结果 IRI组和miR-NC组小鼠血清ALT、AST水平显著高于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠血清ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-30b-3p agomir组小鼠血清ALT、AST水平显著低于IRI组(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠血清ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-30b-3p agomir组小鼠血清ALT、AST水平均显著低于miR-NC组(P<0.05)。IRI组、miR-NC组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著低于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著升高(P<0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著高于IRI组(P<0.05),miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中miR-30b-3p相对表达量显著高于miR-NC组(P<0.05)。IRI组和miR-NC组小鼠肝细胞凋亡率显著高于假手术组(P<0.05),miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率显著低于IRI组(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠肝细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝细胞凋亡率显著低于miR-NC组(P<0.05)。IRI组和miR-NC组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著低于IRI组(P<0.05),miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中Caspase-3相对表达量显著低于miR-NC组(P<0.05)。与假手术组比较,IRI组、miR-NC组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3相对表达量均显著增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.05);miR-30b-3p agomir组与假手术组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3及Bcl-2相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与IRI组比较,miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中FADD、Bax及Cleave Caspase-3相对表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著增加(P<0.05);miR-NC组与IRI组小鼠肝组织中FADD、Bax、Cleave Caspase-3及Bcl-2相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与miR-NC组比较,miR-30b-3p agomir组小鼠肝组织中FADD、Bax及Cleave Caspase-3相对表达量均显著降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量显著增加(P<0.05)。结论 miR-30b-3p可减轻小鼠肝脏IRI,其机制可能与抑制FADD/Caspase-3信号通路所介导的肝细胞凋亡有关。     

微RNA-219通过ERK 1/2通路改善炎症所致新生SD大鼠脑内少突胶质细胞成熟障碍

目的 建立新生SD大鼠炎症模型,初步探究微RNA-219(miR-219)促进少突胶质细胞成熟的机制。方法 将60只SD大鼠随机分为对照组、脂多糖（LPS）组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射）、LPS+miR-219 agomir组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射）、miR-219 antagomir组（miR-219 antagomir 3μL侧脑室注射）和LPS+miR-219 agomir+U0126组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射,U012630 mg/kg腹腔注射）。于大鼠出生第7天和第14天处死后取脑组织,采用qPCR检测脑组织中miR-219及炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测少突胶质细胞成熟标志物髓鞘碱性磷脂蛋白（MBP）和ERK1/2表达水平,免疫荧光检测大鼠胼胝体少突胶质细胞的数量。结果 与对照组相比,大鼠腹腔注射LPS后脑组织内IL-1β、TNF-α mRNA表达均升高（P<0.01）,miR-219表达减少（P...     

电针干预对大鼠脊髓损伤后miR-124-3p及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：通过观察miR-124-3p及Bcl-2、Bax蛋白的表达,探讨电针治疗对脊髓损伤（SCI）大鼠神经功能恢复的机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。假手术组行椎板切除术,其余各组通过改良版Allen’s打击法建立SCI大鼠模型。造模成功后6 h起,电针组予T9～T11夹脊穴、大椎穴以及双侧足三里穴电针治疗,假手术组和模型组不予任何处理。在术后第1、第3、第7天采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分观察各组大鼠后肢运动功能,并于术后第7天进行取材,苏木精—伊红（HE）染色法观察脊髓组织神经元细胞的病理形态学改变,RT-qPCR法检测脊髓组织中miR-124-3p的表达情况,Western blotting检测脊髓组织中凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）的表达量。结果：与假手术组相比,术后第7天模型组大鼠BBB评分降低,神经元数量减少,脊髓组织中Bax的表达水平升高,miR-124-3p、Bcl-2的表达水平下降（P<0.05）;与模型组相比,术后第7天电针组大鼠BBB评分提高,神经元数量增多...     

夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠microRNA-21及其介导的神经元凋亡的影响

目的:观察夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠miR-21的表达及其介导的神经元凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和甲强龙组,通过改良版Allen's打击法复制急性脊髓损伤大鼠模型。各组于造模后2 h给予相应的干预治疗,其中电针组予胸8～胸12夹脊穴电针治疗,甲强龙组给予甲泼尼龙琥珀酸钠30 mg/kg腹腔注射,假手术组和模型组不予处置。分别观察各组大鼠治疗后肢体运动功能评分,并取损伤节段脊髓组织,通过Nissl染色观察脊髓神经病理形态的改变,RT-qPCR法检测组织中miR-21的表达水平,Western-Blot法检测组织中凋亡蛋白(Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase-3)的表达丰度。结果:与除假手术组相比,模型组术后BBB、神经元存活率和组织中miR-21的表达水平明显低,神经元凋亡率明显增高,组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达及Bax/Bcl-2的比值均明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);夹脊穴电针治疗能够明显升高ASCI大鼠术后BBB评分、神经元存活率和组织中miR-21的表达,降低神经元凋亡率和Bax/Bcl-2的比值,抑制组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:夹脊穴电针治疗可明显促进SCI后小鼠神经功能的恢复,其作用机制可能与其上调组织中miR-21的表达进而抑制Bax/Bcl-2/cleaved Caspase-3信号通路的活化密切相关。     

miR-133a调控NLRP3炎性小体活化对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的:探究miR-133a对大鼠脊髓损伤(SCI)修复的作用及机制。方法:采用改良的Allen法诱导急性SCI大鼠模型。进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分以确定运动功能恢复;通过qRT-PCR和Western blot检测miR-133a水平与NLRP3炎性小体相关蛋白水平;HE染色和Nissl染色评估脊髓神经元形态变化情况;TUNEL染色用于评估细胞凋亡;ELISA用于检测TNF-α、IL-1β和IL-10含量;免疫荧光用于评估GFAP、CD11b和NeuN阳性细胞表达情况。结果:SCI后大鼠BBB评分降低,Nissl小体数量减少,TUNEL凋亡率升高;并且TNF-α、IL-1β含量上调,IL-10含量下调,GFAP、CD11b蛋白水平升高,NeuN蛋白水平降低;此外miR-133a表达被抑制,而NLRP3炎性小体活化(P<0.05)。通过注射miR-133a激动剂上调其表达,进而可有效改善SCI大鼠的损伤情况以及对NLRP3炎性小体的激活情况(P<0.05)。此外,NLRP3抑制剂与miR-133a激动剂效果相似(P>0.05),但N...     

利拉鲁肽对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞自噬与运动功能恢复的作用

目的：探讨利拉鲁肽注射液(Liraglutide)对急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经细胞的保护作用及其可能机制。方法54只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组,损伤后立即腹腔注射0.9%氯化钠注射液50μg/kg)和治疗组(Liraglutide组,损伤后立即腹腔注射利拉鲁肽50μg/kg),每组18只,Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,于损伤后3 d取脊髓组织,Western blot检测LC3-Ⅱ、Caspase-3表达,免疫荧光双标染色观察神经元自噬表达水平、神经细胞凋亡情况;于损伤后1 d、3 d、7 d分别进行Basso Beattle Bresnahan (BBB)运动评分。结果与Sham组相比,SCI组LC3-Ⅱ、Caspase-3表达、自噬阳性神经细胞数目、神经细胞凋亡数目均增多(P＜0.01),BBB评分显著降低(P＜0.01);Liraglutide组与SCI组相比,LC3-Ⅱ显著增多,Caspase-3表达降低(P＜0.01);免疫荧光双标染色示自噬阳性细胞数目明显增多(P＜0.01);神经元凋亡双标染色法示神经凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01);BBB评分在3 d与7 d时有显著提高(P＜0.01)。结论利拉鲁肽增强大鼠脊髓损伤后神经细胞自噬,降低凋亡相关蛋白表达,减少神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,对脊髓损伤具有保护作用。     

脊髓损伤大鼠细胞凋亡、自噬程度的评估及阿魏酸的干预作用研究

目的:研究脊髓损伤大鼠细胞凋亡、自噬程度的评估及阿魏酸的干预作用。方法:选择成年雄性SD大鼠并分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组)、阿魏酸干预组(FA组),通过动脉夹夹持的方法建立脊髓损伤模型,给予100mg/kg的阿魏酸灌胃、2次/日干预。干预后7、14d时,测定脊髓组织中凋亡分子、凋亡抑制分子、细胞自噬分子的表达量。结果:SCI组大鼠脊髓组织中PARP-1、AIF、ASK-1、mTOR、PI3K、Akt、Beclin1、LC3-Ⅱ的蛋白表达量显著高于Sham组,Survivin、NAIP、Bcl-2的蛋白表达量显著低于Sham组;FA组大鼠脊髓组织中PARP-1、AIF、ASK-1、mTOR、PI3K、Akt、Beclin1、LC3-Ⅱ的蛋白表达量显著低于SCI组,Survivin、NAIP、Bcl-2的蛋白表达量显著高于SCI组。结论:阿魏酸对脊髓损伤过程中的细胞凋亡、自噬具有抑制作用。     

黄芪注射液对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用及机制研究

目的 基于细胞凋亡Fas和TRAIL死亡受体信号通路探讨黄芪注射液对大鼠急性脊髓损伤(SCI)的神经保护作用及机制。方法 40只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组,SCI模型组,黄芪注射液低、中、高剂量(1、2、4 mL·kg^-1)组,每组8只。采用改良的重物打击法构建大鼠急性SCI模型;按照BBB评分和Rivlin斜板实验评价大鼠运动功能;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色检测脊髓组织病理变化;尼氏染色法检测脊髓神经元细胞损伤程度;高通量转录组测序分析差异表达基因;qPCR验证基因转录水平的表达量;利用TUNEL试剂盒检测各组脊髓细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡通路关键蛋白表达水平。结果 BBB评分和斜板试验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠表现出明显的运动功能障碍;HE染色显示模型组脊髓组织病理病变严重;模型组尼氏染色着色较浅,神经元细胞损伤严重;与假手术组比较,模型组脊髓中4 597个基因差异表达,Fas、TRAIL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bax蛋白表达显著上调(P<0....     

缺氧诱导因子-1α上调Cx43表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制研究

目的研究在糖氧剥夺（OGD）条件下,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）上调缝隙连接蛋白（Cx43）表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制。方法采用HIF-1α过表达质粒转染星形胶质细胞HA细胞株构建过表达细胞株,HIF-1α小干扰RNA（siRNA-HIF-1α）转染构建低表达细胞株。同时设置对照组（Con）,在OGD条件下培养细胞。采用RT-qPCR和Westernblot法检测过表达/沉默后HIF-1α和Cx43mRNA和蛋白水平。CCK-8法检测细胞活力,Annexin-FITC/PI染色后流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测谷氨酸水平,ELISA法检测培养基中炎症因子NO、TNF-α、IL-6水平,Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关启动子（Bad）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞色素C（Cyt-C）的表达水平。结果HIF-1α过表达后,OGD条件下,HIF-1α-lent组细胞凋亡率显著高于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43mRNA和蛋白表达水平显著增高,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著高于Con组,细胞凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均上调,Bcl-2表达水平下调。而HIF-1α沉默后,OGD条件下,siRNA-HIF-1α组细胞凋亡率显著低于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43mRNA和蛋白水平显著降低,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著低于Con组,细胞中凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均下调,Bcl-2表达水平上调。结论HIF-1α可以通过调控Cx43的表达,调控缺血缺氧下星形胶质细胞的损伤,这是HIF-1α在缺血性脑病发生、发展中的作用机制之一。     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达与调控

目的：探讨低氧对滋养细胞转化生长因子3B(TGF-3β)的表达的诱导作用，以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用．方法：滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养：正常对照组、缺氧组、HIF—1α反义组和HIF-1α正义组．HIF-1α反义组和HIF-α正义组先加入HIF-1α寡核苷酸，常氧条件培养6h，再低氧条件培养48h．48h后，收集细胞，实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平，Western blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平．结果：与正常对照组相比，缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加，TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高；与HIF—1α 正义组比较，HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低，TGF-3β mRNA和蛋白表达也下降．结论：缺氧可以诱导滋养细胞TGF-3β表达，并且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控．     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

黄芪甲苷对脊髓损伤及脊髓胶质细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对脊髓损伤(SCI)及脊髓胶质细胞凋亡的影响。 方法实验分为对照组、SCI组(SCI模型)、AS低剂量组(AS-L组)、AS高剂量组(AS-H组)。比较各组大鼠运动功能、脊髓组织水肿、细胞凋亡、氧化反应情况；蛋白免疫印迹分析各组脊髓组织核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)水平。 结果与对照组比较,SCI组脊髓组织促凋亡相关的蛋白cleaved Caspase-3和Bax表达升高,出现明显广泛的神经元死亡、胶质细胞凋亡和氧化应激反应,并伴有更严重的功能缺陷。而AS能够呈剂量依赖性逆转上述趋势,且AS-L组、AS-H组脊髓组织Nrf2和HO-1水平高于对照组和SCI组。 结论AS通过调节Nrf2/HO-1信号通路具有抗氧化和抗凋亡作用,进而改善大鼠脊髓损伤,为脊髓损伤的治疗提供新的思路。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织 Caspase －3表达的影响

目的：观察补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）后大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白 Caspase －3及 mRNA表达的影响,初步探讨补阳还五汤抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法Wistar 大鼠40只,随机分为正常对照组、SCI 模型组、补阳还五汤组和阳性药物对照（MP）组,每组10只。各组分别于建立 SCI 模型后1、7、14、21、28 d 观察大鼠后肢运动功能恢复情况并进行 BBB 功能评分,观察大鼠 SCI 模型建立及恢复情况,并于第28天处死各组大鼠,采用 real －time PCR 法检测脊髓组织 Caspase －3 mRNA 的表达情况,Western blot 法检测脊髓组织 Caspase－3蛋白的表达情况。结果大鼠麻醉清醒后,SCI 模型组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。 BBB 评分结果显示：术后第1～28天,与正常对照组比较,SCI 模型组 BBB 评分明显降低（P ＜0．05）;术后第7～28天,与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分明显增高（P ＜0．05）;补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分差异无统计学意义。 Real －time PCR 和 Western blot 结果显示：与正常对照组比较,SCI 模型组 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显升高（P ＜0．05）;与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓组织 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显降低（P ＜0．05）。补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达差异无统计学意义。结论补阳还五汤可改善 SCI 大鼠后肢运动功能,通过下调 Caspase －3的表达,从而抑制 SCI 大鼠脊髓神经细胞的凋亡,对脊髓神经细胞有保护作用。     

MicroRNA-92a 对大鼠脊髓损伤后 运动功能恢复的影响

目的 分析microRNA-92a（miR-92a）对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及可能的作用机 制。方法 第一步,复制大鼠脊髓损伤模型,将30 只大鼠分为假手术组和脊髓损伤组,筛选目标miRNA。 第二步,分析miR-92a 对脊髓损伤大鼠的影响,将剩余54 只大鼠分为假手术组、对照组（脊髓损伤+miR- 92a mimics negative control）和实验组（脊髓损伤+miR-92a mimics）。采用BBB 评分评估大鼠运动功能, TUNEL 染色检测细胞凋亡,qRT-PCR 和Western blotting 检测相关基因和蛋白的表达,双荧光素酶验证人 第10 号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）与miR-92a 的靶向关系。结果 ①脊髓损伤组与假手术组大鼠第1、 3、7、14、21 和28 天的BBB 评分在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评 分高于脊髓损伤组（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异 有统计学意义（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠miR-92a、miR-132、miR-128、miR-107、miR- 202、miR-451、miR-17 表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）。②假手术组、对照组、实验组大鼠 第7、14 和28 天的miR-92a 表达水平在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,实验组miR- 92a 表达水平最高（P <0.05）。假手术组、对照组、实验组大鼠第1、3、7、14、21 和28 天BBB 评分在不同 时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评分最高（P <0.05）。3 组大鼠细胞凋亡率、 Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异有统计学意义（P <0.05）。③对照组与实验组大鼠PTEN-WT 荧光活性比较, 差异有统计学意义（P <0.05）;两组PTEN-MUT 荧光活性比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组与实 验组大鼠PTEN mRNA 和蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。PTEN 与miR-92a 表达水平 呈负相关（P <0.05）。结论 大鼠脊髓损伤后miR-92a 表达下调。过表达miR-92a 可促进大鼠运动功能恢复, 抑制细胞凋亡。     

雌激素对脊髓继发性损伤保护作用的研究

目的观察雌激素对脊髓继发性损伤的保护作用。方法采用Allen造模法建立脊髓损伤(SCI)模型。将成年雄性SD大鼠126只随机分为假手术组、SCI组和雌激素组,每组42只。采用免疫组织化学法和图像定量分析法观察SCI后凋亡调控因子Bax蛋白的表达,比色法检测各组丙二醛(MDA)的含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的变化,术后4周内经Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分观察脊髓功能恢复情况。结果假手术组有少量散在的Bax蛋白表达,SCI组Bax蛋白表达的阳性细胞较假手术组明显增多(P<0.01),雌激素组较SCI组阳性细胞数明显减少(P<0.05);与SCI组比较,雌激素组MDA含量明显降低而SOD活性明显增高(P<0.05);手术后1周雌激素组较SCI组BBB评分明显增高(P<0.05)。结论雌激素可通过下调促细胞凋亡因子Bax蛋白表达和减少活性氧产生,从而可能在脊髓继发性损伤中发挥保护作用。     

Caspase-1及其下游炎症因子在大鼠脊髓损伤中的表达及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）及其下游炎症因子自介素-1beta（IL-1β）和白介素-18（IL-18）在大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）中的表达及意义。方法将成年雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠84只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组42只。脊髓损伤组应用改良的Allen’S重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型,对照组只做全椎板切除。以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-1β及IL-18的表达情况。结果对照组大鼠脊髓组织中Caspase-1及其下游炎症凶子阳性细胞有少量表达,而脊髓损伤组Caspase—1及其下游炎症因子的阳性表达较对照组显著增高,Caspase-1及IL-18存脊髓损伤后3d表达达到峰值,而IL-1β于损伤后6h表达达到高峰。结论Caspase—1及其下游炎症因子可能参与了SCI后的继发性损伤,并且可能是继发性脊髓损伤的主要损伤因素之一。