氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA1555^G点突变分析

目的 考察１５５５＾Ｇ点在糖甙类抗生素致聋的对应关系，建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了３个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的母系遗传耳聋家系１３人（包括聋人和听力正常者）的外周静脉血标本，聚合酶链反应扩增线粒体ＤＮＡ，Ａｌｗ２６Ｉ限制性内切酶分析、ＤＮＡ斑点杂交和ＤＮＡ序列分析检测１５５５＾Ｇ点突变。结果 家系１和３的７份样品均为１５５５＾Ｇ点突变阳性，家系２的６份样品为１５５５＾Ｇ点突变     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变分析

目的 研究线粒体12S rRNA基因A1555G点突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共23名成员的外周静脉血标本，从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段，限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变。结果 五个家系有母系血缘关系的18份样品均为A1555G点突变阳性，5名配偶为A1555G点突变阴性。结论 线粒体DNA A1555G点突变是氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性最主要的原因，检测A1555G点突变对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测有重要意义。     

线粒体DNA1555位点突变、非综合征性聋与氨基糖甙类抗生素关系研究

氨基糖甙类抗生素致聋是导致儿童重度感音神经性聋的主要原因，而且具有家族聚集性与易感性。目前认为线粒体DNA1555位点突变是导致氨基糖甙类所致非综合征聋的主要遗传基础。本文试图从线粒体基因1555位点突变结构特点、发病机理、突变的外显率、临床意义等方向作一综述。     

一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变检测

目的 应用耳聋基因芯片对一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系和散发的非综合征性耳聋患者进行分子病因学研究.方法 采集一母系遗传耳聋家系2代共12人和散发非综合征耳聋患者68人的外周静脉血,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,应用耳聋基因芯片检测中国人常见的药物性耳聋相关基因--线粒体DNA A1555G突变.结果 家系中有7份样品存在线粒体DNA 12S rRNA 1555位点A→G的突变.其余样品为A1555G点突变阴性;而散发的耳聋患者中未检测出一例携带此突变.结论 线粒体DNA A1555G点突变是导致该家系致聋的主要因素之一,具有母系遗传耳聋特点.     

线粒体DNA突变与氨基糖甙类抗生素致聋研究进展

线粒体脱氧核糖核酸（mitochondrial deoxyroibose nucleic acid,mtDNA）是唯一存在于核外的遗传物质,具有独特的遗传特性,如严格的母系遗传、具有半自主性、不与组蛋白结合,修复能力低下,容易发生碱基突变。氨基糖甙类抗生素耳聋具有家族聚集的现象,遗传的线粒体突变是氨基糖甙类抗生素致聋（aminoglycoside antibiotics induced deafness,AAID）等非综合征耳聋的原因之一。     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA12S和16S rRNA基因突变分析

目的 研究线粒体rRNA基因突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共27名成员的外周静脉血标本。从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段。Alw26I限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变，并对其中一个家系进行了线粒体DNAl2S和16SrRNA基因的全序列分析。结果家系A．C．D和E的2l份样品均为A1555G点突变阳性，家系B的6份样品为A1555G点突变阴性。家系B线粒体DNAl2S和16SrRNA基因全序列分析显示该家系存在16SrRNA基因第2227位“AA”插入突变。结论 本研究发现了一个A1555G点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体DNA A1555G点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础，对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测仅检测A1555G点突变是不够的。应与mtDNA其它相关突变位点的检测结合起来。     

氨基甙类抗生素耳毒性与线粒体基因突变分析

进一步证明遗传因素对氨基甙类抗生素耳毒性的作用,探讨该病的发病机理。方法应用ＰＣＲ限制性酶切方法分析了９个氨基甙类抗生素致聋家系中６２个成员线粒体ＤＮＡ。结果发现５个家系中２０例线粒体ＤＮＡ２２ＳｒＲＮＡ基因第１５５５位Ａ→Ｇ点突变。结论该突变是氨基甙类抗生素耳毒性遗传易感性的分子生物学基础。可能有其他他粒体ＤＮＡ基因突变与氨基甙类抗生素耳毒性有关。     

一个氨基糖甙类药物致聋家系线粒体DNA全序列分析

目的 评估线粒体单倍型对一个氨基糖甙类药物致聋家系中12S rRNA A827G突变表型的影响.方法 用基因组DNA抽提试剂盒提取外周血DNA,PCR扩增家系成员mtDNA 12S rRNA基因进行A827G突变的测序验证,对携带A827G突变的家系先证者进行mtDNA全序列PCR扩增和测序分析,结果 与修正的剑桥参考序列比对,识别除A827G以外的突变位点.结果 5名母系成员mtDNA 12S rRNA序列分析均检测到A827G突变.与修正的剑桥参考序列及家系配偶相比,先证者的mtDNA全序列分析显示出独特的多态性改变,除已知的12S rRNAA827G突变外,另检测到24个碱基变异,其中12S rRNA基因A783C、G786C以及ND4基因C11720A突变(L319A)为首次发现.系统进化法分析显示,上述多态性位点均位于mtDNA非保守区域.结论 线粒体单倍型对该家系mtDNA A827G突变的表型表达无明显影响.     

氨基糖甙类抗生素中毒聋易感性与线粒体DNA突变的研究

应用PCR-限制性内切酶酶切片段长度多态性技术,对164例过去应用过氨基糖甙类药物目前听力严重下降的患者外周血线粒体DNA进行了研究。结果发现6例聋哑患者线粒体DNA12srRNA基因1555位点发生了点突变,突变率3．6％,100例听力正常人无一例在此位点有突变。我们对国外学者的研究方法加以改良,使结果更容易判断。我们推测在线粒体DNA上还有其它与中毒聋易感性相关的突变位点尚未被发现。     

非综合征型聋患者线粒体DNA A1555G突变频率分析

目的分析甘肃地区非综合征型聋患者线粒体DNA 12SrRNA A1555G的突变频率。方法收集甘肃地区五所聋哑学校802例聋哑学生血样，经基因组DNA提取后进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增线粒体DNA目的片段，用A1w26I限制性内切酶检测A1555G点突变，对酶切阳性病例的PCR产物纯化后进行直接测序验证酶切结果，分析线粒体DNA 12SrRNA A1555G在甘肃地区的突变频率。结果802例聋哑学生中有67例经酶切及直接测序证实为线粒体DNA A1555G突变，突变频率为8．4％（67／802）。其中有15例母系家庭成员中还有2例以上耳聋患者。结论线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变在甘肃地区非综合征型聋患者中占有很高的比例，高于国内外其他地区的相关报道。此研究结果不仅为绘制中国人群线粒体DNA A1555G突变频谱增添新的内容，也为因地制宜地开展耳聋基因诊断、实施遗传咨询及积极预防耳聋的发生有重要的指导意义。     

老龄大鼠氨基苷类抗生素耳毒易感与线粒体DNA片段缺失

目的 :分析大鼠内耳组织线粒体DNA(mtDNA)片段缺失与氨基苷类抗生素 (AmAn)致聋的对应关系 ,探讨线粒体DNA片段缺失在老年大鼠AmAn耳毒易感中的可能作用。方法 :将Wistar大鼠 30只按月龄分为A组 (老龄鼠 ,>2 4个月龄 )和B组 (4个月龄鼠 ) ,每组 15只 ;均连续腹腔注射卡那霉素 (KM ) ,每日 5 0 0mg/kg ,共 10d。用药前、后测试听性脑干反应 (ABR)阈值 ,并用聚合酶链反应 (PCR)对大鼠内耳组织mtDNA483 4 缺失片段进行检测。结果 :①A ,B组大鼠用KM前、后 ,ABR反应阈提高 ,阈移均值分别为 :(42 .0 8± 8.5 9)dBpeSPL ,(12 .71± 4 .4 2 )dBpeSPL ,二者间差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;②A组大鼠有 10只存在mtDNA483 4 缺失 ,其中检测到mtDNA483 4 缺失的 10只大鼠和未检测到此缺失的 5只大鼠 ,阈移均值分别为 (45 .0 0± 7.6 7)dBpeSPL ,(33.33± 4 .0 8)dBpeSPL ,两者间差异亦有统计学意义 (P <0 .0 1) ;而B组大鼠未发现此片段缺失。结论 :老龄大鼠内耳组织存在mtDNA片段缺失 ,且此片段缺失可能增加其对AmAn耳毒作用的敏感性     

线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变在中国西北地区的流行病学研究

目的 调查中国西北地区非综合征感音神经性耳聋患者群体中线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变的流行情况．评估开展这一突变检测的临床价值。方法 收集中国西北地区共612例感音神经性聋患者外周静脉血，从白细胞中提取DNA，多聚酶链反应（PCR）扩增线粒体DNA目的片断，Alw26I限制性内切酶检测A1555G点突变，而后对阳性病例的PCR产物进行DNA测序验证。结果 在612例感音神经性聋患者中，共发现56例A1555G突变患者：其中217例为药物性耳聋患者，有47例为A1555G点突变阳性；在其余395例非药物性耳聋患者中，检出9例A1555G突变。结论 中国西北地区的药物性耳聋较为常见，A1555G突变在本地区感音神经性耳聋人群中有较高的检出率（9．15％），在该地区开展线粒体DNA12SrRNAA1555G突变检测有重要意义。     

非综合征型耳聋患者mtDNA A1555G异质性突变比例与临床表型的关系

目的定量检测非综合征型耳聋患者线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)1555突变型/野生型的拷贝数,探讨突变型/野生型比例与临床表型之间的关系。方法建立实时定量PCR技术和扩增阻滞突变系统(Real-time quantitative PCR和Amplification refractory mutation system,RT-ARMS-qPCR系统)对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数进行定量检测并计算比例。共检测散发组12例、家系组7例异质性突变患者,结合耳聋患者的临床资料,分析突变型与野生型的比例与耳聋严重程度的关系。结果散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型mtDNA所占的比例与耳聋轻重程度相关(r=0.771,P=0.003);家系组患者中,突变型mtD-NA所占的比例亦与耳聋轻重程度相关(r=0.850,P=0.015)。结论突变型mtDNA占所有mtDNA的比例与耳聋的严重程度密切相关,是非综合征型耳聋临床表型多样性的分子基础。     

线粒体DNA突变致聋家系检测及单倍型分析

目的 探讨母系遗传氨基糖甙类抗生素诱发致聋家系的线粒体DNA突变情况及其单倍型背景.方法 收集贵州遵义地区6个母系遗传非综合征性耳聋家系的临床资料及血液样本,经PCR-RFLP(polymerase chain re-action-restriction fragment length Polymorphism,聚合酶链反应-限制性片段长度多态)及测序技术检测线粒体DNA1555G突变,并通过对各家系线粒体DNA高变区序列测定及编码区限制性片段多态性分析以划分单倍型类群.结果 经酶切及测序证实其中4个家系存在线粒体DNA 1555G突变,分别属于A、D6、G及M*单倍型.结论 该地区线粒体DNA 1555G突变引起氨基糖甙类抗生素高度敏感致聋的家系发生率较高,线粒体DNA1555G突变致聋家系呈现不同的线粒体单倍型类型.     

Prevalence of A1555G mitochondrial mutation in Chinese newborns and the correlation with neonatal hearing screening

Objective

To investigate the feasibility of genetic screening for deafness causative genes in the process of newborn hearing screening in China.

Methods

Total 865 newborn babies between November 2009 and March 2010 were enrolled for the simultaneous hearing and deafness causative gene screening in Tongji Hospital, Wuhan, China. Hearing screening followed a two-stage strategy with transient evoked otoacoustic emissions. Infants referred after the second-stage screening were tested by diagnostic auditory brainstem response (ABR). Genomic DNA was extracted from heel blood of newborns, and the mitochondrial 12S rRNA A1555G mutation was detected by polymerase chain reaction (PCR) based restriction fragment length polymorphism and confirmed by DNA sequencing.

Results

In hearing screening, 134 out of the 865 newborns (15.5%) were referred after the first-stage screening and 86.6% (116/134) of them returned for the second stage. After the second-stage screening, 15 who were still referred were tested by diagnostic ABR and 3 of them failed the test. On the other hand, gene screening identified 6 of the 865 newborns (0.7%) harbored homoplasmic 12S rRNA A1555G mutation although they passed the hearing screening.

Conclusion

It might be practical and effective to complement routine hearing screening in newborns with gene screening for the purpose of early diagnosis and discovery of the late-onset hearing loss.     

Audiovestibular findings in patients with mitochondrial A1555G mutation

OBJECTIVE: The aims of this study were to explore the prevalence of the A1555G mutation among a group of Japanese patients and to assess the pathophysiology of the hearing impairment associated with the mutation. STUDY DESIGN: Genetic study and retrospective chart review. METHODS: We screened for the mitochondrial DNA A1555G mutation in 138 unrelated Japanese deaf patients, including 63 sporadic cases and 75 familial cases with different patterns of inheritance. When available, patients carrying the mutation received audiovestibular examinations, including speech audiometry, distortion-product otoacoustic emission (DPOAE) testing, electrocochleography (ECochG), and electronystagmography. RESULTS: One of 63 sporadic cases (1.6%) and 6 of 75 familial cases (8.0%) carried the A1555G mutation. Patients with the mutation and a familial history included two with autosomal recessive inheritance and four with maternal inheritance. In addition, two of six patients (33.3%) presenting with aminoglycoside-induced sensorineural hearing loss (SNHL) were associated with the A1555G mutation. All but one of the patients carrying the mutation showed high-frequency SNHL. Distortion-product levels of DPOAE were reduced to the noise levels, suggesting the A1555G mutation caused cochlear deafness. Cochlear microphonics in ECochG showed elevation of the detection thresholds and corresponding audiometric thresholds. The ECochG data implied that patients with high-frequency SNHL had impairment of the cochlear hair cells that was most severe toward the basal turn. The electronystagmographic findings indicated no apparent vestibular dysfunction. CONCLUSIONS: Screening for the A1555G mutation, even in patients with idiopathic bilateral SNHL, likely would be useful for preventing further development and/or acceleration of the deafness.     

Prev-DAF试剂盒分析线粒体基因1555A-G突变

目的建立应用标准试剂盒方法检测线粒体基因1555A-G(mtDNA1555A-G)突变的程序,进行母系遗传耳聋家系的基因型分析.方法采用Prev-DAF试剂盒分析14个母系遗传耳聋家系,共检测耳聋患者34个,正常个体11个,并以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性.结果Prey-DAF试剂盒检测结果证实13个家系中33个耳聋患者携带有mtDNA1555A-G突变,另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变,11个正常个体中无此突变,试剂盒检测方法与Alw26I酶切法和测序结果完全吻合.结论在中国,mtDNA1555A-G氨基糖甙类抗生素致聋的家系多,分布广,Prev-DAF试剂盒在分析线粒体基因1555A-G突变方面具有简单、低耗、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查.