大鼠胚胎隔区神经元体外原代培养

目的：探讨大鼠胚胎隔区神经元培养方法。方法：建立稳定的大鼠胚胎隔区神经元体外培养模型，并观察神经元形态变化即生长过程。结果：神经元培养２小时，大部分细胞已贴壁；１２小时大部分细胞有突起伸出；２４小时部分细胞呈双极型；３天细胞开始聚集，突起互相连接成稀疏的网络；１周细胞簇明显，突起随时间延长而增长；２周细胞体积继续增大，突起连接成致密网络；３周细胞突起聚集明显，细胞数开始减少；４周细胞明显减少，仍见     

三磷酸腺苷诱导体外培养的胚胎大鼠皮层神经细胞凋亡

目的：研究不同浓度三磷酸腺苷（ATP）溶液（0.1、10、100?mmol/L）对体外培养的胚胎大鼠皮层神经细胞的作用。方法：应用倒置显微镜和活细胞计数观察神经细胞死亡性质和细胞存活量;采用Neuron Specific Enolase (NSE) 和cleaved caspase 3免疫组织化学方法了解各实验组NSE阳性神经元的数量和凋亡特异蛋白caspase 3活化情况。结果：10?mmol/L及100?mmol/L ATP溶液作用细胞4?h,存活细胞数与NSE阳性神经元数量呈浓度依赖性减少,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）。10?mmol/L ATP作用细胞4?h,活化的 caspase 3蛋白表达较对照组显著性增加（P＜0.05）。结论:ATP对体外培养的胚胎大鼠皮层神经细胞具有浓度依赖性的细胞毒性作用,细胞凋亡蛋白caspase 3活化机制参与该过程。     

人胚大脑皮层神经元细胞体外培养方法的建立

目的 建立人胚大脑皮层神经元的培养体系,研究神经元细胞的生长发育过程。方法 取妊娠30余周合法流产死亡4h以内的胎儿之大脑皮层额部组织,用胰蛋白酶消化为单细胞悬液。以2×10~6/ml密度接种于96孔培养板,24h后加入DNA抑制剂阿糖胞苷,培养1～12d,用相差显微镜观察神经元生长情况。并以尼氏体染色鉴定神经元,以台盼蓝拒染法细胞计数估算细胞的存活率。结果 神经细胞生长良好,胞体折光性强,神经突起明显,细胞形态清晰。第5天形成较稠密的网络联系;细胞存活率逐步下降,第3至第5天显著下降。由92.3％降至76.9％,以后趋于稳定。第7天为74.26％。尼氏小体染色第7天阳性率为88.25％。结论 体外培养3～5d的神经细胞属发育期;第5天细胞稳定生长;第6天神经细胞基本发育成熟。     

银杏内酯对体外培养的大鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响

目的 :探讨银杏内酯对体外培养的鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响。方法 :实验分成银杏组、NGF组和单纯对照组。取 E17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF及不含上述成份的 DMEM培养液 ,于体外分别培养 18d和 3 0 d后 ,用 TUNEL 法检测细胞凋亡情况 ,显微镜下计数各组的凋亡细胞。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果 :培养 18d和 3 0 d两个时期的银杏组凋亡细胞数均明显少于单纯对照组 ( P<0 .0 1) ,而略多于 NGF组 ,但其差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :银杏内酯具有类似NGF的作用 ,可有效抑制体外培养的胚基底前脑神经元凋亡     

大鼠大脑皮质神经元的原代培养

目的 探讨大鼠大脑皮质神经元的培养方法.方法 体外原代培养新生大鼠大脑皮质神经元.应用免疫细胞化学法及电子显微镜鉴定神经元.结果 用神经基础培养基(Neurobasal-A) B27培养的神经元纯度可达85%.生长状态较佳.结论 以Neurobasal-A B27培养的大鼠大脑皮质神经元括性较佳,纯度较高,是体外研究神经系统相关理论的良好模型.     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

NGF对大鼠创伤性脑损伤后大脑皮质神经元的影响

目的研究神经生长因子(NGF)对大鼠创伤性脑损伤后大脑皮层神经元的影响，为NGF的临床应用提供实验依据。方法用原代培养的胎龄17d SD大鼠胎鼠大脑皮质细胞，机械划痕法建立体外创伤性脑损伤模型，通过细胞形态学、MTT法及琼脂糖凝胶电泳观察NGF的保护作用。结果培养10d的神经细胞行机械性损伤，神经细胞皱缩，突起消失，神经网络减少，胞浆内尼氏颗粒减少、溶解、消失，出现典型的DNA梯状断裂带；给予NGF后，NGF中、高剂量组倒置显微镜下及尼氏染色后观察细胞形态结构损伤减轻；MTT比色法数值增高；DNA Ladder无梯状断裂带出现。结论NGF对创伤性脑损伤所致的大脑皮层神经细胞损伤具有保护作用。     

大鼠胚胎下丘脑神经细胞的体外原代培养

本文采用体外原代培养技术,详细观察和描述了大鼠胚胎下丘脑神经元在体外的形态发育过程,在国内首次建立了稳定的胚胎下丘脑神经元培养模型。结果表明:细胞培养4h,大部分细胞已贴壁;12h,部分细胞开始向外伸出小的突起;24h,部分细胞成为具有两个突起的神经元;3天时,神经元胞体增大,部分细胞为具有3个突起的神经元;1周后,神经细胞突起互相连接成网,细胞突起随培养时间延长而增多;第4周时,细胞开始减少,但仍可见较大的、具有多个突起的神经元。本文还对细胞培养过程中胚胎胎龄的选择、细胞分离的方法等问题进行了讨论。     

体外培养新生大鼠海马神经元突起的形态学

目的研究体外培养过程中，神经元的形态学。方法用扫描电镜观察体外培养的新生大鼠海马神经元在体外发育过程中，神经突起的形态学。结果培养海马神经元呈现梭形、三角形、锥体形等多种形态；神经突起随着培养时间延长，逐渐出现长度增加，突起分支增多；扫描电镜下，突起上显示串珠样膨大的膨体样结构，垂直分出呈鼓槌状的树突棘，突起来梢有矛头样和泪滴状生长锥，并见突起之间有连接存在。结论体外培养的海马神经元，在形态学上经历了与在体相似的变化，并且具有执行神经元功能的基本形态学基础。     

局灶性脑缺血再灌注致大鼠大脑皮质tau蛋白异常高度磷酸化

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白磷酸化的变化,及其与神经细胞凋亡的关系,以阐明脑梗死和阿尔茨海默病间的关系.方法 制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫印迹法检测局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质tau蛋白在Serl99/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点磷酸化和不溶性磷酸化tau蛋白的变化;TUNEL法和免疫荧光双标法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和磷酸化tau蛋白的关系.结果 缺血再灌注6 h后顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点发生异常高度磷酸化,不溶性磷酸化tau蛋白显著增加.脑缺血再灌注后3 d神经细胞的凋亡和tau蛋白高度磷酸化呈显著正相关关系.结论 脑缺血再灌注后发生阿尔茨海默病样病理变化,脑梗死可能促进了阿尔茨海默病的发生、发展.     

糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡

目的 研究糖尿病大鼠肾皮质细胞凋亡的可能机制及其对糖尿病肾病的影响.方法 20只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组和对照组.糖尿病大鼠模型采用链脲佐菌素65 mg/kg腹腔注射诱导建立.12周后观察2组体质量、血糖以及血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白等肾功能指标;采用透射电镜和原位末端标记法（TUNEL法）检测大鼠肾皮质细胞凋亡,并用免疫组织化学的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达.结果 建模12周的糖尿病组肾小球和肾小管细胞凋亡明显增多（P＜0.01）,肾小球和肾小管细胞PCNA表达无明显差别（P＞0.05）;与对照组比较,糖尿病组肾小管Bax和Caspase-3表达明显增加（P＜0.01）,Bcl-2表达明显减少（P＜0.05）;2组肾小球都不表达Bax和Bcl-2,糖尿病组肾小球有少量Caspase-3表达.结论 糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡.包括Bax、Bcl-2和Caspase-3在内的Caspase依赖的线粒体凋亡途径可能参与了糖尿病状态下肾小管细胞的凋亡;细胞凋亡的增多可能是糖尿病肾病发展的原因之一.     

氨培养胎鼠神经细胞钙离子浓度变化与凋亡的相关性

目的 观察体外培养神经细胞在氨作用下钙离子浓度变化与凋亡的关系,探讨氨毒性机制.方法 体外培养胎鼠神经细胞7d,实验分组为对照组、低氨组和高氨组;分别作用24 h后,用流式细胞仪测定神经细胞凋亡比率,用Fluo-3/AM荧光探针测定细胞内钙离子浓度.结果 对照组神经细胞有少量凋亡,细胞内钙离子浓度正常,随着NH4CL浓度的提高,细胞内钙离子浓度明显升高,神经细胞凋亡增加.低氨组和对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,高氨组和低氨组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 氨诱导神经细胞凋亡与细胞内钙离子浓度相关.     

活化的巨噬细胞对肝癌细胞株的凋谢作用

目的：观察巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭΦ）对肝癌细胞株的凋谢作用。方法：从肝癌患者腹水中分离ＭΦ，以细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）进行激活，人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１为靶细胞，光镜观察靶细胞形态学改变。结果：ＬＰＳ活化的ＭΦ与靶细胞共同培养１ｈ可见紧密接触，２４ｈ靶细胞呈现核碎裂，胞浆嗜酸性增强，凋谢小体形成等变化；未活化的ＭΦ仅有与靶细胞接触但未见其破坏现象。结论：活化的ＭΦ通过凋谢的方式引起肝癌细胞株死亡。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后尼莫地平对神经细胞凋亡影响的研究

目的研究大鼠脑缺血再灌注后尼莫地平对神经细胞凋亡的影响。方法雄性Wistar大鼠120只,随机分为空白对照组、假手术组、脑缺血组和尼莫地平组,后两组按时间分成再灌注1、3、6、12、24、36、48、72h和7d组。制作MACO动物模型致大鼠形成局灶性脑缺血,记录大鼠的神经功能缺损情况,应用TUNEL法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的情况。结果大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡缺血组各时间点同正常对照组、假手术组相比均明显增高,且差异有统计学意义(P0.05);尼莫地平干预后可以显著减少大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞数量(P0.05)。结论尼莫地平可以减少神经细胞凋亡,从而保护大鼠脑缺血再灌注后脑细胞的损害。     

大白鼠听皮质脑组织移植神经元的体视学研究

选用体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)和数密度(Nv),对大白鼠听皮员移植脑组织内神经元进行体视学研究。结果表明:移植组织内的三项指标(Vv:0.0898±0.0032,Sv:0.0269±0.0007,Nv:73±2)低于正常脑听皮质(Vv:0.1202±0.0031,Sv:0.0410±0.0012,Nv:92±3),P<0.01。     

褪黑素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的利用大鼠肝脏热缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究褪黑素(MT)对再灌注损伤肝脏的保护作用。方法用无损伤血管夹阻断部分肝脏血流,建立大鼠肝热缺血再灌注损伤模型;用缺口末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡指数(AI);心脏采血,测定血浆ALT和AST的变化。结果模型组肝细胞AI升高,血浆ALT和AST升高(P<0.05),用褪黑素干预组肝细胞AI和血浆ALT和AST较模型组下降(P<0.05)。结论褪黑素可以抑制缺血再灌注损伤后肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤。     

缺血性脑损伤中原代培养神经元凋亡的观察

目的 探讨原代培养的神经元在模拟缺血性脑损伤过程中细胞凋亡的发展规律和机制。并对不同的凋亡检测方法进行比较和评价。方法 对Wistar大鼠大脑皮质神经元进行原代培养，运用流式细胞仪(FCM)、TUNEL等手段检测缺血性损伤各时间点的神经元凋亡以及Caspase-3在神经元中的表达。结果 流式细胞仪与TUNEL检测均显示：在血清剥夺和缺氧后0．5h、6h神经元的凋亡率显著增高，Caspase-3表达阳性率亦随之增高。结论 血清和氧剥夺早期由于神经元内的保护性基因反应性上调，抑制Caspase-3的激活及凋亡的进展，随着损伤时间的延长。抑制凋亡基因向促凋亡基因转换，导致神经元进一步凋亡。FCM与TUNEL二者相结合有助于更为准确地检测神经元凋亡。     

电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的：观察电针预处理对癫痫持续状态（status epilepticus,SE）诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法：20只SD大鼠被随意分为4组：对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果：（1）与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多（P〈0.01,n=5）;（2）与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量（P〈0.05,n=5）。结论：电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。     

电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的:观察电针预处理对癫痫持续状态(status epilepticus,SE)诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法:20只SD大鼠被随意分为4组:对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果:(1)与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多(P<0.01,n=5);(2)与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量(P<0.05,n=5)。结论:电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。