三七和丹参对视网膜新生血管化小鼠血管内皮细胞生长因子的影响

目的：了解活血化瘀中药三七和丹参对视网膜新生血管形成的小鼠血管内皮细胞生长因子的影响．方法：实验于2003-05／2003-06在广州中医药大学中药学院完成。C57BL／6J幼小鼠40只，随机分为正常对照组、模型对照组、三七组、丹参组，每组10只、建立氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型，模型对照组、三七组、丹参组动物均置于密闭容器内，容器内氧气分压控制为75％；正常对照组在正常空气环境下饲养。5d后将动物取出置于正常空气环境下饲养，三七组每天腹腔注射血栓通注射液（三七总皂苷35g/L）1次，丹参组每天腹腔注射丹参注射液1次，按10mL／kg体质量给药，正常对照组及模型对照组每天腹腔注射等容积生理盐水1次。5d后所有动物自眼球取血，采用双抗体夹心法测定血清血管内皮细胞生长因子含量。结果：实验小鼠40只全部进入结果分析。血管内皮细胞生长因子含量：丹参组低于模型对照组[（15．65&;#177;2．51），（19．34&;#177;4．88）ng／L，P〈0．05]；三七组和正常对照组低于模型对照组[（12．87&;#177;3．26），（9．28&;#177;1．26）ng／L，P〈0．01]。结论：活血化瘀药物三七和丹参能减少血管增生性视网膜病变小鼠的血管内皮生长因子含量，可通过改善局部缺氧环境或影响各种新生血管生长因子而阻止视网膜新生血管形成。     

利鲁唑对体外培养人脐静脉内皮细胞及小鼠视网膜新生血管形成的影响

背景:研究已证实利鲁唑具有较强的抑制蛋白激酶C-βⅡ单体介导血管内皮细胞生长因子促内皮细胞增殖效应的作用,因此推测其可用于抑制视网膜新生血管的形成.目的:观察利鲁唑对培养的人脐静脉内皮细胞增殖及小鼠视网膜新生血管形成的抑制及其作用途径.设计、时间及地点:单一样本观察及随机对照动物实验,于2007-08/12在重庆医科大学动物实验室及基础研究实验室完成.材料:清洁级出生第3天的健康C57BL/6小鼠30只60眼,雌雄不限,以改良法建立高氧诱导血管增生性视网膜病变小鼠模型.利鲁唑原料物质为北京万全医药科技有限公司产品,批号:060630,含量≥98.5%.方法:常规传代培养人脐静脉内皮细胞,随机分为3组.高氧模犁组及利鲁唑治疗组为造模小鼠,利鲁唑治疗组小鼠腹腔注射利鲁唑10 mg/(kg·d),正常对照组小鼠腹腔注射等量等渗的生理盐水.主要观察指标:以四甲基偶氮唑盐比色法检测利鲁唑对血管内皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响.以组织切片苏木精-伊红染色观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目.以SABC法免疫组织化学染色观察视网膜组织中蛋白激酶C-βⅡ及血管内皮生长因子的表达.结果:利鲁唑在0.1～10 μ mol/L浓度范围内.可抑制培养的人脐静脉内皮细胞增殖,且呈剂量效应依赖关系.高氧模型组视网膜组织切片上见较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核,治疗组突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目明显减少(P<0.01),免疫组织化学染色检测高氧模型组小鼠视网膜蛋白激酶C-βⅡ及血管内皮生长因子表达比正常对照组明显增强,治疗组比模型组明显减弱.结论:利鲁哗腹腔注射能抑制氧致视网膜新生血管的形成,对视网膜蛋白激酶C-βⅡ及血管内皮生长因子的表达有抑制作用,利鲁唑对体外培养人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用与其抑制蚩白激酶C-βⅡ的活性进而抑制血管生长因子的表达有关.     

雷公藤内酯醇对氧诱导早产儿视网膜病变新生鼠视网膜血管形成的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对氧诱导早产儿视网膜病变新生鼠视网膜血管形成的影响。方法将28只SD新生鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和雷公藤内酯醇治疗组。高氧诱导建立新生鼠ROP模型。7组分别腹腔注射生理盐水、血管抑素、雷公藤内酯醇。观察并比较视网膜血管形态改变、血管内皮细胞核数及VEGF表达。结果视网膜铺片显示,第17d阴性对照组血管密度增高、形态异常,雷公藤内酯醇治疗组血管形态和密度较阴性对照组明显好转。第17d,雷公藤内酯醇治疗组视网膜VEGF表达和血管内皮细胞核数与阴性对照组相比均显著降低(P<0.05),且随着剂量的加大,其抑制新生血管形成作用组间增强。结论高氧可成功诱导ROP动物模型。雷公藤内酯醇在高氧诱导的早产儿视网膜病变新生SD大鼠模型中对视网膜发挥保护作用。     

三七和丹参对视网膜新生血管化小鼠血管内皮细胞生长因子的影响

目的:了解活血化瘀中药三七和丹参对视网膜新生血管形成的小鼠血管内皮细胞生长因子的影响。方法:实验于2003-05/2003-06在广州中医药大学中药学院完成。C57BL/6J幼小鼠40只,随机分为正常对照组、模型对照组、三七组、丹参组,每组10只。建立氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型,模型对照组、三七组、丹参组动物均置于密闭容器内,容器内氧气分压控制为75%;正常对照组在正常空气环境下饲养。5d后将动物取出置于正常空气环境下饲养,三七组每天腹腔注射血栓通注射液(三七总皂苷35g/L)1次,丹参组每天腹腔注射丹参注射液1次,按10mL/kg体质量给药,正常对照组及模型对照组每天腹腔注射等容积生理盐水1次。5d后所有动物自眼球取血,采用双抗体夹心法测定血清血管内皮细胞生长因子含量。结果:实验小鼠40只全部进入结果分析。血管内皮细胞生长因子含量:丹参组低于模型对照组[(15.65±2.51),(19.34±4.88)ng/L,P<0.05];三七组和正常对照组低于模型对照组[(12.87±3.26),(9.28±1.26)ng/L,P<0.01]。结论:活血化瘀药物三七和丹参能减少血管增生性视网膜病变小鼠的血管内皮生长因子含量,可通过改善局部缺氧环境或影响各种新生血管生长因子而阻止视网膜新生血管形成。主题词:视网膜新生血管化/中药疗法;三七/药理学;丹参/药物作用;     

重组人血管内皮抑制素治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究

目的：分析重组人血管内皮抑制素注射液（恩度）对大鼠子宫内膜异位症新生血管的抑制效果,探索治疗子宫内膜异位症的新手段。方法自体移植法建立子宫内膜异位症动物模型,将子宫内膜异位症大鼠随机分为对照组（腹腔注射等体积生理盐水）、恩度高剂量组（2 mg·kg-1·d-1）、恩度低剂量组（1 mg·kg-1·d-1）。用药治疗2周后,测量异位病灶体积变化,血清中血管内皮生长因子（VEGF）含量,免疫组化法检测异位内膜、正常内膜、在位内膜组织中VEGF表达。结果与对照组相比,恩度治疗组大鼠异位内膜体积缩小,血清中VEGF含量降低,内膜组织中VEGF表达下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论重组人血管内皮抑制素对正常免疫状态大鼠（Wistar大鼠）异位内膜组织新生血管的形成和病灶生长有明显抑制作用,恩度高剂量组治疗大鼠子宫内膜异位症效果更明显。     

三七皂苷对高氧诱导的早产儿视网膜病变小鼠血管新生及脂联素和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 研究三七皂苷对高氧诱导的早产儿视网膜病变(ROP)小鼠血管新生及脂联素(APN)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将45只新生C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为正常对照组、ROP组和三七皂苷组,每组15只.采用Smith法建立ROP模型.三七皂苷组小鼠每日腹腔注射三七皂苷药液4μL,正常对照组...     

不同吸氧浓度对新生鼠视网膜血管发育和血管内皮生长因子表达的影响

背景：吸氧在早产儿视网膜新生血管中起重要作用,但其具体吸氧范围以及作用机制仍不明确。目的：观察不同氧环境在新生鼠视网膜病的作用。方法：将新生鼠40只分为空气组、波动1,2,3组,各10只,分别以正常空气、浓度50%、20%变化氧气、40%、10%变化氧气、50%、10%变化氧气环境饲养。饲养14d后,视网膜铺片经ADP酶染色和视网膜切片经常规苏木精-伊红染色观察视网膜血管的增生情况。Western blot检测视网膜血管内皮生长因子的表达。结果与结论：视网膜铺片波动2,3组新生血管钟点数、突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数和血管内皮生长因子表达水平明显高于空气组和波动1组,空气组和波动组1组未见明显的视网膜新生血管。证实了反复血氧浓度波动可导致新生鼠视网膜新生血管增生性病变,吸入氧浓度差的波动与病变程度有关;低氧比高氧对发生视网膜病变可能更重要,血管内皮生长因子在视网膜新生血管形成中起着重要作用,促进视网膜新生血管形成。     

不同吸氧浓度对新生鼠视网膜血管发育和血管内皮生长因子表达的影响

背景:吸氧在早产儿视网膜新生血管中起重要作用,但其具体吸氧范围以及作用机制仍不明确。目的:观察不同氧环境在新生鼠视网膜病的作用。方法:将新生鼠40只分为空气组、波动1,2,3组,各10只,分别以正常空气、浓度50%、20%变化氧气、40%、10%变化氧气、50%、10%变化氧气环境饲养。饲养14d后,视网膜铺片经ADP酶染色和视网膜切片经常规苏木精-伊红染色观察视网膜血管的增生情况。Western blot检测视网膜血管内皮生长因子的表达。结果与结论:视网膜铺片波动2,3组新生血管钟点数、突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数和血管内皮生长因子表达水平明显高于空气组和波动1组,空气组和波动组1组未见明显的视网膜新生血管。证实了反复血氧浓度波动可导致新生鼠视网膜新生血管增生性病变,吸入氧浓度差的波动与病变程度有关;低氧比高氧对发生视网膜病变可能更重要,血管内皮生长因子在视网膜新生血管形成中起着重要作用,促进视网膜新生血管形成。     

叔丁基对苯二酚对大鼠视网膜新生血管的作用及其机制

目的探讨叔丁基对苯二酚对大鼠视网膜新生血管的作用及其机制。方法雄性Sprague Dawley大鼠30只随机分为3组(对照组、模型组与治疗组),每组10只。对照组为正常SD大鼠,给予基础饲料喂养;模型组与治疗组为氧诱导视网膜病变模型,治疗组在模型构建后7 d采取玻璃体注射叔丁基对苯二酚治疗。记录大鼠治疗前和治疗后第7天、第14天与第21天体重;观察大鼠视网膜无灌注区铺片面积和新生血管内皮细胞数量和视网膜病理情况;检测大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达量。结果模型组和治疗组造模成功后(治疗前)和治疗后第7天、第14天与第21天的体重均显著低于对照组(P 0. 05),治疗前和治疗后第7天模型组和治疗组大鼠体重比较差异无统计学意义(P 0. 05),治疗后第14天与第21天治疗组大鼠的体重显著高于模型组(P0. 05)。对照组大鼠视网膜未见无灌注区及新生血管内皮细胞出现,治疗组大鼠视网膜无灌注区铺片面积和新生血管内皮细胞数量均显著少于模型组大鼠(P 0. 05)。与模型组相比,治疗组的视网膜层次病理性变化减弱,水肿程度降低,各层的结构稀疏排列的程度降低。模型组与治疗组大鼠的Nrf2、VEGF蛋白相对表达量均显著高于对照组(P 0. 05),治疗组Nrf2、VEGF蛋白相对表达量均显著低于模型组(P 0. 05)。结论叔丁基对苯二酚治疗的可促进视网膜病变模型大鼠体重恢复,并抑制新生血管内皮细胞的生成和Nrf2、VEGF蛋白的表达,减轻视网膜损伤。     

小鼠氧诱导视网膜新生血管形成中EphA2与VEGF的表达及相关性研究

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(Eph A2)与血管内皮生长因子(VEGF)在C57BL/6小鼠氧诱导视网膜新生血管病变模型(OIR)中的表达以及相关性。方法新生C57BL/6小鼠120只,随机分为实验组和对照组,每组各60只。实验组小鼠建立OIR模型,对照组饲养于正常氧环境。各组小鼠于出生后第17天处死,将小鼠眼球行组织切片后HE染色,计数突破视网膜内界膜新生血管内皮细胞核数。放射免疫法检测小鼠视网膜组织Eph A2和免疫组织化学染色检测视网膜VEGF含量,分析二者的相关性及与视网膜新生血管的关系。结果实验组视网膜大量新生血管形成,实验组小鼠视网膜切片新生血管细胞核计数明显高于对照组(99.10±3.15/个比4.20±0.89/个),差异有统计学意义(t=28.53,P0.01)。各组视网膜中Eph A2的ELISA检测结果:实验组Eph A2含量明显高于对照组(80.82±20.70 pg/ml比14.42±6.80 pg/ml),差异有统计学意义(t=23.23,P0.01)。视网膜免疫组织化学染色显示,VEGF实验组视网膜组中表达明显升高,在对照组小鼠视网膜有微弱表达,实验组VEGF吸光度值高于对照组(5.19±0.75比1.88±0.33),差异有统计学意义(t=13.42,P0.05)。Eph A2和VEGF两者的表达显著相关(r=0.85,P0.05)。结论 Eph A2与VEGF的表达在小鼠视网膜新生血管形成中呈正相关,提示两者可能存在协同效应。     

锌对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的研究金属锌对大鼠糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,证实锌对糖尿病视网膜病变的防治作用。方法用Wistar大鼠建立糖尿病视网膜病变模型,随机分成4组:正常对照组、正常补锌组、高糖组、高糖+锌组。3M后轻摘眼球,在视网膜切片上行VEGF免疫组化。结果正常对照组、正常+锌组及高糖+锌组视网膜石蜡切片中免疫组化染色VEGF阳性表达,高糖组视网膜石蜡切片VEGF免疫组化明显阳性表达,高糖组视网膜切片VEGF免疫组化IOD值与正常组、正常+锌组及高糖+锌组相比明显增高(P0.001),正常组视网膜切片VEGF免疫组化IOD值与正常+锌组及高糖+锌组相比无显著性差异(P0.05)。结论我们认为补充金属锌能减少糖尿病大鼠视网膜病变VEGF的表达,有防治DR的作用。     

兔角膜碱烧伤模型房水中肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子表达与姜黄素的抑制

背景：稳定的角膜新生血管动物模型是研究角膜新生血管调控机制,姜黄素对碱烧伤角膜新生血管具有抑制作用和保护作用。目的：探讨姜黄素对碱烧伤角膜新生血管模型中肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子表达的影响,为防治角膜新生血管提供理论依据。方法：纳入33只新西兰大耳白兔,随机取3只设为正常组,其余30只建立兔角膜碱烧伤诱发角膜新生血管模型,右眼设为对照组给予生理盐水,左眼设为干预组给予姜黄素,裂隙灯观察角膜新生血管生长及角膜混浊情况,酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在房水中的表达。结果：正常组没有角膜新生血管生成。与对照组比较,干预组角膜新生血管受到抑制且角膜混浊较轻（P〈0.05）。房水肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在3组中均有表达,对照组和干预组明显高于正常组,但干预组低于对照组（P〈0.05）。说明姜黄素可以有效降低角膜碱烧伤后房水肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子的表达进而抑制兔角膜碱烧伤后角膜新生血管的生长。     

Neuropilin-1 mediates myeloid cell chemoattraction and influences retinal neuroimmune crosstalk

Immunological activity in the CNS is largely dependent on an innate immune response and is heightened in diseases, such as diabetic retinopathy, multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis, and Alzheimer’s disease. The molecular dynamics governing immune cell recruitment to sites of injury and disease in the CNS during sterile inflammation remain poorly defined. Here, we identified a subset of mononuclear phagocytes (MPs) that responds to local chemotactic cues that are conserved among central neurons, vessels, and immune cells. Patients suffering from late-stage proliferative diabetic retinopathy (PDR) had elevated vitreous semaphorin 3A (SEMA3A). Using a murine model, we found that SEMA3A acts as a potent attractant for neuropilin-1–positive (NRP-1–positive) MPs. These proangiogenic MPs were selectively recruited to sites of pathological neovascularization in response to locally produced SEMA3A as well as VEGF. NRP-1–positive MPs were essential for disease progression, as NRP-1–deficient MPs failed to enter the retina in a murine model of oxygen-induced retinopathy (OIR), a proxy for PDR. OIR mice with NRP-1–deficient MPs exhibited decreased vascular degeneration and diminished pathological preretinal neovascularization. Intravitreal administration of a NRP-1–derived trap effectively mimicked the therapeutic benefits observed in mice lacking NRP-1–expressing MPs. Our findings indicate that NRP-1 is an obligate receptor for MP chemotaxis, bridging neural ischemia to an innate immune response in neovascular retinal disease.     

通心络对糖尿病小鼠视网膜组织血管内皮生长因子及色素上皮衍生因子表达的影响

目的 观察通心络胶囊对自发糖尿病KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived factor,PEDF)基因及蛋白表达的影响.方法 KK/UN-Ay小鼠40只随机分为模型组、通心络低(1 g/kg)、中(2 g/kg)、高(4 g/kg)剂量4组,通心络灌胃给药12周.以C57BL/6小鼠为对照组.应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测各组小鼠视网膜组织中VEGF和PEDF的基因表达;蛋白印迹(western blot)法检测视网膜组织中VEGF和PEDF蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组VEGF mRNA、蛋白表达明显增高(P＜0.01),PEDF mRNA、蛋白则明显下降(P＜0.01);通心络治疗12周后,与模型组比较,低、中、高剂量组VEGF mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P＜0.01),而PEDFmRNA和蛋白表达水平明显增高(P＜0.01).结论 通心络胶囊可通过抑制自发2型糖尿病小鼠视网膜组织VEGF的表达及提高PEDF的表达来改善视网膜病变.     

Increased ocular levels of IGF-1 in transgenic mice lead to diabetes-like eye disease

IGF-1 has been associated with the pathogenesis of diabetic retinopathy, although its role is not fully understood. Here we show that normoglycemic/normoinsulinemic transgenic mice overexpressing IGF-1 in the retina developed most alterations seen in human diabetic eye disease. A paracrine effect of IGF-1 in the retina initiated vascular alterations that progressed from nonproliferative to proliferative retinopathy and retinal detachment. Eyes from 2-month-old transgenic mice showed loss of pericytes and thickening of basement membrane of retinal capillaries. In mice 6 months and older, venule dilatation, intraretinal microvascular abnormalities, and neovascularization of the retina and vitreous cavity were observed. Neovascularization was consistent with increased IGF-1 induction of VEGF expression in retinal glial cells. In addition, IGF-1 accumulated in aqueous humor, which may have caused rubeosis iridis and subsequently adhesions between the cornea and iris that hampered aqueous humor drainage and led to neovascular glaucoma. Furthermore, all transgenic mice developed cataracts. These findings suggest a role of IGF-1 in the development of ocular complications in long-term diabetes. Thus, these transgenic mice may be used to study the mechanisms that lead to diabetes eye disease and constitute an appropriate model in which to assay new therapies.     

缬沙坦对糖尿病大鼠视网膜组织NF-κB表达影响

目的探讨缬沙坦对糖尿病大鼠视网膜组织核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法将20只Wistar大鼠随机分为正常对照组、高糖诱导视网膜病变模型组、缬沙坦处理组和缓冲液处理组,每组5只大鼠。正常对照组和模型组不做处理,缬沙坦组给予缬沙坦40 mg/kg灌胃,缓冲液组给予相同体积缓冲液灌胃,用免疫组织化学法检测视网膜组织中NF-κB的表达水平。结果正常对照组大鼠视网膜组织NF-κB无阳性表达,模型组、缬沙坦组、缓冲液组NF-κB表达水平均明显高于正常对照组（F=262.00,q=18.06~34.59,P〈0.01）;缬沙坦组NFκ-B表达水平较模型组明显降低（q=15.29,P〈0.01）。结论缬沙坦能降低大鼠视网膜组织中NF-κB表达水平,对糖尿病大鼠视网膜病变具有保护作用。     

Inducible nitric oxide synthase mediates the change from retinal to vitreal neovascularization in ischemic retinopathy

Intravitreal neovascular diseases are a major cause of blindness worldwide. It remains unclear why neovessels in many retinal diseases spread into the physiologically nonvascularized vitreous rather than into the ischemic retinal areas, where the angiogenic factors are released. Here we show that inducible nitric oxide synthase (iNOS) is expressed in the ischemic retina. Using iNOS knockout mice and the iNOS inhibitor 1400W, we demonstrate that iNOS expression inhibits angiogenesis locally in the avascular retina, mediated at least in part by a downregulation of VEGF receptor 2 (VEGFR2) in cells adjacent to iNOS-expressing cells. At the same time, pathological intravitreal neovascularization is considerably stronger in iNOS-expressing animals. These findings demonstrate that iNOS plays a crucial role in retinal neovascular disease and show that it offers an ideal target for the control of vitreal neovascularization through improvement of the vascularization of the hypoxic retina.