橄榄油乳液微粒大小及浓度对胰脂肪酶活力测定的影响

<正> 中国药典85年版胰脂肪酶活力测定以橄榄油为底物,在规定条件下,胰脂肪酶可将橄榄油水解成脂肪酸,再用标准碱液滴定生成的脂肪酸,以此测得胰脂肪酶活力。但在测定过程中常出现测定结果重现性欠佳的问题,为此我们进行了一些探讨。在实验过程中我们发现按现行标准测定,酶并未被底物完全饱和,因而橄榄油乳液中的微粒大小及浓度直接影响酶活力测定的结果,现将我们的实验情况介绍如下:     

高效液相色谱法考察蒜酶活力测定中的影响因素

目的考察底物蒜氨酸纯度对蒜酶活力测定数值的影响,比较催化温度为25,35,37℃时蒜酶活力测定数值的差异。建立可行的蒜酶活力检测方法。方法采用高效液相色谱法,以蒜氨酸的减少量计算蒜酶活力。结果进行蒜酶活力测定时,底物蒜氨酸的纯度应不小于90%,确定蒜酶催化反应温度为35℃。结论建立了以95%蒜氨酸为底物,催化温度为35℃的蒜酶活力测定条件。     

盐霉素生物合成的研究——Ⅰ.浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响

对脂肪酸生物合成有专一抑制作用的浅蓝菌素对盐霉素合成也有抑制作用,且其作用强度与加入的剂量和时间有关.当加入剂量为40μ/ml时,抑制盐霉素生物合成的程度可达60%左右;而加入浓度达100μ/ml时,抑制程度为100%,因而可以认为盐霉素的生物合成与脂肪酸相似,即经由聚乙酰途径;而浅蓝菌素阻断了聚乙酰途径中的β-酮脂酰载体蛋白合成酶;且两者间具有竞争关系.据此,可把选育耐高浅蓝菌素菌株作为选育高产菌株的方法之一.比较二株具有不同生产能力的盐霉素产生菌的脂肪酶活力发现:酶活力与盐霉素合成间有着密切的关系.高产菌株具有较高的脂肪酶活力.因而可把脂肪酶活力作为选育高产菌株的一个指标.考察发酵过程中脂肪酶活力的动态变化,似乎亦可作为控制发酵的一个参数.实验证明脂肪酶是由底物诱导产生的,其活力受到葡萄糖反馈阻遏.因此在实际生产中,中途补糖不适合.     

简介胃蛋白酶活力测定各种方法

<正> 胃蛋白酶(简称胃酶)无论在医药方面还是在工业应用方面仍占有一定的比重,为寻找简便准确的活力测定法,曾对胃蛋白酶活力测定各种方法进行了研究实验。胃蛋白酶活力测定方法很多,过去均采用凝固的鸡卵蛋白为底物测定胃蛋白酶的消化力。85年版药典(中国药典)起草时,曾对各种活力测定法进行了实验研究,有凝固卵蛋白为底物的测定法,以胃酶标准品作对照的凝固卵蛋白法,干蛋白为底物的测定法,血红蛋白为底物的福林试剂比色法,血红蛋白为底物的紫     

使用OprF作为锚定蛋白在大肠杆菌表面展示脂肪酶及在有机溶剂中筛选对映异构体的应用

开发了一种新的细胞表面展示系统，使用铜绿假单孢菌的一种主要外膜蛋白OprF作为锚定位点。荧光假单孢菌SIK W1脂肪酶基因通过C端删除融合技术与截短的oprF基因融合。在大肠杆菌表面成功展示了截短的OprF-脂肪酶融合蛋白。通过蛋白杂交分析、免疫荧光显微术和整个细胞的脂肪酶活性确定了截短的OprF-脂肪酶融合蛋白在膜上的定位。为了检测细胞表面展示脂肪酶的酶学特征，在各种条件下考查了细胞整体酶活力和稳定性。细胞表面展示脂肪酶在37℃、pH 8．0时酶活力最高。在水溶液和有机溶液中温育一周后，酶活力还可保留80％以上。将展示脂肪酶的大肠杆菌用于外消旋1-苯基乙醇在正己烷中的对映异构体选择，经36h反应成功获得了对映体超过96％的（R）-苯乙酸乙酯。结果表明OprF作锚定蛋白展示脂肪酶的大肠杆菌可用于各种水相、非水相的生物技术应用。     

关于《中国药典》95版二部胰脂肪酶活力测定方法改进的建议

在《中国药典》1995年版二部胰酶项下胰脂肪酶活力测定中,是先将底物溶液调整为PH9.0,再加入供试品溶液,立即"准确计时",并用氢氧化钠滴定液维持反应液于pH9.0,记录氢氧化钠滴定液消耗量。     

AU480生化分析仪交叉污染的原因分析及改进措施

目的通过改进生化分析仪的系统清洗程序,逐一排除导致脂肪酶检测结果假性增高的因素,最终保证脂肪酶检测结果的准确性。方法将AU480生化分析仪所有检测项目进行逐一排除确定干扰项目,并将这些干扰项目的 R1和R2试剂分别作为样本进行脂肪酶检测,进一步筛选出试剂中哪种成分对脂肪酶有干扰,再进行比色杯、搅拌棒的交叉污染排除实验,最后通过交叉污染实验对检测项目的加样顺序及仪器参数进行调整。结果载脂蛋白A-I、载脂蛋白B、总胆固醇对脂肪酶检测结果没有显著干扰,高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯对脂肪酶检测结果有显著干扰。结论全自动生化分析仪使用过程中,存在交叉污染,为了保证检测质量,应做好室内质控、仪器的维护保养,随时观察检测项目结果与临床疾病是否相符,当检测结果与临床疾病不符时主动找原因并进行复检,并与临床做好沟通。     

脂类包被的脂肪酶在水-有机两相系统中作为一种有效的水解催化剂

脂类包被的脂肪酶 (1)在有机溶剂中可溶 ,在无水有机溶剂中可充当有效的酯化催化剂。研究发现 ,1在水 -有机两相系统中也可作亲脂性酯的有效水解催化剂。 1和底物均可溶于有机相 ,与水相中水分子发生反应。在天然脂肪酶的反应系统中 ,由于酶和底物分别位于水相和有机相 ,反应只发生在两相界面。因此 ,在水解反应时 ,用 1的水解反应速率比天然脂肪酶快 40～ 10 0倍。 1催化的水解速率不受水相 p H和两相搅拌速度的影响。 1的酶活可与 PEG修饰的脂肪酶相媲美 ,本研究还对两相反应的米氏动力学进行了考察。脂类包被的脂肪酶在水-有机两相系统…     

介绍一种胰脂肪酶的简便测定方法

<正> 中华人民共和国药典(1985版)及各国药典(如U.S.P.、B.P.、J.P.等)对胰酶原料及其方剂中所含蛋白酶,淀粉酶及脂肪酶(简称“三酶”)的数量和比例都有严格的规定,并确立了相应的检测方法。本文作者曾对国内多数厂家沿用已久的原胰酶生产工艺进行技术上的探索,旨在使其产品符合中国药典1985版的质量指标。在此项工作实施过程中涉及到对大量试验样品和中间产物的三酶活力检测工作。其中尤其是胰脂肪酶的测定较为复杂。在测定过程中如发生磁力搅     

弹性酶活性测定方法的探讨

<正> 检测弹性蛋白酶(Elastase,EC3.4.4.7)活力的方法有天然不溶性弹性蛋白或染色的不溶性弹性蛋白溶解测定法及合成的专一性小分子底物测定法。底物有弹性蛋白、刚果红弹性蛋白、地衣红弹性蛋白、间苯二酚品红弹性蛋白等。根据卫生部药品标准