基于罗丹明B类荧光探针的Fe3+细胞成像研究

目的:构建一种基于罗丹明B为母体的新型荧光探针,考查其作为荧光探针P的光学性能,发展适合于分析检测细胞内Fe3+的可视化成像分析的荧光探针法.方法:RAW细胞中加入20 μmol/LFe3+孵育30 min后,再在该培养液中加入20 μmol/L探针P,37℃下继续孵育30 min,559 nm激发,收集570～670 nm波段内的荧光信号.结果:探针能够实现对细胞内Fe3+的可视化成像分析.结论:本方法探针容易制备,分析速度快,可实现结果的可视化观测.     

PACS系统中两种图像采集设备的工程技术评价

选用了当前一些常用主流的数字化仪和CR,对PACS系统中的两种图像采集设备胶片数字化仪和CR的各种工程参数进行工程技术方面的评价,分析了两种数字化仪一些参数的测试结果和CR各测试项目的允许误差范围.测试结果表明:图像采集设备的工程技术参数是影响PACS系统整体性能的重要因素.     

广角数码视网膜图像采集系统(Retcam)诊断新生儿视网膜出血的探讨

目的研究广角数码视网膜图像采集系统(Retcam)诊断新生儿视网膜出血的临床价值。方法应用广角数码视网膜图像采集系统(Retcam)对于我院出生的3 216例新生儿在出生后的48~72 h检查并诊断新生儿视网膜出血情况。结果 3 216例新生儿中视网膜出血489例,占15.21%。出血形态以集中在视盘周围的浅层火焰状、深层点状合并的混合型居多;出血量少的患儿多呈单个至多个小片状,出血量多的患儿呈放射状排列。结论应用Retcam可明确诊断新生儿视网膜出血情况。     

荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

目的 研究平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca²⁺浓度的方法。方法 分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca²⁺浓度的动力学变化;首先在37 ℃环境下标定Ca²⁺ 探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca²⁺ 浓度值。结果 激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca²⁺]_i。结论 荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。     

开发用于肿瘤微环境成像的pH敏感荧光探针

目的·合成水溶性pH响应性花菁类近红外荧光探针,评估其光学性能,并将其应用于模拟肿瘤微环境的在体成像。方法·应用两步经典的化学反应,合成水溶性pH响应性近红外荧光探针R2S,同步合成脂溶性探针R2Z作为对照。应用磁共振氢谱、质谱及高效液相色谱验证探针的化学结构及纯度。利用紫外-可见、光致发光光谱学测试评价探针的pH响应性、响应可逆性、光稳定性及结构稳定性。利用细胞荧光共定位成像评价探针的细胞膜通透性,使用HCT-116细胞、HeLa细胞进行细胞毒性实验,使用BALB/c健康雌性小鼠进行小动物在体成像实验,评估探针的安全性。通过在小鼠背部左侧和右侧分别皮下注射pH 6.50和pH 7.40的PBS溶液模拟肿瘤微酸性环境和正常的细胞环境,随后注射探针R2S进行在体成像实验,比较R2S在pH 6.50侧和pH 7.40侧的荧光强度。结果·成功合成了水溶性pH响应性近红外荧光探针R2S及其脂溶性类似物R2Z。随着溶液酸性逐渐增强（从pH 11.10到pH 3.47）,R2S的最大吸收波长由642 nm红移至774 nm,最大发射波长亦由794 nm红移至808 nm。探针R2S的酸解离常数（p...     

发现甘草草酸钙方晶两种亚型的动态显微鉴别研究

目的：通过在三维立体空间360°范围内适当翻转的全方位观察,重新审视甘草草酸钙方晶这一似乎早已洞察无遗的药材粉末表征结构。方法：采用数码显微成像自动分析系统与多向旋转微距驱动机制相结合的动态显微鉴别新模式,并提供有关动态实拍照片。结果：发现甘草草酸钙方晶存在两种亚晶型,可资鉴别利用。结论：新法较为科学、合理、直观。     

一种新型的荧光探针化合物用于研究水溶性高分子的构象问题

本工作合成了一种聚合的分子内电荷转移化合物，作为荧光探针。利用荧光探针技术来研究水溶性高聚物在水溶液中的构象变化，进一步证实了在聚甲基丙烯酸的水溶液中存在着疏水微区。     

一种新的显微CT系统设计及实验研究

本文从基本概念、成像原理、物理结构和技术特点等方面出发,阐述了显微CT的相关研究,提出了一种新的系统设计并以此进行实验,就结果作出讨论.研究结果表明,显微C哺着广阔的应用前景.     

用于检测多硫化氢的荧光探针研究进展

多硫化氢(hydrogen polysulfides, H₂S_n, n ≥ 2)作为硫化氢(hydrogen sulfide, H₂S)所衍生的活性硫物质，在生理调节及信号转导过程中扮演着不可或缺的角色。H₂S_n与H₂S互为氧化还原对，一般经氧化或酶促作用从H₂S转化生成，通过调节蛋白质相互作用及改变酶活力等方式发挥其生理作用。随着研究的深入，发现一些原本被认为是H₂S发挥的生理学功能可能是由H₂S_n所发挥的，并且H₂S_n具有更高的蛋白质巯基化效率。因此，实时检测生物体内的H₂S_n对于研究其生理活性及与H₂S之间的联系具有十分重要的意义。传统的质谱光谱等检测方法需要破碎组织细胞，不适用于生物体内的实时检测。而荧光探针因其具有高灵敏度及特异性，同时生物毒性低常被选作H₂S_n原位实时检测工具。本文概述了H₂S_n的生理调节活性，着重基于响应机制的反应类型的介绍H₂S_n检测荧光探针的设计策略、荧光性能、检测特点及生物成像应用等方面，并对这一领域所面临的挑战与发展进行了展望。     

Allglo探针与TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测猴免疫缺陷病毒的比较

目的比较Allglo 探针和TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测SIV 的灵敏度下限和重复性。方法把SIV 标准品进行梯 度稀释成6 个浓度,每个浓度同时提取12 个标本进行批内差异分析,每个标本提取12 次进行批间差异分析之后进行逆转录 并用TaqMan探针和Allglo 探针进行定量PCR检测。批内差异分析者每个标本同时进行逆转录和上机检测,批间差异分析 者分12 次进行逆转录和检测,对这两种探针的PCR结果利用ABI7300 定量PCR仪所携带的软件和相关的统计学方法进行 分析。结果TaqMan 探针和Allglo 探针法检测SIV 标准品的灵敏度下限均为50 copies/mL。重复性结果显示：批内结果差 异分析显示Allglo 探针法最大变异系数为0.63%,最小变异系数为0.33%,TaqMan 探针法最大变异系数为1.33%,最小变异 系数为0.2%;批间结果差异分析显示Allglo 探针法最大变异系数为1.77%,最小变异系数为0.95%,TaqMan探针法最大变异 系数为1.86%,最小变异系数为1.03%。结论在荧光定量RT-PCR 法检测猴免疫缺陷病毒中,Allglo 探针法可能优于 TaqMan探针法。     

荧光原位杂交检测龈下菌斑中未获培养微生物

目的在龈下菌斑中观察一种未获培养的牙周可疑致病微生物AU126。方法针对AU126设计并评估特异性探针。使用激光共聚焦显微镜,通过与包含插入子克隆的原位杂交,定量分析荧光信号强度研判杂交严谨度。在严谨度分析获得的特定条件下,将慢性牙周炎患者的龈下菌斑标本与AU126探针进行杂交,运用共聚焦显微镜寻找AU126。结果AU126探针理想杂交是在10%甲酰胺中进行。通过对细菌轮廓荧光强度均值的判断,证实龈下菌斑中存在ROX-126标记的阳性细菌。细胞呈杆状,长4.0~5.4μm,宽0.64~0.84μm。结论在评估了AU126探针的特异性以及确定理想杂交严谨度的条件下,运用荧光原位杂交结合激光共聚焦显微镜技术,成功观察到人类龈下菌斑中的一种未获培养微生物AU126。     

还原响应荧光探针的研制

基于荧光共振能量转移(FRET)原理和胞质中的还原环境,对载体在细胞胞质中的稳定性进行了表征。首次合成了同时具有FRET效应和还原响应性的新型荧光探针偶联物:3-羧酸-7-羟基-香豆素-硫-硫-异硫氰酸荧光素(CHC-SS-FITC)。以脂质体为模型载体,制备了荷载荧光探针偶联物的脂质体,并评价了探针偶联物的荧光共振能量转移效应和还原响应性。以巨噬细胞为模型细胞,通过激光共聚焦显微技术考察了载药纳米脂质体在巨噬细胞中稳定性。结果表明,本研究设计的新型荧光探针偶联物CHC-SS-FITC,由于同时具备FRET效应的高灵敏度和还原环境触发式响应的强抗干扰能力,克服了传统表征手段的不足,为纳米载体在细胞胞质中的稳定性表征开辟了新的道路。     

钠离子荧光探针用于检测雪卡毒素的细胞毒性

目的研究和建立以细胞为基础的结合钠离子荧光探针检测雪卡毒素的方法,为快速、敏感检测雪卡毒素提供科学的实验依据。方法采用雪卡毒素标准品(P-CTX-1)结合乌苯苷和黎芦定处理小鼠脑神经瘤细胞(N-2A),用钠离子荧光探针(CoroNaTM Green)标记细胞,利用多功能酶标仪检测荧光强度,建立雪卡毒素浓度与荧光强度的标准曲线关系式;同时,采用CCK-8法和酶标仪检测毒素处理组细胞的存活率,建立细胞毒性实验的标准曲线关系式;分析比较两种方法的灵敏度。以两种方法分别对采集的33份深海珊瑚鱼样品进行毒素检测,对检测结果作分析比较。结果以细胞为基础的荧光检测法检测样品中毒素的检出限为10-13 g/ml,而细胞毒性试验检测法检测样品中毒素的检出限为10-12 g/ml,其结果具有一定的相关性,且荧光检测法灵敏度比细胞毒性试验高;同时钠离子荧光探针检测法的实验终点比CCK-8法缩短2～4 h。结论以细胞为基础的结合钠离子荧光探针检测法能快速、敏感地检测雪卡毒素,可作为雪卡毒素检测初筛方法推广应用。     

罗丹明基类分子荧光探针在丙酮酸细胞内可视化成像中的应用

为了进行生物体内丙酮酸含量变化的可视化研究,筛选了若干螺酰肼结构的罗丹明基探针分子,在水相中与丙酮酸分子中的活性羰基发生席夫碱反应,螺环单元自发打开,特征荧光和紫外吸收增强。研究发现,罗丹明6G酰肼对丙酮酸响应灵敏度最高,565 nm处荧光强度变化与丙酮酸浓度0.2~120 μmol/L范围内呈良好线性相关,检测限低至0.1 μmol/L,专属性高,体内常见生物分子和阴阳离子、活性氧化物等对丙酮酸的检测几乎无干扰,并在非小细胞肺肿瘤细胞A549、肾上皮细胞293T中成功实现了外源性丙酮酸的荧光成像,同时实现了经双酚A诱导的细胞内源性丙酮酸的荧光成像。     

渐逝场荧光显微术的原理及应用

渐逝场荧光显微术是新发展起来的一种显微镜技术。该技术利用入射光在不同折射率的两种介质表面所产生的穿透极浅的渐逝波来激发并观察邻近界面的荧光团。渐逝场荧光显微术已在生命科学领域的研究中得到了广泛应用,比如观察出胞作用和入胞作用,对活细胞实时动态观测和对单个分子成像。     

荧光共振能量转移法对细胞cAMP含量的实时检测

大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)转染pcDNA3-ICUE3质粒,用荧光共振能量转移(FRET)法观察前列腺素(PGE2)刺激下大鼠FLS环磷酸腺苷(cAMP)水平的实时变化,与放免法检测进行比较.FRET检测到FLS在PGE2刺激后1 min,cAMP升高14.93％,且不同批次实验差异较小;放免法检测到cAMP升高7.79％;FRET可检测到PGE2受体拮抗剂对cAMP产生的抑制,可观察到1 nmol/L PGE2促进cAMP产生,放免法检测PGE2产生效应最低浓度为0.1μmol/L.提示FRET法检测灵敏、重复性高,为G蛋白偶联受体信号通路研究的可靠技术手段.     

HMGB1基因SNP位点实时荧光PCR检测方法的建立

目的建立基于Taq Man探针实时荧光PCR技术的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法收集2014年4月在深圳口岸医院体检的健康人群样本20份,选择HMGB1基因上的2个SNP位点设计常规PCR和实时荧光PCR扩增引物和Taq Man探针,采用基因测序和实时荧光PCR方法对样本进行SNP分型。结果实时荧光PCR方法SNP分型结果显示,在20份样本中的HMGB1基因rs1412125位点检测到TT基因型11例,CC基因型1例,TC基因型8例;HMGB1基因rs3742305位点检测到GG基因型15例,GC基因型5例,未发现CC基因型。这一结果与基因测序方法结论完全一致。结论基于Taq Man探针技术的实时荧光PCR方法进行HMGB1基因SNP分型简单、快速、高效,可用于人群大规模样本的SNP筛查,具有广泛应用的价值。     

荧光光漂白恢复技术在检测膀胱平滑肌细胞间通讯功能中的应用

目的　探讨膀胱平滑肌细胞间通讯的功能变化。方法　利用荧光光漂白恢复 (FRAP)技术检测膀胱平滑肌细胞GJIC功能。结果　在相同的时间内 ,对实验组和对照组膀胱平滑肌细胞漂白后平均荧光恢复率相比较 ,实验组显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　FRAP技术可以从功能上研究缝隙连接介导的细胞间通讯