青岛地区先天性心脏病患儿GATA-4基因突变的研究

目的研究山东省青岛地区先天性心脏病患儿GATA4基因突变情况。方法采用PCR直接测序技术对70例先天性心脏病患儿GATA-4基因的全部外显子进行基因突变筛查。结果在1例先天性心脏病室间隔缺损患儿中发现GA-TA4基因的杂合性突变,为第4外显子cDNA的886位点发生G〉A的杂合突变（c.886G〉A）,结果导致其编码蛋白的第296密码子由甘氨酸突变为丝氨酸（p.G296S）,为错义突变。结论在山东省青岛地区先天性心脏病患儿中发现了GATA-4基因的p.G296S突变,该突变可能导致先天性心脏病。     

山东地区先天性心脏病患者CFC1基因突变研究

目的对山东地区126例先天性心脏病患者进行CFC1基因突变筛查,阐明CFC1基因突变类型和特点,为先天性心脏病患者的基因诊断和基因治疗提供理论依据。方法．从126例先天性心脏病患者外周血白细胞中提取基因组DNA,进行PCR扩增CFC1第2和3外显子,对PCR产物进行直接测序分析。结果在126例先天性心脏病患者患儿的CFC1基因第2、3外显子测序中,均未发现基因突变。结论CFC1基因突变率低,可能不是山东地区先天性心脏病患儿的主要致病基因。     

应用变性高效液相色谱技术进行肝豆状核变性的基因突变筛查及产前诊断

目的 探讨变性高效液相色谱(denature high performance liquid chromatography,DHPLC)技术在肝豆状核变性(Wilson's disease,WD)的突变筛查及产前诊断中的临床应用.方法 以6个WD家系中的患者及其父母的DNA为模板,采用PCR技术扩增ATP7B基因的21个外显子及5'非翻译区,PCR产物经DHPLC技术进行突变筛查,对峰型有改变者进行测序验证.在确定了先证者突变类型的基础上,采用相同方法对其中4个家系(1个双胎和3个单胎)进行产前诊断.结果 6例患者中检测出5种已知的致病突变及8种多态类型.患者的父母均为相应突变类型的携带者.产前诊断结果显示,两例妊娠为异常胎儿,其中1例双胎为Arg778Leu/IVS4-1G>C双重杂合子,1例单胎为Ser975Tyr/Pro992Leu双重杂合子,这两对妊娠夫妇选择了终止妊娠.另两例妊娠中,1例为Ser975Tyr杂合子,1例完全正常,他们选择了继续妊娠,出生了表型正常儿.结论 DHPLC在Wilson病的突变检测和产前诊断中有良好的应用前景.     

中国人散发性先天性心脏病患者GATA4基因的两个新错义突变

目的在散发的中国人先天性心脏病（congenital beart defects．CHD）患者中，鉴定GATA4基因突变方法应用单链构象多态性方法对31例CHD患者进行GATA4基因6个外显子所有编码序列的突变检测，对有异常条带的DNA进行直接测序：结果在31个CHD患者中，我们发现GATA4基因的两个新的错义突生，分别是位于第4外显子的V267M，和位于帮6外显于的V380M．以及一个第6内含于中的核苷酸改变．结论我们在患有CHD的中国人群中．发现两个GATA4基因的新突变．提示其编码的转录因子在心脏的发育中具有重要作用．     

应用变性高效液相色谱技术检测parkin基因突变

目的应用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)检测早发性帕金森综合征(early-onset parkinsonism,EOP)致病基因parkin突变。方法散发EOP患者82例,提取外周血细胞DNA,通过PCR扩增parkin基因的12个外显子,应用DHPLC进行变异筛查,峰形异常者进行DNA测序以明确序列变异的种类和位置。结果以100名健康者为正常对照,在82例EOP患者中检测出3种突变,均为点突变,内含子区突变包括IVS1-39G→T和IVS9 18C→T;编码区突变为T1422C,导致所编码的441位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸(Cys441Arg)。结论在散发EOP患者中发现3个杂合型点突变,探讨应用DHPLC在EOP患者中开展parkin基因诊断的可行性。     

一个先天性特发性眼球震颤家系中致病基因FRMD7的突变研究

目的 研究一个先天性特发性眼球震颤家系的致病基因.方法 选取X染色体上微卫星标记物,通过PCR扩增后,进行基因组扫描.应用GeneMapper软件进行PCR扩增产物片段大小和单倍型分析,Linkage 5.1软件进行两点法连锁值(Log of odds,LOD)计算,通过基因序列分析发现致病基因突变.结果 经两点法计算,在DXS1047可获最大LOD值为8.55;基因序列分析发现FRMD7基因第9外显子存在G990T的杂合性基因突变.结论 FRMD7基因突变是导致该家系出现疾病的主要原因.     

变性高效液相色谱法分析非综合征型耳聋人群SLC26A4基因突变

目的 研究非综合征型耳聋(nonsyndromic hearing loss,NSHL)患者SLC26A4基因的突变情况,为临床上NSHL患者基因诊断提供指导.方法 PCR分别扩增SLC26A4基因的21个外显子及其侧翼序列,所得目的 片段用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatorgraphy,DHPLC)进行突变筛查,有异常峰形的样本进行DNA测序.结果 在所选30例无血缘关系且GJB2基因检测未发现突变的NSHL患者中,共检测出10种SLC26A4基因变异,其中包括7种已知突变,2种未见报道的新突变(F572L和D87Y),及一种已知多态(Ivs11+47T＞C),其中Ivs7-2A＞G是最常见的突变,约占总突变的40%.结论 SLC26A4基因为仅次于GJB2的导致NSHL的相关基因,在(GJB2基因检测未发现突变的NSHL人群中SLC26A4基因的检出率达到23.3%,其中Ivs7-2A＞G是其最常见的突变.     

先天性心脏病合并重度肺动脉高压的外科治疗

目的：探讨先天性心脏病(CHD)合并重度肺动脉高压(PH)的外科治疗效果和围手术期处理方法。方法：在体外循环下，采用根治性手术治疗先天性心脏病合并重度肺动脉高压患者54例。结果：全组无死亡病例，无术后Ⅲ。房室传导阻滞、心包填塞、二次开胸止血、肾功能衰竭等严重并发症。结论：综合评价病情、正确掌握手术适应证、充分的术前准备、规范和恰当的围术期处理及手术技术的进步是提高外科治疗成功率的关键。     

先天性心脏病的分子生物学研究

先天性心脏病的分子生物学研究谢进生（北京心肺血管疾病研究所－安贞医院心外科北京１０００２９）ＡｂｓｔｒａｃｔＦｏｒａｌｏｎｇｔｉｍｅ，ｉｔｈａｄｂｅｎｖｉｅｗｅｄｔｈａｔｍｏｓｔｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅｓ（ＣＨＤ）ａｒｅｃａｕｓｅ...     

Nkx2-5在单纯性先天性心脏病中的突变及表达研究

目的分析Nkx2-5基因在单纯性先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）心肌组织中的突变及表达情况,探讨Nkx2-5基因突变、表达与单纯性CHD发生机制的关系。方法采用PCR-SSCP（单链构象多态性）方法对30例因CHD引产胎儿心脏组织进行Nkx2-5基因编码序列突变筛查;以β-actin为内对照,用RT-PCR方法检测Nkx2-5基因在单纯性CHD引产胎儿心肌组织中mRNA的表达情况。结果 30例单纯性CHD引产胎儿Nkx2-5基因2个外显子PCR产物经SSCP检测未发现突变;与正常对照心肌组织相比,单纯性CHD胎儿该基因mRNA表达呈下降趋势（P〈0.05）。结论单纯性CHD中Nkx2-5基因编码区的体细胞突变可能不是单纯性CHD的致病机制;Nkx2-5基因转录水平异常可能是该基因参与CHD形成的一种潜在机制。     

三例CHARGE综合征患儿的临床表型和CHD7基因变异分析

目的对3例CHARGE综合征患者进行基因变异检测,明确其可能的遗传学病因。方法先证者及父母进行全外显子测序检测相关致病基因,对检出致病变异进行Sanger测序验证。结果3例患儿均有程度不同的眼部病变,包括小眼球、小角膜、虹膜缺损、晶状体混浊、视神经视网膜脉络膜缺损等。测序结果示例1的CHD7基因第2外显子存在c.1447delG(p.Val483Leufs*12)杂合移码变异;例2的CHD7基因第36外显子存在c.7957C>T(p.Arg2653*)杂合无义变异;例3的CHD7基因第2外显子存在c.1021_1048delAATCAGTCCGTACCAAGATACCCCAATG(p.Asn341Leufs*2)杂合移码变异,其中c.1447delG(p.Val483Leufs*12)和c.1021_1048delAATCAGTCCGTACCAAGATACCCCAATG(p.Asn341Leufs*2)变异未见报道,根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,这两个均判定为致病性变异(PVS1+PM2+PM6);c.7957C>T(p.Arg2653*)变异为已报道的可能致病性变异(PVS1+PM2+PP4)。Sanger测序结果验证例1和例3的变异为新发变异(de novo),例2的变异为可疑新发变异。结论CHD7基因变异可能为3例CHARGE综合征患者的致病原因。     

单纯性先天性心脏病致病基因的研究进展

先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是胎儿时期心血管发育异常而导致的先天性畸形疾病,在新生儿非感染性死亡中占首位.其中约有80%仅表现为心脏畸形,而不伴有其他系统的先天异常,称之为单纯性先天性心脏病.近年来,用分子遗传学的手段来研究单纯性先天性心脏病的分子基础已经取得了较大进展,从而促进了其临床诊断及治疗方法的拓展.     

两例常染色体显性多囊肾患者PKD1基因的突变检测

目的研究两例常染色体显性多囊肾患者的致病原因。方法对常染色体显性多囊肾患者的多囊肾病1基因(PKD1)3′端单拷贝区进行了聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-denaturing high-per-formance liquid chromatography,DHPLC)分析,并对有异常峰形的PCR产物进行测序。结果在1例患者中发现第42外显子的C11901A有一个无义突变,导致原丝氨酸3897变为终止密码子;而另一例患者第35外显子的C10737T有一个错义突变,导致原苏氨酸3509变为甲硫氨酸。在正常对照中发现两种同义突变分别为第42外显子的G11824A及C11860T。结论用DHPLC和DNA测序方法对两名患者进行PKD1的突变检测中,发现一个新的无义突变、一个错义突变以及两种同义突变。     

14例非缺失型假性肥大型肌营养不良患者的分子鉴定

目的 对非缺失型假性肥大型肌营养不良(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者及其家族成员进行基因诊断,以提供准确的遗传咨询和产前诊断.方法 应用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)对14例DMD患者的DMD基因79个外显子及5'-非翻译区和3'-非翻译区部分片段(共86个片段)进行检测,对检测到异源双峰的PCR产物进行测序.结果 14例患者中共检出7种致病点突变(其中2种末见报道),14种已报道的多态改变和7种未报道的序列变异;其中5例患者的母亲为致病基因携带者.结论 DHPLC技术可以对非缺失型DMD患者进行有效的基因诊断,并对家族女性成员进行携带者检测.     

三例谷氨酸脱氢酶型先天性高胰岛素血症患儿的GLUD1基因突变分析

目的 对3例临床诊断为谷氨酸脱氢酶型先天性高胰岛素血症的患儿家系进行遗传学分析并对中国儿童谷氨酸脱氢酶型先天性高胰岛素血症的遗传发病机制进行初步探讨.方法 选取3例临床诊断为谷氨酸脱氢酶型先天性高胰岛素血症患儿的家系,应用PCR-DNA直接测序技术对3例患儿家系谷氨酸脱氢酶1基因(glutamate dehydrogenase 1,GLUD1)第6,7,10,11,12外显子区进行测序分析.结果 第1例患儿及其父亲GLUD1基因第7外显子区发现了1个R269H杂合突变,遗传方式为常染色体显性遗传.第2例患者GLUD1基因的第11外显子区发现了1个S445L杂合突变,为新生突变.第3例患儿家系GLUD1基因第6,7,10,11,12外显子均未发现突变.结论 在某些中国人中,谷氨酸脱氢酶基因R269H,S445L杂合突变可以导致谷氨酸脱氢酶型先天性高胰岛素血症的发生.     

Mutation spectrum of the fibrillin-1 (FBN1) gene in Taiwanese patients with Marfan syndrome

The aim of this study was to establish a national database of mutations in the fibrillin-1 ( FBN1 ) gene that cause Marfan syndrome (MFS) in the Taiwanese population. In this study, we screened 294 patients from 157 families for the presence of FBN1 mutations using polymerase chain reaction/ denaturing high performance liquid chromatography (PCR/DHPLC). We identified 56 mutations in 62 of the 157 (40%) families including 49 single-base substitutions (36 missense mutations, seven nonsense mutations, and six splicing sites), one small insertion, four small deletions, one small indel (insertion and deletion), and one exonic deletion (Exon 36). When family history was taken into consideration, the mutation detection rate rose to 91% (29 of 32). We further investigated the phenotypic data and found that one third (47 of 157) of the families fit the Ghent criteria for MFS. Based on that data, the mutation rate was 98% (46/47). That finding implies that family history and the Ghent criteria play a more important role than clinical manifestations in establishing a clinical diagnosis of Marfan syndrome. Among the 56 mutations found in this study, 40 (71%) have not been registered in the Human Gene Mutation Database (HGMD) or in the Universal Mutation Database (UMD). This is the first study of the mutation spectrum of MFS in a cohort of patients in Taiwan. The database is expected to considerably improve genetic counseling for and medical care of MFS families.     

Functional variant in microRNA‐196a2 contributes to the susceptibility of congenital heart disease in a Chinese population

Hox gene clusters play an important role during cardiac septation to valve formation in different species, and the miR‐196a‐HOXB8‐Sonic hedgehog signaling pathway is of particular interest. Recently, we found that a genetic variant of rs11614913 in the miR‐196a2 sequence could alter mature miR‐196a expression and target mRNA binding; this observation led us to hypothesize that rs11614913 might influence susceptibility to sporadic congenital heart disease (CHD). We conducted a three‐stage case–control study of CHD in Chinese to test our hypothesis by genotyping miR‐196a2 rs11614913 and three other pre‐miRNA SNPs (miR‐146a rs2910164, miR‐149 rs2292832, and miR‐499 rs3746444) in 1,324 CHD cases and 1,783 non‐CHD controls. We found that rs11614913 CC was associated with a significantly increased risk of CHD in all three stages combined (P=6.81×10^?6). In a genotype–phenotype correlation analysis using 29 cardiac tissue samples of CHD, rs11614913 CC was associated with significantly increased mature miR‐196a expression (P=0.001). In vitro binding assays further revealed that the rs11614913 variant affects HOXB8 binding to mature miR‐196a. This is the first study to indicate that miR‐196a2 rs11614913 plays a role in sporadic CHD susceptibility. Hum Mutat 30:1–6, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

正常血钾型周期性麻痹存在SCN4A基因V781I突变

目的研究两例散发正常血钾型周期性麻痹(normokalemicperiodicparalysis,normoKPP)患者的临床特点及其电压门控钠通道型α亚单位(α-subunittypeofvoltage-gatedsodiumchannel,SCN4A)基因的突变。方法应用变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)技术及测序分析检测患者SCN4A基因第13、19、23、24(部分)外显子是否发生已知导致高钾型周期性麻痹(hyperKPP)的突变(T704M、A1156T、M1360V、I1495F、M1592V);随后应用DHPLC技术筛查SCN4A基因其余外显子,对出现异常洗脱峰者进行测序分析。结果两例患者的SCN4A基因发生点突变2418(G→A)并引起氨基酸序列改变V781I,且为SCN4A基因唯一错义突变。病例1的父亲也发生该突变,但未发病。结论中国人normoKPP患者存在V781I突变,该突变可能是导致normoKPP的突变之一。