淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】(1)体外研究:用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况及信号通路蛋白Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。(2)体内研究:建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】选择低细胞毒性10、20、50μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组(淫羊藿苷0μmol/L)比较,淫羊藿苷10、20、50μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低(P 0.05),E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高(P 0.05),均呈剂量依赖性。淫羊藿苷(10μmol/L)可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降(P 0.05)。【结论】淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

淫羊藿苷对基因转染PC12细胞α-突触核蛋白过表达和泛素-蛋白酶体系统的影响

目的观察淫羊藿苷在体外试验中对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)及相关蛋白表达的影响及其作用机制。方法 不同浓度的淫羊藿苷与转染α-Syn基因PC12细胞共孵育24h,应用RT-PCR法检测各组细胞α-Syn mRNA含量,Western免疫印迹法检测细胞中α-Syn、泛素化蛋白羧基端水解酶(Ubiquitin C-terminal hydrolase protein,UCH-L1)和Parkin蛋白的表达,观察淫羊藿苷对它们的影响。结果 淫羊藿苷浓度40～80μmol/L与转染α-Syn基因细胞孵育24h,能够明显减少模型细胞中α-SynmRNA含量,抑制Syn蛋白表达和聚集,增强UCH-L1和Parkin蛋白表达。结论 淫羊藿苷在体外对基因转染细胞的α-Syn过表达和聚集有明显抑制作用,其作用机制与抑制α-Syn合成和增强α-Syn降解有关。     

阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注PERK/elfR2a通路及Caspase-3表达的影响

目的 研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/eIFR2a通路及Caspase-3在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制及阿托伐他汀对其的影响。方法采用大脑中动脉线栓塞法制作大鼠脑缺血再灌注模型;随机分为缺血再灌注组、假手术组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀+Salubrinal抑制剂组,大体标本采用TTC染色,釆用Western-blot法检测PERK、Caspase-3蛋白表达及eIF2a蛋白磷酸化。结果与假手术组相比,大鼠缺血再灌注后PERK蛋白表达及eIF2a 的磷酸化增加, Caspase-3表达的活性增强(P<0.01);阿托伐他汀干预可以减轻PERK蛋白表达及eIF2a蛋白磷酸化(P<0.05)。给予特异性eIF2a磷酸化抑制剂Salubrinal后可抑制eIF2a的磷酸化及Caspase-3表达的活性(P<0.05),对PERK蛋白表达无影响。形态学上从TTC染色提示:在缺血再灌注组TTC染色可见大片脑梗死组织。Salubrinal抑制剂及阿托伐他汀干预后脑梗死体积明显缩小(P<0.05)。结论内质网应激通过PERK/eIF2a/Caspase-3途径促进细胞凋亡,阿托伐他汀干预可以减轻脑缺血再灌注损伤。     

内质网应激参与高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的作用机制

目的 探讨内质网应激是否参与高磷诱导血管平滑肌细胞钙化及其作用机制。方法 体外培养人胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,分为对照组、正常磷组（1.3 mmol/L磷,NP组）、高磷组（2.6 mmol/L磷,HP组）,培养10 d。茜素红染色后观察细胞钙盐沉积情况;实时定量PCR和Western blotting检测肌醇需求因子1 (IRE1)、RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、内质网应激标志蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、骨形态发生蛋白2 (BMP-2)及Runt相关转录因子2 (Runx-2)的表达;应用CHOP siRNA转染高磷培养VSMC敲低CHOP表达后,检测BMP-2及Runx-2表达;应用JNK抑制剂SP600125 (DMSO溶解),终浓度10μmol/L预处理30 min后加入高磷培养基培养10 min,茜素红染色观察钙沉积情况。结果 与对照组及NP组比较,HP组内质网应激蛋白（IRE1、PERK、JNK、CHOP）及钙化蛋白（BMP-2、Runx-2）均明显增高（均P <0.01）。敲低CHOP表达后钙化蛋白...     

槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激和细胞凋亡

目的 探讨槲皮素改善ADMA引起脐静脉内皮细胞凋亡的可能机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,应用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,应用Western blot法检测内质网应激蛋白PERK磷酸化水平及IRE1的蛋白表达量,用RT-PCR检测ATF4及CHOP mRNA表达量。结果 ADMA诱导脐静脉内皮细胞凋亡,槲皮素可以抑制ADMA引起的PERK磷酸化及IRE1蛋白表达,并可以减少ATF4及CHOP mRNA量,继而改善ADMA引起的细胞凋亡。结论 槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激继而抑制细胞凋亡。     

淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对内皮细胞eNOS表达和NOS活性的影响

目的：用过表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）的猪动脉内皮细胞（porcine aorta endothelial, PAE）作为研究对象,探讨淫羊藿苷(icariin)和淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ)对PAE中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS)表达和一氧化氮合酶(nitric oxide sythase, NOS)活性的影响及其可能机制。方法：利用PAE中转染EGFR并筛选稳定株, 分别用12.5 μmol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞48 h,观察各组细胞eNOS的表达变化;另在淫羊藿苷或淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞时,分别加入表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）共同处理细胞,观察各组细胞eNOS的表达变化;检测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理前后PAE和PAE-EGFR细胞NOS的酶活性改变,并以西地那非作为对照。结果：Western blot显示PAE-EGFR细胞表达eNOS的基础值要比PAE细胞高,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理时PAE和PAE-EGFR细胞株中都能引起eNOS表达增加,并且在PAE-EGFR稳定株中eNOS的表达量比PAE细胞明显提高(P<0.01);在表达EGFR的PAE-EGFR细胞中,当淫羊藿次苷Ⅱ的浓度达到10^-8 mol/L时,NOS活性增加到(15.37±1.49) u/mg ,比PAE细胞高4.66 u/mg。在药物浓度达到10^-7,10^-6和10^-5 mol/L时,淫羊藿次苷Ⅱ对PAE-EGFR细胞NOS活性的影响较PAE细胞显著增加(P<0.01);淫羊藿苷也能增加PAE和PAE-EGFR细胞的NOS酶活性,但是其效果比较淫羊藿次苷Ⅱ组平均低20%,而西地那非没有显著影响NOS酶活性。 结论：淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ可上调PAE和PAE-EGFR细胞eNOS的表达和提高NOS活性,对血管内皮细胞功能可能具有改善作用,而且淫羊藿次苷Ⅱ的效果优于淫羊藿苷,其作用机制可能与激活PAE细胞的EGF-EGFR信号通路有关。     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化相关因子的体外研究

目的 探究淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化的影响。方法 分离、培养SPF级SD雌性大鼠脂肪干细胞后,流式细胞术进行表面标志物检测,然后通过茜素红、油红O染色观察脂肪干细胞的成骨分化及成脂分化。将第3代脂肪干细胞分为空白组、白藜芦醇组(100μmol/L)、淫羊藿苷Ⅰ～Ⅳ组(1、10、50、100μmol/L),培养21 d后对脂肪干细胞LIM结构域蛋白Ajuba(Ajuba)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)进行荧光定量RT-PCR、Western-blotting检测。结果 培养至第3代的脂肪干细胞表面标志物表现为CD90(95%)、CD34(9.26%)。成骨诱导21 d时茜素红染色可见橘红色钙化结节,成脂诱导21 d时油红O染色可见红色脂滴。白藜芦醇与100μmol/L淫羊藿苷均能促进脂肪干细胞Runx2、ALP基因及蛋白表达,且与白藜芦醇比较,同浓度的淫羊藿苷呈现出显著的促进效应(P<0.01,P<0.05)。白藜芦醇及各浓度淫羊藿苷均可抑制Ajuba基因及蛋白表达,且与100μmol/L白藜芦醇比较,50、100μmol/L淫羊藿苷抑制A...     

车叶草苷通过内质网应激促进胰腺癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)通过内质网应激(ERS)诱导胰腺癌(PC)细胞凋亡的机制。方法:选取人胰腺癌PANC-1细胞作为研究对象。将PANC-1细胞按照随机数字表法分为4组，分别为对照组、ASP组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyric acid, 4-PBA)组和ASP+4-PBA组。采用CCK-8检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移，蛋白质印迹法检测细胞中活化转录因子6(ATF6)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇依赖性激酶1α磷酸化蛋白(p-IRE1α)相对表达水平。结果:随着ASP浓度的增加，PANC-1细胞增殖率呈下降趋势。与对照组相比，ASP组迁移细胞数量降低，细胞凋亡率增加，ATF6、CHOP、cleaved-caspase-3、PERK及p-IRE1α蛋白相对表达水平上升，差异均有统计学意义(P<0.05)。与ASP组相比，ASP+4-PBA组细胞迁移数量增多、细胞凋亡...     

淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfαl)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响.方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞.取第3-5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况.分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性.用real-timePCR法检测10～(-6)mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA表达的改变.结果:10~(-8)～10~(-4)moL/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10~(-6)mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达而促进成骨细胞的分化.     

淫羊藿苷通过调节PI3K/AKT/mTOR通路对小鼠黑色素瘤B16细胞生物学行为及作用机制研究

目的:研究淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响及作用机制。方法:小鼠黑色素瘤B16细胞经过不同浓度淫羊藿苷(0、10、20、50μmol/L)处理后,培养24 h,检测细胞增殖、形态、凋亡、迁移能力情况,并采用Western blot法检测细胞磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Ak/mTOR)通路相关蛋白的表达情况。结果:小鼠黑色素瘤B16细胞经过淫羊藿苷处理后,随着给药浓度的增加,抑制率、凋亡率均显著增加(P<0.05)。经Hoechst 33258染色发现空白对照组(0μmol/L)细胞染色均匀且颜色较淡,而含有淫羊藿苷细胞细胞则颜色较浓,且淫羊藿苷浓度越高,染色质凝集程度越明显。B16细胞划痕愈合率、Transwell膜底面的细胞计数随着淫羊藿苷浓度增加均显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果显示随着给药浓度的增加,基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-9, MMP-2)、mTOR表达量显著降低,而PI3K/pPI3K、AKT/pAKT比值显著增加,组间比较差异显著(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可有效抑制小鼠黑色素瘤B16细胞PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞迁移功能,最终发挥抗肿瘤效果。     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

G1对EA.hy926内皮细胞内质网应激的抑制作用

【摘要】目的：观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的eahy926内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的影响。方法：选用eahy926内皮细胞为研究对象,分为3组：正常对照组（Con,17.51mmol/L）、高糖组（HG,33.3mmol/L）、高糖 G1组（HG G1,HG 1umol/L G1）,利用流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测BIP和CHOP的mRNA表达变化。结果：HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达上调（P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达下调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达上调（P<0.01）,HG G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达下调（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达上调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达下调（P<0.01）。结论：GPR30受体激动剂G1可抑制eahy926内皮细胞内质网应激。     

20(S)-PPD促内质网应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:观察原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)中20(S)-PPD对人脐静脉内皮细胞凋亡的作用并探讨其作用机制。方法:20(S)-PPD处理人脐静脉内皮细胞,MTT法检测细胞增殖,DAPI染色检测细胞核形态变化,Calpain活性检测试剂盒检测胞质Calpain活性,内质网荧光探针3,3-二己基恶羰花青碘化物染色检测细胞内质网形态变化,实时定量PCR检测拼接XBP-1以及CHOP mRNA水平,Western blot检测Caspase-3、Caspase-8、bax、bcl-2、ATF-6、磷酸化IRE1、磷酸化PERK、ATF-4以及CHOP蛋白水平。结果:20(S)-PPD 10μmol/L以上处理人脐静脉内皮细胞6 h或5μmol/L以上处理24 h均能显著抑制其细胞活力。20(S)-PPD 10μmol/L处理人脐静脉内皮细胞6 h后,DAPI染色发现细胞出现明显染色质固缩及核碎片;内质网荧光探针3,3-二己基恶羰花青碘化物染色显示内质网形态发生显著变化,出现内质网碎片并且在核周聚集成颗粒;胞质Calpain活性未见显著改变;Western blot检测到凋亡相关蛋白Caspase-3活性片段,Caspase-8表达水平无显著变化且未检出其活性片段,bax表达未见显著改变,而bcl-2表达显著下调,ATF-6表达未见显著改变,磷酸化IRE1显著增加;实时定量PCR结果显示拼接XBP-1s mRNA显著增加,磷酸化PERK及ATF-4显著增加,CHOP mRNA及蛋白水平显著增加。结论:20(S)-PPD通过内质网应激激活IRE1与PERK途径,进一步下调bcl-2而导致人脐静脉内皮细胞凋亡。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞骨向分化基因表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)骨向分化基因表达的影响。方法:体外培养hPDLCs,取第5代细胞,加入浓度为0.01 mg/L的淫羊藿苷溶液,空白对照组为单纯成骨培养基,21天茜素红染色观察淫羊藿苷对hPDLCs成骨作用;Q-PCR定量分析第2、4、6天淫羊藿苷对hPDLCs成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原及骨钙素(osteocalcin,OC)基因表达的影响。结果:第21天茜素红染色显示加入淫羊藿苷组较空白对照组矿化结节形成较多;第2、4、6天时,淫羊藿苷组促进ALP、OC mRNA的表达,第6天时达到高峰,与对照组比较差异有统计学意义(20.15±6.67 vs.7.90±0.71,4.13±0.56 vs.3.55±0.08,P<0.01)。第2天时,Ⅰ型胶原表达量最高,后逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:淫羊藿苷具有促进hPDLCs骨向分化的作用,促进成骨基因的表达。     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体（ER）与其作用机制的关系。方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达。结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10^?9～1×10^?6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780（1×10^?6 mol/L）所拮抗。与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10^?7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制。淫羊藿苷和淫羊藿素1×10^?7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达（P＜0.01）。结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的。     

同型半胱氨酸经PERK磷酸化激活CHOP-ERO1α通路介导心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对心肌的损伤作用及其可能机制.方法 选用H9C2心肌细胞,分别用不同浓度Hcy、4-苯基丁酸(4-PBA)干预细胞.将H9C2细胞分为对照组、H400组、H400P2组,对照组使用普通培养基,H400组加入400μmol/L的Hcy,H400P2组在H400组基础上加入2 mmol/L的4-PBA.CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色评估细胞凋亡,免疫细胞化学检测内质网氧化还原酶1α(ERO1α)表达,Western blot检测蛋白表达差异.结果 Hcy对H9C2心肌细胞损伤呈浓度依赖性(F=2 039.958,P＜0.01).与对照组比较,H400组细胞凋亡分数及胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PEPK(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、ERO1α表达均增加(P＜0.01);H400P2组细胞凋亡分数及PERK、p-PERK、CHOP、ERO1α表达均有所下降,与H400组比较均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Hcy通过内质网应激机制介导心肌细胞凋亡.     

淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的:检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。方法:分别用10、20、40ng/mL的淫羊藿苷作用MC3T3-E1细胞,观察细胞生长情况;MTT法测绘细胞生长曲线;FCM法测定细胞生长周期;免疫细胞化学方法和Western bloting测定细胞BMP-2蛋白表达情况。结果:淫羊藿苷组可使细胞的生长曲线明显上移,S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少以及BMP-2蛋白表达量增加,其中20ng/mL组作用更为显著,各组间比较有显著差异(P(0.01)。结论:淫羊藿苷可以促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞BMP-2的表达。     

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的 研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法 构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白的表达。结果 选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降（P<0.01）,凋亡率明显上升（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调（P<0.01）。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升（P<0.01）,凋亡率明显下降（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调（P<0.01）。结论 滋阴明目方含药血清可以...