益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用

目的:探讨益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用。方法:采用改良Simpson法培养乳鼠心肌细胞,选用NE诱导制作心肌细胞肥大模型,随机分为对照组,NE(10-6M)组,Sta高中低剂量(10-4M、10-5M、10-6M)组及Car(10-6M)组。在药物作用的1d、3d、5d和7d后收集细胞,采用图像分析系统测量心肌细胞表面积,BCA法检测细胞蛋白含量,荧光微量测定细胞DNA含量,ELISA法检测细胞ANP和BNP含量,以细胞表面积、Protein/DNA比值以及ANP和BNP含量作为检测指标,观察益母草水苏碱对肥大心肌细胞的药效学作用。结果:益母草水苏碱作用于细胞1d后,Sta大中小剂量组与NE组比较各项指标没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞3d后,Sta大中剂量组与NE组比较可以明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),Sta小剂量组较NE组降低了细胞表面积(P0.05),其它各项指标没有差异。益母草水苏碱作用于细胞5d后,Sta大中小剂量组较NE组显著降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),各组BNP含量与NE组比较,有降低的趋势,但是没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞7d后,Sta大中小剂量组与NE组比较,明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值、ANP和BNP含量(P0.05)。结论:益母草水苏碱具有抗NE诱导乳鼠心肌细胞肥大作用。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取能力的影响

目的：探讨益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取能力的影响。方法：采用不同浓度的益母草水苏碱（10-4、10-5、10-6mol/L）对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果：益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能。结论：益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的:探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。方法:采用不同浓度的益母草水苏碱(10-4,10-5,10-6mol·L-1)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果:益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。结论:益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 :探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。 方法 :采用不同浓度的益母草水苏碱(10^-4,10^-5,10^-6mol/L)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。 结果: 益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein／DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。 结论: 益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞,观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量）,同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05）,对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）;②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）;③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加,加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大,抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

益母草生物碱对去甲肾上腺素诱导心肌细胞肥大效应的抑制作用

目的 探讨益母草生物碱(Alkaloid of Leonurus,AFL)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的作用.方法 改良Simpson法培养新生大鼠心肌细胞,随机分为生理盐水对照组、NE组及AFL高中低剂量(0.05,0.1,0.5g/L)组.用NE诱导制作心肌肥大模型并给予相应的药物干预.采用伊红染色法测定心肌细胞表面积,BCA法测细胞蛋白含量,HOE 33258荧光法测定细胞DNA含量,观察不同浓度AFL对肥大心肌细胞的影响.结果 模型组细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值与对照组相比明显增加(P＜0.05);AFL中、高剂量组与模型组比较,细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值均显著减少(P＜0.05);低剂量AFL对细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值无明显影响(P＞0.05).结论:AFL可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应.     

益母草水苏碱对肥大心肌细胞活性氧信号的影响

目的:观察益母草水苏碱对心肌细胞肥大的作用,探讨其对活性氧(ROS)及其下游NF-κB信号的影响。方法:原代培养乳鼠的心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ建立细胞肥大模型,观察10-7～10-4mol/L浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响(测定细胞体表面积及Protein/DNA比值),同时利用流式细胞仪检测ROS阳性细胞比例,West-ern Blot法测定细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白表达。结果:一定浓度的益母草水苏碱可以降低肥大心肌细胞的体表面积、Protein/DNA比值以及ROS阳性细胞比例(P0.05);益母草水苏碱干预降低了肥大心肌细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白的表达水平(P0.05)。结论:对ROS及其下游NF-κB信号的抑制可能涉及益母草水苏碱对抗心肌细胞肥大的作用机制。     

温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌肌球蛋白重链基因表达的影响

目的:观察温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌肌球蛋白重链基因表达的影响。方法:采用"甲状腺全切术+术后皮下注射L-T4"法制备亚临床甲减大鼠模型,设定空白对照组、模型组、西药组、中药低剂量组及高剂量组、中+西药组,RT-PCR法按照试剂盒说明测定心肌肌球蛋白重链基因表达,同时观察温肾方对其指标的干预情况。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠心肌肌球蛋白重链α-MHCmRNA表达降低(P0.05),β-MHCmRNA表达显著增加(P0.01);与模型组比较,中+西药组和中药高剂量组在上调大鼠心肌α-MHCmRNA表达,下调大鼠心肌β-MHCmRNA表达方面效果显著(P0.05);中+西药组及中药高剂量组心肌α-MHCmRNA、β-MHCmRNA表达水平接近于空白对照组(P0.05)。结论:亚临床甲状腺功能减退可引起心肌肌球蛋白重链基因表达的改变,温肾方能逆转心肌肌球蛋白基因的异常表达,从而具有防治亚临床甲减心脏并发症的作用。     

人参皂苷Rb1经ERK1／2对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究人参皂苷Rbl（Gs—Rbl）对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能的作用机制。方法原代乳鼠心肌细胞培养,H202诱导造成细胞损伤,实验分为6组,空白对照组、模型组、原花青素组（100／~mol／L）和Gs—Rbl低（50vmol／L）剂量、中剂量（100μmol／L）、高剂量（200／xmol／L）组。采用MTT法检测心肌细胞活性,Tunnel法检测心肌细胞凋亡率,Westernblot检测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化表达水平。结果与空白对照组相比,模型组心肌细胞活力明显下降（P〈0．01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）,心肌细胞P—ERK1／2表达明显减少（P〈0．01）;与模型组比较,原花青素组以及Gs—Rbl低、中和高剂量组心肌细胞活力明显提高（P〈0．05）,细胞凋亡率显著下降（P〈0．05）,原花青素组和Gs—Rbl高剂量组心肌细胞P—ERKl／2表达明显增加（P〈0．05）。结论Gs—Rbl对H202诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与激活ERK信号通路相关。     

益母草碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大p38 MAPK信号通路和miRNA-1表达的影响

目的:研究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的作用,并分析其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路和微小RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)表达的影响。方法:以AngⅡ(0. 1μmol·L~(-1))诱导肥大心肌细胞。实验分为空白组,模型组,p38 MAPK抑制剂组(SB203580,10μmol·L~(-1))以及益母草碱低、中、高浓度组(5,10,20μmol·L~(-1))。以图像分析软件测量心肌细胞表面积; Folin-酚试剂法(Lowry)检测心肌细胞蛋白含量;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞miRNA-1 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞内皮素-1(endothelin-1,ET-1),p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK),肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2),β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量明显升高(P 0. 05),ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平明显上调(P 0. 05),α-MHC蛋白及miRNA-1 mRNA的表达水平明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,益母草碱高浓度组明显减少肥大心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量(P 0. 05);下调ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平(P 0. 05);上调α-MHC蛋白及miRNA-1的表达水平(P 0. 05)。结论:益母草碱高浓度组(20μmol·L~(-1))可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化和上调miRNA-1的表达有关。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶表达的影响

目的从细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）激活角度研究姜黄素（curcumin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥大反应的作用。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组（10-6mol/L AngⅡ）、姜黄素组（10-6mol/L AngⅡ＋2.5×10-8g/L姜黄素）及对照组（正常培养的心肌细胞）。3组分别培养24h,收集心肌细胞,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定ERK1/2表达。应用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果①3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有统计学意义（F=20.68,P〈0.01）,AngⅡ（10-6mol/L）处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率明显增加,姜黄素能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率的增加;②AngⅡ（10-6mol/L）处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达明显增加,预先以姜黄素2.5×10-8g/L处理心肌细胞30min,发现姜黄素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达。结论姜黄素可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2的表达,这可能是姜黄素治疗心肌肥厚的重要机制之一。     

β-羟基异戊酰紫草素联合顺铂对SKOV3细胞活力的影响

目的观察β-羟基异戊酰紫草素（β-HIVS）联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV_3活力的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组及6个不同浓度β-HIVS组（2~30μmol/L）,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定不同浓度β-HIVS对SKOV_3细胞活力的影响。设立顺铂单用组（10、20、40μmol/L）和选择〈IC_（50）的β-HIVS 3个浓度（0.25、1、2.5μmol/L）协同顺铂组,应用MTT比色法测定β-HIVS协同顺铂对SKOV_3细胞活力的影响。应用Western blot法检测不同浓度β-HIVS作用后BcI-2、Bax蛋白表达。结果不同浓度β-HIVS（2～30μmol/L）均可抑制SKOV_3细胞活力,并呈一定的浓度依赖性,测得半数抑制率IC_（50）为7.37μmol/L,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。β-HIVS（1、2.5μmol/L）与顺铂联合应用,与顺铂单用组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。协同作用对β-HIVS呈现浓度依赖性。Western bIot检测结果表明：不同浓度β-HIVS（5、7.5、10μmol/L）可明显上调SKOV_3细胞中Bax蛋白表达水平,同时抑制Bcl-2蛋白表达,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论β-HIVS对人卵巢癌细胞株SKOV_3体外活力有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性。在一定浓度范围内,β-HIVS对顺铂具有协同增敏作用,且随β-HIVS浓度的增高,这种协同作用表现的更为显著。协同作用可能通过β-HIVS上调Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白表达,从而加速诱导SKOV_3凋亡。     

气滞血瘀证大鼠NO/NOS体系的变化

目的：观察气滞血瘀证大鼠一氧化氮／一氧化氮合成酶（NO／NOS）的体系变化。方法：将Wistar大鼠随机分成4组,对照组、模型组、血府逐瘀汤低、高剂量组。采用多因素联合刺激法建立气滞血瘀模型。运用分光光度法测定血浆和肝组织中NO含量以及肝组织中NOS活性,利用RT—PCR法测定肝组织中NOS基因表达。结果：模型组血浆NO含量（0．52±0．33）μmol／L显著低于对照组（2．77±1．73）μmol／L（P〈0．01）,低剂量组NO含量（2．37±0．53）μmol／L显著高于模型组（0．52±0．33）μmol／L（P〈0．01）;模型组肝组织NO含量（0．52±0．24）μmol／mg显著低于对照组（5．87±1．72）μmol／mg（P〈0．01）,低剂量组NO含量（3．72±1．53）μmol／mg显著高于模型组（0．52±0．24）μmol／mg（P〈0．01）;模型组肝组织eNOS基因表达水平显著低于对照组（P〈0．01）,低剂量组肝组织eNOS显著高于模型组（P〈0．05）。结论：气滞血瘀证大鼠NO／NOS体系下调,为进一步研究治疗血瘀症类疾病提供了借鉴和思路。     

左旋四氢巴马汀对大鼠海马神经元细胞钙超载损伤的保护作用

目的研究左旋四氢巴马汀（1-THP）对氯化钾所致大鼠海马神经元胞内钙超载的影响。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,分为4组：空白对照组、1-THP1／lmol／L组、1-THP10ILmol／L组、1-THP100μmol／L组。应用激光扫描共聚焦显微镜实时扫描,观测大鼠海马神经元胞内钙的荧光强度变化。结果在静息状态下（1～100）／2μMol／L左旋IN氢巴马汀对胞内钙浓度（[Ca2＋]i）均无影响。左旋IN氢巴马汀对60mmol／LKCl诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有抑制作用。对照组、1μMol／L1—THP、10μmoL／L1—THP、100Hmol／L1THP的峰值荧光强度增加分别为（64．3±2．8）％、（46．3±3．1）％、（34．2±1．5）％、（20．8±1．2）％（P〈0．05）。左旋四氢巴马汀对10mmol／L。Caffeine诱导细胞内钙库的钙释放,引起的胞浆钙升高有抑制作用。对照纽、1μmol/L1-THP、10μmol／L1-THP、100μmol／L1—THP峰值荧光强度增加分别为（53．9±4．3）％、（48．2±3．9）％、（44．3±4．6）％、（35．5±3．2）％（P〈0．05）。结论左旋四氢巴马汀可以通过减轻损伤诱发的海马神经元细胞内钙超载程度来保护海马神经元。     

鹿茸多肽诱导心肌干细胞分化作用及对心肌细胞特征性MHC基因表达的影响

目的从新生大鼠心脏中分离得到心肌干细胞,体外培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察鹿茸多肽诱导前后心肌细胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β心肌肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,探讨鹿茸多肽对心肌干细胞分化的促进作用。方法胰酶消化法分离心肌干细胞(CSCs),并进行传代培养,流式细胞法及免疫组化染色鉴定,于第3代CSCs培养液中加入不同浓度的(50,100,200,400,800,1 600μg/mL)鹿茸多肽进行体外诱导,3周后,用细胞刷收集细胞,利用RT-PCR技术观察心肌细胞特征性基因MHC的表达情况。结果鹿茸多肽对CSCs的MHC基因表达有促进作用,在一定范围内存在量效关系,并随着鹿茸多肽浓度的增加,α-MHC和β-MHC基因的表达均有所增加。结论鹿茸多肽对心肌干细胞分化心肌细胞有促进作用,表明其在心肌损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步全面深入的研究。     

多肽药物汇利心康对小鼠心肌肥大与肌球蛋白重链表达的影响

 目的 探讨Gq蛋白羧基端模拟肽盐酸GCIP-27（汇利心康,HLXK）对去甲肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大和肌球蛋白重链表达的影响。方法 60只小鼠,随机分为对照组、模型组、氯沙坦组、HLXK（10、30、90 μg·kg-1）组,分别给予生理盐水、去甲肾上腺素1.5 mg·kg-1（ip,bid）、氯沙坦钾9 mg·kg-1（ig,qd）、HLXK（10、30、90 μg·kg-1;ip,bid）。连续给药20 d后,称量小鼠体重、心脏质量、左心室质量,计算心脏质量指数和左心室质量指数。采用免疫组化法测定肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)α、β在心肌组织中的表达情况。结果 去甲肾上腺素可明显诱导小鼠心肌重构。氯沙坦、HLXK（30、90 μg·kg-1;bid）能明显降低小鼠心脏质量指数和左心室质量指数,增加心肌组织中α-MHC的表达,降低β-MHC的表达。结论 汇利心康能够有效防止小鼠发生心肌肥大,纠正心肌肥大过程中的肌球蛋白重链表达失衡。     

杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。