抗白细胞介素—6受体单克隆抗体的制备

用白细胞介素－６（ＩＬ－６）依赖性人多发性骨髓瘤细胞株ＸＧ－１作为免疫原，我们成功地制备获得一株分泌抗人ＩＬ－６受体单克隆抗体的杂交瘤，命名为ＳＩ１５。夹心ＥＬＩＳＡ和位点竞争试验表明，ＳＩ１５和抗人ＩＬ－６受体单克隆抗抗Ｍ１９识别ＩＬ－６受体上的同一位点，对ＩＬ－６受体的生物活性无影响。     

人白细胞介素15单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :用rhIL 15与沙门氏菌裸菌相偶联制备IL 15单克隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,以便为疾病的诊断、治疗和发病机制的研究提供可靠的生物制剂。方法 :将纯化的rhIL 15蛋白与沙门氏菌裸菌相偶联制成免疫原 ,用脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB c小鼠 ,以PEG为促融剂 ,将脾细胞与SP2 0细胞进行融合 ,HAT选择培养 ,间接ELISA筛选阳性克隆 ,通过多次克隆化 ,获得稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株 ,并对所获得的细胞株及分泌的McAb特性进行了分析。结果 :获得 4株能稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞系 (hybridomacell,Hc) ,ELISA法检测其效价分别为 1:10 6 、1:10 7、1:10 7、1:10 7。Dotblot检测IL 15的灵敏度为 1 5ng ,其中一株 (1 7E4 )尚可用于Westernblot检测。结论 :成功制备了 4株IL 15McAb杂交瘤细胞系。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制

目的获得针对人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体。方法hCG蛋白免疫Balb／c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞NS-1按8：1比例融合,间接ELISA法筛选阳性克隆,有限稀释法进行克隆化培养;制备腹水抗体;采用间接ELISA法鉴定抗体亚型和测定抗体效价。结果得到6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;抗体经鉴定均为IgG1、κ型,效价均达10^-5以上。结论所获得的6株杂交瘤细胞株均有较强稳定分泌抗-hCG单克隆抗体的能力。这为有关hCG的检测、hCG本身相关研究以及避孕疫苗的研制打下了基础。     

一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定

目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Western blot对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e).结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础.     

抗鳗弧菌单克隆抗体的研制及鉴定

鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一 ,在淡水鱼中也有发病的记载 ,并可通过食物链感染人类 ,使人发生较严重的疾病［１］。目前 ,对此种菌的检测主要通过对鱼的临诊病理观察及细菌学检查 ,但检测速度和准确性受到一定的限制。我们制备了抗鳗弧菌的ｍＡｂ ,并对其进行了鉴定。１材料和方法１．１材料实验所用鳗弧菌标准菌株由青岛海洋大学海洋生命学院提供。Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞由第四军医大学８６３课题组惠赠。１．２方法鳗弧菌菌体用１００ｍＬ／Ｌ福尔马林固定２４ｈ灭活 ,生理盐水洗涤两次后 ,比浊记数。经腹腔免疫 (８周龄、…     

杀虫剂西维因单克隆抗体的研制及鉴定

目的 制备特异性的西维因单克隆抗体。方法 合成了西维因的半抗原并对其进行了结构鉴定，将半抗原与牛血清白蛋白和卵清蛋白共价偶联分别制备免疫抗原和包被抗原。再将免疫的Balb／c小鼠脾脏细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，建立一株分泌西维因单克隆抗体的杂交瘤细胞。分析该杂交瘤细胞的染色体，并以间接酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型及其与西维因的亲和性和特异性。结果 杂交瘤细胞的平均染色体数目为98条，它分泌IgG1亚类的单克隆抗体；该单克隆抗体与西维因的亲和性较高(IC50=52ng，mL)而与西维因结构类似物的交叉反应很小。结论 本实验成功的制备了西维因特异性的单克隆抗体，为其ELISA方法的建立提供了条件。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

Tamm-Horsfall糖蛋白单克隆抗体制备及其临床应用

用0.58mol/L NaCl沉淀提取Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)制备了三株抗THP单克隆抗体(McAb)。免疫印迹技术(Immunoblotting Technigue,IBT)证明这些McAb特异性地和94kD THP抗原结合,ELISA抑制试验表明三株McAb识别THP抗原的不同位点。用McAb双夹心ELISA法测定尿THP的含量,表明尿THP含量与血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)呈显著负相关(P<0.01),与内生肌酐清除率(Ccr)呈明显正相关(P<0.01),BUN、Scr、Ccr正常的各种肾病尿THP含量无明显异常(P<0.05)。测定尿THP含量可作为判断肾功能损害程度的良好指标。     

抗t—PA单克隆抗体的制备及初步应用

应用锗心ｔ－ＰＡ和人黑色素瘤细胞分泌的ｔ－ＰＡ抗原，经腹腔及脾内免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。用细胞融合技术制务杂瘤细胞，细胞融合率达８５％获得四株抗ｔ－ＰＡ杂交瘤细胞株，鼠腹水抗体效价达１：１０＾５；Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ结果表明该单抗所结合的抗原分子量与ｔ－ＰＡ相符。     

IL-6受体的多抗制备及其在正常大鼠脑内的分布

IL-6是神经 -免疫通讯的主要信息分子之一 ,获得其受体的抗体并研究该受体在脑内的分布对探讨 IL-6在脑内的功能是重要的基础工作。本研究用原核表达的大鼠 IL-6受体 ( IL-6R)蛋白免疫新西兰大白兔制备了其多克隆抗体 ,经 ELISA、Western blot和免疫细胞化学染色等方法进行了鉴定 ,并且将之用于免疫组织化学染色 ,观察了 IL-6R在正常成年大鼠脑内的表达。结果表明 :所获得的 IL-6R多抗具有较高的效价、特异性和亲和力 ;IL-6R在脑内的分布广泛 ,其中大脑皮质的颗粒细胞层和锥体细胞层、外侧隔核、海马、齿状回、下丘脑视上核、弓状核、小脑 Purkinje细胞以及延髓最后区都有浓染的 IL -6R阳性细胞 ;纹状体、下丘脑视前区、丘脑背侧核群、下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质和蓝斑等部位染色较淡 ;另外 ,胼胝体、视束和海马伞等白质内有许多胶质细胞也呈现 IL -6R阳性染色。本文观察到的 IL -6R在脑内的广泛分布表明 ,IL -6在中枢神经系统内可能具有重要的神经生物学意义     

识别脊神经感觉神经元单克隆抗体的制备

将脊神经感觉神经元特有的蛋白组份作为抗原,注入BABL/c小鼠腹腔中。采集经免疫的小鼠脾细胞,以聚乙二醇(PEG)为促融剂,使之与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。应用HAT选择性培养液培养杂交瘤细胞。三周后,以ABC法检测,筛选出仅对感觉神经元起反应的Ⅱ6H杂交瘤细胞株,三次有限稀释,克隆化后,体外培养达一年之久,仍能稳定地分泌抗体。该抗体属IgG_1亚类,特异性地识别感觉神经元特有的蛋白组份。应用该单抗,可鉴别周围神经干中的感觉与运动纤维,亦可研究感觉神经的发育以及结构与功能的关系。     

周围神经18kD蛋白单克隆抗体的制备

本实验用不连续、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统，以损伤坐骨神经远侧端提取的具有神经诱向生长作用的、PI为5．2的18kD蛋白作为抗原，免疫BALB／C小鼠，通过杂交瘤技术，Elisa法筛选，获得二株（Ⅲ8G、Ⅳ3C）稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫印迹结果表明单克隆抗体能特异性识别分子量为18kD蛋白。免疫组化法显示：在实验组坐骨神经远侧端为阳性反应，对照组坐骨神经的神经膜为阴性。     

刀豆凝集素单克隆抗体特性分析和初步应用

建立了一株能分泌抗刀豆凝集素(ConA)单克隆抗体(McAb)的细胞株-CA2。ELISA证实所得 CA2 McAb仅与 ConA有反应,而与菜豆凝集素(PHA)、美洲商陆(PWM)、花生凝集素(PNA)、扁豆凝集素(LcA)以及牛血清白蛋白(BSA)都无交叉反应。免疫印迹试验进一步证实该McAb 只能与 ConA 形成免疫沉淀线。该McAb 能抑制 ConA对RLc-802细胞的凝集作用,竞争抑制试验显示α-甲基甘露糖、果糖不能抑制 CA2 McAb与 ConA 的结合,提示它可能是针对 ConA蛋白结合点部位抗原决定簇的 McAb。应用该McAb证实了急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt_4、CEM和B淋巴母细胞CCRF-sb以及转化的扁桃腺淋巴细胞表面膜存在有分子量大小不同的 ConA受体,提示同是ConA受体,可能具有不同的生物学功能。     

抗人疱疹病毒6型中国分离株单克隆抗体的制备与鉴定

从婴儿玫瑰疹病人分离的ＨＨＶ－６ＣＨ３病毒株制备单克隆抗体，用间接免疫荧光试验筛选获得６株能持续分泌单抗的细胞株，这６株单抗还能与ＨＨＶ－６Ｚ２９病毒株反应，以上单抗将是我国开展ＨＨＶ－６的研究和临床实验诊断的良好试剂。     

几株抗血吸虫单克隆抗体细胞株的建立与特性鉴定

为了对血吸虫病的免疫诊断和免疫预防提供有价值的单克隆抗体,通过2次骨髓瘤细胞与感染日本血吸虫的小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立了4株分泌单克隆抗体的细胞株。其中2株的靶抗原为血吸虫成虫肠道;1株为成虫表面膜;另一株为成虫的肌细胞或纤维细胞。免疫球蛋白亚类鉴定表明前3株均为IgG_1。除了SM 48-2对虫卵呈弱反应外,未见对血吸虫虫卵、尾蚴、童虫有阳性反应;亦未见对曼氏血吸虫、肺吸虫、华枝睾吸虫、疟原虫及利什曼原虫有阳性反应。这几株细胞已在体外培养下稳定地分泌特异性抗体达6个月之久。     

乙型肝炎病毒单克隆表面抗体的抗独特型抗体的制备与免疫效果

用乙型肝炎病毒单克隆表面抗体免疫新西兰兔制备抗独特型抗体，经小鼠γ球蛋白－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ免疫亲和柱纯化后，用ＥＬＩＳＡ鉴定，结果表明特异性良好。以此抗独特型抗体免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，引起抗－ＨＢ＿ｓ应答，提示制备抗独特型疫苗的可能性。