葛根素在体外对成骨细胞增殖和分化的影响

背景：成骨细胞是骨代谢平衡过程中的关键功能细胞,植物雌激素对成骨细胞的增殖和分化有重要影响,葛根素作为植物雌激素的一种,在体外以较大范围浓度对成骨细胞功能的影响仍少见报道。 目的：观察葛根素在体外对大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响。 方法：取新生Wistar大鼠的颅盖骨,对成骨细胞进行分离、培养、纯化及鉴定。将培养的成骨细胞随机分为对照组、10-3~10-10 mol/L不同浓度葛根素组,观察不同浓度葛根素对体外培养的成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性表达的影响。 结果与结论：细胞经葛根素处理后10-5~10-9 mol/L组成骨细胞增殖活性较对照组明显增加(P < 0.05),第3天增殖最快(P < 0.01),第4天开始下降;诱导第4天,各组碱性磷酸酶活性与对照组相比,差异均有显著性意义(P < 0.01),其中以10-6 mol/L组最显著(P < 0.01)。然而葛根素10-3 mol/L组成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性表达较对照组均减少(P < 0.05)。提示葛根素对成骨细胞的影响存在剂量依赖性,并且具有双向性,即在低浓度(10-5~10-8 mol/L)下刺激骨形成;在高浓度(10-3~10-4 mol/L)下抑制骨形成。     

雌激素受体基因ERβ与小鼠成骨细胞的增殖和分化

背景：雌激素受体ERs表达于所有关系到骨形成和骨吸收的细胞成分中。 目的：观察雌激素受体ERβ对成骨细胞增殖、分化能力的调控作用。 方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为对象,设立3组：实验组转染雌激素受体ERβ RNAi载体、阴性对照组转染ERL RNAi载体、空白对照组不进行转染,3组在相同条件下培养。采用MTT法绘制各组细胞的生长曲线;流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期。 结果与结论：实验组成骨细胞的增殖能力明显高于空白对照组和阴性对照组,G1期细胞百分率明显少于空白对照组和阴性对照组,而S期和G2期细胞百分率明显高于空白对照组和阴性对照组(P均< 0.05)。根据雌激素受体ERβ沉默后检测的结果可以反向推断,ERβ的表达对成骨细胞的增殖、分化具有抑制作用。     

中药促成骨细胞增殖和分化的机制与作用

背景：中药促进成骨细胞增殖和分化的效果已经得到肯定,其在细胞分子水平的药理机制研究取得了很大进展。 目的：对国内外应用中药诱导成骨细胞增殖和分化的药理机制研究进展作一综述。 方法：应用计算机检索CNKI,Pubmed和sciencedirect数据库中2001-01/2010-12关于中药促进成骨细胞增殖和分化机制研究的文章,在标题和摘要中以“中药,成骨细胞,增殖,分化,机制”或“Chinese herbs,osteoblast,proliferation,differentiation, mechanism”为检索词进行检索。初检得到176篇文献,最终选择30篇文献进行综述。 结果与结论：中药通过对成骨细胞基因、信号通路、细胞因子和OPG/RANK/RANKL系统的调控,以及类雌激素样作用促进成骨细胞增殖和分化,其作用机制明确,将中药引入骨组织工程领域具有良好的发展前景。 关键词：中药;成骨细胞;增殖;分化;机制;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.037     

miR-99a通过下调RRM2抑制人子宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-99a与核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)的靶向关系,并分析二者对人子宫颈癌(CC)HeLa细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。方法 将HeLa细胞,分为对照组(control)、阴性对照组(inhibitor-NC)、抑制miR-99a表达组(miR-99a-inhibitor)、共转染组(RRM2-siRNA+miR-99a-inhibitor)。MTT法、平板集落实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;Western blot检测RRM2、细胞增殖核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin定位及表达;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a与RRM2靶向关系;RT-qPCR检测细胞中miR-99a、RRM2 mRNA水平。结果 下调miR-99a表达,可增高HeLa细胞增殖率(100.00比128.86±4.25,P<0.05);上调集落形成率、划...     

三种波形磁场对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的：研究不同波形磁场辐照，对离体大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法：用矩形、三角形和正弦三种典型波形磁场辐照离体成骨细胞。结果：频率15Hz，幅值5mT，矩形磁场促进细胞增殖（P〈0．01），抑制细胞分化（P〈0．01）;正弦磁场抑制细胞增殖（P〈0．01），促进细胞分化（P〈0．01）；三角彤磁场对细胞增殖和分化的影响尤显著性差异．结论：除强度和频率窗外，还需考虑波形的影响。     

中药含药血清对体外成骨细胞增殖和分化影响的实验研究进展

近年来不少学者从细胞分子生物学角度开展了中医药对成骨细胞(OB)影响的实验研究,为中医药防治骨质疏松提供了分子生物学理论依据,其中运用体外成骨细胞培养和中药血清干预实验,研究骨质疏松的中药防治是常用的方法之一,也是中药防治骨质疏松症研究热点之一,本文主要回顾了含药血清对成骨细胞的增殖与分化方面的相关文献,这些研究对中药防治骨质疏松症奠定了基础。     

miR-23a/b在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的研究miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌中的表达特征,并探讨其临床意义。方法收集157例非小细胞肺癌手术切除标本及50例癌旁组织标本,采用Real time PCR方法检测miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌及其癌旁组织中的表达,分析二者表达的相关性,并探讨其表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌组织中的表达水平均高于癌旁肺组织,二者在非小细胞肺癌组织中表达呈正相关(r=0.351,P0.001)。miR-23a和miR-23b联合高表达与淋巴结有无转移(P0.001)、远处转移(P=0.001)及临床分期(P=0.002)相关,而与年龄、性别、组织类型及组织分化程度无显著相关性(P0.05)。KaplanMeier分析显示miR-23a和miR-23b联合高表达组患者生存期显著低于单独高表达组或联合低表达组(P=0.009),Cox风险比例模型分析显示miR-23a和miR-23b联合高表达为非小细胞肺癌患者的危险因素。结论 miR-23a和miR-23b在非小细胞肺癌中异常高表达可能是潜在的肺癌预后分子标志物。     

微小RNA miR-181a促进慢性粒细胞白血病K562细胞分化

目的探讨微小RNA miR-181a对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的作用。方法构建了miR-181a过表达的慢病毒载体,采用实时定量PCR方法检测CD235a和γ球蛋白的表达,评价K562细胞向红系分化的程度,检测CD61和CD41的表达,评价K562细胞向巨核系分化的程度,采用CCK实验检测细胞增殖情况。结果氯高铁血红素佛及波酯诱导后,miR-181a在K562细胞中过表达能够增强CD235a、γ球蛋白、CD61和CD41的表达水平(P0.05);miR-181a过表达能够明显抑制K562细胞的增殖(P0.05)。结论 miR-181a过表达促进K562细胞的分化并抑制其细胞的增殖。     

葛根素可促进老年女性骨质疏松症患者成骨细胞的增殖

背景：近年来,葛根素作为植物雌激素其抗骨质疏松作用对实验动物及成骨细胞的研究较多,但对老年骨质疏松症患者成骨细胞作用的研究甚少,缺乏实验资料。 目的：观察葛根素对体外培养老年女性骨质疏松症患者成骨细胞增殖的影响。 方法：选择老年女性骨质疏松症股骨颈骨折行人工股骨头置换患者,采集术中取下的股骨颈松质骨,采用骨组织块培养法原代培养松质骨成骨细胞,将细胞传代至所需数量。对照组给予不含葛根素的培养液,0.01,0.1,1 μmol/L葛根素组分别给予含相应浓度葛根素的培养液。成骨细胞与不同浓度葛根素共培养1,3,5 d,观察成骨细胞增殖情况。 结果与结论：共培养不同时间点,0.01-1.00 μmol/L的葛根素随浓度增加,成骨细胞增殖活性不断增强(P < 0.05);培养第3 天,各浓度葛根素组细胞吸光度值均最高。结果提示0.01,0.1,1 μmol/L的葛根素可呈浓度依赖性促进老年女性骨质疏松症患者成骨细胞增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

缺氧大鼠成骨细胞增殖、分化及基因表达

背景：研究表明,低氧会引起骨折延迟愈合或不愈合,骨密度减低,使骨质疏松、骨折等疾病的发病率升高。成骨细胞是骨形成、生长和发育主要的功能细胞。 目的：观察缺氧对体外培养成骨细胞增殖、分化及基因表达的影响。 方法：选用新生Wistar大鼠颅盖骨,使用胰酶-胶原酶序贯消化法获取成骨细胞,进行体外传代培养及鉴定。在缺氧培养下应用MTT法测定成骨细胞增殖率,对硝基苯磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶活性,反转录-聚合酶链反应法测定成骨细胞内骨钙素及Ⅰ型胶原的表达。 结果与结论：缺氧具有抑制成骨细胞增殖,降低碱性磷酸酶活性及下调大鼠成骨细胞中Ⅰ型胶原α1、骨钙素基因表达的作用,随缺氧时间的增加作用更加明显。提示缺氧可通过抑制成骨细胞增殖、分化成熟及下调Ⅰ型胶原α1、骨钙素基因表达而降低成骨能力,从而促进骨质疏松的发生。     

PGC1a通过miR-23a抑制成肌细胞炎症因子分泌减少废用性肌肉萎缩

目的 研究PGC1a通过miR-23a抑制成肌细胞炎症因子分泌减少废用性肌肉萎缩的相关机制。方法 40只野生型小鼠随机平均分为空白对照组（Control组）、生理盐水+后肢神经固定组（Immobilization组）、过表达PGC1a+后肢神经固定组（OE-PGC1a+Immobilization组）和抑制PGC1a+后肢神经固定组（Sh-PGC1a+Immobilization组）。检测小鼠肌肉组织细胞大小、肌萎缩标志基因Atrogin-1和MuRF-1,以及TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等炎症因子和神经营养因子NT-3的表达。进一步采用生物信息学方法预测PGC1a与miR-23a的上游启动子区域存在结合潜能,并用染色质免疫共沉淀确证。在成熟肌管细胞中转染过表达和抑制PGC1a慢病毒,检测miR-23a与炎症因子表达变化。在成熟肌管细胞中转染miR-23a mimic和miR-23a inhibitor后观察炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8表达变化。结果 Immobilization组小鼠肌肉组织中PGC1a相对表达水平显著高于Control组（P<...     

茶多酚对脂多糖刺激下成骨细胞增殖分化的影响

背景：研究表明,茶多酚在牙周炎等疾病的研究中能发挥抗炎、抗氧化作用。目的：探讨茶多酚在脂多糖刺激下对小鼠成骨细胞增殖分化及氧化应激的影响。方法：体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分4组处理：对照组常规培养;脂多糖组加入10μg/mL脂多糖,茶多酚组加入1μg/mL茶多酚,联合组加入10μg/mL脂多糖+1μg/mL茶多酚。采用MTT法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性,偶氮偶联法检测细胞碱性磷酸酶染色程度,钙检测试剂盒检测细胞钙沉积量,超氧化物试剂盒检测细胞超氧化物含量,丙二醛试剂盒检测细胞丙二醛含量。结果与结论：(1)与对照组相比,脂多糖组成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性、钙沉积量降低(P <0.05),碱性磷酸酶染色程度降低(P <0.01),超氧化物和丙二醛含量增加(P <0.05);茶多酚组成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性、钙沉积量升高(P <0.05),碱性磷酸酶染色程度提高(P <0.01),超氧化物和丙二醛含量减少(P <0.05);(2)与脂多糖组相比,联合组成骨细胞增殖活性、钙沉积量升高(P <0.0...     

低氧条件下成骨细胞的增殖与分化

背景：低氧可通过多种途径作用于成骨细胞影响骨代谢,对骨生成、骨愈合等产生负面影响。 目的：观察低氧对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化的影响,并探讨其分子机制。 方法：分离培养新生Wistar大鼠颅盖骨成骨细胞,取第2代细胞分别在常氧(体积分数20%O₂)与低氧(体积分数3%O₂)条件下培养。 结果与结论：低氧组成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性、骨钙素水平及茜素红结节形成数量均明显低于常氧组(P < 0.05或  P < 0.01),说明缺氧条件对成骨细胞的增殖、分化及功能有抑制作用;低氧组骨形成发生蛋白2及Runx2表达低于常氧组(P < 0.05或P < 0.01),说明低氧条件下大鼠成骨细胞Runx2、骨形成发生蛋白2的表达受抑制。结果表明低氧可通过抑制大鼠成骨细胞的Runx2、骨形成发生蛋白2的表达进一步抑制成骨细胞的增殖与分化。     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

基于Toll样受体4通路研究黄芪甲苷促进成骨细胞增殖分化的作用

目的研究黄芪甲苷促进成骨细胞增殖分化的作用,并初步探讨作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为对照组和实验组,对照组正常培养成骨细胞,实验组采用不同浓度黄芪甲苷干预成骨细胞,并孵育不同时间,MTT法观察对细胞增殖的影响,检测碱性磷酸酶(ALP)活性观察对细胞分化的作用,Western blot检测成骨细胞Toll样受体-4(TLR-4)蛋白表达。结果与对照组比较,随着黄芪甲苷浓度的增加,成骨细胞活性或ALP活性逐渐上升,并趋于稳定。延长黄芪甲苷作用时间,低浓度组细胞活性显著升高,而各组细胞ALP活性均显著上升。与对照组比较,实验组细胞中TLR-4表达显著下降。结论黄芪甲苷能够促进成骨细胞增殖和分化,其作用机制可能与TLR-4通路有关。     

miR-98-5p促进成骨细胞增殖和分化的可能及机制

背景:miRNA-98-5p可抑制高迁移率族AT HOOK蛋白2(high mobility group AT-HOOK 2,HMGA2).磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(phosphatidylinositol 3-kinase/alkaline phosphatase/glycogen synt...     

miR-3960对成骨细胞分化的影响**☆

背景：成骨细胞的分化成熟过程涉及多种激素和细胞因子对成骨细胞分化相关基因表达的调控,近来发现多个微小RNAs也参与了这一调控过程。 目的：观察miR-3960在小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的作用。 方法：将miR-3960表达载体pSilencer4.1-miR-3960转染骨髓基质细胞,构建miR-3960过表达细胞模型,随后予300 μg/L骨形态发生蛋白2诱导分化,观察成骨细胞分化指标变化。 结果与结论：转染pSilencer4.1-miR-3960能够在细胞中稳定地高表达miR-3960。miR-3960过表达促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的碱性磷酸酶活性增高和骨钙素分泌,增加细胞中的钙沉积量。抑制miR-3960降低骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的碱性磷酸酶活性,减少骨钙素分泌,降低钙沉积量。表明miR-3960可以促进成骨细胞分化。     

mTORC1 信号促进前成骨细胞MC3T3-E1 的分化成熟

目的:研究mTORC1 信号对前成骨细胞MC3T3-E1 向成骨细胞分化成熟的调控作用。方法:通过向MC3T3-E1 转染pcDNA3.1-Raptor,对mTORC1 信号相关蛋白Raptor 进行过表达。向MC3T3-E1 转染Raptor siRNA,对mTORC1 信号蛋白Raptor 进行基因沉默。通过Real-time PCR 方法测定Raptor 的基因表达,通过蛋白免疫印迹法测定Raptor 蛋白水平,并通过茜素红染色检测成骨矿化情况,以测定成骨分化程度。通过Real-time PCR 检测成骨分化指标的基因表达。结果:与对照组相比,Raptor 过表达组的Raptor mRNA 和蛋白水平明显增加;茜素红染色结果显示Raptor 过表达组染色更深,说明成骨矿化程度更高;荧光定量PCR 结果显示,Raptor 过表达组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均高于对照组。与对照组相比,Raptor siRNA 组的Raptor mRNA 和蛋白水平明显降低;茜素红染色结果显示Raptor siRNA 组染色更浅,说明成骨矿化程度更低;荧光定量PCR 结果显示,Raptor siRNA 组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均低于对照组。结论:mTORC1 信号促进前成骨细胞MC3T3-E1 向成骨细胞分化成熟。     

miR-23a对LPS诱导小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

 目的 探讨miR-23a对LPS诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响。方法 Real-time PCR定量分析LPS刺激不同时间的腹腔巨噬细胞中miR-23a的表达以及瞬时转染miR-23a mimics和inhibitors的腹腔巨噬细胞中IL-1?、IL-6和TNF-?等促炎性细胞因子的表达;ELISA检测mRNA变化明显的细胞培养上清的IL-6的含量。结果 原代腹腔巨噬细胞在LPS刺激后,miR-23a的表达明显下调;在转染miR-23a mimics后,IL-6的表达和分泌明显升高 (P <0.05),但对IL-1?和TNF-?的表达没有明显影响。而转染miR-23a inhibitors后,则IL-6的表达水平受到抑制。结论 LPS刺激原代巨噬细胞可抑制miR-23a的表达;miR-23a可促进炎性细胞因子IL-6的表达,对IL-1?和TNF-?无显著影响。     

小鼠原始生殖细胞体外增殖与分化的研究

目的探讨小鼠原始生殖细胞（PGC）的体外增殖与分化.方法将PGC与睾丸支持细胞（SC）共培养进行PGC的体外增殖.用原代PGC悬浮培养获取类胚体（EB）,将EB贴壁培养,观察自然分化的结果.结果PGC与SC共培养可获得大量PGC集落.组织化学与免疫组织化学法显示,PGC集落碱性磷酸酶（AKP）和阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）均呈阳性表达.将PGC悬浮培养可获得EB,EB贴壁生长后,可自然分化形成上皮样细胞、成纤维样细胞和神经样细胞.结论小鼠PGC与SC共培养能在体外大量增殖.并保持干细胞特性.PGC可形成EB,EB自然分化后大多数形成神经样细胞、其次是上皮样细胞和成纤维样细胞.