等温核酸扩增技术进展

等温核酸扩增技术已广泛应用于生物分析的体外核酸扩增,本文综合国内外报道,对等温核酸扩增技术的进展进行简要综述,包括依赖核酸序列型扩增(NASBA)、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、单引物等温扩增(SPIA)、交叉引物等温扩增(CPA)、新型等温多自配引发扩增(IMSA)的原理、重要特性、应用及未来的展望。     

新型冠状病毒变异特点及其变异检测技术

由新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019, COVID-19)暴发已构成重大的全球健康危机,SARS-CoV-2已出现多种变异型,其传播能力和毒力存在较大差异。SARS-CoV-2变异已成为目前新型冠状病毒疫情防控的重大难题之一。SARS-CoV-2的变异特点分析及变异检测对遏制新型冠状病毒的传播,采取全面有效的疾病控制措施及使用合理的治疗方式等具有重大意义。本文就SARS-CoV-2主要变异型的特点及其变异检测技术进行分析和综述。     

埃博拉病毒核酸快速检测技术应用及展望

埃博拉病毒(EBOV)是引起人类及哺乳动物高致死性出血热的病原体,2013~2014年已引起了严重的西非埃博拉出血热。快速检测确证病原对于防止疾病的进一步扩散至关重要。目前,实时荧光定量PCR技术及环介导等温扩增技术(LAMP)已经应用于EBOV的核酸快速检测,依赖核酸序列的扩增技术(NASBA)及重组聚合酶扩增技术(RPA)有望成为EBOV新型核酸快速现场检测技术。本文对几种核酸快速检测方法进行综述。     

环介导等温扩增技术在疾控机构微生物检测中的应用

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术,具有特异性强、灵敏度高、快速简便等优点.本文综述了近年来LAMP在微生物检测领域的具体应用实例和研究进展,并对其应用前景做了展望.     

新型冠状病毒检测技术的研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)具有高传染性和高隐蔽性,并且不断发生变异,产生不同类型病毒变异株,其主要传播途径是呼吸道飞沫传播、接触传播、气溶胶传播。快速准确的病毒检测技术对疫情防控工作具有重要意义。本文就SARS-CoV-2的病原学结构特点和当前实验室主要检测技术(病毒分离鉴定、高通量测序、荧光定量PCR、反转录环介导恒温扩增、基因芯片、抗原抗体检测和基于CRISPR/Cas系统的核酸检测)作一综述。     

新型冠状病毒表面蛋白与其受体蛋白棕榈酰化研究进展

由新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)已在全球范围内流行2年多。SARS-CoV-2是单股正链包膜RNA病毒,可感染多种哺乳动物。蛋白棕榈酰化是翻译后修饰的一种途径,与蛋白质的定位和转运等有关。SARS-CoV-2的刺突蛋白S、包膜蛋白E及其受体血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)均可被棕榈酰化。本文主要综述有关新型冠状病毒蛋白和受体ACE2棕榈酰化的研究进展,包括S蛋白棕榈酰化的位点、参与这一过程的酶以及其功能,通过对这些内容的整合综述,期望为新型冠状病毒致病机制和治疗策略提供新思路。     

新型冠状病毒的研究进展

由于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)传播快,病情潜伏期长,且具有较强的传染性,引发了全球新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发。SARS-CoV-2与重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)的基因序列、传播途径、临床特征等方面具有高度相似性,但其传染性、变异性和适应性更强。SARS-CoV-2主要传播途径为呼吸道传播、气溶胶和接触传播。SARS-CoV-2通过表面S蛋白入侵表面有ACE2受体的细胞,通常最先攻击肺,亦可波及心脏、血管、肾脏、肠道和大脑等多个器官。而识别和消除人畜共患病源是阻止新的病毒从动物宿主传染到人类的重要任务,预防和控制SARS-CoV-2感染最有效的措施仍然是早发现、早隔离新的感染源、疑似感染者及无症状感染者,并对感染者进行早期诊断和支持治疗。同时建议建立全球性健康保护体系,统筹安排各种防疫资源,以积极应对现阶段的全球疫情。     

新型冠状病毒特异性抗体检测性能评价及临床价值

目的:评价新型冠状病毒(SARS-CoV-2)免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)抗体检测的诊断性能及在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疑似患者中的临床诊断价值.方法:本研究采用回顾性研究方法,收集2020年1月3日至2月28日在武汉市肺科医院住院患者301例,其中197例为SARS-CoV-2核酸检测阳...     

环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养在涂阴肺结核中的诊断价值

目的探讨环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification metliod,LAMP,新型的核酸扩增技术)联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960,结核分枝杆菌检测仪)在痰涂片阴性肺结核中的诊断价值。方法收集疑似肺结核患者90例,随机分成A、B、C组,A组通过指南推荐涂阴肺结核诊断,B组通过LAMP确诊,C组通过LAMP联合BACTEC MGIT 960确诊,并给予抗结核治疗2个月后随访所有入组患者胸部CT变化情况,分别比较涂阴肺结核诊断方法、LAMP及LAMP联合BACTEC MGIT 960的诊断可靠性。结果涂阴肺结核指南推荐诊断阳性率40.0%,LAMP阳性率53.3%、联合检测阳性率60.0%,差异无统计学意义。联合检测敏感性88.9%,特异性91.7%均明显升高。结论在实际临床中,环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960)在痰涂片阴性肺结核诊断中特异性及敏感性高。     

新型冠状病毒SARS-CoV-2特异性可检测靶点的确认与重叠PCR合成

高敏感的检测试剂盒的基因检测,是防控新冠疫情的关键手段之一。鉴于目前国内外新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测试剂盒在敏感性方面存在的不足,我们认为与其所检测靶点数量的局限性有关。本研究结合生物信息学分析和采用重叠PCR合成策略,获得了可用于新型冠状病毒检测的8个新靶点。这些靶点主要呈现为两个方面的特点:一是增加了扩增引物的SARS-CoV-2特异性;二是增强了适宜于TaqMan探针检测的SARS-CoV-2特异性。这些新的靶点有望成为未来SARS-CoV-2高灵敏度检测及试剂盒开发的重要对象。     

环介导等温扩增技术检测炭疽芽孢杆菌的研究

目的 建立环介导等温扩增技术(loop mediated isothermal amplification, LAMP)检测炭疽芽孢杆菌。方法 应用Primer Explorer V5软件设计针对炭疽杆菌的保守区引物,建立LAMP检测方法,检测其特异度和灵敏度,并与荧光定量PCR法进行比较。采用荧光定量PCR法、LAMP和细菌培养鉴定,对45份炭疽疫情标本进行检测。结果 LAMP、荧光定量PCR法和细菌培养鉴定的检测结果差异无统计学意义(χ²=3.202,P=0.229)。LAMP扩增产物通过紫外凝胶成像系统显示,炭疽芽孢杆菌强毒株和弱毒株均呈现特异性梯状条带,而其他菌株如痢疾志贺菌、肠炎沙门杆菌和金黄色葡萄球菌等菌株电泳均无条带,扩增结果为阴性。LAMP与荧光定量PCR法检测炭疽芽孢杆菌的检测限均为4.0×10²CFU/ml。结论 LAMP使用恒温水浴箱进行等温扩增,反应结束后可在可见光或紫外灯下肉眼观察结果。LAMP灵敏特异,简单快速,无需特殊仪器,可广泛用于基层实验室甚至疫情现场。     

新型冠状病毒肺炎无症状感染者的检测方法研究进展

新型冠状病毒肺炎的全球大流行给世界多个国家和地区带来了极大的危害与挑战.大多数新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)患者都有典型的临床表现,但随着人们对COVID-19的进一步研究以及SARS-CoV-2的检测技术进一步提高,发现无症状感染者的人数在不断增加.许多COVI...     

新型冠状病毒实验室检测方法及应用

随着新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus?2,SRAS?CoV?2）分离培养与基因组测序的完成,新型冠状病毒肺炎（corona virus disease,COVID?19）的确诊主要依靠RT?PCR 法检测SARS?CoV?2 核酸基因,重组酶介导等温核酸扩增技术（recombinase aided amplification,RAA）等新型常温核酸扩增技术也得到进一步应用。免疫学诊断包括胶体金和ELISA IgM 和IgG 抗体检测技术,主要用于人群的筛查和辅助诊断。基于CRISPR技术的新型诊断技术等也在进一步完善过程中。     

一种基于NASBA技术的新型快速肠道病毒检测方法的应用研究

目的: 基于核酸等温扩增技术(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)荧光分子信标探针检测技术,进行肠道病毒的快速检测与辅助诊断?方法:根据Genebank上肠道病毒5′端非编码区序列,设计特异性引物与捕获探针,应用纳米技术对商品化磁珠进行偶联,NASBA方法进行扩增,NucliSens读数仪检测,荧光定量RT-PCR方法进行验证,同时验证NASBA方法的特异性?灵敏度和重复性?结果:该方法对肠道病毒具有高度特异性,与RSV等呼吸道相关病毒均无交叉反应,反应体系具有很高的稳定性?结论:本研究应用的肠道病毒NASBA检测方法特异?灵敏?快速简便,适用于肠道病毒的日常监测和爆发疫情的应急诊断?     

环介导等温扩增技术的研究进展和微生物检测应用

环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）是一种新型的核酸扩增技术。本文概述其反应原理、技术特点、相关技术、微生物检测应用及发展前景。     

环介导等温扩增技术检测福氏志贺菌的实验研究

目的：了解并建立福氏志贺菌的快速、特异的环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法,探讨快速、简便、有效的消化道传播性病原体的临床诊断、饮水检测和环境卫生监测等检测手段。方法对福氏志贺菌进行细菌培养,然后使用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和LAMP技术设计4条特异性引物,以及使用克隆等分子生物学方法进行DNA提取,然后对PCR方法与LAMP方法进行对比分析。结果LAMP扩增具有非常高的特异性,几乎不会产生非特异性扩增;与PCR方法相比,LAMP检测限更低,仅为5个拷贝;LAMP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1h内可将靶序列扩增至109～1010倍,并且不需要模板的热变性。结论 LAMP技术具有特异敏感简单的特点,不需要特殊的仪器,在65℃时1 h即可完成反应,同时检测结果可直接通过肉眼或加入荧光染料即可判断。     

新型冠状病毒特异性抗体微流控法定量检测能力评价及应用

目的：建立并评价新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（severe acute respiratory syndrome coronavirus2,SARS-CoV-2）特异性抗体定量检测方法,为新型冠状病毒肺炎（corona virus disease-2019,COVID-19）疫情防控提供血清学研判支持。方法：采集2020年1—2月SARS-CoV-2感染者及其密切接触者的血清和咽拭子样本,分别用RT-qPCR法检测SARSCoV-2核酸,微流控法和胶体金法检测SARS-CoV-2特异性抗体,并比较分析检测结果的一致性。结果：微流控法、胶体金法检测SARS-CoV-2特异性IgG抗体的结果均与RT-qPCR方法一致。发病早中期（<14 d）与后期（≥14 d）微流控法IgG抗体阳性率差异有统计学意义。结论：微流控法是一种新型可定量的SARS-CoV-2抗体检测法,检测结果准确且耗时短。     

新冠病毒是否经消化道传播的研究进展

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease, COVID-19)疫情在全球持续蔓延,严重影响了经济发展和人民生活质量,对世界公共卫生安全造成了极大威胁。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)主要通过飞沫、接触和气溶胶进行传播,此外,流调显示公共卫生间可能是部分确诊病例的风险点,有研究者在COVID-19患者粪便中检测到病毒,但是SARS-CoV-2是否存在消化道传播的可能,目前尚无定论。基于此,本文汇总COVID-19病例的消化道排毒情况,总结SARS-CoV-2消化道感染动物模型的研究进展,探讨SARS-CoV-2通过消化道途径传播的可能性,并进行风险评估,为疫情防控提供建议。     

新型冠状病毒肺炎的研究进展与展望

2019年12月,武汉市爆发由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎。2020年2月11日,世界卫生组织将该疾病正式命名为新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019, COVID-19)。随着COVID-19在世界范围的大流行,全球科研工作者从SARS-CoV-2的各方面入手,开展了一系列研究工作。冠状病毒是一种包膜RNA病毒,广泛存在于人类和野生动物中。目前包括SARSCoV-2在内共有7个已知人冠状病毒,它们会感染神经系统、呼吸系统和消化系统。SARS-CoV-2具有高度传染性,并导致COVID-19在全球迅速流行。随着病例数量的不断增加,疫情严重威胁人民群众身体健康和生命安全。本文介绍了SARS-CoV-2的概况,总结COVID-19相关研究进展,并对未来进行展望。     

应用NASBA定量检测HCV RNA的研究进展

NASBA（nucleic acid sequence-based amplification)即核酸序列依赖性扩增法，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增的RNA新技术。反应在42℃进行，可在2h内将RNA模板扩增约10^9倍。本文综述NASBA在HCV RNA定量检测中的应用。