MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2/信号转导子和转录活化子5(JAK2/STAT5)通路特异性抑制剂———苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS-RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法;粒单集落刺激因子(GM-CSF)激活10例MDS-RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bc l-xL表达,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-3、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,FQ-PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.01),IL-2、INF-α水平差异无显著性;AG490组JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平,进而影响JAK2/STAT5通路信号转导,下调Bc l-xL表达。     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法;粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平,FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01）,IL-2、INF-α水平差异无显著性;AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较,差异有显著性（P〈0．05,P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平,进而影响JAK2／STAT5通路信号转导,下调Bcl-xL表达。     

氟伐他汀对高糖状态下肾小球系膜细胞JAK/STAT信号蛋白表达的影响

目的 观察氟伐他汀对体外培养的肾小球系膜细胞信号蛋白Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、STAT3表达的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和氟伐他汀干预.采用免疫沉淀和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测JAK2磷酸化表达;Westernblotting检测信号蛋白JAK2、STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3的表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF-β1和纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 与低糖组比较,高糖组肾小球系膜细胞p-JAK2(802±124比204±31)、p-STAT1(2 856.6±337.8比617.7±76.2)和P-STAT3(3 049.8±421.3比946.7±141.2)表达均明显增强;上清液中TGF-β1[(2.87±0.34)μg/L比(1.20±0.11)μg/L]和FN((6.34±0.61)mg/L比(3.24±0.26)mg/L]的含量均增高,TGF-β1 mRNA表达增加(P均＜0.01).与高糖组比较.高糖+氟伐他汀组p-JAK2(412±67)、p-STAT1(1 178.4±137.1)和p-STAT3(1 572.6±181.2)表达均明显下调,TGF-β1[(1.94±0.27)μg/L]和FN[(4.27±0.33)mg/L]含量减少,同时TGF-β1 mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 高糖能激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和FN的分泌可能部分是通过影响JAK/STAT信号通路的激活而实现的.     

非小细胞肺癌组织中STAT3的表达及临床意义

目的 检侧非小细胞肺癌组织及癌旁组织中信号转导子与转录活化子3(STAT3)的表达,探讨其表达与非小细胞肺癌各临床病理因素之间的关系。方法 应用SABC免疫组织化学技术检测40例非小细胞肺癌及其癌旁组织中STAT3蛋白的表达。结果 肺癌组织中STAT3蛋白表达明显高于癌旁组织,低分化肺癌组织中STAT3表达水平明显高于高分化肺癌组织,有淋巴细胞转移的肺癌组织中STAT3表达明显高于无淋巴细胞转移肺癌组织。结论 STAT3表达与非小细胞肺癌的组织分化程度及淋巴细胞转移有关,STAT3过度表达可能在肺癌的发生发展中起着重要作用。     

高三尖杉酯碱联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5相关信号通路的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱( homoharringtonine,HHT)联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5信号通路的影响及其机制,为临床应用新方案治疗慢性骨髓增殖性肿瘤( MPN)提供理论依据.以20 ng/ml的HHT,100μmol/L AG490,20 ng/ml HHT+ 100 μmol/L AG490处理HEL细胞24、48、72小时以后,用MTT法和流式细胞术检测细胞生长抑制率和凋亡率,药物处理细胞24小时后用WB法检测JAK2突变激活的信号蛋白P-JAK2,P-STAT5以及BCL-xL表达的变化.结果表明,HHT以及AG490作用HEL24小时均能抑制其增长,Annexin V-PI双染流式细胞图显示均能明显诱导HEL早期凋亡,HHT更为明显;免疫电泳分析显示,P-JAK2和P-STAT5表达下调,而JAK2和STATS总蛋白水平稳定.结论:HHT联合AG490能明显抑制HEL细胞增殖并诱导凋亡,两者具有协同作用,其作用机制是HHT作为一种广谱的蛋白酪氨酸激酶抑制剂,协同AG490抑制JAK2突变引起的信号蛋白的酪氨酸位点的磷酸化,从而下调STAT5反应性基因的转录.     

低氧状态下海马神经元细胞信号转录因子和活化子3,5的基因表达状况

目的:探讨STAT3,5基因在缺氧性海马神经元细胞损伤中的可能作用。方法:分离新生Wistar大鼠双侧海马进行体外培养,采用Tripure试剂提取海马神经元细胞的总RNA,自行设计大鼠STAT3,STAT5和阳性对照HPRT的PCR引物序列,通过半定量的逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测常氧组、低氧2,6,12h组海马神经元细胞的STAT3和STAT5基因的表达水平;采用PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物,而后用四色荧光法直接测序。结果:图像分析结果显示低氧培养2h组海马神经元细胞中STAT3,5mRNA表达水平升高,目的片段与HPRT的光密度比值分别为0.57±0.11和0.64±0.09,在低氧6h组(0.85±0.14和0.86±0.11)达最高,与正常组(0.34±0.12和0.40±0.08)比较差别均有显著性意义(t=-24.59～-7.37,P<0.01)。低氧12h组的表达量低于6h组,但高于正常组(P<0.01)。测序显示,PCR扩增的产物STAT3,STAT5与大鼠Genbank中的序列完全一致。结论:低氧增强海马神经元细胞中STAT3,5基因的表达,在低氧所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达及其信号通路的影响

目的初步探讨信号转导子和转录激活子STAT3在宫颈癌发生发展中的作用以及槲皮素对宫颈癌细胞中STAT3表达的影响。方法用RT-PCR检测不同浓度的槲皮素作用人宫颈癌HeLa细胞中STAT3 mRNA的表达,并以细胞免疫荧光技术观察凋亡细胞内STAT3和磷酸化STAT3(P-STAT3)的改变。结果槲皮素处理HeLa细胞后,当槲皮素浓度从6.25μmol/L增加到50μmol/L,相同时间HeLa细胞内STAT3 mRNA表达逐渐降低,除6.25μmol/L组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,余差异全部有统计学意义(P<0.05),且处理24h后,STAT3 mRNA表达量与给药浓度呈负相关,r1=-0.861,P=0.000;各时间段不同浓度组(6.25、12.5、25、50μmol/L)两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着时间变化,相同浓度组中STAT3 mRNA表达明显降低,在给予6.25μmol/L槲皮素后,STAT3 mRNA的表达量呈时间依赖性,r2=-0.539,P=0.000。运用免疫荧光技术观察到STAT3蛋白及磷酸化水平随槲皮素浓度及时间增加表达呈明显下降趋势。结论槲皮素能明显抑制HeLa细胞的生长;槲皮素可抑制细胞内STAT3表达,从而可能通过抑制JAK/STAT信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡。     

哮喘小鼠肺组织STAT5、STAT6表达及阿奇霉素的影响

目的观察阿奇霉素(AZM)对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子5、6(STAT5、STAT6)的影响。方法 BALB/c小鼠24只随机分为三组,A组(哮喘模型组)、B组(阿奇霉素治疗组)、C组(正常对照组)。其中A、B组小鼠于第0、13天分别给予卵清蛋白(OVA)20μg和氢氧化铝1 mg的混悬液致敏,于第21-30天每天给予雾化吸入2%OVA建立哮喘模型,B组于15-30天给予阿奇霉素100 mg/kg/d腹腔注射,C组以0.9%生理盐水代替OVA致敏和激发。所有动物于31天处死,制备肺组织石蜡切片,应用免疫组化方法检测支气管肺组织STAT5、STAT6的表达水平。结果哮喘模型组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(23.25±3.28)和(26.11±3.95)明显高于正常对照组(2.33±0.78)和(2.78±0.32)(P0.01),阿奇霉素治疗组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(10.83±1.96)和(11.32±2.03)明显低于哮喘组(P0.01)。结论 STAT5S、TAT6与哮喘发病相关,阿奇霉素可通过下调STAT5、STAT6的表达抑制气道炎症。     

Janus激酶/信号转导和转录激活因子途径与脓毒症的研究进展

脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS)是多种疾病的常见并发症 ,在临床危重患者的死亡原因中占有重要地位 ,在美国每年因此而造成 2 2 5 0 0 0人死亡。虽然医疗技术水平飞速发展 ,但过去的几十年中脓毒症发病率未见下降反而有上升的趋势。目前人们已经认识到 ,革兰阴性 (G- )菌的细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharide,L PS)或者内毒素(endotoxin)是诱发脓毒症及 MODS的主要致病因子。对于 L PS及其相应的受体、细胞内信号通路、炎性因子基因表达与调控机制的研究日益受到关注 ,也是现代危重病领域的前沿课题之一 〔1〕。现就目前对 Ja…     

热休克蛋白90抑制剂对白血病细胞分化凋亡信号通路的作用

目的探讨热休克蛋白（HSP）90抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素（17AAG）诱导白血病细胞生长抑制、分化和凋亡作用的信号传导途径。方法采用不同剂量的17AAG处理Kasumi-1细胞，Westernblot检测处理前后kit蛋白（CD117）及其下游信号分子AKT、STAT3水平；免疫共沉淀法检测处理前后HSP与kit蛋白的结合状态变化。结果17AAG降低突变kit蛋白及其活性水平，但并不影响c—kitmRNA水平；17AAG能降低组成性活化kit下游信号分子AKT及其磷酸化水平，同时磷酸化STAT3水平亦降低，但总STAT3水平没有变化；免疫共沉淀法检查结果显示经17AAG处理1h后，与kit结合的HSP90明显减少，同时结合的HSP70增加。结论在诱导白血病细胞分化凋亡过程中，17AAG能降低Kasumi-1细胞内Asn822Lys突变kit蛋白及其磷酸化水平，同时下调kit蛋白下游增殖及存活信号途径的信号分子；AKT也是HSP90的客户蛋白之一；17AAG所导致的kit蛋白与HSP90及HSP70结合状态的变化。符合分子伴侣复合物的循环模型。