COL3A1对胃癌细胞增殖及侵袭影响的实验研究

目的 研究COL3 A1在胃癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中的作用.方法 以靶向COL3 A1的干扰慢病毒(3个靶点)及阴性对照慢病毒转染胃癌细胞株MGC803,嘌呤霉素筛选稳转细胞株.qRT-PCR验证转染后MGC803细胞中COL3A1的mRNA表达,筛选出2个转染效率最高的细胞株,再以Western blot法进一步...     

结直肠腺癌中COL9A1蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨微环境中Ⅸ型胶原α1(collagen type IX alpha 1 chain,COL9A1)在结直肠腺癌中的表达及其与肿瘤进展的相关性和临床意义。方法：收集2012年1月至2021年1月手术切除的结直肠癌标本408例,采用免疫组织化学检测结直肠腺癌肿瘤组织及癌旁正常组织中COL9A1表达,同时检测肿瘤组织中肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)和错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白MLH1、MSH6和PMS2的表达,统计分析COL9A1的表达与各临床病理特征参数的关系,以及与P53突变和MMR状态的相关性,并分析COL9A1阳性表达患者的预后情况。结果：COL9A1在结直肠腺癌肿瘤组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001);COL9A1的表达与肿瘤浸润深度、临床分期和肠系膜淋巴结转移有关(χ²=16.943、89.031和84.814;均P<0.001),而与P53突变和MMR状态无关(χ²=0.677、1.260,均P>0.05);Log-rank检验显示COL9A...     

Hec1在胃癌组织中的表达及其在胃癌进展中的临床意义

目的:Hec1(癌高表达蛋白),作为着丝粒蛋白的重要组分及纺锤体检测点调节器,在肿瘤的发生和进展中发挥着重要的作用.因此,本文旨在研究Hec1在胃癌组织中的表达及其在胃癌进展中的临床意义.方法:采用Sybr Green荧光染料法的实时定量逆转录PCR方法检测30例胃癌标本及17例癌旁正常组织中Hec1 mRNA表达情况,其中TBP作为内参照.通过2-△CT法计算经过内源性管家基因标准化处理后的目的基因的表达,以此来比较各比较组之间Hec1 mRNA的表达差异.结果:(1)胃癌组织中Hec1 mRNA的表达(0.272±0.036 9)明显高于癌旁正常组织(0.041±0.023 1).(2)Ⅰ/Ⅱ期(0.286±0.184 3)、Ⅲ/Ⅳ期(0.269±0.0717)胃癌组织Hec1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织;但Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期胃癌组织相比较,Hec1 mRNA表达量没有明显差异.(3)Hec1 mRNA在无淋巴结转移组中的表达为0.325±0.2077,在有淋巴结转移组中的表达为0.238±0.0697;两者间无明显差异.结论:Hec1 mRNA在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,但与TNM分期及淋巴结转移情况无明显的相关性.     

抑癌基因LKB1及其产物在胃癌中的表达

目的:研究LKB1、AMPK在人胃癌组织中的表达情况及其在胃癌发生中的作用机制。方法:收集胃癌组织、癌旁组织和癌旁正常组织各30例,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织中LKB1 mRNA含量;用蛋白印迹法和免疫组化法检测胃癌组织中LKB1及其下游信号AMPK的表达状态。结果:胃癌组织中的LKB1 mRNA水平显著高于癌旁正常组织,而LKB1蛋白表达量和AMPK的172位苏氨酸(Thr)的磷酸化水平显著低于癌旁正常组织。结论:在胃癌组织中,肿瘤抑制因子LKB1的表达可能存在转录和(或)翻译后的调节,而LKB1蛋白激酶活性显著降低,提示存在LKB1/AMPK信号通路下调。     

成人骨关节炎软组织中COL2A1和NFAT1mRNA及蛋白表达的差异意义

目的:探讨骨性关节炎软骨组织中COL2A1和NFAT1基因蛋白的表达水平及临床意义.方法:收集30例因髋关节骨性关节炎行全髋或半髋置换的患者的软骨组织样本,并选取30例股骨颈骨折患者的软组织样本作对照.RT-PCR法检测COL2A1和NFAT1的mRNA水平,Western-blot法检COL2A1和NFAT1的mRNA和蛋白水平均高于股骨颈骨折患者,并有统计学差异(P＜0.05),结论:髋关节骨性关节炎软骨组织中COL2A1和NFAT1的基因及蛋白表达水平上调,提示两者在骨性关节炎软骨组织退变中起重要作用.     

胃癌组织中Ezrin表达及其意义

目的探讨埃兹蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法分别选取胃癌组织标本40例、不典型增生胃黏膜组织标本20例及正常胃黏膜组织标本10例,检测分析其Ezrin mRNA及蛋白的表达及意义,检测方法采用原位杂交及免疫组化法。结果 EzrinmRNA和蛋白阳性表达率,胃癌组织<不典型增生胃黏膜<正常胃黏膜,且三者差异有统计学意义(P<0.01);在不同浸润深度、肿瘤大小及有无淋巴结转移组内Ezrin mRNA和蛋白阳性表达率有明显的差异(P<0.05),但在年龄、性别和脉管侵犯组内没有明显的差异(P>0.05);Ezrin mRNA正比于蛋白表达率(rs=0.99,P<0.01)。结论胃癌产生、发展及转移在很大程度上会导致Ezrin表达下降。     

ATP/GTP结合蛋白1基因在胃癌及食管癌组织中高表达

目的:应用荧光mRNA差异显示技术(DD-PCR),筛选胃癌及食管癌相关基因的异常表达。方法:收集临床胃癌组织样本,通过荧光差异显示技术(DD-PCR)获得胃癌样品中差异的片段,对这些片段进行克隆和测序。通过在GenBank中同源性检索,查找与差异片段相对应的同源基因。利用半定量PCR及定量PCR方法检验该基因在胃癌及食管癌组织中与其对应正常组织之间表达的差异。结果:通过DD-PCR获得的一个差异表达片段的序列对应于ATP/GTP结合蛋白1基因(A/GT-PBP1)。半定量PCR及荧光定量PCR技术检测结果表明,A/GTPBP1基因在胃癌及食管癌组织中的表达量高于其对应的正常组织(胃癌,P<0.01;食管癌,P<0.01)。该基因包含25个外显子,读码框长3561bp,编码1186个氨基酸,蛋白质相似性分析表明该蛋白为G蛋白家族成员。结论:A/GTPBP1在胃癌组织中异常表达,可能在胃癌发生过程中起调节作用。     

胃癌和胃癌前病变中NHE1蛋白的表达及意义

探讨NHE1蛋白在胃癌组织和胃癌前病变中的表达及临床意义。选取我院收治的65例各类胃病患者的病变组织标本,通过免疫组化法进行胃癌病变组织及癌旁组织中NHE1蛋白表达水平的检测,分析胃癌病变组织中NHE1蛋白表达与临床病理相关因素之间的相关性。65例标本中,10例正常胃黏膜无表达;5例异型增生中表达1例,阳性率为20.00%;13例肠上皮化生中表达3例,阳性率23.08%;12例慢性萎缩性胃炎中表达2例,阳性率16.67%;25例胃癌中表达20例,阳性率80.00%。胃癌组织中NHE1蛋白表达阳性率显著高于正常胃黏膜及各型胃癌前病变组织中NHE1蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P0.01);NHE1蛋白表达与癌变组织浸润程度、有无淋巴结转移密切相关(P0.05),与年龄、肿瘤分化程度无关(P0.05)。NHE1在在胃癌组织中高表达,且可能与胃癌的浸润程度和转移密切相关;NHE1可能是肿瘤治疗的一个有效的靶点。     

激光捕获显微切割结合定量PCR检测NES1 mRNA在胃癌中的表达及其甲基化状态

目的:探讨正常上皮细胞特异性-1基因(NES1)在正常胃组织及胃癌组织中的表达和受甲基化调控的影响。方法:利用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术分离胃癌患者活检组织中的癌细胞和正常上皮细胞,采用荧光定量PCR检测其中NES1 mRNA的表达,甲基化特异性PCR观察NES1基因外显子3 CpG岛甲基化状态。结果:荧光定量PCR结果显示,NES1 mRNA在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃上皮细胞(P＜0．05)。甲基化特异性PCR检测胃癌组织癌细胞中NES1外显子3 CpG岛甲基化状态发现,大部分肿瘤患者NES1外显子3 CpG岛均存在不同程度甲基化,其中完全甲基化7例(33．3%),不完全甲基化12例(57．14%);而正常细胞中存在不完全甲基化仅为1例(5%),其余19例均不存在甲基化(95%)。结论:激光显微切割结合荧光定量PCR技术可较精确地检测NES1在胃癌组织细胞和正常组织细胞中的表达。NES1在胃癌中表达降低,其表达降低与NES1基因外显子3甲基化有关。     

SEMA3B在胃癌中的表达和临床意义

摘要：目的探讨SEMA3B在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用Western Blot及RT—PCR方法检测60例胃癌患者癌组织和正常胃粘膜组织的SEMA3B蛋白及mRNA表达量变化。结果胃癌组织中SEMA3BmR—NA表达量明显高于胃正常黏膜（0．18±0．04vs0．36±0．08，P=0．009〈0．05）。结论SEMA3B在抑制胃癌的发生发展过程中具有重要作用。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1表达水平与胃癌生物学行为的关系

目的探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）在胃癌组织、癌旁组织、胃良性病变组织中的表达水平，及其与胃癌转移等生物学行为的关系。方法用实时荧光定量逆转录PCR（FQ-Rt-PCR）方法，对66例胃癌患者的癌组织、癌旁组织及11例胃良性病变患者的组织标本中Tiam1 mRNA进行定量检测。结果66例胃癌患者的癌组织、癌旁组织中Tiam1 mRNA表达阳性率分别为92．4％、19．7％，11例胃良性病变患者的组织标本中有1例患者有Tiam1 mRNA表达，3类组织标本的差异有统计学意义（χ^2=78．96，P〈0．01）；胃癌组织中Tiam1 mRNA表达量高于癌旁组织，且与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤原发部位无关（P〉0．05），但随着淋巴结转移的发生、浸润深度加深、分化程度降低、TNM分期增高，而呈现增高趋势（P〈0．05）。结论FQ-Rt-PCR检测Tiam1表达具有较高的敏感性和特异性，Tiam1与胃癌生物学行为密切相关，有可能成为胃癌转移的基因治疗新靶点。     

p-STAT3、Survivin和Mcl-1蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的检测胃癌组织中p-STAT3蛋白及其下游靶基因产物Survivin、Mcl-1蛋白的表达,探讨STAT3信号通路激活在胃癌发病机制中的作用及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测53例胃癌及44例正常胃黏膜组织中p-STAT3、Survivin和Mcl-1蛋白的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果 p-STAT3、Survivin和Mcl-1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著高于其在正常胃黏膜组织中的阳性表达率(P<0.01)。p-STAT3、Survivin蛋白的表达与胃癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均相关(P<0.05),Mcl-1蛋白的表达与胃癌组织的浸润深度、淋巴结转移及临床分期均相关(P<0.05),而与胃癌组织的分化程度无明显相关性(P>0.05)。胃癌组织中的p-STAT3与Survivin、Mcl-1蛋白表达均呈正相关(P<0.01)。结论 STAT3信号通路激活可能在胃癌的发生、发展过程中起重要作用,检测胃癌组织中p-STAT3、Survivin和Mcl-1蛋白的表达有助于判断胃癌的恶性程度及病情进展。     

胃癌组织和远癌组织β-catenin的表达及临床意义

目的 检测胃癌组织与远癌组织中的β-catenin的表达水平并探讨其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR、Westbloting的方法,对收集到的32例胃癌切除标本中胃癌组织与距癌肿边缘5 cm的远癌组织中β-catenin表达情况进行检测分析其与胃癌临床病理特征间的关系。结果 胃癌组织中β-catenin mRNA及蛋白都呈低表达,而远癌组织内的β-catenin mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）;胃癌组织中β-catenin蛋白及mRNA表达与癌肿部位及分化程度、癌肿分期、淋巴结转移、性别、年龄因素无明显相关性（P>0.05）。结论 β-catenin蛋白及mRNA表达在胃癌组织和远癌组织中的表达有差异,与胃癌病理特征无明显相关性,在胃癌发生发展过程中β-catenin的是否参与及其作用机制需进一步探究。     

胃癌组织中HMGB1和VEGF-D的表达及其相关性研究

目的探讨胃癌组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、血管内皮生长因子D(VEGF-D)的表达及其相关性,为临床诊断和治疗提供科学依据。方法选择2015年1月至2015年12月手术切除的87例胃癌组织及其配对的癌旁组织标本为研究对象,另选取20例正常胃组织标本为对照组。采用免疫组织化学染色检测HMGB1和VEGF-D的表达水平,并分析两者的相关性。用HMGB1重组的质粒转染人胃癌细胞BGC-823,用逆转录PCR的方法分析VEGF-D mRNA的表达水平变化。结果正常胃黏膜中未发现染色阳性细胞,87例胃癌组织共检出VEGF-D阳性标本48例,阳性率为55.17%,检出HMGB1阳性标本63例,阳性率72.41%;87例癌旁组织共检出VEGF-D阳性标本22例,阳性率为25.29%,检出HMGB1阳性标本15例,阳性率为17.24%;胃癌组织中VEGF-D和HMGB1阳性率均显著高于癌旁组织(P0.05)和正常胃组织(均P0.05),HMGB1阳性与VEGF-D阳性呈正相关(r=0.482,P=0.001);转染后BGC-823细胞中HMGB1和VEGF-D mRNA表达水平显著增加,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论胃癌组织中HMGB1和VEGF-D蛋白表达水平均显著增加,并且两者呈正相关,体外研究证实HMGB1具有促进VEGF-D基因转录的作用,两者在胃癌发展中的机制还有待进一步研究确认。     

PCR-SSCP银染法在检测错配修复基因突变中的应用

目的建立稳定、有效地检测错配修复（Mismatch Repair，MMR）基因突变的方法。方法对30例肠癌及癌旁正常组织标本分别提取DNA，设计错配修复基因hMSH1引物，应用聚合酶链式反应进行PCR扩增，10％聚丙稀酰胺凝胶电泳PCR产物，银染等技术检测分析错配修复基因hMSHI突变；hMSH1抗体为一抗，免疫组化法检测30例肠癌及例癌旁正常组织石蜡切片中hMSH1蛋白的表达。结果30例肠癌组织中发生错配修复基因hMSH1突变4例（发生率13．3％），10例癌旁正常组织中无一例发生错配修复基因hMSH1突变；免疫组化检测到30例肠癌组织中有6例hMSH1蛋白表达阴性，其中hMSH1基因突变的组织hMSH1蛋白均未表达，正常组织中hMSH1蛋白表达正常。结论PCR-SSCP银染法是检测错配修复基因突变的简捷、稳定、有效的方法之一。可成为早期诊断肿瘤发生的分子手段。在肿瘤的早期治疗中具有重要作用。     

胃癌组织中β-catenin mRNA表达水平及临床意义

目的:检测胃癌组织标本β-catenin mRNA表达水平,并探讨其临床意义.方法:以β-actin为内参照,采用实时荧光定量PCR技术检测45例胃癌患者术后胃癌组织标本、肿瘤边缘5 cm外的正常组织β-catenin基因mRNA的表达水平,并进行比较.结果:胃癌患者术后胃癌组织标本β-catenin mRNA表达水平较正常组织标本高(P<0.01);肠型胃癌β-catenin mRNA表达水平高于弥漫型胃癌(P<0.05);TNM分期早期胃癌β-catenin mRNA表达水平低于晚期(P<0.05);淋巴结有转移者高于无转移者(P<0.01),且与浸润深度相关(P<0.01);胃癌β-catenin mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关.结论:β-catenin mRNA在胃癌组织中呈高表达,是评价疾病发生、发展的良好指标.     

C-myc和LIN28B蛋白及其mRNA在胃癌组织和相应癌旁正常组织中的表达及其与胃癌发生发展的相关性

目的分析反式激活活性蛋白(C-myc)与LIN28B mRNA、蛋白在胃癌组织和相应癌旁正常组织中的表达及其与胃癌发生发展的相关性。方法通过Western blot法对60例胃癌组织和相应癌旁正常组织中C-myc、LIN28B蛋白表达水平进行检测,实时荧光定量PCR法测定C-myc、LIN28B mRNA表达水平,统计分析C-myc、LIN28B蛋白表达与胃癌临床病理参数的关系。结果 C-myc、LIN28B蛋白在胃癌组织中的表达水平较癌旁正常组织均明显升高(P0. 01); C-myc、LIN28B mRNA在胃癌组织中的表达水平较癌旁正常组织均明显升高(P 0. 01)。C-myc蛋白表达与胃癌TNM分期、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P 0. 05); LIN28B蛋白表达与胃癌TNM分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P 0. 05)。结论 C-myc、LIN28B蛋白及其mRNA均高表达于胃癌组织,二者与胃癌TNM分期、浸润深度及淋巴结转移均密切相关,可能共同参与胃癌的病理过程。     

Bmi-1和hTERT在胃癌组织中表达及其相关性

目的探讨细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点-1（Bmi-1）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白在胃癌组织表达及其与临床病理特征的关系,探讨二者在胃癌发生发展中的作用及其相关性。方法采用免疫组化PV-9000法分别检测70例胃癌、20例慢性萎缩性胃炎及10例癌旁正常胃黏膜组织标本中Bmi-1和hTERT蛋白的表达。结果胃癌组织Bmi-1和hTERT蛋白的阳性表达率分别为71.4%、78.6%,明显高于正常组织（0、0）及慢性萎缩性胃炎组织（20.0%、15.0%）,差异均有显著性（χ2=17.14~27.44,P〈0.01）。胃癌组织中Bmi-1和hTERT蛋白阳性表达均与癌组织的浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移有关（χ2=6.375~26.480,P〈0.05）,而与病人的性别、Borrmann分型及分化程度等无关（χ2=0.047~1.052,P〉0.05）。胃癌组织中Bmi-1和hTERT蛋白的表达呈显著正相关（r=0.826,P〈0.01）。结论 Bmi-1、hTERT蛋白表达与胃癌的发生发展、浸润转移密切相关,可作为早期诊断胃癌及判断转移、预后的重要参考指标。     

胃癌组织中β-catenin mRNA表达水平及临床意义

目的:检测胃癌组织标本β-catenin mRNA表达水平,并探讨其临床意义。方法:以β-actin为内参照,采用实时荧光定量PCR技术检测45例胃癌患者术后胃癌组织标本、肿瘤边缘5 cm外的正常组织β-catenin基因mRNA的表达水平,并进行比较。结果:胃癌患者术后胃癌组织标本β-catenin mRNA表达水平较正常组织标本高(P<0.01);肠型胃癌β-catenin mRNA表达水平高于弥漫型胃癌(P<0.05);TNM分期早期胃癌β-catenin mRNA表达水平低于晚期(P<0.05);淋巴结有转移者高于无转移者(P<0.01),且与浸润深度相关(P<0.01);胃癌β-catenin mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关。结论:β-catenin mRNA在胃癌组织中呈高表达,是评价疾病发生、发展的良好指标。     

胃癌组织中环氧化酶-2 mRNA及蛋白的表达

[目的]检测环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达并探讨其意义.[方法]对60例胃腺癌及对应的癌旁组织中利用RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达,免疫组织化学SP法检测COX-2蛋白的表达.[结果]CO)X-2 mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达阳性率分别为51.7%及48.3%,两者相比差异无显著,且相关分析显示,两检测法的结果呈正相关.而癌旁组织中均不表达COX-2 mRNA及其蛋白,与胃癌组织中相比差异有显著性(P＜0.05).[结论]COX-2的表达与胃癌的发生有关,COX-2 mRNA或其蛋白的检测两者均可反映出胃癌组织中COX-2的表达情况.