葛根素通过下调miR-23a促进小鼠前成骨细胞增殖和分化的研究

目的 探讨葛根素是否通过下调miR-23a促进小鼠前成骨细胞增殖和分化。方法 将小鼠前成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、葛根素组、葛根素+miR-NC组和葛根素+miR-23a过表达组，RT-qPCR检测细胞中miR-23a的表达，CCK-8法检测细胞增殖活性，碱性磷酸酶活性检测葛根素对细胞活力的影响，Western blot检测细胞中Runx2蛋白的表达。应用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证miR-23a和Runx2的靶向调控关系。结果 与对照组相比，葛根素组MC3T3-E1细胞增殖活性增强，细胞中miR-23a表达降低，Runx2蛋白表达水平升高(P<0.05);与葛根素+miR-NC组相比，葛根素+miR-23a过表达组MC3T3-E1细胞增殖活性降低，细胞中Runx2蛋白表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-23a靶向负调控Runx2的表达。结论 葛根素促进小鼠前成骨细胞增殖和分化，机制可能与下调miR-23a进一步调控Runx2表达有关。     

miR-187靶向S100A4抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移并诱导细胞凋亡

目的探讨miR-187对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的U251细胞分为Con组(未处理)、NC组(转染miR-NC)、miR-187组(转染miR-187 mimics)。采用实时定量PCR检测miR-187的表达,MTT法、Transwell小室实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,实时定量PCR和Western blot检测S100A4 mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-187和S100A4的靶向关系。结果与Con组相比,miR-187组细胞中miR-187表达水平和细胞凋亡率均明显升高,而细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移细胞数和S100A4 mRNA、S100A4蛋白的表达水平均明显降低(P0.05);而miR-NC组与Con组相比无显著性差异(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实S100A4是miR-187的靶基因。结论 miR-187通过靶向S100A4抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-7靶向调节EGFR基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-7(miR-7)对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-7抑制剂组、miR-7模拟物组和对照组,分别将miR-7抑制剂或miR-7模拟物转染至miR-7抑制剂组或miR-7模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-7表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞EGFR mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞miR-7表达水平显著降低,miR-7模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,EGFR mRNA及蛋白表达水平显著升高,miR-7模拟物组则均显著降低(P0.01)。结论 miR-7抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调EGFR的表达相关。     

miR-101靶向调节c-Fos基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101抑制剂组、miR-101模拟物组和对照组,分别将miR-101抑制剂或miR-101模拟物转染至miR-101抑制剂组或miR-101模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-101表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-101模拟物后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-101抑制剂后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-101抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调c-Fos的表达相关。     

miR-130a靶向调节SMAD4基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-130a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-130a抑制剂组、miR-130a模拟物组和对照组,分别将miR-130a抑制剂或miR-130a模拟物转染至miR-130a抑制剂组或miR-130a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-130a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞SMAD4 mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-130a模拟物后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-130a抑制剂后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-130a抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调SMAD4的表达相关。     

miR-26a靶向调节GSK-3β基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-26a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-26a抑制剂组、miR-26a模拟物组和对照组,分别将miR-26a抑制剂或miR-26a模拟物转染至miR-26a抑制剂组或miR-26a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-26a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞GSK-3βm RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞miR-26a表达水平显著降低,miR-26a模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著降低,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著升高,miR-26a模拟物组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-26a促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调GSK-3β的表达相关。     

高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制

目的 探究高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制.方法 将TPC-1细胞分为空白对照组、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-20b模拟物组(转染miR-20b mimics),实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-20b和CCND1的表达,双荧光素酶报告基因实验分析miR-20b和CCND1的靶向关系.MTT方法检测各组TPC-1细胞第24h、48h、72h的增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力.结果 实时定量PCR和Western blot结果显示,转染miR-20b模拟物后,TPC-1细胞中miR-20b的表达升高,CCND1的表达下降(P＜0.05),生物信息学和双荧光素酶实验表明CCND1是miR-20b的靶基因.转染miR-20b模拟物后,TPC-1细胞的增殖和侵袭能力下降(P＜0.05).结论 高表达miR-20b可抑制甲状腺癌细胞TPC-1的增殖和侵袭能力,其机制可能与CCND1表达受到抑制有关.     

miR-34a通过靶向MMP2抑制上皮性卵巢癌细胞增殖和侵袭转移

目的 探讨miR-34a在多株上皮性卵巢癌（EOC）细胞中的表达情况和对细胞增殖转移和EMT的调控作用。方法 体外培养人卵巢上皮细胞HOSEpiC、人卵巢癌ES2和SKOV3细胞,RT-qPCR方法检测细胞中miR-34a的表达情况;将miR-34a mimics转染ES2和SKOV3细胞建立后,CCK-8法检测细胞增殖;穿梭小室实验检测细胞侵袭和转移;Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达。生物信息学网站预测和荧光素酶报告基因实验验证miR-34a的下游靶蛋白,Western blot检测miR-34a mimic对细胞中靶蛋白的抑制作用。结果 与卵巢上皮细胞相比,ES2和SKOV3细胞系miR-34a水平显著升高。CCK-8实验发现细胞增殖受到抑制;穿梭小室结果显示miR-34a能够显著抑制细胞的侵袭和转移。Western blot实验结果显示miR-34a能够下调细胞的EMT。Targetscan网站预测MMP2是miR-34a的下游靶基因,荧光素酶报告基因实验结果证实miR-34a能够特异性的结合MMP2的3’UTR,Western ...     

LncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过自噬对胃癌细胞活性及血管生成的影响

目的 探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法 将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达；MTT法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡能力；Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力；蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGF、LC3、Beclin1、p62蛋白表达；双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果 与人胃黏膜细胞系GES-1相比，人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SCG-823细胞中SNHG15表达明显升高，miR-123表达明显降低（P<0.05）；且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞，miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞（P<0.05）。si-SNHG15组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显低于...     

MiR-610通过下调双微体基因2的表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-610 对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。方法：通过RT-PCR 检测卵巢癌组织及细 胞、正常组织及细胞中miR-610 与鼠双微体基因2（MDM2）mRNA的表达;通过Lipofectamine 2000 将miR-NC、 miR-610 mimic、miR-6101 inhibitor、pc-MDM2质粒分别或联合转染进入HO8910细胞;划痕实验检测细胞迁移 能力,Transwell 法检测细胞侵袭能力,免疫印迹检测E- 钙黏着蛋白（E-cadherin）、N- 钙黏着蛋白（N-cadherin） 和MDM2蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测miR-610 与MDM2靶向关系。 结果：与正常卵巢组织和上皮 细胞系HOSEpiC相比,人宫颈癌组织和细胞系中miR-610 表达明显下调,选择下调效果较明显的HO8910细胞系 进行后续实验。与Control 组相比,miR-610 mimic 组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显降低、侵袭细胞数目明 显减少、E-cadherin 明显上调、N-cadherin 表达明显下调,miR-610 inhibitor 组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显 升高、侵袭细胞数目明显增多、E-cadherin 明显下调、N-cadherin 表达明显上调。MiR-610 与MDM2 3'UTR 区存在 结合位点,且miR-610 靶向下调MDM2 表达。共转染pc-MDM2逆转了miR-610 mimic 对卵巢癌HO8910细胞迁移 和侵袭能力抑制作用。 结论：MiR-610 通过靶向下调MDM2抑制卵巢癌HO8910细胞迁移和侵袭能力。     

miR-149-3p 靶向FOXM1 抑制人胃癌细胞SGC-7901 生长和迁移

目的:探究miR-149-3p靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901生长和迁移的机制。方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,并分为:Ctrl组、miR-NC组、miR-149-3p mimic组、pLV-FOXM1组和pLV-FOXM1+miR-149-3p mimic组;使用RT-PCR分别检测正常组织、原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织中miR-149-3p和FOXM1 mRNA的表达水平并分析miR-149-3p与FOXM1的线性关系;使用miR-NC、miR-149-3p mimic转染细胞后检测miR-149-3p和FOXM1 mRNA表达水平;双荧光素酶检测miR-149-3p与FOXM1的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖情况,体外侵袭实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质印迹检测N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9、FOXM1、PCNA、p21的表达水平。结果:相比原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织,正常组织中FOXM1 mRNA表达较低、miR-149-3p表达较高。荧光素酶报告实验表明miR-149-3p序列上有FOXM1的结合位点。相比空白对照组(Ctrl),miR-149-3p mimic组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。相比Ctrl组,pLV-FOXM1组细胞生长受到促进,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。相比pLV-FOXM1组,miR-149-3p+pLV-FOXM1组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:miR-149-3p可以靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长侵袭和迁移,其机制与调控细胞生长侵袭和迁移的蛋白有关。     

miR-19a介导JAK/STAT信号通路促进卵巢癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-19a对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 选取人卵巢癌细胞株SKOV3、正常人卵巢表面上皮细胞HOSEpiC以及30例上皮卵巢癌组织和20例癌旁组织为研究对象.对SKOV3细胞株进行转染,分为NC组(未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-19a组(转染miR-19a mimic).MTT检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期;采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌中miR-19a、JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3基因mRNA水平;Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平.结果 卵巢癌组织miR-19a水平高于正常卵巢组织,SKOV3细胞株中miR-19a表达水平高于HOSEpiC细胞(P<0.01).转染后48 h和72 h,与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞增殖能力明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞克隆数目、S期细胞百分比明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3基因mRNA表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).结论 卵巢癌组织miR-19a高表达,miR-19a过表达可能通过Akt/mTOR通路促进卵巢癌细胞的增殖.     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

circSLC8A1通过调控miR-301a-3p表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨circSLC8A1对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 收集本院2016年1月至2020年12月37例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,RT-qPC检测circSLC8A1和miR-301a-3p表达水平。卵巢癌细胞株SKOV3随机分为pcDNA-circSLC8A1组、pcDNA组、anti-miR-301a-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-circSLC8A1+miR-301a-3p组、pcDNA-circSLC8A1+miR-NC组。分别采用CCK-8法检测细胞活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circSLC8A1和miR-301a-3p的靶向关系。结果 卵巢癌组织中circSLCA81表达水平低于癌旁组织,miR-301a-3p表达水平高于癌旁组织（P<0.05）。过表达circSLC8A1或抑制miR-301a-3p表达,细胞活性降低,细胞克隆形成数减少,细胞凋亡率及Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白表达水平升高（P&...     

miR-107抑制胶质瘤细胞的体外增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-107对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法运用RT-qPCR检测人正常的星形胶质细胞系NHA、神经胶质瘤细胞系U87、A172、U251中miR-107和FOXK1的表达;将细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-107组(转染miR-107 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXK1组(转染si-FOXK1)、miR-107+pcDNA3.1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1)和miR-107+pcDNA3.1-FOXK1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1-FOXK1);用脂质体法分别转染至U87细胞;CCK-8法检测细胞的增殖;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测细胞中FOXK1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常的星形胶质细胞NHA相比,神经胶质瘤细胞U87、A172、U251中miR-107表达明显下调,FOXK1表达明显上调(P<0.05);过表达miR-107、敲减FOXK1均可抑制U87细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-107可抑制野生型FOXK1的细胞荧光活性,并负向调控FOXK1的表达;过表达FOXK1可逆转miR-107对U87细胞增殖迁移侵袭的抑制作用。结论 miR-107抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制可能与靶向负调控FOXK1有关,将可为胶质瘤的诊断和治疗提供靶向治疗的依据。     

circAGFG1/miR-487a-3p轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的实验研究

目的 探讨circAGFG1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。方法 RT-qPCR检测31例卵巢癌患者的癌组织和对应的癌旁组织中circAGFG1和miR-487a-3p表达。体外培养SKOV3细胞,分别转染circAGFG1小干扰RNA、miR-487a-3p模拟物或抑制剂后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法对细胞迁移和侵袭进行检测,Western blot对细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cadherin蛋白表达进行检测。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-487a-3p调控关系。结果 circAGFG1在卵巢癌组织中表达升高,miR-487a-3p表达降低。下调circAGFG1或上调miR-487a-3p阻碍SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。circAGFG1在SKOV3细胞中靶向负调控miR-487a-3p表达。敲减miR-487a-3p逆转下调circAGFG1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。结论 下调circAGFG1可能通过靶向上调miR-...     

LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18...     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

miR-129-5p靶向KLK7对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨高表达miR-129-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3细胞与人正常卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达。在卵巢癌SKOV3细胞中瞬时转染miR-129-5p模拟物及无意义序列,采用CCK8法及Transwell实验检测各组细胞的增殖能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR检测miR-129-5p和KLK7的相对表达水平;Western blot检测各组细胞中KLK7蛋白表达;Targetscan 7.2和双荧光素酶实验分析miR-129-5p与KLK7的靶向关系。结果 miR-129-5p在卵巢癌SKOV3细胞中的表达低于人正常卵巢上皮细胞(P<0.05),过表达miR-129-5p降低SKOV3细胞中KLK7 mRNA和蛋白的表达,Targetscan 7.2网站分析及双荧光素酶实验证实KLK7为miR-129-5p的靶基因,过表达miR-129-5p抑制SKOV3细胞增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 过表达miR-129-5p可通过靶向调控KLK7抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭。     

miR-124-3p 靶向WISP1 对TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-124-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法:分离培养大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞,用100 ng/ml的TNF-α处理作为TNF-α组,正常培养的细胞作为对照组(Con);将miR-NC、miR-124-3p、anti-miR-NC、anti-miR-124-3p转染至大鼠脑动脉血管平滑肌细胞中,分别记为miR-NC组、miR-124-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-124-3p组;将miR-NC、miR-124-3p、si-NC、si-WISP1转染至血管平滑肌细胞后再用100 ng/ml的TNF-α处理,记为TNF-α+miR-NC组、TNF-α+miR-124-3p组、TNF-α+si-NC组、TNF-α+si-WISP1组;将miR-124-3p分别与pcDNA、pcDNA-WISP1共转染至血管平滑肌细胞后再用100 ng/ml的TNF-α处理,记为TNF-α+miR-124-3p+pcDNA组、TNF-α+miR-124-3p+pcDNA-WISP1组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-124-3p和WISP1 mRNA表达水平;Western blot检测WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测miR-124-3p和WISP1的靶向关系。结果:与对照组相比,TNF-α处理的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞中miR-124-3p表达水平显著降低,WISP1表达水平显著升高,细胞活性显著升高,迁移、侵袭数显著升高,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,p21表达水平显著降低(P0.05)。miR-124-3p过表达和干扰WISP1表达可抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-124-3p靶向调控WISP1,WISP1过表达逆转了miR-124-3p过表达对TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-124-3p可抑制TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调WISP1有关。