三七皂苷FC通过MAPK/NF-κB途径抑制RAW264.7细胞炎症及凋亡的机制研究

目的:基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)途径探讨三七皂苷FC对RAW264.7巨噬细胞炎症及凋亡的作用机制。方法:(1)采用不同浓度的三七皂苷FC(0、1、10、20、50、100μmol/L)分别干预RAW264.7细胞和脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞,CCK8法检测细胞活力,筛选合适的药物浓度。(2)将RAW264.7细胞分为对照组、LPS组、LPS+三七皂苷FC低剂量(20μmol/L)组和LPS+三七皂苷FC高剂量(50μmol/L)组。先给予相应剂量的三七皂苷FC预处理6 h,再加入1μg/ml LPS。干预24 h后,PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot检测TNF-α、iNOS、p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光检测NF-κB核转位;Transwell实验检测细胞迁移。结果:(1)20、50μmol/L三七皂苷FC干预24 h后,LPS诱导的RAW264.7细胞活力较对照组无显著差异(P0.05),用于后续实验。(2)与LPS组相比,低、高剂量的三七皂苷FC作用后,TNF-α、IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01);TNF-α、iNOS蛋白表达明显降低(P0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达比值显著下调(P0.05,P0.01);细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01);细胞核内NF-κB p65蛋白表达减少,阳性表达细胞数占比显著降低(P0.05);细胞迁移数显著减少(P0.01)。结论:三七皂苷FC能够显著改善LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,抑制巨噬细胞凋亡和迁移,其作用机制可能与下调MAPK/NF-κB通路磷酸化水平及抑制NF-κB核转位有关。     

苦参素对脂多糖诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨苦参素(OMT)对脂多糖(LPS)诱导的海马神经元凋亡的影响及其可能机制。 方法 根据海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放率选择OMT的浓度进行实验分组。分为7组:正常对照组;脂多糖组;阿司匹林+脂多糖组;苦参素组;苦参素低剂量+脂多糖组;苦参素中剂量+脂多糖组;苦参素高剂量+脂多糖组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫荧光观察NF-κB/P65核易位情况;酶联免疫吸附(ELISA)技术测定海马神经元培养上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。 结果 LPS组海马神经元凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01),OMT预处理可以显著减少LPS刺激引起的海马神经元凋亡率(P<0.05)。LPS可以促进海马神经元NF-κB/P65由胞浆转位到胞核,提高海马神经元培养上清中TNF-α和IL-1β水平;而OMT预处理能显著减少LPS对海马神经元NF-κB/P65核易位作用及降低TNF-α和IL-1β的水平(P<0.05)。 结论 LPS诱导海马神经元NF-κB/P65核易位,导致炎症因子TNF-α和IL-1β的含量增加;OMT预处理可以抑制海马神经元NF-κB/P65核易位,减少TNF-α和IL-1β的分泌,从而抑制海马神经元的凋亡。      

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

抑肽酶抑制凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞IL-8的表达

目的 研究抑肽酶对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)IL-8表达和核因子κB(NF-κB)活性的影响.方法 将培养的HUVECs分为空白对照组、凝血酶组以及半量和全量抑肽酶组,抑肽酶组细胞采用800 KIU/ml(半量)和1 600 KIU/ml(全量)抑肽酶预处理1 h,后续处理与凝血酶组相同,均以凝血酶(4 U/ml)诱导刺激作用. ELISA法测定细胞培养上清液中IL-8的含量;荧光实时定量PCR检测IL-8 mRNA的表达,扩增产物进行熔解曲线图和琼脂糖电泳分析;采用激光共聚焦显微镜观察NF-κB p65在细胞胞质和胞核的分布情况.结果 凝血酶明显刺激HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,细胞中游离的NF-κB增加并发生核转位.半量和全量抑肽酶均能减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,且对细胞内游离NF-κB的产生和核转位具有明显抑制作用,半量和全量抑肽酶组对NF-κB表达的抑制作用差异无显著性意义(P>0.05).结论 抑肽酶均能够减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的表达,该作用与其抑制细胞内活化的NF-κB核转位有关.     

没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的 BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制

目的:建立BV2细胞缺氧损伤模型,研究没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制。方法:取BV2小胶质细胞分为空白组、模型组、低剂量、中剂量及高剂量组,通过三气培养箱建立BV2小胶质细胞缺氧损伤模型,低剂量、中剂量及高剂量组分别给予1.7 g/mL、3.4 g/mL、8.5 g/mL没食子酸进行干预。采用CCK-8法检测没食子酸对缺氧的BV2细胞的保护作用,使用试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,ELISA检测上清中炎症因子表达水平(TNF-α、IL-1β、IL-6),Western blot检测BV2细胞内p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和pNF-κB p65/NF-κB p65蛋白的表达水平以及NF-κB p65的核位移。结果:与空白对照组相比,缺氧可造成BV2细胞培养基上清液LDH的活力增加和炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的释放,细胞中SOD活力降低,MDA和ROS的水平升高,NF-κB通路(p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和p-NF-κB p6...     

高糖环境对肝星状细胞TLR4表达及脂多糖诱导的炎症因子表达的影响

目的研究高糖环境对肝星状细胞Toll样受体4(TLR4)表达及脂多糖（LPS）诱导的炎症因子表达的影响。方法体外培养
大鼠肝星状细胞株HSC-T6,采用高糖刺激,Western blot及RT-PCR检测细胞TLR4蛋白及mRNA表达;低糖或高糖培养基预处
理肝星状细胞24 h 后采用LPS（100 ng/ml）刺激,2 h 后Western blot 检测NF-κB核转位,24 h 后RT-PCR 检测MCP-1 和IL-6
mRNA表达,ELISA检测细胞上清两种炎症因子的浓度。结果高糖环境可上调肝星状细胞TLR4 蛋白及mRNA表达（均为P<
0.01）,且呈明显的时效-量效关系。高糖可促进肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）,并促进MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<
0.01）。高糖预处理可增强LPS诱导的肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）、MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<0.01）。结论高
糖可上调肝星状细胞TLR4的表达,并可促进脂多糖激活NF-κB而增加炎症因子表达及分泌。
     

利拉鲁肽对人脐静脉内皮细胞中核转录因子κB和单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 观察胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽(LRL)对高糖及脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核转录因子-κB(NF-κB)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 体外培养HUVECs,细胞传至第3代,随机分为7组:正常对照组(C组),高糖组(HG组),LPS组,高糖+LPS组(HGS组),高糖+LRL组(HGL组),LPS+LRL组(LPSL组)和高糖+LPS+LRL组(HGSL组).CCK-8法检测LRL干预前后HUVECs的增殖情况,RT-PCR和ELISA分别检测NF-κB、MCP-1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 与C组比较,HG组、HGS组、LPS组HUVECs的生长受到明显的抑制(P＜0.05),LRL干预后各组细胞的生长抑制情况得到减轻(P＜0.05).HG组、LPS组、HGS组HUVECs中NF-κB、MCP-1的mRNA和蛋白水平较C组升高(P ＜0.05);LRL干预后各组mRNA和蛋白水平降低(P＜0.05).结论 高糖和LPS抑制HUVECs增殖,促进NF-κB、MCP-1表达增加,LRL能有效降低炎症因子的表达,改善内皮功能紊乱,有助于延缓糖尿病动脉粥样硬化的进程.     

肝X受体激动剂T0901317对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞的保护及机制研究

目的：探讨肝X受体激动剂T0901317激活肝X受体对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）缺氧复氧（Anoxia/reoxygenation,A/R）损伤的影响及其可能机制。方法：传代培养HUVECs,建立A/R模型,实验分为6组：正常对照组,单纯缺氧（Anoxia,AN）组,缺氧复氧（A/R）组,A/R+不同浓度（0.1、１、１０ μmol/L）肝X受体激动剂T0901317干预组（A/R+T 0.1组、A/R+T 1组、A/R+T 10组）。流式细胞术检测各组细胞凋亡率;RT-PCR方法检测各组细胞间黏附分子-1（In－tercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）mRNA表达;凝胶电泳迁移率分析法检测各组核转录因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）的活性。结果：与正常对照组比较,AN组、A/R组的细胞凋亡率升高,ICAM-1、IL-6 mRNA的表达增高,NF-κB活性增强（P<0.05）。与A/R组比较,A/R+T 0.1,A/R+T 1组显著抑制A/R损伤引起的细胞凋亡,减少炎症因子ICAM-1、IL-6 mRNA的表达,并明显抑制A/R损伤造成的NF-κB活化（P<0.05）。与A/R+T 0.1组比较,A/R+T 1 组细胞凋亡率,ICAM-1、IL-6的表达及NF-κB活性均降低（P<0.05）。结论：适当剂量（0.1、1 μmol/L）T0901317可激活HUVECs肝X受体,对A/R引起的HUVECs损伤起保护作用,其机制可能与抑制NF-κB转录活性从而下调NF-κB通路下游炎症因子如ICAM-1,IL-6的表达有关。     

槲皮素对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及神经功能的影响

目的探究槲皮素对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及神经功能的影响。方法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组及槲皮素低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg槲皮素);另取12只未造模大鼠为假手术组。比较各组大鼠神经功能和脑组织病理情况,末端标记法检测神经细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测脑组织炎症因子和生长因子水平,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白和Toll样受体/核因子-κB(TLR4/NF-κB)通路表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、脑源性神经生长因子(BDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4及p-NF-κB/NF-κB水平升高,肝细胞生长因子(HGF)水平降低(P＜0.05)。与模型组比较,槲皮素中、高剂量组神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、IL-6、IL-1β、TNF-α、TLR4及p-NF-κB/NF-κB水平降低,BDNF、VEGF及HGF水平升高(P＜0.05)。结论槲皮素可有效保护脑梗死大鼠,主要通过抑制神经细胞凋亡、减轻神经功能损伤、阻滞TLR4/NF-κB通路降低炎症反应。     

NF-κB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以肿瘤坏死因子α（TNF-α,10 ng/mL）刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子κB（NF-κB）p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）浓度,MTT法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高（P〈0.05）。结论 NF-κB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-κB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤。     

β-细辛醚对氧糖剥夺/复糖复氧诱导星形胶质细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨石菖蒲有效成分β-细辛醚对氧糖剥夺/复糖复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及机制。方法 将星形胶质细胞分为5组：对照组、模型组、β-细辛醚(50μg/mL)组、核因子-E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385,5μmol/L)组、β-细辛醚(50μg/mL)+ML385(5μmol/L)组。CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡水平,以DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞氧化应激因子[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)]及炎症因子[核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18]的水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1) mRNA的表达水平,Western blot检测Nrf2、醌氧化还原酶-1(NQO-1)、HO-1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组、ML385组及β-细辛醚+ML385组细胞凋亡率、LDH、ROS、MDA、NF-κB p56、IL-1β和IL-18水平明显升高,细胞存活率、N...     

妇科千金胶囊的抗炎作用与其调节NF-κB信号通路的关系

目的研究妇科千金胶囊总浸膏(Fuke Qianjin capsule extract, FKE)体外抗炎活性及其抗炎作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度FKE单独使用和FKE叠加100 ng/mL脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)使用时对小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)活性的影响;采用ELISA法检测不同浓度FKE对LPS刺激后RAW 264.7细胞炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放的影响;通过RT-PCR法检测不同浓度FKE对炎症相关蛋白环氧合酶2 (COX-2)、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α转录水平的影响;采用Western blot检测不同浓度FKE对炎症相关蛋白IκBα、iNOS表达的影响;利用激光共聚焦技术检测FKE对NF-κB p65核转位的影响;采用双荧光素酶报告基因检测不同浓度FKE对核转录因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)的影响。结果 MTT测定结果表明,与对照组相比,FKE在50～800滋g/mL浓度范围内对RAW 264.7细胞活性的影响无显著差异(P0.05); ELISA检测结果显示,FKE能明显降低LPS刺激诱导的RAW 264.7细胞NO含量,在400滋g/mL浓度时,呈现出对IL-6、TNF-α的抑制作用(P0.05);Western blot检测结果表明,FKE对IκBα的表达无影响,但对iNOS活性具有一定的抑制作用;激光共聚焦检测发现,与对照组比较,FKE部分抑制p65核转位;FKE在400滋g/mL时,可明显抑制NF-κB的激活(P0.05)。结论 FKE具有明显减轻细胞炎症反应的作用,其机制可能与FKE抑制炎症通路关键信号分子NF-κB激活从而导致TNF-α、IL-6、iNOS等释放减少有关。     

槲皮黄酮对AMPK/NF-κB信号通路介导IL-6表达的影响

目的 探讨槲皮黄酮介导AMPK/NF-κB信号通路对IL-6炎症因子表达的影响.方法 RAW264.7细胞体外培养,采用LPS不同浓度及时间点诱导炎症模型,ELISA法检测IL-6含量;CCK8试验检测槲皮黄酮和LPS(1 ng/mL)对RAW264.7细胞抑制率的影响;槲皮黄酮处理细胞1h后,加入LPS(1 ng/mL)培养48 h,ELISA法检测IL-6含量;将细胞分为5组后,ELISA法检测IL-6表达水平;Western blot检测细胞核中NF-κB蛋白的表达水平.结果 LPS处理细胞后,分泌IL-6的量明显高于对照组细胞;CCK8实验表明槲皮黄酮和LPS对细胞的抑制作用较弱;槲皮黄酮处理后的细胞分泌IL-6的能力减弱;LPS+AMPK激活剂组、LPS+槲皮黄酮组、LPS+槲皮黄酮+AMPK激活剂组相对于LPS细胞组中IL-6的分泌受到抑制,并且细胞核内NF-κB的表达水平降低.结论 槲皮黄酮通过刺激AMPK含量来抑制NF-κB向细胞核的转移,导致细胞核内NF-κB表达降低而起到抑制炎症因子IL-6的分泌.     

硼替佐米调节NF-κB途径对IL-1β诱导的ATDC5细胞炎症性损伤的影响研究

目的探究硼替佐米(Bor)对白介素-1β(IL-1β)诱导的ATDC5细胞炎症性损伤及核因子κB(NF-κB)的影响。方法 0、5、15、25、35、45、55 nmol/L Bor处理ATDC5细胞48 h,CCK-8实验筛选无细胞毒性浓度,0、1.0、5.0、12.5、25.0 nmol/L Bor分别与10μg/m L IL-1β共培养ATDC5细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)检测上清液中IL-1β表达情况;蛋白免疫印迹检测细胞中NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bc L-2)、Bc L-2相关X蛋白(BAX)蛋白水平。结果 0、5、15、25 nmol/L Bor组差异无统计学意义(P0.05)。与0 nmol/L Bor组相比,35、45、55 nmol/L Bor组细胞存活率降低(P0.05)。Bor浓度≤25 nmol/L对该细胞无毒。与0 nmol/L Bor组相比,IL-1β组细胞存活率、细胞中Bc L-2蛋白水平降低(P0.05),凋亡率、上清液中IL-1β水平、细胞中NF-κB、BAX蛋白水平升高(P0.05)。随着Bor剂量的增加,细胞存活率、细胞中Bc L-2蛋白水平逐渐升高(P0.05),细胞凋亡率、上清液中IL-1β、细胞中NF-κB、BAX蛋白水平逐渐降低(P0.05),呈剂量依赖效应。结论 Bor可抑制细胞凋亡及炎症因子水平从而减弱IL-1β诱导的ATDC5细胞炎症性损伤,可能是通过抑制NF-κB途径实现的。     

shRNA干扰NLRP3对晚期糖基化终末产物诱导的心肌细胞炎症反应的影响

目的  探讨沉默NOD 样受体家族pyrin域3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性小体对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)诱导的心肌细胞损伤的调节作用及机制。 方法  H9c2心肌细胞分为4组:对照组、 AGEs组、AGEs+sh-Ctrl组、 AGEs+sh-NLRP3组,后两组细胞首先将短发夹RNA（shRNA）对照（sh-Ctrl）和shRNA干扰NLRP3（sh-NLRP3）质粒分别转染入H9c2细胞,然后后3组细胞用100 mg/L AGEs处理24 h,建立H9c2损伤模型,对照组细胞用溶剂处理24 h。Western blot检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、 Caspase-3、 Caspase-9、核转录因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) P65和磷酸化P65（p-P65）的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-18和IL-1β的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测细胞核中NF-κB P65的水平。结果  AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NLRP3、 ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均高于对照组( P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NLRP3、ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均下降( P<0.05)。与对照组相比,AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组IL-6、IL-18、IL-1β水平升高,细胞凋亡率上升(P<0.05)。AGEs+sh-NLRP3组IL-6、IL-18、IL-1β水平和细胞凋亡率低于AGEs组( P<0.05)。AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平高于对照组(P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平降低( P<0.05)。结论  沉默NLRP3可通过抑制NF-κB P65的活化减轻AGEs诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应。     

肝素寡糖对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响及分子机制研究

以脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞HUVECs炎症损伤,探讨肝素寡糖对炎症的影响及其分子机制。实验分为空白组(0.5%血清培养基)、模型组(LPS+0.5%血清培养基)及给药组(LPS+0.5%血清培养基+0.01、0.1、1 μmol/L HDO),采用活性氧实验检测细胞内活性氧簇水平,Western blot检测VCAM-1、p38、p-p38及核转录因子NF-κB等关键蛋白的表达水平。结果显示0.01、0.1和1 μmol/L的HDO可抑制100 μg/mL LPS诱导的HUVECs炎症因子VCAM-1表达水平,较弱的影响细胞中NF-κB分布,并下调信号通路中关键蛋白p38和p-p38表达。结果表明,HDO可能通过抑制炎症信号通路中关键蛋白的表达水平来抑制炎症因子的表达,从而起到抗炎作用。     

Exendin-4降低高糖联合TNF-α诱导的血管内皮细胞损伤的机制

目的观察exendin-4对于高糖联合肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12损伤的影响并探讨其可能机制。方法体外培养HUVEC-12细胞至对数生长期,根据干预措施分为正常对照组、高糖+TNF-α组(HT组)、高糖+TNF-α+exendin-4(1 nmol/L)组(HT+E1组)和高糖+TNF-α+exendin-4(10 nmol/L)组(HT+E10组),采用硝酸还原酶法检测NO含量,实时荧光定量PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测NF-κB p65核转位,Western blotting检测p38 MAPK蛋白表达。结果处理组细胞培养液中NO含量无明显差异;与对照组相比较,HT组核NF-κB p65荧光强度及p38 MAPK水平显著增加(P<0.01);加入Eexendin-4预处理组的ICAM-1 mRNA表达显著降低;HT+E10组核NF-κB p65荧光强度及p38 MAPK蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Exendin-4减少高糖联合TNF-α诱导的HUVEC-12细胞ICAM-1 mRNA表达,其机制可能与抑制NF-κB p65核转位及p38 MAPK蛋白有关。     

硫辛酸对内毒素诱导的SIRS大鼠心肌损伤的保护作用

目的 以内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导法建立全身炎症反应综合征(SIRS)大鼠心肌损伤模型,探讨不同浓度硫辛酸(lipoic acid,LA)对大鼠心肌损伤的保护作用。方法 选择健康SD大鼠75只,其中60只腹腔注射内毒素25mg/kg,构建SIRS大鼠心肌损伤模型,再分为阴性对照组、LA大剂量组、LA中剂量组、LA小剂量组,每组15只;其余15只大鼠为正常组。分别于24、48、72h后采用real-time PCR检测各组每只大鼠心肌组织中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)水平,ELISA法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)的水平。同时观察心肌组织变化。结果 LPS诱导后,LA阴性对照组大鼠心肌中NF-κB、IL-1、TNF-α在72 h时最高。与阴性对照组比较,处理24、48、72h后,LA大剂量组、中剂量组中NF-κB、IL-1、TNF-α表达水平下降(P<0.05);随硫辛酸剂量加大,心肌组织炎症反应相应减轻。结论 硫辛酸对SIRS大鼠心肌损伤有一定保护作用,其机制可能与抑制NF-κB激活以及下调心肌组织中IL-1、TNF-α的表达有关。     

沉默lncRNA NEAT1通过抑制NF-κB通路减轻LPS 诱导的支气管上皮细胞炎症反应

目的探究沉默长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮(HBE)细胞(16HBE)炎症反应的影响及机制。 方法16HBE细胞分为Control组、LPS组、LPS+si-NC组和LPS+si-NEAT1组。实时荧光定量PCR检测各组lncRNA NEAT1、白细胞介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blotting检测各组炎症因子水平及增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、核因子κB抑制蛋白(IκB)α、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平。 结果沉默lncRNA NEAT1后,IL-1β、IL-6、TNF-α及其mRNA表达水平、细胞凋亡率及p53、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白水平均明显降低,细胞增殖活力及PCNA蛋白水平均明显升高(P＜0.05),细胞中p-NF-κB p65相对荧光强度(细胞核/细胞质)降低(P＜0.05)。 结论沉默lncRNA NEAT1表达抑制16HBE细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB通路的激活有关。