抗工程菌产HBcAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文用纯化的工程菌产HBcAg免疫Balb/C小鼠,将该鼠的脾淋巴细胞与鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇作用下融合,获得2株抗-HBc阳性、与工程菌茵体蛋白无交叉反应的杂交瘤细胞系.2个亚株经体外培养两月余,传代20次,液氮反复冻存、复苏3次,仍能稳定分泌抗-HBc.该细胞接种经石蜡油致敏的Balb/C小鼠腹腔,产生抗-HBc腹水.其中1株经鉴定,其抗体亚类为IgG2a.     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体的研究

用人血清IgM球蛋白重链——μ链免疫的BALB/C小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤SP2/0细胞在聚乙二醇(PEG)作用下融合,用改进的免疫荧光技术筛选出6株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其中5株分泌物确定为抗人μ链McAb,1株未定.杂交瘤细胞经4次克隆,半年多传代,接种BALB/C鼠可稳定地产生腹水抗体.     

产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV-1 SM44株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/O融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12,2A8,1G8,1D10,2C5 5株细胞系用有限稀释法做2～5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV-1和HSV-2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)～10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)～10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV,CMV,JEV和HFRSV无交叉反应。     

赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及直接竞争酶联免疫吸附法的建立

目的 建立快速且灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫吸附检测(cdELISA)方法.方法 采用OTA与卵清蛋白(OVA)偶联作为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合、克隆筛选,获得鼠抗OTA的杂交瘤细胞株;以ELISA方法测定抗体效价并鉴定抗体的IgG及亚类;用辣根过氧化物酶(HRP)标记OTA,建立cdELISA方法.结果 获得了3株稳定分泌高效价抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株(S-17-8、S-212-7和S-225-11),3株重链均为IgG1亚型,轻链为κ亚型;建立了cdELISA检测方法,检测下限为0.5ng/ml.结论 以抗OTA单克隆抗体和OTA-HRP为基础,建立了灵敏且省时的检测OTA的cdELISA方法,为进一步OTA快速筛查提供了条件.     

登革4型病毒的单克隆抗体

用SP2/0小鼠骨髓瘤细胞与用登革4型病毒免疫的鼠脾细胞,在PEG—1000的作用下进行融合,获得了8株产生抗登革4型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系。其中5株杂交瘤产生的抗体,对登革4型病毒具有荧光型特异性,1株对登革1型病毒有交叉反应;另2株对登革2型病毒有交叉反应。对上述8株杂交瘤分泌的抗体又进行了补体结合、空斑抑制中和及血凝抑制试验的鉴定,结果有2株是补体结合型特异,另4株有低度的中和活性。然后用3个荧光型特异的单克隆抗体对5个地方毒株进行试用的结果,进一步验证了它们的特异性。上述杂交瘤稳定传代7个月后,冻存于液氮中。     

产毒大肠杆菌不耐热肠毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步应用

用亲和层析纯化的产毒大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)免疫BALB/C小鼠,将小鼠脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞(1:8)在PEG(MW1000)作用下融合,采用ELISA筛选抗-LT抗体阳性孔,细胞融合率为50％,抗体阳性率为4.5％,经3～5次克隆后筛选出2株分泌抗-LT杂交瘤细胞株(2D_、2E_5),用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及腹水的效价,后者约为前者的100倍,高达90万～110万。通过平板免疫溶血试验和ELISA双抗夹心法分别对2株杂交瘤分泌的抗LT单克隆抗体(McAb)的特异性进行了试验,结果表     

抗—HIV单克隆抗体的的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条，加入纯化的HIV组织培养抗原，通过夹心ELISA法，筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞，传代稳定。培养上清经Westernblot染色鉴定含有抗-HIVgag蛋白，夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴达到1：6400，接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1：2430000。实验表明，用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好，是一种良好的试剂。     

抗人IgM（μ链）单克隆抗体的制备

本实验用可溶性抗原人 IgM 免疫 BALB/C 小鼠,按常规方法取免疫鼠脾细胞,分别与 NS-1、SP2/0细胞进行融合,ELISA 法筛选只与 IgM 反应阳性的抗体分泌杂交细胞,建立了6株杂交瘤株。经鉴定,此6株细胞分泌的抗体与 IgM 产生特异性反应,而不与其它免疫球蛋白重、轻链及 J 链交叉反应。经免疫电转印的硝酸纤维膜染色只显示分子量为72kD 的电泳带。放射免疫方法检测6个单克隆抗体,可分别识别4个不同的抗原决定簇。此组抗体识别 B 细胞胞浆内及膜表面μ链并可检测乙型病毒性肝炎患者血清中 HB_C-IgM 复合物。本组抗体间彼此加合可提高检测的灵敏性。抗 IgM(μ链)单克隆抗体对研究人 B 细胞的分化、成熟及功能提供了重要途径。     

用单克隆抗体快速鉴定登革病毒

用登革病毒参考株免疫的BALB/C鼠的脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,成功地建立了分泌抗登革1～4型病毒单克隆抗体的杂交瘤31株。经免疫荧光交叉鉴定,其中17株杂交瘤的抗体是属登革型特异的。用4个型特异的单克隆抗体对国内分离的12令登革地方毒株进行了免疫荧光的快速鉴定,获得了高度敏感高度特异的结果。证明获得的单克隆抗体可以作为免疫荧光诊断制剂,提供登革热病原的快速鉴定应用。     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

乙型肝炎患者肝内HBV抗原表达与肝细胞病变的关系

本文用ABC法和单克隆抗体检测139例乙肝患者肝组织内HBsAg和HBcAg。HBcAg阳性89例(64.0％),阳性率随乙肝病变严重程度依次递增,膜型HBsAg可能与疾病严重程度有关。HBcAg阳性68例(48.9％),阳性率以慢活肝最高而HBsAg携带者最低,浆膜型HBcAg可能反映了疾病的活动性。HBsAg和HBcAg的膜表达可能与乙肝肝细胞病变密切相关。     

8－氮鸟嘌呤诱变3D_5杂交瘤细胞的初步研究

小鼠杂交瘤３Ｄ５为一株分泌抗人红细胞非凝集性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用８－氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）诱变处理可以使之成为具有模拟骨髓瘤性质的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺失的杂交瘤细胞系，并且保留杂交瘤细胞系分泌抗体的能力，在利用自身血细胞凝集试验对各种病原体的快速诊断中应用广泛。实验表明，用不同剂量的８－ＡＧ进行诱变，在不同剂量水平上３Ｄ５杂交瘤细胞主要呈现细胞生长抑制、部分细胞衰老死亡、存活细胞分裂生长成为多细胞克隆及细胞适应８－ＡＧ诱变后恢复正常生长能力等一系列的变化过程。利用间接免疫荧光方法检测３Ｄ５分泌抗体结果表明，诱变后３Ｄ５杂交瘤细胞株仍然保持有分泌抗人红细胞非凝集性单克隆抗体的能力，此细胞系的建立不仅为研制自身血细胞凝集试验的双功能抗体奠定了基础，同时也具有一定理论意义     

抗莱氏无胆甾原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用浓缩提纯的莱氏无胆甾原体做为抗原,多途径免疫 BALB/C 小鼠,取脾细胞与 SP_2/O-Ag~(14)小鼠骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗莱氏无胆甾原体单克隆抗体杂交瘤细胞。分析了杂交瘤细胞的染色体,平均数为103条;制备了腹水抗体,经 APAAP 法(碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶桥联酶标显色技术)和 IFA 法检测,抗体效价在80～320之间;对免疫球蛋白亚类进行了鉴定,其抗体均为 IgM。上述细胞经3～4个月稳定传代后,冻存于液氮中。该单克隆抗体的制备对细胞培养中支原体污染的检出可能有重要意义。     

登革1型病毒的单克隆抗体

我们用SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞与用登革1型病毒免疫的BALB/C小鼠脾细胞在融合剂PEG-1000的诱导下进行融合,获得了15株产生抗登革1型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系。其中14株属登革病毒型特异,1株属登革病毒亚群特异,它们的荧光效价均在10,240以上。15株杂交瘤均无血凝活性,3株有补体结合活性。1D_4,1B_9的IgG亚类为IgG_1,1F_(11)为IgG_2a,轻链均为K型。1株杂交瘤(1D_4)的染色体数为87～115。用SDS-PAGE测定1D_4分子量,重链为54,000,轻链为24,000。15株杂交瘤连续传代3～6个月,冻存复苏后抗体水平未见下降。     

登革2型病毒单克隆抗体的制备与鉴定

用登革2型病毒参考株免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEG1000作用下进行融合,获得了10株分泌抗登革2型病毒单克隆抗体的杂交瘤。经间接免疫荧光鉴定,有4株杂交瘤产生的单克隆抗体对登革2型病毒是型特异的;2株对登革1型有交叉反应;1株对登革3型有交叉反应;1株对登革4型有交叉反应;另2株为黄病毒属特异的。经补体结合和血凝抑制试验鉴定,有2个单克隆抗体是黄病毒属血凝抑制特异的。这10个单克隆抗体对登革热的诊断是很有用的。     

抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤的建立与临床应用

目的 制备分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立快速诊断HBsAg的方法奠定了基础。方法 通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用ELISA测定单抗的特异性,并用此单抗对临床标本进行初步检测。结果 细胞株分泌的单抗可与HBsAg特异性结合,与乙肝病毒E抗原和核心抗原无交叉反应,经免疫扩散试验分析为IgG1型,将此单抗用辣根过氧化物标记后可与HBsAg阳性的病人血清反应。结论 筛选出了一株适合临床应用的单抗杂交瘤细胞株。     

利用DNA免疫建立分泌登革2型病毒E蛋白单抗的杂交瘤细胞系

目的:利用DNA免疫建立分泌登革2型病毒E蛋白特异单抗的杂交瘤细胞系,为研究E蛋白的结构和功能及其抗原表位提供新手段.方法:以构建的病毒全长prM-E基因的真核重组质粒DNA作为免疫原,免疫BALB/c小鼠后将其脾细胞和SP2/0瘤细胞融合,通过IFA、间接ELISA和空斑减少中和试验对杂交瘤细胞系进行筛选和鉴定.结果:获得了4株分泌登革2型病毒E蛋白单抗的杂交瘤细胞系(2B4,6B4,4C10和2D5),它们结合的抗原表位均位于E蛋白Ⅲ区,其中4C10对登革2型病毒具有中和活性.这些单抗与登革1、3和4型病毒有强的交叉反应,但与黄病毒其他成员反应较弱.结论:DNA免疫法可用于分泌登革2型病毒E蛋白特异单抗的杂交瘤细胞系的建立,该结果有利于登革病毒E蛋白特异抗原表位的研究及新的登革病毒诊断试剂的研制.     

硝酸纤维素膜酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗原

将待测血清中乙型肝炎病毒(HBV)与抗-HB_s制成复合物,抽滤浓集于硝酸纤维素膜上,经3mol/L NaCNS处理后直接用酶标记抗-HBc染色。其方法简便易行,敏感性、特异性和重复性均可满足常规工作要求。测定结果表明,血清HBcAg与HBsAg、抗-HBc、聚合人血清白蛋白受体(PHSAR)密切相关,可显著提高乙肝诊断水平。     

人源抗-HAV全分子抗体在CHO细胞中的表达

目的 :构建人源抗_HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系。方法 :将抗_HAV抗体轻链全分子 (信号肽与VL_CL)基因克隆至表达载体pCI_neo中 ;将重链信号肽、重链 (γ)VH_CH1 和Fc基因进行重组形成重链全分子基因 ,再将其克隆到真核表达载体pCdhfr1中。将轻、重链全分子表达载体共转染CHO dhfr_细胞 ,用G_4 18和甲氨蝶呤(MTX)筛选细胞克隆 ,ELISA法检测细胞培养上清中的抗_HAV活性 ,增加MTX浓度进行加压筛选。用蛋白L亲和层析柱从培养上清中纯化重组抗体。结果 :构建的真核表达载体可实现抗_HAV全分子抗体在CHO细胞中的分泌表达 ,纯化的重组抗体在还原SDS_PAGE中表现为相对分子质量约 2 5 0 0 0、5 0 0 0 0两条带 ;Western印迹表明 ,重组抗体全分子和重链分子均可和羊抗人Fc抗体发生特异性免疫反应。结论 :抗_HAV全分子抗体在CHO细胞中表达 ,为基因工程生产具有完整功能的全分子抗体奠定了基础