黑逍遥散含药血清对PC12两种AD模型的LDH、T-SOD、MDA的影响

目的 研究黑逍遥散含药血清对Aβ25-35/H2O2分别诱导的PC12细胞模型酶学指标的影响.方法 经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞(PCl2细胞)分为空白对照组(常规培养液)、Aβ25-35/H2O2损伤组(常规培养液+Aβ25-35或H2O2)、黑逍遥散含药血清组(常规培养液+Aβ25-35或H2O2+不同浓度的黑逍遥散含药血清).MTT检测细胞各组存活率,比色法检测LDH、T-SOD、MDA酶学指标.结果 Aβ25-35/H2 O2损伤组细胞存活率均显著低于空白对照组(P＜0.05),黑逍遥散血清组细胞存活率均高于损伤组,以10％含药血清组最为明显(P＜0.05);黑逍遥散含药血清可提高LDH、T-SOD活性,降低MDA含量,但以10％组最为明显(P＜0.05).结论 在两次实验中,黑逍遥散均能够不同程度的保护PC12细胞,其机制可能和抗氧自由基有关.     

当归含药血清对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:观察当归含药血清对由Aβ25-35片段毒性诱导的PC12细胞阿尔茨海默病(AD)模型凋亡的影响。方法:利用细胞计数、MTT及流式细胞术测定观察当归含药血清处理由Aβ25-35片段诱导的PC12细胞活力、形态学及细胞凋亡的改变。结果:当归含药血清能增加PC12细胞的活力,降低LDH释放,流式细胞术分析显示,当归含药血清能降低细胞凋亡率。结论:当归含药血清能升高PC12细胞的活力,降低LDH释放,对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。     

阿魏酸对Aβ25-35诱导PC12细胞的保护机制研究

目的:观察阿魏酸对β-淀粉样蛋白25-35(βamyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)模型细胞的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,以不同浓度阿魏酸对抗干预,以MTT比色法观测阿魏酸对AD模型细胞增殖的保护作用,以比色法检测阿魏酸对AD模型细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。用RT-PCR法检测Apbb1,乙酰胆碱酯酶(Ache)基因的表达。结果:阿魏酸对损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,阿魏酸在2 mmol/L时可明显降低模型细胞培养液中MDA、LDH含量,提高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.01)。阿魏酸可下调Apbb1和Ache的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阿魏酸对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力相关,与下调Apbb1、Ache的mRNA表达量相关。     

开心散含药血清对Aβ诱发的PC12细胞损伤的改善作用

目的:观察开心散含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤制造体外AD细胞模型;采集开心散含药血清;MTT法检测开心散对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。结果:开心散含药血清可显著改善Aβ25-35诱导PC12细胞生存活力的下降。结论:开心散含药血清通过提高PC12细胞生存活力而显示了神经保护作用。     

中药复方更年春含药血清及其主要单体对β淀粉样蛋白所致细胞损伤的保护作用

目的:观察中药复方更年春含药血清及其主要单体成分对β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)所致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用Aβ25-35作用PC12细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)细胞模型,相差显微镜观察细胞形态改变。运用中药血清药理学方法制备大鼠更年春含药血清,以四甲基偶氮唑盐法观察更年春含药血清及其主要单体芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗Aβ损伤的作用,采用流式细胞仪观察更年春复方含药血清及复方主要单体对Aβ诱导的PC12细胞凋亡的影响。结果:PC12细胞在Aβ25-35作用后,有活力细胞数目减少,细胞间连接较松,胞浆较暗淡,细胞碎片较多,贴壁细胞欠透明,部分发生皱缩,胞浆中有较多颗粒。Aβ25-35剂量、时间依赖性地抑制PC12细胞的活力。更年春含药血清可以增强PC12细胞活力,不同浓度更年春含药血清培养细胞24、48、72h后,其增强PC12细胞活力均在20%浓度作用最强。更年春复方含药血清及复方主要单体之一的黄连素及主要单体混合液(包括芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷)均有拮抗Aβ对PC12细胞损伤的作用,且均能抑制Aβ诱导的PC12细胞早期凋亡,其中更年春含药血清作用最强,中药单体混合液作用其次,而单体黄连素作用最弱。结论:更年春对AD细胞模型有保护作用,其含药血清作用强于主要中药单体及主要单体的混合液。     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响(英文)

目的:研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35(amyloid beta protein 25-35,Aβ_(25-35))导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)损伤的抗凋亡作用。方法:通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_(25-35)和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达情况。结果:与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖(P0.05)。Aβ_(25-35)对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率(P0.05),导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤有保护作用(P0.05),其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论:更年春含药血清可提高Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响

目的 通过建立Aβ损伤的PC12细胞模型,分析含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响.方法 将PC12细胞离体培养,待细胞进入对数生长期后吸弃培养液,分别加入空白培养液10％、正常脑脊液10％、含安理申脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液5％、含地黄饮子脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液20％,并加培养液补至等量,即成为:空白组、模型组、安理申组、地黄饮子低剂量组、地黄饮子中剂量组、地黄饮子高剂量组,37℃孵育2h.除空白组外各组均加入4μl经老化处理终浓度为10μ mol/L的Aβ25-35,建立AD细胞模型,空白组则加入4μl空白培养液,继续37℃孵育24h.然后收集培养液,离心细胞.检测各组PC12细胞培养液中MDA、SOD、CAT、GSH-Px的含量.结果 地黄饮子能降低Aβ25-35损伤PC-12细胞培养液中的MDA含量,提高PC-12细胞培养液中SOD的活性、提高CAT、GSH-Px的含量即抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,减少自由基对PC-12细胞的损伤.结论 含地黄饮子脑脊液可能通过改善Aβ25-35损伤的PC-12细胞状态,减轻脂质过氧化反应,提高降低的抗氧化酶活性,清除自由基,从而起到保护细胞的作用.     

复方益智颗粒对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的神经保护作用研究

目的:探讨复方益智颗粒对Aβ_(25-35)导致PC12细胞损伤的保护作用,为进一步研究该产品改善阿尔茨海默症记忆功能障碍的作用机制奠定基础。方法:取经不同处理的PC12细胞分为正常对照组、Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+正常血清组、Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组(不同浓度)。正常对照组:DMEM培养基培养48 h,Aβ_(25-35)模型组:DMEM培养基培养24 h后换含20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+正常血清组:正常血清预处理24 h后加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组:不同浓度CYZG含药血清预处理24 h后,加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h。分别采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测PC12神经细胞凋亡情况。结果:Aβ_(25-35)时间依赖性地抑制PC12细胞的生长,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞损伤有保护作用,随着含药血清剂量的增加,细胞的存活率增加,生长抑制率减少。Aβ_(25-35)能显著引起PC12细胞凋亡,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞凋亡有抑制作用。结论:复方益智颗粒对Aβ_(25-35)引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其神经保护作用可能与抑制Aβ_(25-35)引起的PC12细胞凋亡有关。     

补肾益智方含药血清保护Aβ_(25-35)-3损伤PC12细胞的实验研究

目的:探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)老年性痴呆(AD)细胞模型的保护作用。方法:建立PC12细胞培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法,观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果:补肾益智方5%含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5%正常血清,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PC12细胞的神经毒性作用。     

鲜姜有效部位对H2O2致血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用

目的研究鲜姜有效部位对离体培养的血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用。方法取健康大鼠每日ig不同剂量(200、400、800mg/kg)鲜姜有效部位或洛伐他汀(40mg/kg),共4d,取含药血清作为受试药物。采用H2O2建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激的损伤模型,测定细胞存活率、内皮细胞培养液中LDH、MDA水平及细胞中MDA水平。结果鲜姜有效部位含药血清能够显著提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,降低受损内皮细胞培养液中LDH,并减少细胞培养液及细胞中MDA。结论鲜姜有效部位具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻内皮细胞的氧化损伤。     

何首乌不同炮制品含药血清对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究何首乌不同炮制品含药血清对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:将何首乌生品、清蒸品、黑豆汁蒸品按20g/kg剂量小鼠灌胃给药,分别将其含药血清分别分成20%、10%、5%含药血清组,采用MTT法测定其对正常PC12细胞增殖的影响和对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用,并用比色法测定SOD活性、LDH和MDA含量。结果:何首乌不同炮制品含药血清对正常PC12细胞增殖均无明显影响,含何首乌生品、黑豆汁蒸品各浓度血清和10%,5%含清蒸品血清可显著增强受损细胞内SOD活性(P<0.05~0.01);10%,5%含生品血清、含黑豆汁蒸品各浓度血清和10%含清蒸品血清能明显降低受损细胞LDH释放量(P<0.05~0.01);含清蒸品各浓度血清和20%,5%含黑豆汁蒸品血清能降低受损细胞的MDA释放量(P<0.05),而含生品各浓度血清对细胞内MDA水平无显著降低作用。结论:含何首乌黑豆汁蒸品和清蒸品血清对H2O2致PC12细胞损伤有保护作用。     

五味子超临界萃取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:研究五味子超临界萃取物对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,建立Aβ引起的细胞损伤的AD细胞模型,采用MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:五味子超临界萃取物能降低LDH含量,升高细胞线粒体脱氢酶的活性,增加活细胞数。结论:五味子超临界萃取物能减轻Aβ25-35损伤后的PC12细胞的受损程度,保护细胞膜,提高细胞生存活力。     

冠心苏合胶囊含药血清对乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:采用血清药理学方法探讨冠心苏合胶囊对过氧化氢(H2O2)致心肌细胞过氧化损伤的保护作用。方法:血清药理学方法制备含药血清(0.8g生药/kg),体外培养原代乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、空白血清对照组、H2O2损伤模型组、冠心苏合低、中、高剂量(5%,7.5%,10%)干预组,建立H2O2氧化损伤模型,以不同剂量的冠心苏合含药血清进行干预。MTT法测定细胞存活率,并检测各组心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:100μmol/L H2O2处理2h,原代乳鼠心肌细胞存活程度适中,模型制备的重复性较好;与H2O2单纯损伤组和空白血清对照组比较,冠心苏合低、中、高(5%,7.5%,10%)剂量干预组的心肌细胞有较高存活率(P<0.01),且呈现一定的剂量依赖性;与正常细胞相比,H2O2损伤后MDA、LDH含量明显升高,T-SOD、CAT活性降低,而冠心苏合含药血清可剂量依赖性的降低损伤细胞MDA、LDH含量,升高CAT、T-SOD活性,结果具有显著统计学差异。结论:冠心苏合胶囊能够提高H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞存活率;下调MDA、LDH水平,上调CAT、SOD水平,对氧化损伤的心肌细胞起保护作用     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:探讨古方地黄饮子对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为6组:空白对照组、模型对照组、VitE脑脊液组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。待24h细胞贴壁后吸去培养液,分别加入空白培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的Aβ25-35(终浓度为10μmol/L),建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液,继续孵育24h后收集培养液,对培养液进行MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:地黄饮子能升高MTT代谢率,降低LDH释放。结论:地黄饮子能改善Aβ25-35损伤后的PC12细胞生存状态,提高细胞生存活力。     

地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响的实验研究

目的：观察地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响。方法：通过建立β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的AD细胞模型,采用脑脊液药理学方法,观察地黄饮子对PC12细胞培养液中CAT、GSH-Px、SOD、MDA含量的影响,探讨地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力的作用。结果：地黄饮子能提高PC12细胞培养液中SOD、CAT、GSH-Px的活性,降低培养液中MDA的含量。结论：地黄饮子通过提高AD细胞模型的抗氧化能力,对Aβ所致PC12细胞损伤起到较好的保护作用。     

回神颗粒含药脑脊液对Aβ_(25-35)所致PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察回神颗粒含药脑脊液对Aβ_(25-35)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用PC12细胞建立24 h Aβ_(25-35)所致损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,回神颗粒含药脑脊液高、中、低剂量组(20%、15%、5%),空白脑脊液组。将各剂量回神颗粒含药脑脊液与20μmol/L Aβ_(25-35)同时加入PC12细胞中培养24 h后,MTT法检测细胞活力。结果:回神颗粒含药脑脊液各剂量组均能显著提高Aβ_(25-35)所致受损PC12细胞的生存率,与模型组比较,差异均有显著意义(P0.05)。结论:回神颗粒含药脑脊液能减轻Aβ_(25-35)所致的PC12细胞损伤,具有细胞保护作用。     

基于中药血清药物化学及血清药理学方法探讨荭草保护心肌细胞氧化损伤的物质基础

目的:应用中药血清药物化学及血清药理学方法探讨荭草保护H9c2心肌细胞氧化损伤的物质基础。方法:通过比较荭草提取液、给药后含药血清和空白血清的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,寻找荭草的入血成分;建立体外培养的H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,以荭草含药血清对氧化损伤心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响为评价指标,并采用吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)双荧光染色法观察荭草含药血清对H2O2氧化损伤的心肌细胞形态学的影响,研究荭草含药血清对氧化损伤心肌细胞的保护作用。结果:灌胃给予荭草提取液后,从大鼠血清中发现25个移行成分,其中有9个为荭草中的原型成分,16个可能为其在体内转化的代谢产物;与模型组相比,荭草含药血清各剂量组能明显降低氧化损伤心肌细胞LDH漏出率、MDA含量(P<0.05),显著升高T-SOD活性和细胞存活率(P<0.05或P<0.01),有效抑制细胞凋亡。结论:荭草含药血清中的移行成分及其代谢产物可能是荭草保护心肌细胞氧化损伤的物质基础。     

当归芍药散通过调控NF-κB炎性通路改善H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用

目的:研究当归芍药散(Danggui Shaoyaosan,DSS)含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)氧化应激和炎症反应的调控作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定SH-SY5Y细胞存活率构建最佳时间和最佳剂量的H2O2诱导的细胞损伤模型。实验设空白组,模型组,当归芍药散含药血清高、中、低剂量组(2.5%,5%,10%)。采用MTT比色法检测DSS干预后细胞活率,分光光度法测定抗氧化指标丙二醛(MDA),过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达水平,采用免疫荧光检测核转录因子-κB(NF-κB)p65的核移位情况。结果:H2O2浓度为250μmol·L-1干预24 h后SH-SY5Y细胞存活率约55%为最佳造模条件,DSS高、中、低剂量干预后,与模型组比较,细胞活率呈剂量依赖性上升(P<0.05),MDA明显下调(P<0.05),抗氧化指标CAT,SOD和GSH明显上升(P<0.05);H2O2能显著上调SH-SY5Y细胞炎性因子TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表达水平,并介导胞质NF-κB的激活和向核移位,当归芍药散含药血清能呈剂量依赖性抑制NF-κB p65的入核并降低IL-1β,IL-6和TNF-α等细胞炎性因子的mRNA表达水平。结论:当归芍药散含药血清可以显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的氧化损伤通过改善其抗氧化状态,同时也能降低炎症反应通过抑制NF-κB信号通路。     

琐琐葡萄总黄酮对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞Bax表达的影响

目的研究琐琐葡萄总黄酮(Flavones from Vitis viniferal L,VTF)对Aβ25-35诱导PC12细胞Bax表达的影响。方法体外培养PC12细胞,分为5组,对照组正常培养,模型组加入20μmol·L-1Aβ25-35作用24h建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,实验组分别加入20,40,80mg·L-1浓度VTF干预24h,通过检测细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放,观察细胞损伤情况,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Bax mRNA表达,Western bolt检测Bax蛋白表达。结果模型组较对照组细胞活性降低,LDH释放增加(P0.01),Aβ25-35诱导PC12细胞明显损伤,VTF实验组与模型组比较,细胞活性增加,LDH释放减少,有显著差异(P0.05);与模型组比较,给药组Bax表达下降(P0.01)。结论 VTF通过调节Bax表达,对Aβ25-35诱导的细胞损伤有保护作用。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。